全 文 ：论 著
(基础研究)
羽扇豆醇对人共刺激细胞及结肠癌细胞株 SW480 的
影响
毕亭亭，刘军权，陈复兴，刘 岩，朱炳喜
［摘要］ 目的 共刺激细胞是一种对肿瘤细胞有杀伤作用的 NK样 T细胞，既往研究表明羽扇豆醇作为一种天然植物提取
物，能改变 NK细胞、γδT细胞的生长及其对肿瘤细胞的作用。文中主要探讨羽扇豆醇对人共刺激细胞杀伤结肠癌细胞株 SW480
的影响。 方法 取健康人外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子诱导为共刺激细胞;不同浓度的羽扇豆醇在作用于共刺激
细胞及结肠癌细胞株不同时间段后，甲基偶唑蓝(MTT)法检测羽扇豆醇对共刺激细胞及结肠癌细胞株 SW480 生长的影响;乳酸
脱氢酶(LDH)法检测共刺激细胞对结肠癌细胞株 SW480的杀伤活性。 结果 羽扇豆醇浓度在 0． 1 ～200． 0μg /mL时对共刺激
细胞的生长有促进作用，对结肠癌细胞株 SW480 有抑制作用;羽扇豆醇诱导后，共刺激细胞对 SW480 的杀伤活性增强，浓度为
12． 5mg /L时与空白对照比较的差异有统计学意义(76% vs 40%，P ＜0． 05)。 结论 羽扇豆醇能促进共刺激细胞的增殖，抑制
结肠癌细胞株 SW480的生长，并能增加 SW480对共刺激细胞的敏感性，增强共刺激细胞对 SW480细胞株的杀伤能力。
［关键词］ 羽扇豆醇;共刺激细胞;结肠癌细胞株 SW480;杀伤活性
［中图分类号］ Ｒ979． 1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1008-8199(2014)10-1047-05
作者单位:221002 徐州，徐州医学院研究生学院(毕亭亭、刘 岩) ;
221002 徐州，徐州医学院附属医院消化内科(朱炳喜) ;
221004 徐州，解放军第九七医院实验科(刘军权、陈复兴)
通讯作者:朱炳喜，E － mail:82200496@ 163． com
Effects of lupeol on human co-stimulation cells and colonic cancer cell lines SW480
BI Ting-ting1，LIU Jun-quan3，CHEN Fu-xing3，LIU Yan1，ZHU Bing-xi2
(1． Graduate School，Xuzhou Medical College，Xuzhou 221002，Jiangsu，China;2． Department of Gastroenterolo-
gy，The Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College，Xuzhou 221002，Jiangsu，China;3． Department of Central
Laboratory，97th Hospital of Chinese PLA，Xuzhou 221004，Jiangsu，China)
［Abstract］ Objective Co-stimulation cells is a kind of natual killer (NK)-like T cells，which can kill tumor cells． Previous
studies show that lupeol，an natural plant extracts，can change the growth of NK cells，γδT cells and their effects on tumor cells． This
study aimed to investigate the effects of lupeol on human co-stimulation cells and colonic cancer cell lines SW480． Methods The
peripheral blood mononuclear cells (PBMC)from healthy volunteers were induced in vitro by different cytokines and transferred into
