全 文 ：［基金项目］江西省教育厅科技计划项目（编号：ＧＪＪ０９３２２）；赣南医学院校级科研项目（编号：２００８１０８）　［作者简介］吴素珍，女，硕士学位，讲
师，研究方向：中药资源及活性成分研究，电话：１８９７０７８６１７１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉａｌｉｎｌｉ２００５＠１２６．ｃｏｍ
硫酸酯化当归多糖制备及抗肿瘤活性的考察
吴素珍１，李加林２，陈水亲１，朱秀志１　（１．赣南医学院基础医学院，江西 赣州３４１０００；２．赣南医学院药学院，江西 赣州
３４１０００）
［摘要］　目的：对当归多糖进行硫酸酯化修饰，考察修饰前后当归多糖抗肿瘤活性的变化。方法：采用氨基磺酸－甲酰胺法制
备硫酸酯化当归多糖，ＭＴＴ法检测硫酸酯化前后当归多糖对乳腺癌细胞（ＭＣＦ－７）、白血病细胞（Ｋ５６２）体外增殖的影响。结
果：当归多糖和硫酸酯化当归多糖在体外均能抑制乳腺癌细胞（ＭＣＦ－７）、白血病细胞（Ｋ５６２）的增殖且与浓度呈正相关；对两
种肿瘤的抑制效果又以硫酸酯化当归多糖效果更明显。当质量浓度为２．０ｍｇ·ｍＬ－１时，当归多糖和硫酸酯化当归多糖对乳
腺癌（ＭＣＦ－７）的抑制率分别为４１．４７０　８％，８５．９２６　９％。结论：当归多糖及硫酸酯化当归多糖对乳腺癌细胞（ＭＣＦ－７）、白血病
细胞（Ｋ５６２）都具有明显的抑制作用，且硫酸酯化当归多糖的抑制肿瘤生长作用明显强于当归多糖。
［关键词］　抗肿瘤；ＭＴＴ法；硫酸酯化当归多糖
［中图分类号］Ｒ２８　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－５２１３（２０１３）２２－１８３２－０４
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍＡｎｇｅｌｉｃａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ
ＷＵ　Ｓｕ－ｚｈｅｎ１，ＬＩ　Ｊｉａ－ｌｉｎ２，ＣＨＥＮ　Ｓｈｕｉ－ｑｉｎ１，ＺＨＵ　Ｘｉｕ－ｚｈｉ　１（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂａｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇａｎｎａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｊｉａｎｇｘｉ　Ｇａｎｚｈｏｕ　３４１０００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇａｎｎａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｎｇｘｉ　Ｇａｎｚｈｏｕ　３４１０００，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍＡｎｇｅｌｉｃａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ　ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｓｕｌ－
ｆａｔｅｄ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍＡｎｇｅｌｉｃａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｈｏｔ　ｗａｔｅｒ，ｔｈｅｎ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｌｃｏ－
ｈｏｌ．Ａｍｉｎｏ　ｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ－ｆｏｒｍａｍｉｄｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｇｅｔ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａ－
ｒｉｄｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｓ（ＭＣＦ－７），ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｃｅｌｓ（Ｋ５６２）ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｐｏｌｙ－
ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｂｅｆｏｒｅ／ａｆｔｅｒ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｓ（ＭＣＦ－７）ａｎｄ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｃｅｌｓ
（Ｋ５６２）ｉｎ　ｖｉｔｒｏ，ｗｈａｔ＇ｓ　ｍｏｒｅ，ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ；ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｕｌｆａｔｅｄ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｕｎ－ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｕｌｄ　ｅｎｈａｎｃｅ
ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ；ＭＴＴ；ｓｕｌｆａｔｅｄ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
　　当归是临床使用最多的中药之一，素有“十方九
归”之称。当归多糖是其发挥药效的主要成分之一，
是一类重要的生物大分子物质，能提高机体的免疫
功能，具有防衰老，抗氧化、抗癌、抗病毒等作用［１］。
研究发现硫酸多糖具有抗肿瘤、抗凝血、抗氧
化、增强免疫等作用［２］。其抗病毒和抗肿瘤活性引
起了人们的极大重视。除了天然的硫酸酯化多糖，
许多原本不具有或仅有微弱抗病毒或抗肿瘤活性的
多糖，经过硫酸酯化修饰后其抗病毒或抗肿瘤活性
得到了显著提高，而且由于其抗病毒或抗肿瘤的同
时还能提高机体的免疫功能，成为具有良好开发前
景的药物［３］。本实验采用氨基磺酸－甲酰胺法制备
硫酸酯化当归多糖，比较研究了硫酸酯化前后当归
多糖抗肿瘤活性的变化，为当归多糖的抗肿瘤研究
提供实验依据。
１　材料
１．１　仪器与试剂　ＲＰＭＩ－１６４０培养基（北京赛默
飞世尔生物化学制品有限公司，批号ＮＹＡ０７８４）；胎
牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司，批号
０７０６１１）；噻唑蓝（ＭＴＴ，Ｓｉｇｍａ公司）、二甲基亚砜（
ＤＭＳＯ，Ｓｉｇｍａ公司）；透析袋 （截留分子量７　０００）；
ＣＯ２培养箱、ＭＫ３酶标仪（美国Ｔｈｅｒｍｏ公司）；ＷＦ－
４０００微波快速反应系统（上海屹尧微波化学技术有
限公司）；傅立叶红外光谱仪（美国ｎｉｃｏｌｅｔ　３８０）；当
归多糖（多糖含量９２．３％，分子量为１．４×１０４　Ｄａ，本
实验室制备）；其他化学试剂为国产分析纯。
１．２　细胞株　Ｋ５６２细胞株由赣南医学院范启兰教
授惠赠，ＭＣＦ－７细胞株由赣南医学院向明钧副教授
惠赠。
１．３　药材　当归药材购自赣州市鑫龙欣大药房，经
赣南医学院生药学教研室李加林副教授鉴定为伞形
·２３８１· 中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第２２期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３　Ｎｏｖ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．２２
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2013.22.003
科当归属植物当归（Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｓｉｎｅｓｉｓ（Ｏｌｉｖ．）Ｄｉｅｉｓ）
的干燥根。
２　方法
２．１　当归多糖的制备　称取一定量的干燥当归粉
末，加入适量纯化水在热水浴中浸提，其间不断搅
拌，静置冷却后离心，收集上清液，减压浓缩，在冷却
后的上清液中加入４倍体积无水乙醇，４℃静置过
夜，离心，收集沉淀，Ｓｅｖａｇ法除蛋白，冷冻干燥，得
当归粗多糖，取一定量的粗多糖溶于０．１　ｍｏｌ·Ｌ－１氯
化钠溶液，过 ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ａ－２５（８０　ｃｍ×３．５
ｃｍ）凝胶柱，用不同浓度氯化钠梯度洗脱合并相同
组分，透析，减压浓缩，冷冻干燥，得到均一性当归多
糖［４］。
２．２　硫酸酯化当归多糖的制备　将当归多糖和氨
基磺酸按物质的量浓度比（１∶２）混悬于１０　ｍＬ甲酰
