全 文 ：RP 一 内标法测定 个不同收集地构骨叶中熊果酸和羽扇豆醇的含量
李颜 ,` , 吴技 , , 王峥涛 卫, 郭澄 几海中医药人学 药研究所, 药标准化教育部、点实验室止海 卜海中药标准化
研究 `,心,上海 上海交通大学附属第六人民医院药剂科, 海
摘要 目的 建立以三菇类化合物紫莞酮为内标物 , 同时测定构骨叶药材中熊果酸和羽扇豆醇含量的反相高效液相色谱
脱
一 分析方法。方法 色谱柱 一 , 林 , 流动相 以乙睛一 磷酸水 ,梯度洗流速
和 一住 之间。
的含量测定 。
检测波长 。结果 个不同收集地的构骨叶中熊果酸和羽扇豆醇的含量分别在 一
结论 该法快速 、灵敏度高、重复性好 , 可用于测定构骨叶中主要三菇类化合物熊果酸和羽扇豆醇
关键词 构骨叶 熊果酸
中图分类号 之
羽扇豆醇 反相高效液相色谱法 内标法
文献标识码 文章编号 一 一 一
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构骨日一为冬青科 冬青属 植
物构骨叨己 的干燥计十, 主要
分布 于在我国南方江苏 、湖南 、安徽 、浙江等地 ,
是苦 茶`的上要来源植物之 川 。传统 , ,医药理论
认为 , 构骨叶具有一清热养阴 , 平肝益肾 , 散风通络
等功效 。现代药理学研究表明 , 构骨叶具有抗生育 ,
扩张冠状动脉 , 抗菌等作用 一。大量的植物化学研
究揭示了三菇及其营类是构骨叶中的主要和活性
成分 ,巨其具有多种多样的生理活性阵 。
本研究课题在前期对其主要活性及特征性成
分羽扇豆醇进行定量分析的基础 已 , 进 步对构
骨叶中两个上要的三帖类成分 含量最高的活性成
分熊果酸和特征性的活性成分羽扇 豆醇运用
即一 内标法进行了定量分析 。实验结果表明 ,
该方法简便 、灵敏 , 更全面的对构骨叶质量评价提
供依据 。
仪器与试药
仪器
高效液相色谱仪美国 系列 ,包括
型 检测器 、自动进样器和柱温箱 。电
子分析天平 , 一 型数控超
声波清洗器 比山市超声仪器有限公司 。
试药
乙睛 色谱纯 , 水为超纯水 自制 , 乙酸乙醋 ,
甲醇 分析纯 ,熊果酸 批号 一 ,羽扇豆醇 批
号 一 对照品和紫苑酮 批号 一 内标
物 海中药标准化研究中心 , 经 检测 , 面积
归 ·化法计算 , 纯度多 , 构骨叶药材原植物由
上海中医药大学吴立宏博士鉴定 。
作者简介 李颜 ,
与质以标准研究
女 , 硕 生研究牛 研究方向 , ,药活性成分与质叭标准研究 通讯作者 吴技 , 女 , 不沙于究员 研究方向 卜`药活性成分
一
〔为 , 人人 , 从 〕 ` , 阅药学杂志 年 第 卷第 期
2 方法与结果
色谱条件
色谱柱
, 林 柱 流动相 乙腊 , 】磷酸水 ,
梯度洗脱 , 流速 · 一 色谱峰采集波长范
围 一 检测波氏为 柱温为
进样量为 林 。
对照品和内标物溶液的制备
取紫苑酮 , 精密称定 , 置于 量
瓶中 , 用乙胎溶解并定容至刻度 , 摇匀 , 作为内标
物溶液 。
分别精密称取对照品熊果酸 、羽扇豆醇
不日熊果酸 , 、羽扇豆醇 , 分别
置于 量瓶中 ,用甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,
作为混合对照品溶液 和 。
供试品溶液的制备
构骨叶药材于 ℃干燥 , 粉碎 , 过 目
筛 , 制成粗粉。取构骨叶样品粉末约 , 精密称
定 , 置于 具塞三角瓶中 精密加入乙酸乙酷
, 称重 ℃水浴温浸 , 然后超声振荡
提取 , 放冷至室温 , 称定重量 用乙酸乙酷
补足减失的重量 , 摇匀 , 过滤 取续滤液 , 蒸
干溶剂 , 甲醇溶解 , 精密加入内标物溶液 ,
定容至 ,经 林 微孔滤膜过滤 ,取续滤液 ,
即得供试品溶液 。色谱图见图 。
系统适应性实验
线性关系考察 精密取混合对照品溶液
, , , , 置于 量瓶中 , 分
别加入内标物溶液 , 用甲醇溶解并定容至刻
度 , 摇匀 , 经 林 微孔滤膜过滤 , 取续滤液
林 进样 ,和对照品溶液 经 林 微孔滤膜过滤
的续滤液 林 进样 , 在 “ ” 色谱条件进行
一 分析 ,以对照品峰面积一与内标物峰而积之
