全 文 ：世界中西医结合杂志2008年第3卷第8期 WorldJournalofIntegratedTraditionalandWesternMedicine 2008,Vol.3,No.8
复方南星止痛膏对甲醛等致炎性疼痛模型
大鼠止痛作用及c-fos表达的影响
陈荣明 1,姜 淼 1,殷书梅 2,俞晶华 1,仇锦春 1,卞慧敏 1
【摘要】目的:观察复方南星止痛膏的镇痛作用及机理。方法:采用两种致炎模型(甲醛、胰蛋白酶),两种对照药物来
建立大鼠模型,大鼠甲醛致炎性疼痛模型选用泼尼松为阳性对照药;胰蛋白酶致炎疼痛模型选用吲哚美辛。观察复
方南星止痛膏对两种致炎模型大鼠足跖肿胀压痛的影响及脊髓中 c-fos的表达。结果:复方南星止痛膏可以提高两
种致炎剂引起的大鼠足跖肿胀压痛的痛阈值;降低脊髓中 c-fos的表达。结论:复方南星止痛膏具有一定的镇痛作
用,其作用机理与减少脊髓中c-fos的表达有关。
【关键词】复方南星止痛膏;镇痛;c-fos表达
【中图分类号】R285.5 【文献标识码】A 【文章编号】1673-6613(2008)08-0454-03
实验研究
[作者单位]1.南京中医药大学,江苏 南京 210046;2.江苏南星药业
有限责任公司,江苏 南京 210049
复方南星止痛膏是由生南星、生川乌、丁香、肉桂、
乳香、没药、白芷、细辛、樟脑、冰片等药物组成,具有散
寒除湿、活血止痛之功,临床将其外贴于局部治疗寒湿
瘀阻所致的关节、肌肉疼痛。为了进一步评价其抗炎镇
痛作用,并探讨其镇痛机理,我们进行了复方南星止痛
膏抗炎镇痛的实验研究。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 药品及试剂 复方南星止痛膏,规格:10cm×13cm,
药膏量 6cm×9cm(1.84g生药/片,0.034g生药/cm2)由
江苏南星药业有限责任公司提供(批号:061210);醋酸
泼尼松,规格:5mg/片,由江苏鹏鹞药业有限公司生产
(批号:0608251);甲醛,由上海久亿化学试剂有限公司
生产(批号:040721);吲哚美辛肠溶片,规格:25mg/片,
江苏亚邦爱普森药业有限责任公司生产 (批号:
0609018);c-fos免疫组化试剂盒,武汉博士德生物试剂
公司提供(批号:20070107)。
1.1.2 实验动物 大鼠,雄性,体重 140~180g,由南京
中医药大学实验动物中心提供,实验动物使用许可证
SYXK(苏)2002-0053。
ImpactofCompoundNanxingPainPasteonAnalgesiaandtheExpressionof
C-FosinModelRatswithFormaldehyde-inducedInflammatoryPain
CHENRong-ming1,JIANGMiao1,YINShu-mei2,YUJing-hua1,QIUJin-chun1,BIANHui-min1
(1.NanjingUniversityofChineseMedicine,NanjingJiangsu210046;2.JiangsuNanxingPharmaceuticalCo.,Ltd,Nanjing
Jiangsu210049)
【Abstract】 Objective:ToobservetheanalgesiaanditsmechanismofCompoundNanxingPainPaste.Methods:Twoin-
flammatorymodels(inducedbyformaldehydeandtrypsinass)wereadopted.Twocontroldrugswereadministratedtoestab-
lishratmodels.Informaldehyde-inducedinflammatorypainmodel,prednisonewasselectedtobeactivecontroldrug,and
intrypsinase-inducedinflammatorypainmodel,indomethacinwasused.ItwastoobservetheimpactsofCompoundNanx-
ingPainPasteonplantarswelingandtendernessandexpressionofc-fosinspinalcordintwokindsofinflammatory
model.Results:CompoundNanxingPainPasteimprovedpainthresholdofratplanterswelingandtendernessinducedby
twokindsofinflammatoryagentsandreducedc-fosexpressioninspinalcord.Conclusion:CompoundNanxingPainPaste
actsonanalgesiaanditsmechanismisrelevantwithreductionofexpressionofc-fosinspinalcord.