胺中，置于微波反应釜中，温度控制在５０℃，功率
８００　Ｗ，反应５　ｍｉｎ。冷却至室温后加入５０　ｍＬ左右
冰水，用２．５　ｍｏｌ·Ｌ－１氢氧化钠调至中性，加入３倍
体积无水乙醇，４℃冰箱中放置过夜，析出沉淀。离
心收集沉淀，并将沉淀溶于适量水，流水透析１　ｄ，纯
化水透析２　ｄ，浓缩后真空干燥得硫酸酯化当归多
糖［５］。
２．３　硫酸基含量测定
２．３．１　 标准曲线的制备 　 精密称取硫酸钾
０．１８１　ｇ，加去离子水定容，充分摇匀。分别吸取
２．０，４．０，６．０，８．０，１０．０ｍＬ溶液。转入１００　ｍＬ量
瓶中，加去离子水定容。充分摇匀，分别吸取５　ｍＬ
置５０　ｍＬ比色管中，加５　ｍＬ２５％二氯化钡，摇匀，
放置１０　ｍｉｎ，用紫外分光光度计测定４００　ｎｍ处的
吸光度值。以Ｓ含量（Ｘ）和吸光度（Ｙ）绘制曲线。
得回 归 方 程：Ｙ ＝２．５８３　５１　Ｘ －０．００２　３９（Ｒ＝
０．９９９　１）。
２．３．２　样品制备和测定　精密称取各硫酸酯化多
糖２０　ｍｇ，加入２０％ 盐酸２０　ｍＬ，煮沸至溶液澄清，
稍冷。转入１００　ｍＬ量瓶中，去离子水定容。吸取５
ｍＬ置５０　ｍＬ比色管中，加入５　ｍＬ２５％二氯化钡
摇匀，放置１０　ｍｉｎ，于４２２　ｎｍ处测定吸光度，根据
标准曲线回归方程，计算硫酸基取代度。
ＤＳ＝（１．６２×Ｓ％）／（３２－１．０２×Ｓ％），其中ＤＳ
为取代度，Ｓ％为硫酸基的含量。
２．４　红外光谱分析　称取适量当归多糖、硫酸酯化
当归多糖分别与干燥的溴化钾粉末混匀，置玛瑙研
钵中充分研磨使其混匀，压片机压成均匀透明、无明
显颗粒的片。用同法制成只有溴化钾的供试片作为
空白背景，用红外光谱仪测定样品４　０００～４００　ｃｍ－１
的红外光谱。
２．５　ＭＴＴ法检测硫酸酯化当归多糖的体外抗肿
瘤作用　肿瘤细胞培养，并收集对数生长期的乳腺
癌细胞（ＭＣＦ－７）、白血病细胞（Ｋ５６２），配成浓度为
１．０×１０５／ｍＬ的细胞悬液，以每孔接种细胞悬液
１８０μＬ接种于９６孔培养板，在３７℃、５％二氧化碳
条件下培养２４　ｈ后，实验组分别加入当归多糖和硫
酸酯化当归多糖溶液２０μＬ，使当归多糖和硫酸酯
化当归多糖的终浓度分别为０．１，０．２，０．４，０．８，１．０，
２．０ｍｇ·ｍＬ－１，对照组加相同体积的ＲＰＭＩ１６４０溶
液，每组设３个平行孔，继续培养４８　ｈ后，每孔加２０
μＬ　ＭＴＴ（５　ｍｇ·ｍＬ
－１）溶液，再培养４　ｈ。小心弃去
培养液，每孔加入１５０μＬ　ＤＭＳＯ溶液，待完全溶解
后，于５７０　ｎｍ波长处测定各孔吸光度。根据下面
的公式计算出抑制率，绘制浓度－抑制率曲线。
抑制率（％）＝（１－处理组吸光度／对照组吸光
度）×１００％
２．６　统计学处理［４］　所有数据用珚ｘ±ｓ表示，经
ＳＰＳＳ统计软件进行方差分析。多个样本均数与对
照组样本均数之间的比较采用单因素方差分析。
３　结果
３．１　当归多糖硫酸酯硫酸基含量测定　根据硫酸
基标 准 曲 线 线 性 回 归 方 程 Ｙ ＝２．５８３　５１　Ｘ －
０．００２　３９（Ｒ＝０．９９９　１），测得当归多糖硫酸酯的硫
酸基含量为１３．６９％，硫酸基取代度为１．２３。
３．２　当归多糖及硫酸酯化当归多糖红外光谱分
析　当归多糖红外光谱图中，在３　４００　ｃｍ－１处有强
峰，显示有－ＯＨ 基团；当归多糖在１　６００，１　４００，
１　０４０　ｃｍ－１附近有多糖母体特征吸收峰，说明是多
糖。
图１　当归多糖红外光谱
Ｆｉｇ　１　ＩＲ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｏｆ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
　　硫酸酯化多糖不仅在１　６００，１　４００，１　０４０　ｃｍ－１
附近有多糖母体特征吸收峰，同时还可以看出，硫酸
酯化多糖在３　４００　ｃｍ－１附近的羟基吸收峰有所降
低，表示部分羟基已被酯化，在１　２４０　ｃｍ－１左右为
Ｓ＝Ｏ伸缩振动，６２０　ｃｍ－１处有硫酸酯键的特征吸收
峰，证明硫酸基与当归多糖结合成酯。
·３３８１·中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第２２期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３　Ｎｏｖ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．２２
图２　硫酸酯化当归多糖红外光谱
