全 文 ：2011 年 3月第 3期 中闯民族 医药杂志 5 7
新疆假龙胆中有效成分提取工艺的研究
努尔拉江 ` 吐普洪卡地 尔2 阿达来提` 阿不都瓦尔`
( 1
.新疆维吾尔自治区维吾尔医 医院 ,新疆 乌普木齐 83 X( 只9 ;
2
.新疆维吾 尔自治 区维吾 尔医药研究所 , 新疆 乌鲁木齐 83 X( 又9
摘 要 : 目的 :优选龙胆的最佳提取工艺 。 方法 : 比较冷浸提取 、超声提取 、加热回流提取 、 渗渡提取和煎煮提取等 5 种提取
方式 。 采用 场 (3 4 )正交试验 , 以龙胆苦普 、龙胆总等的提出率和干青得率为考察指标 , 通过 多指标综合评分法进行数据分
析 , 对影响龙胆提取工艺的 因素进行了研究 。 结果 : 龙胆的最佳提取工 艺为 :龙胆药材用 70 % 乙醉徊热 回流提取 3 次 ,每次
hl
, 溶剂用量分别 为 or 倍 、 8倍 、 8倍 。 结论 :优选得到的提取工艺稳定可行 ,适合工业化生产。
关键词 :新疆假龙胆 ;龙胆苦替 ;正 交试验 ;提取工艺
中图分类号 二IU 9 1 . 5 文献标识码 : A
新 疆 假 龙 胆 〔晓 nt 她nel 么 t l时如腼~ ( C a记 . H o l-
ub 汀 , , , 〕 ,龙胆科 ( eG int ~ ae e )
,
l 年或 2 年生草本 , 药用全
草 。 另还有黑边假龙胆「G . ~
a ( Bge
.
) H
o lub 〕、 矮假龙胆
〔G . yP gn n a e a (脉 . 。 t cS ll n l al ll . ) H .骊ht 以及天山假龙胆 ( G .
it
~
h出五ca R u Pr . )〕等多种 ,多数供药用 ,用法亦基本相似。
ij int an 为维吾尔语习用名称 ,是 由拉丁语 eG int an a 音译的
名称 ,也是世界通用名称 。 欧洲中部 , 原苏联有分布 , 日本
有载陪 fz, 4〕。 本品含龙胆苦味质约 4% 龙胆昔 。 另报道含
龙胆糖昔 ( eC int i )n 、 龙胆 苦味质 (晓 int am iar )n 、 龙胆三糖
(eG nt ian os
e
)
、龙胆酶等 。 两者都含龙胆苦贰 ( C e n t ivio icr )n 该
类化合物极性较大 ,易溶于水 、 甲醇 、 乙醇 、 乙酸乙醋等溶剂
中阁 。 为适应传统中药剂型改革的需要 ,本研究拟将新疆
假龙胆提取物通过分离纯化得到龙胆总昔这一有效部位 。
本实验在对几种常见的昔类成分提取方法进行初筛的基础
上 , 采用正交设计法详细考察了龙胆总昔的加热回流提取
工艺 ,选取龙胆苦昔和龙胆总昔的提出量及干浸膏得率为
评价指标 ,通过综合评分阴 ,考察乙醇浓度 、 溶剂用量及提
取时间对龙胆提取效果的影响 ,优化了龙胆总昔的加热回
流提取工艺 。
1 仪器与试药
岛津高效液相色谱仪 (配 20 BA 泵 、 20 A 检测器 、 HW -
2X( X) 千谱色谱工作站 ) ; -VU 一 2如 I CP 型紫外分光光度计 ( 日
本岛津 ) ; DK 一 5 24 型电热恒温水浴锅 (上海华联医疗器械
作者简介 :努尔拉江 , 男 ,主管药师 。 19 8年 比业于新疆医学院
药学系 、获得理学学士学位 、 主要从事中草药 、 民族药有效成分分
离测定及药物质量标准的研究工作。 在复旦大学药学院参加课题
研究工 作并发表过数篇论文 。 elT : (》 ) 1 一 25 6 26 72 , 138 9 99 181 0 。
D l l ia l : p axnl r3 2肠@ h由 .面1
.
