全 文 ：第 32 卷第 6 期
2013 年 12 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Ｒesources
Vol． 32 No． 6
Dec． 2013
收稿日期:2013 － 05 － 18
资助项目:“十二五”国家科技支撑计划(2011BAD33B02)
* 通讯作者:孙力军，博士，副研究员，主要研究方向:生物技术。E-mail:shengwudiqiu@ 126． com
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2013． 06． 012
不同季节灰毡毛忍冬茎叶中绿原酸和木犀草苷含量的分析
姚正颖，张卫明，孙力军*
(南京野生植物综合利用研究院，江苏 南京 210042)
摘 要 目的:比较分析不同季节的灰毡毛忍冬茎叶中绿原酸和木犀草苷的含量，为综合利用茎叶资源提供参考
依据。方法:采用蒸制晒干法对灰毡毛忍冬的茎叶进行干燥处理，利用超声波法提取样品中的绿原酸和木犀草苷
并通过高效液相色谱法进行含量测定。结果:绿原酸和木犀草苷含量在不同季节的灰毡毛忍冬茎叶中差异明显。
绿原酸含量依次为花 ＞叶 ＞茎，以秋季( 11 月份) 叶片样品中的绿原酸含量最高( 3． 031% ) ，是花蕾中含量的 96% ;
木犀草苷含量总体趋势为叶 ＞花和茎，以冬季( 2 月份) 叶片样品中的含量最高( 0． 558% ) ，是花蕾中含量的 4． 6
倍;二者均高于 2010 版《中国药典》对山银花和金银花指标物质含量的规定。结论:秋冬季节对灰毡毛忍冬进行休
眠期整型修剪，副产物叶片资源丰富，药源成分充足，具有广阔的开发应用前景。
关键词 灰毡毛忍冬; 茎叶;绿原酸;木犀草苷;高效液相色谱
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2013)06 － 0035 － 04
Content Analysis of Chlorogenic Acid and Galuteolin from Stems and
Leaves of Lonicera macranthoides Collected in Different Seasons
Yao Zhengying，Zhang Weiming，Sun Lijun*
(Nanjing Institute for Comprehensive Utilization of Wild Plants，Nanjing 210042，China)
Abstract Objective:To compare the content of chlorogenic acid and galuteolin from stems and leaves
of Lonicera macranthoides collected in different seasons． Methods:Dehydrating methods of steaming-sun
drying was chosen to deal with stem and leaves of Lonicera macranthoides． Chlorogenic acid and galuteo-
lin were extracted by ultrasonic method and determined by high performance liquid chromatography
(HPLC)． Ｒesults:The content of chlorogenic acid and galuteolin distributed in stem and leaves of Loni-
cera macranthoides collected in different seasons had a great difference． The content trend of chlorogenic
acid was:flower buds ＞ leaves ＞ stem． The highest content reached 3． 031% in leaves collected in No-
vember，which was 96% of the content of chlorogenic acid in flower buds． The content trend of galuteolin
was:leaves ＞ flower buds and stems． The highest content reached 0． 558% in leaves collected in Febru-