Ｆｉｇ　２　ＩＲ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｏｆ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
３．３　当归多糖和硫酸酯化当归多糖对 ＭＣＦ－７增殖
的影响　用不同浓度的当归多糖和硫酸酯化当归多
糖处理乳腺癌细胞（ＭＣＦ－７）后，可见抑制率均随着
多糖和硫酸酯化多糖浓度的增加而增加；当质量浓
度为２．０ｍｇ·ｍＬ－１时，当归多糖和硫酸酯化当归多
糖对 ＭＣＦ－７的抑制率分别为４１．４７％，８５．９３％，与
对照组相比差异有显著性；对 ＭＣＦ－７抑制效果硫酸
酯化当归多糖明显优于当归多糖对其的抑制。结果
见表１，图３。
表１　当归多糖和硫酸酯化当归多糖对 ＭＣＦ－７生长的影响
（珚ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｔａｂ　１　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ａｎｄ　ｓｕｌｆａｔ－
ｅｄ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｏｎ　ＭＣＦ－７　ｃｅｌｓ（珚ｘ±ｓ，ｎ＝３）
组别
质量浓度
／ｍｇ·ｍＬ－１
当归多糖 硫酸酯化当归多糖
吸光度 抑制率／％ 吸光度 抑制率／％
对照 ０．０ ０．４８２　３±０．０８４　９ － ０．４８２　３±０．０８４　９ －
多糖 ０．１　 ０．４５６　４±０．０１８　７　 ５．３７　 ０．４６７　５±０．０２１　４　 ３．０６
０．２　 ０．４４９　８±０．０１３　２　 ６．７３　 ０．４４７　６±０．０１３　８　 ７．１９
０．４　 ０．４４０　３±０．００７　８　 ８．７０　 ０．３７０　５±０．０２０　５ａ ２３．１７
０．８　 ０．４２３　０±０．０３５　８　１２．２９　 ０．１８５　１±０．０３５　３ａ ６１．６３
１．０ ０．３９７　４±０．０１１　７ａ１７．６０　 ０．１６１　０±０．００９　０ａ ６６．６２
２．０ ０．２８２　３　０．０１８　８ａ ４１．４７　 ０．０６７　９±０．００８　１ａ ８５．９３
注：与对照组比较，ａＰ＜０．０５
图３　当归多糖和硫酸酯化当归多糖对 ＭＣＦ－７作用的浓度－抑制率
曲线
—◆—当归多糖；—▲—硫酸酯化当归多糖
Ｆｉｇ　３　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌ－
ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ａｎｄ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｏｎ　ＭＣＦ－７ｃｅｌｓ
—◆—Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；—▲—ｓｕｌｆａｔｅｄ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａ－
ｒｉｄｅ
３．４　当归多糖和硫酸酯化当归多糖对白血病细胞
（Ｋ５６２）增殖的影响　用不同浓度的当归多糖和硫
酸酯化当归多糖处理 Ｋ５６２后，可见抑制率均随着
多糖和硫酸酯化多糖浓度的增加而增加；当质量浓
度为２．０ｍｇ·ｍＬ－１时，当归多糖和硫酸酯化当归多
糖对Ｋ５６２的抑制率分别为６６．６２％，７７．２２％，与对
照组相比差异有显著性；对 Ｋ５６２抑制效果硫酸酯
化当归多糖更为明显。结果见表２，图４。
表２　当归多糖和硫酸酯化当归多糖对白血病（Ｋ５６２）生长
的影响（珚ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｔａｂ　２　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ａｎｄ　ｓｕｌｆａｔ－
ｅｄ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｏｎ　Ｋ５６２　ｃｅｌｓ（珚ｘ±ｓ，ｎ＝３）
组别
质量浓度
／ｍｇ·ｍＬ－１
当归多糖 硫酸酯化当归多糖
吸光度 抑制率／％ 吸光度 抑制率／％
对照 ０．０ ０．９４３　７±０．０３８　２ － ０．９４３　７±０．０３８　２ －
多糖 ０．１　 ０．５１６　３±０．０１４　５ａ４５．２８　０．４５５　３±０．０２９　２ａ ５１．７５
０．２　 ０．５１２　０±０．０２０　７ａ４５．７４　０．３１６　７±０．０３８　３ａ ６６．４４
０．４　 ０．４５７　０±０．０５０　３ａ５１．５７　０．３０９　３±０．０２４　１ａ ６７．２２