c
om
文章编号 : 10拓 一 6 8 1以20 川 03 一加 57 一 以
有限公司 ) ; D Z F 系列真空干燥箱 (上海华联医疗器械有限
公司 ) ; B望24 5 型电子分析天平 ( Sart 硕 u8 , (尧溯an y ) ; 甲醇为
色谱纯 ,其余试剂为分析纯 。 新疆假龙胆药材「晓瓜她nel 必
t l川油at no ~ ( Gadr
.
Ho l t山」新疆维吾尔自治区维吾尔医医院
提供 ,批号为仪刃825 3 ,经新疆维吾尔 自治区维吾尔医医院
制剂室质检室鉴定 ,符合卫生部药 品标准维吾尔药分册 。
龙胆苦昔对照品 ( 中国药品生物制品检定所 ,批号为 l m 70
一 2X() 5 10
0
2 方法与结果
2
.
1 紫外分光光度法测定龙胆总昔的含量〔 1D , lj
2 1 1 最大吸收波长的确定 :样品与对照品溶液均以甲醇
溶液为空白对照在 2X() ~ 礴仪 )unI 波长处进行扫描 , 对照溶液
在 27 0 unr 、 2肠unI 处有吸收峰 ,且在 27 0 unr 处为最大吸收 ,样
品溶液在 2 05unr 、 2 67unr 处有吸收峰 ,相比较而言 ,在 27 0lun
处样品吸收干扰较小 ,故选择 27 0nl 作为测定波长 。
2
.
1
.
2 对照品溶液及样品溶液的制备 : GT P (龙胆苦昔 )对
照品溶液 ;精密称取 G r p 又寸照品 9 . ggm , 置于 or 毗 容量瓶
中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀作为对 照品储备液
(卿陷 ·吐一 ` ) ,精密量取储备液 lmL 一 50 11止 容量瓶中 , 用
甲醇稀释至刻度 ,摇匀即得 。
样品溶液 :精密称取约 1印 gm 龙胆提取物 ,置 1田m L 量
瓶中 , 用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 , 0 . 45 脚 的滤膜过
滤 , 取续滤液 1毗 于 10 nzL 量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇
· 匀即得 。
2
.
1
.
3 方 法学考 察结果 : 标准 曲线 为 A 二 0 . 倪 4 8C -
0
.恻1 , r 二 0 .望从〕 ,线性范围为 3 . % 一 39 . 6拌g’ mL 一 ` , 加样回
收率为卯 . 7 土 1 . 42 % ,精密度试验 RS D 为 0 . 2 % ,重现性
试验 RS D 为 1 . 02 % ,稳定性试验结果表明 ,样品在 24 h 内稳
定 , RS D 为 0 . 75% 。
DOI : 10. 16041 /j . cnki . cn15 -1175. 2011. 03. 037
58 中国民族 医药杂志 20 11 年 3 月第 3 期
2
.
2 G 理的 H PI￡ 法测定〔lz ]
2
.
2
.
1 色谱条件 : 色谱柱 :纯e la ve n us il X p B一 l C: (4. 6~ x
2 50
1胭 , 5阿 ) ,保护柱 :撇面勿邪创 一 C比 ( 4 . 6~ x 2 . 压朋】 ,
5四;) 流动相 : 甲醇 一 水 ( 30 : 70 ) ; 流速 : l mL . n血一 ’ , 柱温 :
30 ℃ ;进样体积 : 1 0匹 ;检测波长 : 27 0 nrU 。
2
.
2
.