ary，which was 4． 6 times of the galuteolin content in flower buds． Both of the best were higher than the
prescribed contents of corresponding indexes in Chinese Pharmacopoeia． Conclusion:The by-products
obtained by punching branches and leaves of Lonicera macranthoides in dormant period of autumn and
winter were abundant with productivity and pharmaceutical ingredients，which will have a broad applica-
tion prospect．
Key words Lonicera macranthoides;stems and leaves;chlorogenic acid;galuteolin;HPLC
灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand． －
Mazz．)，忍冬科忍冬属植物，具有花期长、适应性
强、易繁殖、易采摘等特点，是我国西南、中南地区金
银花药材的主流品种之一［1 － 2］。灰毡毛忍冬作为中
药山银花的主要来源，其花、茎、叶均可入药，与传统
中药材金银花同具清热解毒、疏散风热之效［3］。
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 32 卷
绿原酸和木犀草苷是金银花的主要有效成分，
许多研究报道了其在花、茎、叶等部位的含量［4 － 8］。
灰毡毛忍冬与金银花具有相同的主治与功效，2010
版《中国药典》规定山银花的质量控制指标成分为
绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙;金银花
的质量控制指标成分为绿原酸和木犀草苷。前期研
究报道了灰毡毛忍冬干燥花蕾中绿原酸、灰毡毛忍
冬皂苷乙、川续断皂苷乙和木犀草苷含量均高于
《中国药典》的规定［9］。目前对于灰毡毛忍冬有效
药源成分的研究主要集中在其花蕾部分，而对其茎、
叶中活性成分的报道较少。
每年不同季节对灰毡毛忍冬进行整形修剪产生
了大量的茎叶副产品，而且产量远高于花蕾［10］。本
研究前期发现灰毡毛忍冬茎叶中未能检测出灰毡毛
忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙。为了合理开发利用药
用植物资源，扩大灰毡毛忍冬的药用部位，本文采用
《中国药典》所收载的金银花质量标准项下的含量
测定方法，分别在不同季节(夏季、春季、秋季和冬
季)采集同株灰毡毛忍冬来源的茎叶，分析其中绿
原酸和木犀草苷的含量，探讨灰毡毛忍冬茎叶的药
用价值。
1 材 料
1． 1 样品
灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand． －
Mazz．)为南京野生植物综合利用研究院选育品种，
该品种花蕾呈含苞未放的棒状，花冠一直不开裂。
分别在 2012 年 6 月 8 日(现蕾后 10 天)和 11 月 6
日以及 2013 年 2 月 25 日和 5 月 3 日采集同一健康
植株的茎叶样品(剪取带叶枝条的 1 /3)用于研究。
1． 2 仪器与试剂
Agilent 1200 型高效液相色谱仪(HPLC)(美国
Agilent 公司)，配有二极管阵列检测器(DAD)、四元
泵和柱温箱;EL204 电子分析天平(中国梅特勒 －托
利多公司);KQ5200E型超声波清洗机(昆山市超声
仪器有限公司)。
绿原酸(纯度 ＞ 95%，美国 Sigma － Aldrich 公
司);木犀草苷(纯度 ＞ 95%，批号 LF2012A0001，南
京春秋生物工程有限公司)。HPLC 分析用试剂为
色谱纯，包括乙腈(美国 Sigma － Aldrich公司)、甲醇
和乙酸(美国 Tedia公司)，超纯水为娃哈哈纯净水。
2 方 法
2． 1 灰毡毛忍冬的干燥处理
将采摘的新鲜茎叶摊在蒸笼内，厚 4 ～ 5 cm，以
蒸盖上气时计时 3 min，取出后疏松摊在晒盘内，置
于太阳光下直接晒干。
2． 2 绿原酸含量的测定
2． 2． 1 色谱条件
色谱柱:Agilent ZOＲBAX Eclipse XDB － C18
(150 mm ×4． 6 mm，5 μm);柱温 25℃;流速 1． 0 mL