０．８　 ０．４０２　７±０．０２６　３ａ５７．３３　０．３０４　０±０．０２０　８ａ ６７．７９
１．０ ０．３３５　３±０．０１２　９ａ６４．４６　０．２５６　３±０．０２９　２ａ ７２．８４
２．０ ０．３１５　０±０．０３４　０ａ６６．６２　０．２１５　０±０．０２２　４ａ ７７．２２
注：与对照组比较，ａＰ＜０．０５
图４　当归多糖和硫酸酯化当归多糖对Ｋ５６２作用的浓度－抑制率曲
线
—◆—当归多糖；—▲—硫酸酯化当归多糖
Ｆｉｇ　４　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌ－
ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ａｎｄ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｏｎ　Ｋ５６２　ｃｅｌｓ
—◆—Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；—▲—ｓｕｌｆａｔｅｄ　Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａ－
ｒｉｄｅ
４　讨论
癌症对人类健康威胁很大，目前的治疗方法主
要有外科手术、放射治疗和化学治疗。放疗缺乏特
异性，在杀死肿瘤细胞的同时，也损伤正常细胞，化
学治疗又有很强的不良反应，因此，寻找天然的低毒
高效的抗癌辅助药越来越重要。
硫酸酯化多糖是多糖的硫酸酯化衍生物，近几
年相继发现一些多糖硫酸酯化修饰后抗肿瘤活性显
著增强，如茯苓多糖、螺旋藻多糖、牛膝多糖等［７－９］经
硫酸酯化修饰后体内和体外抗肿瘤效果显著提高。
近些年对多糖硫酸酯的抗肿瘤活性做了不少研
究，结果表明，无论是在抑制肿瘤细胞增殖、增强免
疫功能、抗癌转移方面都显示出很强的抗肿瘤活性，
海藻硫酸多糖和海带硫酸多糖等天然的硫酸多糖均
具有一定的抗肿瘤活性［１０］。先宏等［１１］发现，海藻硫
酸多糖可以调节巨噬细胞分泌ＮＯ和ＴＮＦ，增强免
疫功能，促进肿瘤细胞凋亡。
前期动物体内研究表明，硫酸酯化当归多糖能
显著抑制小鼠实验性肿瘤的生长，虽然硫酸酯化当
归多糖对肿瘤生长的抑制作用不及环磷酰胺，但能
显著增加荷瘤小鼠胸腺指数和脾脏指数，改善荷瘤
小鼠的非特异性免疫功能，能明显延长Ｓ１８０腹水
瘤小鼠生命存活期。本实验所用的 ＭＴＴ法具有经
·４３８１· 中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第２２期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３　Ｎｏｖ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．２２
济、快速、高效的优点，是目前最常用的体外抗肿瘤
药物筛选方法，选用乳腺癌细胞株 ＭＣＦ－７和白血病
细胞株Ｋ５６２，用当归多糖和硫酸酯化当归多糖进行
体外抗肿瘤活性的实验研究。结果表明硫酸酯化后
的当归多糖对乳腺癌细胞株 ＭＣＦ－７抑制作用明显
强于未酯化的当归多糖对其的抑制作用。当浓度为
２．０ｍｇ·ｍＬ－１时，当归多糖和硫酸酯化当归多糖对
ＭＣＦ－７的抑制率分别为４１．４７％，８５．９３％。硫酸酯
化当归多糖的浓度小于０．２　ｍｇ·ｍＬ－１时，对 ＭＣＦ－７
的抑制作用与对照组相比没有显著性差异，可能是
因为硫酸酯化当归多糖的浓度太低，而对 ＭＣＦ－７的
抑制不明显。当归多糖的浓度要达到１　ｍｇ·ｍＬ－１
左右才对 ＭＣＦ－７的抑制作用有显著性。硫酸酯化
当归多糖对 ＭＣＦ－７的抑制作用明显优于当归多糖
对其的抑制作用。当归多糖和硫酸酯化当归多糖在
低浓度对Ｋ５６２就有显著的抑制作用。酯化后的当
归多糖对Ｋ５６２的抑制作用更加明显，但其作用机
制和构效关系还有待进一步深入研究。
参考文献：
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究［Ｊ］．时珍国医国药，２０１２，２３（２）：３１９－３２０．
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［５］　易剑平，闫红，钟儒刚．微波法硫酸酯化枸杞多糖的研究［Ｊ］．食
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［６］　杨铁虹，贾敏，商澎，等．当归多糖硫酸酯的合成及其对脾细胞
增值的作用［Ｊ］．第四军医大学学报，２００１，２２（５）：４３２－４３４．