Co-simulation cells． After SW480 and Co-stimulation cells were incubated with different concentrations of lupeol for different durations，
methyl thiazolyl tetrazolium (MTT)was used to detect the effects of lupeol on co-stimulation cells and colonic cancer cell lines SW480．
Lactate dehydrogenase was used to determine the cell-killing activity of Co-simulation cells to colonic cancer lines SW480． Ｒesults
The concentration of lupeol in 0． 1 － 200． 0 mg /L promoted the growth of Co-stimulation cells and inhibited the colonic cancer cell lines
SW480． When the concentration of lupeol is at 12． 5mg /L，the cell-killing activity of Co-simulation cells to colonic cancer lines SW480
was enhanced significantly compared with the controls (76% vs 40%，P ＜ 0． 05)． Conclusion Lupeol could promote the prolifera-
tion of Co-stimulation cells，inhibit the growth of cancer lines SW480，and strengthen the cytotoxicity of Co-stimulation cells against co-
lonic cell lines SW480．
［Key words］ Lupeol;Co-stimulation cells;Colonic cell lines SW480;Killing activity
0 引 言
结肠癌是目前威胁人类健康最常见的恶性肿瘤
之一，是一种以局部表现为主的全身性疾病。目前
一般采用手术、化疗、放疗等方案治疗结肠癌，但部
分患者术后采用标准的化疗方案仍无法避免肿瘤的
·7401·医学研究生学报 2014 年 10 月 第 27 卷 第 10 期 J Med Postgra，Vol． 27，No． 10，October，2014
DOI:10.16571/j.cnki.1008-8199.2014.10.005
早期复发［1］，因此提高其生存率成为治疗的关键。
随着细胞免疫学的发展，生物治疗逐渐成为研究的
热点。羽扇豆醇是一种可从草莓、芒果等多种果蔬
以及植物中提取的五环三砧类化合物［2 － 4］，具有抗
炎症、抗氧化、促进创面愈合、抗肿瘤等作用［5］。有
研究表明，一定浓度的羽扇豆醇能促进 γδ T细胞的
生长及其对胰腺癌细胞的杀伤作用［6］，但有关羽扇
豆醇在体外对人共刺激细胞杀伤结肠癌细胞株
SW480 的报道国内外鲜见。因此，本研究探讨羽扇
豆醇对人共刺激细胞杀伤结肠癌细胞株 SW480 生
长的影响。
1 材料与方法
1． 1 材料 人结肠癌细胞株 SW480 (购于上海细
胞生物研究所，本室传代保存) ;羽扇豆醇(lupeol)
(Sigma 公司) ;胰蛋白酶、ＲPMI 1640(GIBCO 公
司) ;人 AB血清(徐州市血站) ;胎牛血清、淋巴细胞
分离液(中国科学院血液病研究所) ;二甲基亚砜
(dimethyl sulfoxide，DMSO)、甲基偶唑蓝(MTT) (美
国 Sigma 公司) ;恒温 CO2培养箱公司、倒置显微镜
(德国 Wilovert公司) ;超净工作台、低温离心机 (北