·min －1;λ = 330 nm;流动相:0． 4%冰醋酸(A)－乙
腈(B)，梯度洗脱(0 ～ 10 min，88． 5% ～ 85% A;10
～ 12 min，85% ～ 71% A;12 ～ 18 min，71% ～ 67%
A;18 ～ 30 min，67% ～ 55% A;30 ～ 31 min，55% ～
88． 5% A)。进样量 10 μL，外标法定量。
2． 2． 2 溶液的制备
对照品:精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量
瓶中，用 50%甲醇溶解并稀释制成每 1 mL 含绿原
酸 0． 50 mg。供试品:取干燥样品细粉(过 5 号筛)，
精密称定 0． 5 g，置 50 mL容量瓶中，用 50%甲醇定
容至刻度，称定重量，超声处理 40 min，放冷，再称定
重量，用 50%甲醇补足减失的重量，摇匀，8 000 r·
min －1离心 5 min，取上清过 0． 45 μm滤膜，即得。
2． 3 木犀草苷含量的测定
2． 3． 1 色谱条件
色谱柱:Agilent ZOＲBAX Eclipse XDB － C18
(150 mm ×4． 6 mm，5 μm);柱温 25℃;流速 1． 0 mL
·min －1;λ = 350 nm;流动相:0． 4%冰醋酸(A)－乙
腈(B)，梯度洗脱(0 ～ 30 min，90% ～ 70% A);进样
量 10 μL，外标法定量。
2． 3． 2 溶液的制备
对照品:精密称取木犀草苷对照品适量，置棕色
量瓶中，用 70%乙醇溶解并稀释制成每 1 mL 含 80
μL的溶液。供试品:取干燥样品细粉(过 5 号筛)，
精密称定 3 g，置 50 mL容量瓶中，用 70%乙醇定容
至刻度，称定重量，超声处理 1 h，放冷，再称定重量，
用 70%乙醇补足减失的重量，摇匀，8 000 r·min －1离
心 5 min，取上清过 0． 45 μL滤膜，即得。
3 结果与分析
3． 1 线性关系的考量
精密吸取不同体积的绿原酸和木犀草苷对照品
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第 6 期 姚正颖，等:不同季节灰毡毛忍冬茎叶中绿原酸和木犀草苷含量的分析
溶液进样分析，以峰面积(Y)对各对照品的进样量
(X，μg)进行线性回归，所得两种成分的线性回归方
程如下:
绿原酸:Y1 = 4 097X1 + 5． 76(Ｒ2 = 0． 999 4 ，线
性范围:0． 25 ～ 7． 50 μg)
木犀草苷:Y2 = 1 227． 5X2 + 0． 05(Ｒ2 = 0． 997 6
，线性范围:0． 16 ～ 1． 60 μg)
结果表明各对照品在其相应的进样量范围内与
峰面积呈现良好的线性关系。绿原酸和木犀草苷的
HPLC色谱峰分别见图 1a和图 1b。
a:绿原酸标准品;b :木犀草苷标准品;
A:供试品中的绿原酸;B:供试品中的木犀草苷
图 1 绿原酸和木犀草苷的 HPLC图
3． 2 精密度实验
分别吸取绿原酸对照品溶液和木犀草苷对照品
溶液，按各自的色谱条件测定绿原酸和木犀草苷峰
面积的 ＲSD(n = 5)分别为 1． 02%和 1． 18%。以上
数据表明，该实验精密性良好。
3． 3 稳定性实验
取同一供试品溶液，分别于 0、4、6、12、24 h 进
样测定的绿原酸和木犀草苷峰面积的 ＲSD(n = 5)
分别为 1． 12%和 2． 43%，表明供试品溶液中各组分
在 24 h内稳定。
3． 4 重复性实验
分别按照 2． 2 和 2． 3 所述方法配制供试品溶液
5 份，按照各自的色谱条件测定绿原酸和木犀草苷
的含量 ＲSD(n = 5)分别为 2． 88%和 1． 48%，表明
本方法有良好的重复性。
3． 5 加样回收率
精密称取一定量已知含量的样品，分别加入对
照品适量，按照上述方法制备供试品溶液，测定各组
分含量计算回收率，结果见表 1。
表 1 绿原酸和木犀草苷加样回收率试验结果(n = 5)
成 分
样品含量 /
mg·g － 1
加入量 /
mg·g － 1
测定值 /
mg·g － 1
平均回收
率 /%
ＲSD /
%
17． 18 2． 50 19． 38
绿原酸 17． 18 5． 00 22． 53 101． 22 2． 55
17． 18 7． 50 25． 57
1． 00 0． 13 1． 12
木犀草苷 1． 00 0． 26 1． 28 100． 95 1． 59
1． 00 0． 40 1． 43
3． 6 样品的测定
采用 HPLC检测绿原酸(图 1A)和木犀草苷(图
1B)，各组分均能良好分离。以干燥品来计算各样品