［７］　邹品文，赵春景，李攀，等．山茱萸多糖的抗肿瘤作用及其免疫
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［收稿日期］２０１３－０１－１６
［基金项目］贵州省科技计划项目（编号：黔科合工字［２００９］４００１）；贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目（编号：黔科合中药字［２０１１］
５０８１号）　［作者简介］刘丽君，女，在读硕士，中药师，研究方向：新剂型新技术及新药开发　［通讯作者］黄勇，男，副教授，研究方向：制剂新
剂型新技术及新药开发，电话：０８５１－６９０８４６８，Ｅ－ｍａｉｌ：ｍａｉｌｏｆｈｙ＠１２６．ｃｏｍ
局部注射用右旋酮洛芬氨丁三醇温敏凝胶的制备及其体外释药的考察
刘丽君１，张洁１，唐丽２，刘跃２，黄勇１，２　（１．贵阳医学院药学院，民族药与中药开发应用教育部工程研究中心，贵州 贵阳
５５０００４；２．贵州省药物制剂重点实验室，贵州 贵阳５５０００４）
［摘要］　目的：制备右旋酮洛芬氨丁三醇温敏凝胶，并研究其体外释药行为特性。方法：采用正交设计法，以药物水溶液浓
度、壳聚糖（ＣＳ）用量、β－甘油磷酸钠（β－ＧＰ）／壳聚糖（ＣＳ）溶液配比为三因素，将优化后的处方利用药物释放模型方程进行评
价。结果：右旋酮洛芬氨丁三醇温敏凝胶的最佳处方为：药物水溶液浓度０．００２　５　ｇ·ｍＬ、ＣＳ用量０．０４　ｇ、β－ＧＰ／ＣＳ配比１∶２，在
体外释药持续１２　ｄ以上，释放特性符合Ｒｉｔｇｅｒ－Ｐｅｐｐａｓ方程的药物扩散动力学特点。结论：本凝胶制备简单，胶凝温度适宜具
有温敏特性及明显的缓释作用。
［关键词］　右旋酮洛芬氨丁三醇；温度敏感性；水凝胶；体外释药
［中图分类号］Ｒ９４４　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－５２１３（２０１３）２２－１８３５－０５
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｅｘｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ　ｔｒｏｍｅｔｈａｍｉｎｅ　ｔｈｅｒｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｈｙｄｒｏｇｅｌ　ａｎｄ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ
ｉｔｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｒｅｌｅａｓｅ
ＬＩＵ　Ｌｉ－ｊｕｎ２，ＺＨＡＮＧ　Ｊｉｅ１，ＴＡＮＧ　Ｌｉ　２，ＬＩＵ　Ｙｕｅ２，ＨＵＡＮＧ　Ｙｏｎｇ１，２（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌ－
ｌｅｇｅ，Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｔｈｎｉｃ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ　ａｎｄ　ＴＣＭ ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，
Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｇｕｉｙａｎｇ　５５０００４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ　ｉｎ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｇｕｉｙａｎｇ　５５０００４，
Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｐｒｅｐａｒｅ　ｄｅｘｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ　ｔｒｏｍｅｔｈａｍｉｎｅ　ｔｈｅｒｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｈｙｄｒｏｇｅｌ　ａｎｄ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ
·５３８１·中国医院药学杂志２０１３年第３３卷第２２期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１３　Ｎｏｖ，Ｖｏｌ　３３，Ｎｏ．２２