京希亚克技术有限公司) ;ST-360 酶标仪(上海科华
实验系统有限公司) ;Encore自动生化分析仪(北京
希亚克技术有限公司) ;流式细胞仪(flow cytometer，
FCM) (美国 BD公司)。
1． 2 共刺激细胞的培养 取 10 份健康人外周抗
凝血每份 10 mL，用淋巴细胞分离液分离单个核细
胞(离心半径 12 cm，1500 r /min离心 15 min) ，吸取
单个核细胞层，等渗盐水洗涤 3 次(离心半径 12
cm，1500 r /min离心，10 min /次) ，用ＲPMI l640 培
养液(含 rhIFN-γ 2 × 106U /L、100 mL /L 小牛血清、
50 mL /L人 AB 血清)调整细胞密度为 5 × 108 /L，
接种于 6 孔细胞培养板中，每孔 5 mL，置37 ℃、50
mL /L CO2环境培养 24 h 后收集细胞，离心弃上清
液后用 ＲPMI 1640 洗涤 1 次。用 ＲPMI 1640 完全
培养液(含 100 mL /L 小牛血清、50 mL /L 人 AB 血
清、IL-1α 10 μg /L、rhIL-2 5 × 104 U /L、CD3 mAb
1mg /L)调整细胞密度为 5 × 108 /L，接种于 6 孔细
胞培养板中，每孔 5 mL，然后根据分组分别加入下
列细胞刺激因子:IL-15 20 μg /L、IL-21 10 μg /L、
CD28 10 mg /L单抗，于 37 ℃、50 mL /L CO2培养箱
中培养，每 2 天半量换培养基(含相应的细胞刺激
因子)1 次，并调整细胞密度为 5 × 108 /L。收集共
刺激细胞做相关检测。
1． 3 人结肠癌细胞株 SW480 的培养 将复苏后的
细胞配成 1． 75 × 104 /L 的细胞悬液，置于细胞培养
瓶中，在 37 ℃、50 mL /L CO2条件下培养，2 ～ 3 d 更
换细胞培养液，细胞达 80% 瓶底时，以 0． 02%
EDTA消化脱壁，收集细胞，离心半径 12 cm，800
r /min离心 3 min，弃去上清备用。
1． 4 羽扇豆醇原液的配制 羽扇豆醇纯度≥95%，
取 3 mg，用温无水乙醇和二甲基亚砜(DMSO)按1∶1
混匀，配成原液浓度为 40 mg /mL，放入 － 20 ℃冰箱
储存备用。
1． 5 MTT 法检测 将对数生长期的结肠细胞株
SW480 及培养 7 d 的共刺激细胞分别配成 1． 75 ×
104 /L、4 × 104 /L的细胞悬液，均接种于 96 孔板中，
0． 2 mL /孔，加入不同浓度的羽扇豆醇(终浓度分别
为 200 mg /L，倍比稀释至 0． 005 mg /L)。同时设空
白和溶剂(每孔加入与溶解羽扇豆醇等量的溶剂)
对照组，每组设 3 个复孔，孵育 24、48、72 h后每孔加
人 MTT(5 g /L)液 20 μL，37 ℃培养箱孵育 4 h 后弃
去上清液，每孔加入 DMSO 150 μL，轻轻震荡 10 min
使其充分溶解，在 540 nm波长酶标仪上测定各孔吸
光度值(A)。每试验重复 3 次，求其平均值，并计算
细胞生长抑制率和细胞生长增殖率，公式如下:
细胞生长抑制率(% ) = ( 对照 A值 －实验 A值) /
对照 A值 ×100%
细胞生长增殖率(% ) = ( 实验 A值 －对照 A值) /
对照 A值 ×100%
1． 6 LDH法检测共刺激细胞对 SW480的杀伤活性
1． 6． 1 共刺激细胞对羽扇豆醇诱导后的结肠癌细胞
株 SW480杀伤活性的检测 将培养 7 d的共刺激细胞
(效应细胞)及经羽扇豆醇(终浓度为 0． 4、0． 8、1． 6、
3． 1、6． 2、12． 5、25． 0、50． 0 mg /L，浓度选择根据 MTT
结果)诱导的对数期生长结肠癌 SW480 细胞(靶细
胞)分别用含 100 mL /L 胎牛血清的 ＲPMI 1640 配成
2 ×109 /L和 2 × 108 /L 细胞悬液。各取 0． 5 mL 效靶
细胞悬液充分混合，置37℃、50mL /L CO2孵箱中孵育
6 h后，离心半径为 12 cm，1500 r /min离心 10min收集