中活性组分的含量(%，g·g －1)，结果如表 2 所示。前
期研究可知经蒸制晒干处理的的灰毡毛忍冬花蕾中
绿原酸含量为 3． 156%，木犀草苷含量为0． 122%［9］。
将茎叶中测得的绿原酸及木犀草苷含量与同时期花
蕾中的含量进行比较，结果如图 2 所示。
表 2 不同季节灰毡毛忍冬茎叶中绿原酸和
木犀草苷的含量(x ± s，n = 3) %
绿原酸含量 木犀草苷含量
叶 茎 叶 茎
夏季(6月份) 2． 218 ± 0． 016 0． 638 ± 0． 018 0． 480 ± 0． 016 0． 252 ± 0． 012
秋季(11月份) 3． 031 ± 0． 055 0． 658 ± 0． 021 0． 456 ± 0． 011 0． 071 ± 0． 002
冬季(2月份) 1． 715 ± 0． 029 0． 500 ± 0． 070 0． 558 ± 0． 033 0． 029 ± 0． 001
春季(5月份) 1． 718 ± 0． 021 0． 765 ± 0． 102 0． 100 ± 0． 003 0． 085 ± 0． 001
图 2 不同季节灰毡毛忍冬茎叶中绿原酸和木犀草苷的
相对含量(%，以夏季花期花蕾中各物质含量为对照)
由实验数据可见，绿原酸和木犀草苷在不同季
节的灰毡毛忍冬的花、茎、叶中均有分布，且含量差
别明显。绿原酸含量总体趋势为:花 ＞叶 ＞茎。秋
季(11 月份)的叶片样品含量最高(3． 031%)，约为
同一生长期花蕾绿原酸含量的 96%;在夏季(6 月
份)、冬季(2 月份)和春季(5 月份)采摘的叶片样品
中，绿原酸含量约为花蕾中含量的 54% ～ 70%，;在
不同季节的茎干样品中，绿原酸含量较低，仅为其在
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 32 卷
花蕾中含量的 16% ～ 24%。木犀草苷含量总趋势
为:叶 ＞花和茎(春季除外)。以冬季的叶片样品含
量最高(0． 558%)，约为同一生长期花蕾中木犀草
苷含量的 4． 6 倍;夏季和秋季的叶片样品中木犀草
苷含量分别是花蕾中含量的 3． 7 和 3． 9 倍;春季叶
片中含量较低，约为花蕾中含量的 82%;在不同季
节的茎干样品中，除夏季花期样品中木犀草苷含量
约为其在花蕾中含量的 2． 1 倍外，其它三季的木犀
草苷含量较低，约为花蕾中含量的 24% ～70%。
4 讨 论
绿原酸是金银花和山银花的主要有效成分和活
性成分，具有显著的抗病毒、调节糖脂代谢等功
能［11］。依据 2010 年版《中国药典》，山银花的干燥
花蕾中绿原酸含量不低于 2． 0%［12］。在本研究中，
灰毡毛忍冬的夏季和秋季叶片样品中的绿原酸含量
完全符合药典的规定，以秋季叶片中绿原酸含量最
高(3． 031%)。诸多研究报道了金银花的不同部位
均含有绿原酸，按含量依次为花 ＞叶 ＞茎［4，5，8］。本
研究结果与金银花中绿原酸含量分布趋势一致。而
滕昱伯等研究发现灰毡毛忍冬的主要活性成分绿原
酸在各部位含量为花 ＞茎 ＞ 叶［13］，这可能与灰毡
毛忍冬的产地、品种、采摘季节及提取工艺等因素存
在差异有关。
木犀草苷是金银花的另一主要特征成分，具有
抗菌消炎的功效，药典规定其在金银花干燥花蕾中
含量不低于 0． 05%［12］。由于木犀草苷在灰毡毛忍
冬花蕾中的含量过低，关于其含量检测的报道较
少［11，14］。我们在前期研究中测得经蒸制晒干处理
的灰毡毛忍冬干燥花蕾中的木犀草苷含量为
0． 122%，高于药典中金银花项下指标的规定［9］。本
研究发现灰毡毛忍冬茎叶中含有木犀草苷尚属首次
报道。在不同季节采摘的茎叶样品中，除冬季的茎
干样品外，其它时期茎叶样品中木犀草苷含量均高
于药典规定的下限值。付庆霞报道了木犀草苷在金
银花花期的叶片中含量最高，几乎是花蕾与茎中含
量的 3 倍［7］。本研究结果显示，夏秋冬三季叶片中
的木犀草苷含量远高于花和茎，尤以冬季的叶片样
品中含量最高(0． 558%)，是花蕾中含量的 4． 6 倍。
本研究采用超声波提取和 HPLC，对不同季节
灰毡毛忍冬茎叶样品中的绿原酸和木犀草苷含量进
行检测，方法准确、稳定、可靠。秋季(11 月份)采摘
的灰毡毛忍冬叶中的绿原酸为 3． 031%，为同一生
长时期花蕾中含量的 95%;冬季(2 月份)采摘的灰
毡毛忍冬叶中的木犀草苷含量为 0． 558%，是花蕾
中含量的 4． 6 倍，二者均高于《中国药典》的规定标
准。因此，在秋冬季节对灰毡毛忍冬进行整型修剪，
叶片等副产物资源丰富，药源成分充足，灰毡毛忍冬
的药用价值将得以高效开发利用。
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