比为纵坐标 均, 以浓度为横坐标因绘制标准曲线 。
熊果酸和羽扇豆醇的线性方程 , 线性范围及相关系
数见表 。
仪器的精密度和样品稳定性 取熊果酸和
羽扇豆醇浓度分别为 和 一`的混合对
照品溶液 , 按 “ ”项下色谱条件连续进样 次 ,
测得熊果峻和羽扇豆醉对照品峰面积与内标物峰
面积之比的相对标准偏差 分另为 和
。另取购自 海的构骨叶样品 , 共 份 ,
精密称定 , 按 , ”项制备供试品溶液 , 按 “ ”项
卜色谱条件进行 分析 , 计算熊果酸和羽扇显
醉对照品峰面积与内标物峰面积之比的 分别
为 和 , 表明精密度良好 。
另取购自 海的构骨叶样品 , 精密称定 ,
按 “ ”项方法制备供试品溶液 , 分别在 , , ,
, 和 的时间内进行 测定 , 分别记
录熊果酸和羽扇豆醇对照品峰面积与内标物峰面
积之比 , 结果表明 , 内 , 对照品和内标物峰面
积比的 值分别为 和 , 说明熊果酸
和羽扇豆醇在 内稳定 。
回收率实验 精密称取已测知熊果酸和羽
扇豆醇含量的购自上海的构骨叶样品约 , 份 ,
分为 组 , 分别加入其含量 , 和 的
熊果酸和羽扇豆醉对照品 , 按 “ ”项条件制各供
试品溶液 ,按 “ ”项下色谱条件进行 测定 ,
计算回收率 , 实验结果见表 。
个收集地构骨叶药材熊果酸和羽扇豆醇含
量测定
分别取 个不同收集地的构骨叶样品 , 按
“ ”项制备供试品溶液 , 按 “ ”项 卜色谱条
件进行 分析 , 结果见表 。从样品 色
谱图 图 中可以看出 , 在木实验色谱条件下 , 熊
果酸和羽扇豆醇是构骨叶的主要成分 , 本实验以此
两个成分作为构骨叶质量评价的指标 。
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讨 论
在本实验中考察了氯仿 、乙酸乙酷和甲醇等不
同溶剂对熊果酸和羽扇豆醇的提取效率 , 结合溶剂
表 熊果酸和羽扇豆醇的线性回归分析
图 对照品和样品的色谱图
一江已合对照 ,, 色潜图 一拘骨叶样公归叮南色谱图
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中国药学杂志 年 月第 卷第 期
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表 熊果酸和羽扇豆醇的加样回收试验结果 。二
毗 如 “ 加 了
招
样品色谱图比较, 可知紫苑酮不干扰构骨叶样品的
测定 , 而且作为三菇类化合物的紫莞酮和被测化合
物熊果酸和羽扇豆醇有相似的色谱响应 , 故选择紫
苑酮作为内标物。考虑到熊果酸的偏酸性特性 , 选
择在流动相中加入酸抑制剂调节 值抑制酸的解
离 。由于甲酸和醋酸在 处有较强的吸收 , 因
此本实验选择在紫外区几乎无吸收的磷酸调节流
动相的 值。
从样品测定结果 表 中可以看出 , 各收集
地构骨叶中熊果酸和羽扇豆醇的含量均存在一定
差异 , 其中上海张江样品中的熊果酸含量最高 , 新
疆乌市的熊果酸含量最低 贵州贵阳样品中的羽扇
豆醇含量最高 , 河南许昌和江苏南京的羽扇豆醇含
量最低 , 但在所有样品中熊果酸的含量均大于羽扇
豆醇的含量 。由于样本数量有限 , 熊果酸和羽扇豆
醇含量高低的相关性尚未有明显的规律性发现有
待进一步研究 。
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表 构骨叶样品中熊果酸和羽扇豆醇的含量 二
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自身对色谱行为的影响 , 选择采用乙酸乙酷提取后
经甲醇定容的方法。同时也对加热回流 、索氏提取 、
超声振荡提取及温浸后超声振荡提取等提取方法
进行了考察 , 在考虑提取效率和操作简便性的基础
上选择采用温浸后超声振荡的提取方法。同时通过
对大黄素 、大黄酚 、大黄素甲醚 、蛇床子素 、苍术
素 、苍术素醇 、 , 一二苯甲酞瓜萎仁二醇和紫苑酮
等化合物在 “ ”色谱条件下的保留时间和构骨叶
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