上清液，按乳酸脱氢酶试剂盒要求操作，在全自动生
化分析仪 340 nm 波长下测定 LDH 的活性单位
(U/L)。每测试样本均设未加羽扇豆醇的对照组。
同时检测单靶细胞的自然释放值和单效应细胞的自
然释放值。每份测试样本重复 3次，取平均值。
1． 6． 2 羽扇豆醇诱导后的共刺激细胞对结肠癌细胞
株 SW480的杀伤活性检测 取将经羽扇豆醇(终浓度
为 0． 4、0． 8、1． 6、3． 1、6． 2、12． 5、25． 0、50． 0 mg /L)诱导
培养 7 d的共刺激细胞(效应细胞)及对数期生长的
结肠癌 SW480 细胞(靶细胞)分别配成 2 × 109 /L 和
2 × 108 /L 细胞悬液。余操作步骤及检测方法同
1． 6． 1。计算共刺激细胞杀伤活性，公式如下。
共刺激细胞杀伤活性( % ) = ( 测定管 LDH 单
位 －效应细胞自然释放 LDH 管) / ( 靶细胞最
大释放 LDH管 －靶细胞自然释放 LDH 管) ×
100%
·8401· 医学研究生学报 2014 年 10 月 第 27 卷 第 10 期 J Med Postgra，Vol． 27，No． 10，October，2014
1． 7 统计学分析 采用 SPSS 13． 0 软件进行统计
学处理。计量资料使用平均数 ±标准差(x ± s)表
示。组间均数比较采用单因素方差分析(One-way
ANOVA) ，多组间两两比较用 Dunnet t检验。以P≤
0． 05为差异有统计学意义。
2 结 果
2． 1 共刺激细胞形态学观察结果 共刺激细胞为
贴壁细胞，在培养过程中发现，培养 24 h 后动态观
察细胞出现明显增殖现象，培养 3 d 后可见小集落
状细胞，7 d后出现大的集落细胞生长，见图 1。
2． 2 羽扇豆醇对人共刺激细胞生长的影响 不同
浓度的羽扇豆醇作用人共刺激细胞 24、48、72 h 后，
浓度在 0． 1 ～ 12． 5 mg /L 时对人共刺激细胞的生长
有促进作用，且随着浓度的逐渐升高细胞增殖率
升高，浓度在 12． 5 ～ 100． 0 mg /L 时，其促进作用逐
渐减弱，100． 0 ～ 200． 0 mg /L 之间促进作用不再有
明显变化，72 h 浓度为 12． 5 mg /L 时增殖率达到最
大值，见图 2。24、48、72 h 各浓度组与空白对照组
比较均有统计学意义(P ＜ 0． 05) ，空白对照组与溶
剂对照组比较均无统计学意义，见表 1。
2． 3 羽扇豆醇对结肠癌细胞株 SW480 生长的影响
羽扇豆醇作用于结肠癌细胞株 SW480 24、48、72 h
后，在 0． 05 ～ 200． 0 mg /L 时，对 SW480 的生长有抑
制作用，随着浓度的升高抑制率逐渐上升，呈浓度依
赖性，25． 0 mg /L 时抑制率开始显著增高，见图 3。
24、48、72 h各浓度组与空白对照组、溶剂对照组比
较均有统计学差异(P ＜ 0． 05) ，空白对照组与溶剂
对照组比较均无统计学意义，见表 2。
图 1 显微镜下培养 7 d共刺激细胞形态
Figure 1 The shape of Co-stimulation cells under the
microscope at the 7th day
图 2 不同浓度羽扇豆醇对共刺激细胞生长的影响(n =3)
Figure 2 Effects of different concentrations of Lupeol on
the growth of Co-stimulation cells(n =3)
表 1 羽扇豆醇作用不同时间后人共刺激细胞的 A值比较(x ± s，n =3)
Table 1 Different concentrations of Lupeol effect on Co-stimulation cells after 24 h、48 h、72 h (x ± s，n =3)
组 别
A值
24 h 48 h 72 h
空白对照组 0． 296 7 ± 0． 002 5 0． 298 6 ± 0． 002 5 0． 303 0 ± 0． 001 0
