全 文 ：PLC灵敏度、峰通量高于 HPLC 引起的或由于色谱柱
的不同引起的，具体原因还有待于进一步研究分析。
图 1 HPLC和 UHPLC色谱图
3. 3 绿原酸含量差异 由测定结果可以看出，不同产
地绿原酸含量存在差异，绿原酸以封丘杜庄和封丘鸭
固集产地含量相对较高，而商丘和禹州产地的含量较
收稿日期:2013 － 11 － 16
作者简介:高瑞斌(1986 －) ，男，甘肃兰州人，硕士研究生，研究方向:中
药有效成分及质量标准研究。
通讯作者:郭玫(1963 －) ，女，教授，博士研究生导师，研究方向:中药有
效成分及质量标准研究，E － mail:guomeig@ sina． com。
低。金银花由于产地、品种不同，绿原酸含量有差异。
采用 UHUPLC代替 HPLC测定金银花中绿原酸含
量，在保证测定结果准确的前提下，大大提高了分析效
率，节约了大量的分析时间，减少了溶剂的消耗，降低
分析成本。本实验可为金银花的质量控制提供新的分
析方法和依据。
参考文献
［1］ 中华人民共和国国家药典委员会． 中华人民共和国药典:一部
［S］．北京:中国医药科技出版社，2010:205．
［2］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草:下册［M］． 上
海:上海科学技术出版社，1998:1797．
［3］ 黄喜茹，刘伟娜，曹冬． 金银花的化学成分及药理作用研究评析
［J］．中医药学刊，2005(3) :418 － 419．
［4］ 邢俊波，李萍，刘云．不同产地、不同物候期金银花中绿原酸的动
态变化研究［J］．中国药学杂志，2003，38(1) :19 － 21．
［5］ 辛华，丰杰，程若敏，辛宁，等． HPLC 测定不同产地金银花中绿原
酸和木犀草苷［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(2) :60 － 63．
［6］ 杨义芳．超高效 /高分离度快速 /超快速液相色谱在中药及其制剂
研究中的应用［J］．中草药，2008，39(8) :1259 － 1263．
［7］ 王静，韩正洲，杨立伟，等． HPLC 和 UHUPLC 法对比测定千里香
药材中九里香酮的含量［J］．药物分析杂志，2010，30(8) :1499 －
1501．
［8］ 傅晓燕，黄巧玲． HPLC 与 UHUPLC 法对比测定两种川芎药材中
阿魏酸的含量［J］．中药材，2011，34(7) :1070 － 1072．
DOI∶10． 13192 / j． issn． 1000-1719． 2014． 05． 071
高效毛细管电泳同时测定川西獐芽菜中龙胆苦苷和獐芽菜苦苷
高瑞斌1，董树清2，杨艳3，倪京满3，赵亮2，郭玫1
(1．甘肃中医学院药学系，甘肃省高校中(藏)药化学与质量研究省级重点实验室，甘肃 兰州 730000;
2．中国科学院兰州化学物理研究所，中国科学院西北特色植物资源化学重点实验室，甘肃省天然药物重点实验室，
甘肃 兰州 730000;3．兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000)
摘 要:目的:建立高效毛细管电泳( CE) 同时测定川西獐芽菜中龙胆苦苷及獐芽菜苦苷的方法。方法:研究运行缓
冲液的浓度、pH、添加剂 β －环糊精浓度、检测波长及分离电压对分离结果的影响。在最佳分离测定条件下，龙胆苦苷和
獐芽菜苦苷得到快速分离检测。结果:龙胆苦苷和獐芽菜苦苷分别在 9． 375 ～ 150 μg /mL、6． 252 ～ 100 μg /mL 范围内线
性关系良好，r 值分别为 0． 9997 和 0． 9998，加样回收率分别为 99． 74%和 99． 58%，保留时间 ＲSD 值分别为 6． 7%和
5． 1%，峰面积的 ＲSD值分别为 1． 98%和 2． 43%。结论:本方法简便、快速、重现性好，适用于含有龙胆苦苷、獐芽菜苦苷
类药物成分的检测。
关键词:川西獐芽菜;高效毛细管电泳法;龙胆苦苷;獐芽菜苦苷
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标志码:A 文章编号:1000-1719(2014)05-0994-04
Simultaneous Determination of Gentiopicroside and Swertiamarin
in Swertia mussotii Franch by HPCE
GAO Ｒuibin1，DONG Shuqing2，YANG Yan3，NI Jingman3，ZHAO Liang2，GUO Mei1
(1． Key Laboratory of Chemistry and Quality for Traditional Chinese Medicine of College of Gansu Province，