【Keywords】CompoundNanxingPainPaste;analgesia;c-fosexpression
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DOI:10.13935/j.cnki.sjzx.2008.08.015
世界中西医结合杂志2008年第3卷第8期 WorldJournalofIntegratedTraditionalandWesternMedicine 2008,Vol.3,No.8
1.2 实验方法
本研究采用两种致炎模型,两种对照药物,观察复
方南星止痛膏的止痛作用。大鼠甲醛致炎性疼痛模型
选用阳性对照药泼尼松。大鼠胰蛋白酶致炎疼痛模型
选用的阳性对照药物为吲哚美辛。
1.2.1 大鼠甲醛致炎性疼痛模型[1] 50只大鼠致炎前
测定大鼠右后足正常痛阈值 (大鼠炎性足受压后疼痛
引起的嘶叫或挣扎时作为痛阈值),并按痛阈值与体重随
机分为模型对照组(外贴基质)、阳性泼尼松组(0.0054
g/kg灌胃给药,同时外贴基质)及复方南星止痛膏高(外
贴膏药,0.3300g生药/kg)、中(0.1656g生药/kg)、低
(0.0828g生药/kg)剂量组(以下分别简称南星高剂量组、
南星中剂量组、南星低剂量组)。处理完毕后,于右后足
跖皮下注入5%甲醛0.1mL/只,测定致炎后1h、2h、3h、
4h及6h的痛阈值并记录结果。实验结束后,处死大
鼠,取腰段脊髓,多聚甲醛固定,石蜡包埋,切片备用。
1.2.2 大鼠胰蛋白酶致炎性疼痛模型 60只大鼠致炎
前测定大鼠右后足正常痛阈值,并按痛阈值与体重随
机分为空白对照组(外贴基质)、模型对照组(外贴基
质)、阳性吲哚美辛组(0.0135g/kg,灌胃给药)以及复
方南星止痛膏高、中、低剂量组(给药剂量同甲醛致炎
法)6组。空白对照组不注射致炎剂,其余各组在每只大
鼠右后足足跖皮下注射 0.25%胰蛋白酶 0.1mL诱发局
部急性炎症的发生,受试药组注射后立即用医用胶布固
定膏药粘贴给药。阳性吲哚美辛组灌胃吲哚美辛1mL/
100g。模型对照组用医用胶布固定基质粘贴致炎部位,
并分别于致炎后1h,1.5h,24h测定大鼠炎性足痛阈值。
1.2.3 足跖肿胀大鼠脊髓c-fos的表达 (免疫组化方法)
将切片脱蜡、水化后,用PBS(pH为7.4)冲洗3次,每次 3
min(3×3);每张切片加 1滴 3%过氧化氢阻断溶液,以
阻断内源性过氧化物酶的活性,室温下孵育 10min;
PBS冲洗3×3(下同);每张切片加1滴非免疫性动物血
清,室温下孵育 20min;甩去血清,每张切片加 1滴第
一抗体(c-fos),4°C过夜;PBS冲洗 3×5;甩去 PBS液,
每张切片加 1滴生物素标记的第二抗体,室温下孵育
10min;PBS冲洗 3×3;甩去 PBS液,每张切片加 1滴
SABC,室温下孵育 20min;PBS冲洗 3×3;甩去 PBS液,
每张切片加2滴新鲜配制的DAB溶液,室温下显色,显
微镜下观察3~10min;蒸馏水冲洗,苏木精复染,过梯度
酒精脱水干燥,(二甲苯透明),中性树胶封固。染色结果
采用半定量分析,每张切片随机选取6个视野,计数高倍
镜下出现染色颗粒的阳性细胞数,并计算6个视野的病
理总积分,其半定量标准为:在一个视野下,阳性细胞数
小于 25%为-(1分);25%~50%为+(2分);50%~75%
为++(3分);大于75%为+++(4分)。结果判断参照文献
[2]方法进行,阳性结果为细胞浆中可见棕黄色颗粒。
1.3 统计学处理
各组实验数据以 x±s表示,采用 SPSS11.5统计软
件包进行方差分析,多组间两两比较采用 q检验;c-fos
的表达采用秩和检验。
2 结 果
2.1 复方南星止痛膏对甲醛致大鼠足跖肿胀压痛的影响
结果见表 1,表 2。结果表明造模后大鼠痛阈值明
显下降,复方南星止痛膏高、中剂量在各时间点、低剂
量在1、6h均可显著提高甲醛致炎大鼠的痛阈值,与模
型对照组相比,有显著性差异。阳性泼尼松组大鼠痛阈
值也有明显提高,这可能与其炎症反应较轻有关。
2.2 复方南星止痛膏对胰蛋白酶致大鼠足跖肿胀压痛
的影响
结果见表 3,表 4。结果表明,复方南星止痛膏高、
中剂量在 1h,1.5h和 24h的时候均可以提高胰蛋白
注:与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