溶剂对照组 0． 298 7 ± 0． 003 1 0． 300 3 ± 0． 001 5 0． 304 0 ± 0． 004 4
羽扇豆醇组(mg /L)
0． 005 0． 303 0 ± 0． 003 6* 0． 306 3 ± 0． 003 1* 0． 308 3 ± 0． 001 5
0． 01 0． 306 0 ± 0． 002 0* 0． 309 7 ± 0． 001 5* 0． 312 7 ± 0． 002 5*
0． 025 0． 311 7 ± 0． 002 1* 0． 315 3 ± 0． 004 0* 0． 321 7 ± 0． 002 1*
0． 05 0． 317 0 ± 0． 001 0* 0． 320 3 ± 0． 002 5* 0． 345 0 ± 0． 003 0*
0． 1 0． 323 3 ± 0． 003 1* 0． 337 3 ± 0． 001 5* 0． 348 3 ± 0． 002 5*
0． 2 0． 327 7 ± 0． 001 5* 0． 344 3 ± 0． 002 5* 0． 371 0 ± 0． 002 6*
0． 4 0． 337 7 ± 0． 003 1* 0． 359 7 ± 0． 001 5* 0． 392 0 ± 0． 003 6*
0． 8 0． 352 0 ± 0． 005 3* 0． 384 3 ± 0． 004 0* 0． 436 3 ± 0． 003 5*
1． 6 0． 360 0 ± 0． 002 0* 0． 391 6 ± 0． 001 5* 0． 452 3 ± 0． 002 5*
3． 1 0． 361 3 ± 0． 003 2* 0． 396 6 ± 0． 002 1* 0． 468 7 ± 0． 003 0*
6． 2 0． 367 0 ± 0． 002 6* 0． 418 0 ± 0． 002 0* 0． 480 3 ± 0． 005 1*
12． 5 0． 375 3 ± 0． 002 5* 0． 435 6 ± 0． 002 1* 0． 516 3 ± 0． 004 5*
25． 0 0． 357 7 ± 0． 002 5* 0． 392 7 ± 0． 003 1* 0． 465 0 ± 0． 004 6*
50． 0 0． 348 0 ± 0． 002 6* 0． 364 0 ± 0． 003 6* 0． 425 0 ± 0． 005 6*
100． 0 0． 320 3 ± 0． 002 5* 0． 331 3 ± 0． 006 1* 0． 341 7 ± 0． 003 5*
200． 0 0． 317 7 ± 0． 002 5* 0． 324 0 ± 0． 005 6* 0． 336 0 ± 0． 002 0*
与各时间点空白对照组比，* P ＜ 0． 05
·9401·医学研究生学报 2014 年 10 月 第 27 卷 第 10 期 J Med Postgra，Vol． 27，No． 10，October，2014
表 2 羽扇豆醇作用后 SW480 细胞的 A值(x ± s，n =3)
Table 2 Effect of different concentrations of Lupeol on the A value of SW480 cells (x ± s，n =3)
组 别
A值
24 h 48 h 72 h
空白对照组 0． 394 3 ± 0． 003 8 0． 377 6 ± 0． 002 5 0． 404 7 ± 0． 004 2
溶剂对照组 0． 392 0 ± 0． 002 0 0． 377 0 ± 0． 002 0 0． 401 7 ± 0． 003 2
羽扇豆醇组(mg /L)
0． 005 0． 386 7 ± 0． 004 2* 0． 365 0 ± 0． 002 6* 0． 388 3 ± 0． 003 8*
0． 01 0． 384 0 ± 0． 003 5* 0． 361 3 ± 0． 003 1* 0． 383 7 ± 0． 005 1*
0． 025 0． 381 7 ± 0． 003 2* 0． 357 3 ± 0． 003 1* 0． 377 3 ± 0． 005 0*
0． 05 0． 378 7 ± 0． 003 1* 0． 352 7 ± 0． 003 1* 0． 368 7 ± 0． 006 5*