2 结果 : 在设定液相条件下 ,样品中的其他成分不干
扰以P 的测定 。 标准 曲线为 A = 6以犯 . S C + 刀刀 8 , r 二 .0
性冲为 , 结性范围为 19 . 8 一 卯2滩 ·吐一 ’ ,样 回收率为 卯 . 12 士
1
.
10 %
, 日内精密度为 0 . 18 % , 日间精密度为 0 . 3 % 。
内 , 排除筒内空气后浸渍 48 h ,然后 以 3mL · 10 njI n 一 ’ 的流速
渗镜 12 倍量的 85 %的乙醇 ,将渗流液过滤 ,备用 。
煎煮提取 :取切碎的龙胆药材 10 9 ,加 10 倍量的蒸馏
水 ,煎煮 hl ,过滤 ,药渣再加 8倍量的蒸馏水煎煮 hl , 过滤 ,
合并滤液 ,备用 。
将所得的 5 份提取液分别减压 回收溶剂 , 并定容至
5X()
u 止 ,测定龙胆苦昔和龙胆总背的浓度 ,计算可得各提取
方法龙胆苦昔和龙胆总昔的提取量 ( gm · g 一 ’生药 ) 。 结果见
表 l 。
表 1 5 种提取方法的比较
龙胆苦昔 ( (刀P ) 龙胆总昔 (冗 )提取方法 啤 · g一 I gm · g 一 l
冷浸提取 20 . 2 37 . 4
超声提取 15 . 4 3 2 . 6
加热回流提取 2 1 . 4 45 . 5
渗谁提取 2 1 4 45 . 4
续胜1益“卜找行n
.
)址 巳郊
:
n八n凡、à月ō
40印
印705
图 1 龙胆苦对照品《)A 和
新获假龙胆提取物 《)B 的 H P I￡ 图谱
2
.
3 干膏得率的测定 :精密量取各提取液匆“山 ,置已干燥
至恒重的蒸发皿 中 ,在水浴上蒸干 ,于 105 ℃干燥 b3 ,迅速
移置干燥器中 ,冷却劝面 n ,迅速精密称定重量 ,计算干浸膏
得率 。
2
.
4 提取方法的选择 : 以新疆假龙胆药材中龙胆苦昔和龙
胆总昔的提出量 (哪 · g 一 ’ 生药 )为指标 , 考察了冷浸提取 、 超
声提取 、 加热回流提取 、 渗施提取和煎煮提取 。 各提取方法
分别为 :
冷浸提取 : 取龙胆药材粗粉 (过 5 号筛 ) 10 9 ,加 or 倍
量 85 % 乙醇 ,冷浸 48 h ,过滤 ,药渣再加 8 倍量的 85 % 的乙
醇 ,冷浸 铭h ,过滤 ,合并滤液 ,备用 。
超声提取 : 取龙胆药材粗粉 (过 5 号筛 ) 10 9 ,加 10 倍
量 85 % 乙醇 ,超声提取 2 次 ,每次 犯而。 ,过滤 ,药渣再加 8
倍量的 85 % 的乙醇 ,超声提取 2 次 ,每次 引玉苗 n , 过滤 ,合并
滤液 ,备用 。
加热 回流提取 : 取切碎的龙胆药材 10 9 , 加 10 倍量
85 % 乙醇 . 水浴加热回流 hl ,过滤 , 药渣再加 8 倍量 85 % 的
乙醇加热回流 h1 ,过滤 ,合并滤液 ,备用 。
渗流提 取 : 取 龙胆 药 材 粗 粉 (过 5 号 筛 ) 10 9 , 加
1X() m IJ 巧% 乙醇 ,润湿 h3 ,将润湿好的药粉均匀加人渗德筒
煎煮提取 20 . 0 45 . 4
实验结果可见 ,加热回流提取和渗滚提取 ,这两种提取
方法龙胆的转移率相似 ,本实验进一步考察了这两种提取
方法 的出膏率 , 加 热 回流提取为 36 . 8% , 渗流提取 为
34
.