Department of Pharmacy of Gansu College of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730000，Gansu，China;
2． Key Laboratory of Chemistry of Northwestern Plant Ｒesources and Key laboratory for
Natural Medicine of Gansu Province，Lanzhou Institute of Chemical Physics，The Chinese Academy
of Sciences，Lanzhou 730000，Gansu，China;3 Lanzhou University，Lanzhou 730000，Gansu，China)
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Abstract:Objective:The highly performance capillary electrophoresis (HPCE)method was developed for the simultaneous
determination of Gentiopicroside and Swertiamarine in Swertia mussotii Franch． Methods:The effects of some important factors such
as pH value，concentration of running buffer，separation voltage and detection wavelength，were investigated． Under the optimal e-
lectrophoresis conditions，gentiopicroside and swertiamarine can be well separated and detected fast． Ｒesults:The linear range of
Gentiopicroside and Swertiamarine were 9． 375 － 150 μg /mL，6． 252 － 100 μg /mL with correlation coefficients of 0． 9997 and 0．
9998． The average recoveries of gentiopicroside and swertiamarine in sample were ranged from 99． 74% and 99． 58%，the ＲSD
values of retention times were 6． 7% and 5． 1%，and those of peak areas were 1． 98% and 2． 43% ． Conclusion:The method was
simple，convenient，rapid，reproducibility，and can be successfully applied in the determination of Gentiopicroside and Swertiama-
rine as pharmaceutical ingredients．
Key words:Swertia mussotii Franch;HPCE;gentiopicroside;swertiamarine
川西獐芽菜(Swertia mussotii Franch) ，属于龙胆科
獐芽菜属，生长于海拔 1900 ～ 3800 m 的山坡、灌丛草
地、林缘、河滩等，在我国四川的西部，西藏及青海等地
区均有分布［1］。川西獐芽菜具有清热解毒、利胆退黄
之功效［2］，全草可用于治疗消化不良、胆囊炎、各种肝
炎、急性骨髓炎、急性结膜炎、急性咽喉炎及烫伤，也用
于风火牙痛、热淋等症［3 － 4］，是藏族民间常用上品藏
药，俗名“藏茵陈”。目前为止，许多学者已从獐芽菜
属植物中分离出 100 多种不同类型的化合物。其中龙
胆苦苷和獐芽菜苦苷是川西獐芽菜中具有代表性化合
物［5］，从分子式(见图 1)可以看到两种化合物的结构
很相似，同属于裂环烯醚萜苷，所以近年来其药理作用
成为许多学者研究的焦点。现代医学表明，龙胆苦苷
可治疗消化不良，有抗原虫，抗炎等功效［6］，而獐芽菜
苦苷则能有效保护肝细胞，具有抗氧化、抗菌消炎、抗
癌、抗突变以及调节免疫系统的功效［7］。目前，针对藏
茵陈活性成分的研究，多采用传统的薄层扫描法和高
效液相法测定其含量［8 － 10］。高效毛细管电泳(HPCE)
是近些年发展起来的一项新的分离分析技术，具有灵