0h 1h 2h 3h 4h 6h
模型对照组 贴基质 268.85±49.78 195.19±76.44 227.13±59.59 212.36±51.96 217.60±46.68 193.35±80.13
阳性泼尼松组 0.0054 266.21±89.64 232.34±90.08 270.07±79.90** 270.44±89.02** 269.23±91.15** 244.10±73.23**
南星高剂量组 0.3312 266.09±71.77 290.82±93.05** 307.86±55.07** 279.84±55.63** 306.20±69.30** 264.56±35.19*
南星中剂量组 0.1656 285.43±61.38 272.66±75.69** 301.03±61.63* 308.37±71.11** 315.24±124.18* 301.51±42.55**
南星低剂量组 0.0828 291.00±65.87 293.62±60.29** 285.54±86.37 249.62±58.36 266.42±71.28 284.30±64.39*
组 别 剂量(g/kg)
表1 各组对大鼠甲醛致足跖肿胀压痛的影响 (n=10,x±s)
组 别 剂量(g/kg) 1h 2h 3h 4h 6h
模型对照组 贴基质 73.66±48.61 41.72±43.71 56.49±36.81 51.25±34.45 75.50±41.54
阳性泼尼松组 0.0054 40.13±34.11 0.60±39.62* -0.98±49.07** -0.41±91.15** 28.10±36.30**
南星高剂量组 0.3312 -24.77±73.57** -41.77±58.34** -13.76±64.77** -40.11±53.77** -2.77±48.01**
南星中剂量组 0.1656 12.77±59.77* -15.60±38.28** -22.94±52.37** -29.81±128.53* -16.08±54.03**
南星低剂量组 0.0828 -2.62±65.73** 5.46±42.00 41.38±35.38 24.58±32.22 6.70±52.08**
表2 各组对大鼠甲醛致足跖肿胀压痛差值的影响 (n=10,x±s)
注:与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
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世界中西医结合杂志2008年第3卷第8期 WorldJournalofIntegratedTraditionalandWesternMedicine 2008,Vol.3,No.8
酶致炎大鼠的痛阈值,与模型对照组相比有显著性差
异,而南星低剂量组无明显提高痛阈值的作用。
2.3 复方南星止痛膏对足跖肿胀大鼠脊髓 c-fos表达
的影响
光镜下可见空白对照组无棕黄色颗粒,模型对照组
有大量的棕黄色颗粒;南星高剂量组有少量的棕黄色颗
粒,阳性泼尼松组有一定量的棕黄色颗粒,南星中剂量
组有一定量的棕黄色颗粒,南星低剂量组有大量的棕黄
色颗粒。模型大鼠脊髓背角浅层内有大量的 c-fos免疫
反应阳性神经元。结果表明,模型对照组大鼠脊髓中c-
fos阳性细胞数明显高于空白对照组。复方南星止痛膏
高、中剂量均能显著减少模型大鼠脊髓中 c-fos阳性细
胞数,与模型对照组相比有显著性差异。结果见表5。
3 讨 论
颈、肩、腰、腿疼痛属中医“痹症”范畴,多因寒湿侵
袭致络脉瘀阻,不通则痛。治宜散寒除湿、活血止痛。复
方南星止痛膏即是以此治则组方,方中生天南星、生川
乌为君,散寒除湿;丁香、肉桂、细辛为臣,温经通阳;川
芎、乳香、没药为佐使,活血行气,且调和诸药,使药力
直达病所;全方共奏散寒除湿、活血止痛之功。因复方
南星止痛膏止痛作用明显、疗效确切、使用方便,故在
临床上得到广泛的应用。
疼痛模型的选择由 Dubuisson等[3]于 1977年创立
的甲醛实验,经过很多学者的改进,使其疼痛更贴近临
床实际表现,并具有良好的重复性,已成为研究痛觉调
节机制和镇痛药物筛选的方法而被广泛应用。本实验