0 %
, 结果也无明显 区别 。 考虑到加热回流提取简易可
行 ,周期短 ,更适合工业化生产 ,因此选择加热回流提取法 。
2 5 龙胆总昔加热回流提取最佳工艺的筛选
2
.
5
.
1 提取溶媒浓度的影响 : 固定提取次数为 1 次 ,提取
时间为 1b ,提取溶媒用量为 or 倍量 ,考察 30 % 、 40 % 、 50 % 、
印% 、 70 % 、 so % 与卯% 乙醇对龙胆苦昔提取量和龙胆总昔
提出量的影响 。 见表 2o
表 2 提取溶媒的浓度的影晌
乙醇的浓度 龙胆苦昔 ( 1七P ) 龙胆总昔 (兀 )
% gm
·
g
一 l
gm
·
g
一 ,
叨 35 . 3 5 14 .刀
40
.
25 17
.
93
17
.
6 1
18
.
4
39
.
37 18
.
47
36
.
05 17
.
9
如 30 . 50 16 50
结果显示 ,提取溶媒的浓度对龙胆苦昔和龙胆总昔的
20 11年 3 月第 3 期 中目民族 医药杂志 5 9
提取率具有一定的影响 , 提取溶媒的 乙醇浓度在 印% 一
so % 时 , 提取效果较好。
2
.
5
.
2 提取次数 : 固定提取溶媒为 70 % 的乙醇 ,提取溶媒
用量为 20 倍 ,考察加热回流提取 1次 ( Z b) , 2 次 (每次 l b) 、 3
次 (每次 l h) 、 4 次 (每次 l b) , 对龙胆苦昔提取量和龙胆总昔
提取量的影响 。 结果见表 3 。
表 3 提取次数的影晌
龙胆苦昔 ( T G P ) 龙胆总昔 ( .戏二)提取次数
mg
·
g 一 l 叱 · g 一 l
1 17
.
9 2 3 8
.
6
2 19
.
19 刁2 6
3 2 0
.
88 4 5
.
0
4 20
.
85 45
.
9
表 4 因素水平表
因 素水平—
2
.
5
.
3 正交设计优选龙胆的最优提取工艺 :根据单因素考
察结果 ,选择乙醇浓度 、 提取时间和溶剂用量为考察因素 ,
以龙胆苦昔的提取量 ( lY ) 、 龙胆总昔的提取量 (飞 )和干膏
得率 (叽 )为考察指标 , 用 肠 (乡 )正交表 ,进行 3 因素 3 水平
设计 , 因素水平表见表 4 ,正交试验安排见表 5o
表 6 方差分析表
F创维《此 骆 v F P
A 6
.
15 1 2 2 山 8
4
. 刁叹 ) 2 1 . 月8 5 > 0 . 1
3
。兑 l
A (乙醇浓度 % ) B (提取时间 )
l
,
0
.
5
,
0
.
5 h
C(溶媒的体积 )
8
,
6
,
10
,
8
,
8
2
,
l
,
l h 12
,
10
,
10
印705
表 5 正交试验结果与分析
试
_
验 lY 飞 妈 吸号 A B C D
哪 ·弓一 1 赐 · 弓一 , % %
20
.
34 肠 . 46 42 . n 65 . 39
2 2 2 1
.
36 48
.
14 43
.
8 8 68
.劣
21
.
23 48
.肠 43 . 58 68 . 61
4 2 2 1
.
10 4 1
.以 68 . 84
2 1 40
2 1
.
48
46
.
5 5
47
.
98 42
.
67 69
.
37
49
.
62 43
.肠 70 . 36
20
.
73
2 0
.抖
47
.砧
45
.
86
39
.
67 69
.肠
39
.
37 6
.
92
9 3 3 2 1 20
.
7 9 49
.
50 4 1
.