敏度高、准确度高、简便、快速等特点。本文则采用高
效毛细管电泳技术成功地分离、分析了藏茵陈中龙胆
苦苷和獐芽菜苦苷的含量，通过对电泳条件的优化，以
及方法学筛选和考察，克服了因其结构相似而很难实
现基线分离的难题，获得了理想的实验结果，为准确控
制川西獐芽菜质量标准研究提供了新的方法。
1 材料与方法
1. 1 仪器和试剂 高效毛细管电泳仪(贝克曼 P /
ACE MDQ，美国) ，毛细管 (68. 5 cm ×75 μm i. d. ) ;电
子天平［奥豪斯国际贸易(上海)有限公司］;DZF － 1B
真空干燥箱(上海) ;CQX 25 － 12 超声波清洗器(上
海) ;Ｒ －200 型旋转蒸发仪(德国海尔道夫仪器厂) ;
AB －8 型大孔吸附树脂(西安蓝晓科技有限公司)。
氢氧化钠、硼砂购买于国药集团化学试剂有限公
司，乙醇、甲醇(禹王实业有限公司化工分公司，山东)
均为色谱纯试剂，实验所需的水均为二次蒸馏水，所有
溶液均经 0. 45 μm 微孔滤膜过滤。药材为兰州黄河
药市购买，经甘肃中医学院中药鉴定教研室鉴定符合
《中华人民共和国药典》2010 版一部獐芽菜项下规定，
为龙胆科獐芽菜属植物川西獐芽菜(Swertia mussotii
Franch)实验用全草。獐芽菜苦苷对照品(批号
110785 － 200203)、龙胆苦苷对照品(批号 110770 －
200510)均购于中国药品生物制品检定所。
图 1 龙胆苦苷和獐芽菜苦苷的分子结构式
1. 2 标准溶液的制备 分别精密称取獐芽菜苦苷对
照品 1. 012 mg、龙胆苦苷对照品 1. 005 mg，加无水甲
醇溶液配制成浓度为 1. 012 mg /mL 的獐芽菜苦苷和
1. 005 mg /mL 龙胆苦苷对照品溶液，超声脱气 5 min，
储备液放置在 4 ℃冰箱中备用。
1. 3 供试品溶液的制备 将 50 ℃烘干的川西獐芽菜
全草粉碎后过 60 目筛，精确称取 50 g，加入 500 mL
90%(v /v)乙醇溶液浸泡 4 h 后加热回流，重复回流 3
次，每次 2 h，合并 3 次所得滤液并减压浓缩至浸膏状，
浓度约 2 g /mL。取浸膏 4 g 于离心管中，加水稀释至
1 g /mL，在 10000 r /min的转速下离心 5 min。取离心
后上清液上样于已活化好的 AB － 8 型大孔吸附树脂
柱，先采用蒸馏水冲洗树脂柱，直至洗脱液无色，弃去
水洗脱液，续以 30 %、60 %、80 %(v /v)的乙醇溶液
洗脱，控制流速为 1. 5 mL /min 左右，分别收集上述不
同浓度洗脱液，浓缩干燥后，取 30%乙醇洗脱浓缩样
品，用甲醇溶解稀释，配置成 1. 0 mg /mL 的溶液，经
0. 45 μm滤膜过滤，即得川西獐芽菜的样品溶液。
1. 4 电泳条件 毛细管使用前分别用甲醇、0. 1
mol /LNaOH 溶液、稀盐酸、重蒸水和电泳缓冲液分别
冲洗 5 min。两次进样间，在 15 kV电压下用缓冲液冲
洗 5 min。以 0. 2 mol /L硼砂缓冲体系(pH 9. 48)及 5
·599·辽宁中医杂志 2014 年第 41 卷第 5 期
mmol /L添加剂 β －环糊精(β － CD)为电泳缓冲溶液，
未涂层熔融毛细管(68. 5 cm ×75 μm i. d. ) ，有效长度
为 60 cm)为分离通道，压力进样(20 Psi) ，运行电压
15 kV，温度 25 ℃，时间为 5 s，在检测波长 250 nm 下
进行检测。
2 结果与讨论
2. 1 缓冲溶液 pH值的影响 缓冲溶液的 pH在毛细
管电泳中扮演着重要的角色，因为它直接影响到电渗
流(EOF)的大小，对分离的灵敏度与迁移时间都会造
成影响［11 － 12］。本实验选用 0. 2 mol /L 硼砂缓冲液，pH
值从 7. 6 ～ 9. 94 范围内对分离测定的结果进行考察。
从图 2 可以看出，当 pH值在 7. 5 ～ 9. 0 范围内，两组分
的迁移时间会随着 pH值的增大而不断减小，但当 pH
＞9. 5，獐芽菜苦苷的迁移时间又会随着 pH 值的增大
而增大，甚至接近 30 min。从图 2 中可以看到，当 pH
为 9. 48 时，两组分的迁移时间最接近，其迁移时间分
别为 3. 56 min和 18. 28 min。
图 2 缓冲溶液 pH对迁移时间的影响
2. 2 添加剂浓度对分离检测的影响 从图 2 中可以
看出，两组分虽能达到基线分离，但迁移时间差别较
大，所以在确定的缓冲溶液浓度和 pH 9. 48 条件下，加
入 β －环糊精(β － CD)添加剂。结果发现，两组分的
迁移时间会随着 β － CD 浓度的改变而发生变化。从
图 3 中可以清楚地看到，当 β － CD等于 5 mmol /L时，
两组分的迁移时间提前且分离度明显增大。
2. 3 检测波长的选择 对龙胆苦苷和獐芽菜苦苷分