0． 1 0． 378 0 ± 0． 003 6* 0． 349 3 ± 0． 002 5* 0． 355 0 ± 0． 005 0*
0． 2 0． 374 0 ± 0． 004 4* 0． 341 3 ± 0． 001 5* 0． 335 0 ± 0． 006 6*
0． 4 0． 371 0 ± 0． 003 6* 0． 322 6 ± 0． 002 5* 0． 309 0 ± 0． 007 8*
0． 8 0． 369 0 ± 0． 002 6* 0． 303 3 ± 0． 003 1* 0． 297 0 ± 0． 006 2*
1． 6 0． 366 3 ± 0． 003 1* 0． 294 0 ± 0． 003 6* 0． 291 7 ± 0． 002 5*
3． 1 0． 362 6 ± 0． 004 0* 0． 289 3 ± 0． 003 5* 0． 287 0 ± 0． 003 6*
6． 2 0． 358 3 ± 0． 001 5* 0． 286 3 ± 0． 004 0* 0． 283 0 ± 0． 005 6*
12． 5 0． 353 0 ± 0． 002 6* 0． 280 3 ± 0． 004 9* 0． 279 7 ± 0． 005 5*
25． 0 0． 348 7 ± 0． 002 3* 0． 276 3 ± 0． 003 2* 0． 275 3 ± 0． 004 7*
50． 0 0． 317 3 ± 0． 002 5* 0． 260 0 ± 0． 005 0* 0． 243 3 ± 0． 005 0*
100． 0 0． 282 0 ± 0． 005 3* 0． 241 7 ± 0． 002 1* 0． 225 6 ± 0． 007 6*
200． 0 0． 253 7 ± 0． 005 7* 0． 218 0 ± 0． 002 0* 0． 196 3 ± 0． 001 5*
与各时间点空白对照组及溶剂对照组相比，* P ＜ 0． 05
图 3 羽扇豆醇对 SW480 生长的影响(n =3)
Figure 3 Effect of Lupeol on the growth of SW480 cells(n =3)
2． 4 共刺激细胞对 SW480 的杀伤活性影响
2． 4． 1 共刺激细胞对羽扇豆醇作用后的 SW480 的
杀伤作用 浓度在 0． 4 ～ 12． 5 mg /L 时，共刺激细胞
对 SW480 的杀伤活性明显高于空白对照组，浓度为
12． 5 mg /L 时杀伤活性最强(71%) ，与空白对照组
(38%)比较，差异有统计学意义(P ＜ 0． 05)。当浓
度超过 12． 5 mg /L后，杀伤活性开始下降，见图 4。
与 0 mg /L(空白对照组)比较，* P ＜ 0． 05
图 4 共刺激细胞对羽扇豆醇作用后的 SW480 的杀伤作用
(n =3)
Figure 4 The killing effects of the Co-stimulation cells on
SW480 cells cultured with Lupeol (n =3)
2． 4． 2 羽扇豆醇诱导后的共刺激细胞对 SW480 的
杀伤作用 浓度在 0． 4 ～ 12． 5 mg /L 时，共刺激细胞
对 SW480 的杀伤活性显著升高，12． 5 mg /L 达到最
大值(76%) ，与空白对照组(40%)比较差异有统计
学意义(P ＜ 0． 05)。当浓度超过 12． 5 mg /L后，杀伤
活性开始下降，见图 5。
与 0 mg /L(空白对照组)比较，* P ＜ 0． 05
图 5 羽扇豆醇诱导后的共刺激细胞对 SW480 的杀伤作用
(n =3)
Figure 5 The killing effects of the Co-stimulation cells which
cultured with Lupeol on SW480 cells (n =3)
3 讨 论
羽扇豆醇具有抗炎止痛、抗糖尿病等药理活
性［8 － 9］。近年来的研究发现羽扇豆醇也具有抗肿瘤
的作用，张琳和张有成［10］的研究表明羽扇豆醇对黑