采用Abbot等[4]推荐的5%甲醛(最佳浓度)注射于大鼠
足跖底部复制疼痛模型,发现大鼠注射甲醛后,注射足
表现出缩腿、舔爪、抖动等反应。除正常组外,各组大鼠
对伤害性刺激的行为学反应表现分为两个不同的时间
段,其间隔间歇期与国内外实验相符[5]。结果表明,复方
南星止痛膏高、中剂量可明显提高甲醛和胰酶致痛模
型大鼠的痛阈值,与模型对照组比较均有显著性差异。
fos是 c-fos的蛋白表达产物,原癌基因 c-fos是一
种存在于正常神经元细胞核内的即刻早期基因(imme-
diateearlygene,IEG),正常情况下,细胞内c-fos很少表
达,外周伤害性刺激等因素可激活脊髓内 c-fos基因并
表达 fos。一定程度上,fos免疫反应阳性神经元的数量
与所受刺激的强度成正比,因此 fos可作为伤害性刺激
的标志物,是疼痛在分子水平的标志[6-7]。实验结果表
明,复方南星止痛膏能够减少模型大鼠 c-fos阳性神经
元在脊髓背角浅层内的表达,从而阻断了痛觉信息传
导通路,这可能是其发挥镇痛作用的机理之一。
综上所述,复方南星止痛膏可以提高甲醛及胰蛋
白酶致足跖肿胀压痛的痛阈值,具有一定的镇痛作用,
其镇痛作用的发挥可能与抑制c-fos的高表达有关。
参考文献
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作者简介:陈荣明,男,医学博士,副教授,硕士生导师。研究方
向:中医药外治法治疗疼痛证的研究
(收稿日期:2008-06-15)
组 别 剂量(g/kg) 致炎前 1h 1.5h 24h
空白对照组 贴基质 348.04±53.66392.10±35.05**373.61±74.15**322.55±40.24*
模型对照组 贴基质 353.89±16.57259.29±55.04 284.43±32.45 280.84±39.53
阳性吲哚美辛组 0.0135 349.23±56.73362.23±53.41**340.93±56.31* 343.38±62.76*
南星高剂量组 0.3312 351.40±57.05355.79±36.08**313.86±45.21 349.35±63.92**
南星中剂量组 0.1656 351.63±36.85313.81±73.76 315.49±23.53* 339.70±53.02*
南星低剂量组 0.0828 350.72±82.21286.79±68.88 265.06±44.62 287.86±44.11
表3 各组对胰蛋白酶致大鼠足跖肿胀压痛的影响 (n=10,x±s)
注:与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
组 别 剂量(g/kg) 1h 1.5h 24h
空白对照组 贴基质 -44.06±48.22** -25.57±42.71** 25.49±29.02**
模型对照组 贴基质 94.60±47.54 69.46±29.20 73.05±29.41
阳性吲哚美辛组 0.0135 -13.00±23.79** 8.30±36.52** 5.86±28.44**
南星高剂量组 0.3312 -4.39±32.73** 37.54±31.82* 2.05±48.11**
南星中剂量组 0.1656 37.82±42.99* 36.14±32.26* 11.93±30.62**
南星低剂量组 0.0828 63.94±33.81 85.66±54.23 62.86±47.12
表4 各组对胰蛋白酶致大鼠足跖肿胀压痛差值的影响 (n=10,x±s)
注:与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
组 别 n 剂量(g/kg) 阳性细胞病理积分(分)
模型对照组 10 贴基质 23.0±5.1
阳性泼尼松组 10 0.0054 19.0±4.3
南星高剂量组 10 0.3312 11.0±5.5**
南星中剂量组 10 0.1656 15.0±5.9**
南星低剂量组 10 0.0828 22.0±6.6
表5 各组对足跖肿胀大鼠脊髓c-fos表达的影响 (x±s)
注:与模型对照组比较,**P<0.05
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