15 的 . 35
凡刊 r 3 . 0 2 一
注 : .0F 以.2 ) 二 19 . 0 , 0F . l(z .2) = 9 . 0
根据所选指标进行多指标综合评分 , 以各指标的
最大值为参照将数据进行归一化 ,分别给出权重系数。 鉴
于 口P 是龙胆中含量最大的活性成分 ,且含量测定方法专
属性强 ,其权重系数设为 0 . 7 ,龙胆总昔的权重系数设为 0 .
3
。 在有效成分明确的条件下 ,干膏得率越高则纯度越低 ,
故其权重系数设为 一 0 . 3 , 以综合值进行统计分析 ,结果见
表 5 和表 6 。 其中综合评分 Y = 0 . 7 YI x 100 12 1 . 48 十 0 . 3叽
x lX() 149
.
62 一 0
.
3妈 x lX() j 4 3 . 88 0
由极差分析结果可见 ,影响 Y 的因素顺序为 A > B >
C
,龙胆的最优提取方案应为 凡几 q , 即用 70 %的乙醇提取
3 次 ,第 1 次溶剂用量 12 倍 ,提取 h2 ,第 2 次溶剂用量 10
倍 ,提取 hl ,第 3 次溶剂用量 10 倍 ,提取 hl 。 从方差分析结
果可知 ,各因素对考察指标无显著差异 。
由极差分析及方差分析结果 ,再结合生产实际 ,最后确
定龙胆最佳提取条件为 人残q ,即龙胆药材用 70 % 乙醇提
取 3 次 , 每次 hl , 溶剂用量分别为 10 倍 、 8 倍 、 8 倍 。
表 7 加热回流提取工艺重复性实验结果
批号 Y , (鸣 · g一 ’ ) 2Y (嗯 · g一 , ) 3Y (% ) Y
0叹) 203 2 1 . 47 47 .肠 4 1 3 70 . 18
KI 67
.
,以 ) 67 .?印 67 . 55 7 68 . 03 7 (场刃1以 20 . 96 47 . 7 4 40 . 2
凡 的 . 52 3 68 .肠 3 68 . 89 7 69 .加 3 扣 . 3
40
.
6
印 . 68
7 1
.
34
凡 68 闷如 69 一钊 O的 . 01 0 68 . 123
R 2
.咤刀 3 1 . 6 50 1 . 45 3 1 2肠
结果显示 , 当提取 3 次以上时 , 不同提取次数对龙胆苦
昔的提取量和龙胆总昔的提取量没有显著的影响 ,为了节
约时间和成本 ,确定龙胆加热回流提取 3 次 。
(X刃105 2 1 . 38 48 3
平均数 21 . 27 47 . 71 70 . 40
RS (D % ) .0 刀 .0 64 1 , 49 1 . 21
2
.
5
.
4 加热回流提取工艺重演性结果 :按优化的加热 回流
提取工艺重复提取 3 次 ,对龙胆苦昔和龙胆总昔进行测定 ,
计算龙胆苦昔和龙胆总昔的提出量 ,结果如表 7 。 此试验
60 中闯民族 医药杂志 20 11 年 3月第 3期
结果表明加热回流提取工艺重演性 良好 , 优选得到的提取
工艺稳定可行 。
3 讨 论
直观分析结果表明 , 最优的提取方案为 人乌马 , 即龙
胆药材用 70 % 乙醇加热回流提取 3 次 , 每次 h3 , 溶剂用量
分别为 12 倍 、 10 倍 、 or 倍 。 方差分析的结果表明 , 正交实
验所选取的 3 个 因素对考察指标虽有影 响 , 但均不显著 。
为了节约时间 、 降低成本 , 在重复性实验中 , 我们每次只提
取 h1 , 溶剂用量分别为 10 倍 、 8 倍 、 8 倍 ,结果发现该提取方
案与最佳方案相 比 , 综合评分分值略有降低 ,但无统计学意
义 , 结果说明在最佳提取方案基础上改动后方案切实可行 。
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20 10 年 12 月 20 日收稿
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