别进行紫外扫描，判定出两种化学成分的最大吸收波
长分别为 270 nm和 235 nm。综合考虑后选择的检测
波长为 250 nm。
2. 4 分离电压的选择 在选定了缓冲液浓度、pH 及
添加剂浓度的情况下，进一步考察在不同电压下对被
测组分迁移时间的影响。结果发现当分离电压小于
14 kV 或大于 16 kV 时，虽检测信号变强，但噪音严
重，在色谱图上表现出基线不稳。所以最终选择的分
离电压为 15 kV，龙胆苦苷和獐芽菜苦苷均可以达到
基线分离，且在 8 min 内完成分离检测。在上述优化
的色谱条件下，检测得到浓度为 1. 012 mg /mL 的獐芽
菜苦苷和 1. 005 mg /mL 龙胆苦苷的混合标准溶液的
电泳图(见图 4)。
2. 5 线性范围、检出限及重现性考察 配制系列不同
浓度的 8 组龙胆苦苷和獐芽菜苦苷混合标准溶液，在
选定条件的下，试验了各组分的线性范围并得出两组
分的线性回归方程，并按 3 倍信噪比计算检出限。结
果如表 1 所示。
图 3 添加剂 β － CD浓度对迁移时间的影响
运行条件:硼砂 － NaOH(0. 2 mol /L 硼砂，pH 9. 48) ;
毛细管:68. 5 cm × 75 μm I. D. ;分离电压:15 kV;柱温:20 ℃;
检测波长:250 nm。色谱峰:(1)龙胆苦苷，(2)獐芽菜苦苷
图 4 龙胆苦苷和獐芽菜苦苷的标准混合溶液的电泳图
在最终的优化条件下，检测波长为 250 nm，将质
量浓度为 1. 012 mg /mL的獐芽菜苦苷和 1. 005 mg /mL
龙胆苦苷的混合标准溶液连续进样 6 次，每测定 1 次
后，用超纯水和缓冲溶液清洗毛细管 3 min，分别测定
其峰面积和保留时间，分别计算其相对标准偏差，得出
龙胆苦苷和獐芽菜苦苷的峰高的相对标准偏差(ＲSD)
分别为 4. 5%和 5. 8%，迁移时间的 ＲSD 为 6. 7%(龙
胆苦苷)和 5. 1%(獐芽菜苦苷)。试验表明，用毛细管
电泳测定川西獐芽菜中龙胆苦苷和獐芽菜苦苷含量，
误差小，重现性好。
表 1 回归方程和检出限
化合物
回归方程*
y = ax + b
相关系数 r
线性范围
ρ /(μg /mL)
检测限
ρ /(μg /mL)
龙胆苦苷 y = 20. 43x + 0. 2097 0. 9997 9. 375 － 150 0. 0035
獐芽菜苦苷 y = 29. 21x + 0. 1121 0. 9998 6. 252 － 100 0. 0021
注:* y值代表检测的峰高(mAU) ;x值代表检测的浓度(mg /mL)。
2. 6 精确度及稳定性 取龙胆苦苷和獐芽菜苦苷的
混合标准溶液样品，每天重复测定 5 次，连续测定 5
天，得到峰面积的日内与日间变异系数，见表 2。
2. 7 川西獐芽菜样品的测定 在优化电泳条件下，测
得实际样品溶液的电泳图(图 5)。经计算川西獐芽菜
中的龙胆苦苷和獐芽菜苦苷的的含量高分别为 0. 12、
0. 63 mg /g。
2. 8 加样回收率测定 取已知含量川西獐芽菜的样
品 5 份(含龙胆苦苷 0. 12 mg /g，獐芽菜苦苷 0. 63
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mg /g) ，每份约 0. 50 g，精密称定，每份分别精密加入
龙胆苦苷对照品 1 mL (0. 0612 mg /mL)、獐芽菜苦苷
1 mL(0. 2012 mg /mL) ，按照供试品溶液制备方法制
备，计算得出龙胆苦苷的平均回收率为 99. 74%，ＲSD
为 3. 78%;獐芽菜苦苷平均回收率为 99. 58%，ＲSD为
5. 23%，见表 3。
表 2 精确度实验
化合物
日内(n = 5)
峰面积
(mm2 × 10 －4)
变异系数
(%)
日间(n = 5)
峰面积
(mm2 × 10 －4)
变异系数
(%)
龙胆苦苷 103. 70 104. 04
104. 34 104. 56
103. 44 1. 98 103. 91 1. 36
103. 98 103. 45
104. 01 104. 01
獐芽菜苦苷 257. 56 258. 45
257. 87 258. 64
256. 78 2. 43 257. 91 2. 01
257. 13 257. 04
258. 07 256. 73
注:运行条件:硼砂 － NaOH (0. 2 M硼砂，pH 9. 48) ;
毛细管:68. 5 cm × 75 μm I. D. ;分离电压:15 kV;柱温:20 ℃;
检测波长:250 nm。色谱峰:(1)龙胆苦苷，(2)獐芽菜苦苷
图 5 川西獐芽菜实际样品溶液电泳图
3 讨 论
综上所述，利用高效毛细管电泳(HPCE)技术测
定川西獐芽菜中龙胆苦苷和獐芽菜苦苷成分，简便、快