色素瘤、白血病、皮肤癌、胰腺癌、乳腺癌都有抗肿瘤
作用，抗肿瘤机制主要是诱发肿瘤凋亡、阻断肿瘤细
胞的信号传导通路，抑制肿瘤血管生成及转移。
细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced kil-
ler，CIK)是多种刺激因子联合诱导活化的 NK 样 T
细胞。不仅具有 T 淋巴细胞特异性抗瘤活性，而且
·0501· 医学研究生学报 2014 年 10 月 第 27 卷 第 10 期 J Med Postgra，Vol． 27，No． 10，October，2014
有 NK细胞的非 MHC限制性杀瘤特性，其增值速度
快、杀伤活性高、杀瘤谱广、副作用小和对正常骨髓
造血影响轻等优点而被广泛应用于肿瘤的过继性免
疫治疗［11］。许多研究发现，添加不同的共刺激因子
对 T细胞的增殖和抗肿瘤效应有一定的影响。在 T
细胞培养体系中增加 CD28mAb，可促进其增殖［12］;
加入 IL-15 能抑制 T 细胞的凋亡及其中 IFN-γ、
TNF-α的分泌［13］;加入 IL-21 可促进肿瘤组织中
Th17 细胞的分化［14］，参与固有免疫及适应性免
疫［15］，加入 IL-2、IL-15 来增强 T 细胞的细胞毒活性
并促进 IFN-γ 的分泌［16］，促进记忆 T 细胞的增
殖［17］。在常规 CIK 细胞培养基中加入刺激因子
(CD3、CD28、IFN-γ、IL-2、IL-1α、IL-15 和 IL-21)后，
发现这样不仅能促进细胞增殖，而且能提高特异性
细胞毒 T 细胞的扩增，增加记忆性细胞比值［18］。将
这些细胞因子刺激后得到的 T 细胞称为共刺激细
胞。与 CIK 细胞的区别在于其培养前后细胞表型
CD3、CD56、CD107a的表达明显高于 CIK细胞，具有
比 CIK细胞更强的抗肿瘤活性。有研究证实，共刺
激细胞有抗胃癌 SGC-7901、SW-1990 和 SW-1116 细
胞的作用［18］，其抗肿瘤的机制主要是通过释放穿孔
素、颗粒酶而裂解靶细胞。穿孔素是存在于细胞毒
性 T淋巴细胞、自然杀伤细胞和 γδT 细胞胞质中的
细胞毒颗粒，当这些细胞与靶细胞接触后可释放穿
孔素，在靶细胞膜上形成多聚穿孔素管状通道，导致
靶细胞溶解破坏［19］。颗粒酶 B 是杀伤性 T 淋巴细
胞和 NK 细胞颗粒中最重要的丝氨酸蛋白酶，通过
Caspases依赖途径、直接入核途径及不依赖 Caspases
的胞质途径杀伤靶细胞［20］。T 细胞表面的 CD107a
分子，与抗原特异性细胞活化后的脱颗粒过程有关，
脱颗粒则是穿孔素、颗粒酶依赖性靶细胞杀伤过程
的关键步骤［21］。但共刺激细胞对抗结肠癌的报道
尚不多见。
既往我们研究已证实，羽扇豆醇在一定时间、一
定的浓度范围内能促进 γδ T细胞、NK细胞的生长，
抑制胰腺癌［6］、胃癌［22］细胞的增殖，增强 γδ T 细
胞、NK 细胞对胰腺癌、胃癌的杀伤活性。本实验主
要研究羽扇豆醇诱导后共刺激细胞杀伤结肠癌的作
用，结果发现羽扇豆醇的浓度在 0． 1 ～ 12． 5 mg /L 范
围内对共刺激细胞的生长有促进作用，超过 12． 5
mg /L促进作用开始减弱，这说明在适当的浓度范围
内，羽扇豆醇能促进共刺激细胞的生长。随着浓度
的逐渐升高，羽扇豆醇对结肠癌细胞株 SW480 的抑
制作用逐渐增强，说明其有抗结肠癌细胞增殖的作
用。另外，羽扇豆醇诱导后，共刺激细胞对结肠癌细
胞株 SW480 的杀伤活性明显增强，说明羽扇豆醇不
仅能提高 SW480 对共刺激细胞的敏感性，而且能提
高共刺激细胞对 SW480 的杀伤能力。其机制可能
与羽扇豆醇能上调共刺激细胞内穿孔素、颗粒酶、
CD107a的表达有关，其对共刺激细胞信号通路的影
响还需进一步研究。
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(收稿日期:2013-08-14; 修回日期:2013-10-07)
(责任编辑:李风华; 英文编辑:杨建军)
·1501·医学研究生学报 2014 年 10 月 第 27 卷 第 10 期 J Med Postgra，Vol． 27，No． 10，October，2014