速、重复性好，结果准确、可靠，可用于川西獐芽菜中裂
环烯醚萜类成分的含量测定和质量检测。
表 3 龙胆苦苷、獐芽菜苦苷加样回收率试验结果
试验号
称样量
(g)
样品含量(mg)
龙胆苦苷 獐芽菜苦苷
加入量(mg)
龙胆苦苷 獐芽菜苦苷
测定总量(mg)
龙胆苦苷 獐芽菜苦苷
回收率(%)
龙胆苦苷 獐芽菜苦苷
1 0. 4971 0. 0597 0. 3132 0. 0610 0. 2011 0. 1206 0. 5117 99. 8 98. 7
2 0. 4893 0. 0587 0. 3083 0. 0612 0. 2012 0. 1198 0. 5081 99. 8 99. 3
3 0. 5017 0. 0602 0. 3161 0. 0611 0. 2011 0. 1215 0. 5214 100. 3 102. 1
4 0. 4932 0. 0592 0. 3107 0. 0611 0. 2009 0. 1204 0. 5103 100. 1 99. 3
5 0. 5031 0. 0604 0. 3170 0. 0610 0. 2011 0. 1207 0. 5151 98. 7 98. 5
参考文献
［1］ 邹寒雁．青海省中药资源开发及利用研究［M］． 北京:东方出版
社，1990．
［2］ 袁叶飞，胡祥宇．川西獐芽菜中芒果苷的提取分离研究［J］．时珍
国医国药杂志，2009，20(8) :1840．
［3］ 张建胜，王雪梅，董秀华，等．川西獐芽菜化学成分研究［J］．中药
材，2009，32(4) :511 － 514．
［4］ 肖培根．中药志:第四册［M］．北京:人民卫生出版社，1988．
［5］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典:一部［S］． 北京:中国医
药科技出版社，2010:475．
［6］ Lian LH，Wu YL，Wan Y，et al． Anti － apoptotic activity of gentiopi-
croside in D － galactosamine / lipopolysaccharide － induced murine ful-
minant hepatic failure［J］． Chemico － Biological Interactions，2010，
188(1) :127 － 133．
［7］ Jaishree V，Badami S，Kumar MＲ，et al． Antinociceptive activity of
swertiamarin isolated from Enicostemma axillare［J］． Phytomedicine，
2009，16(2 /3) :227 － 232．
［8］ 杨红霞，魏立新，杜玉枝，等． 不同海拔川西獐芽菜中药用成分的
HPLC分析［J］．中草药，2010，33(6) :867 － 869．
［9］ 保怡，吉文鹤，马玉花，等． HPLC测定四川及青海地区獐芽菜植物
中 6 种主要成分的含量［J］．中国中药杂志，2006，31(24) :2036 －
2038．
［10］ 王世盛，肖红斌，刘秀梅，等． 藏药抱茎獐芽菜中酮类成分研究
［J］．中草药，2003，34(10) :878 － 879．
［11］ Liu J，Lou YJ． Determination of icariin and metabolites in rat serum
by capillary zone electrophoresis:rat pharmacokinetic studies after
administration of icariin［J］． Journal of Pharmaceutical and Biomed-
ical Anal，2004(36) :365 － 370．
［12］ Ding N，Yang Q，Huang SS，et al． Separation and determination of
four ganoderic acids from dried fermentation mycelia powder of Gano-
derma lucidum by capillary zone electrophoresis［J］． Journal of Phar-
maceutical and Biomedical Anal，2010(53) :
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
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1224 － 1230．
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