全 文 ：中国医药导报 2014 年 9月第 11卷第 25期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 25 September 2014
·药品检验·
龙胆科龙胆属植物全世界约有 400 余种，我国有
240余种，分布遍及全国[1]。 六叶龙胆（Gentiana hexa-
phylla Maxim. ex Kusnez.）为龙胆科龙胆属的多年生草
本植物。 六叶龙胆出自《青藏药鉴》，书中记载藏药名
称为吉解那保。主要分布在中国内地的甘肃、西藏、青
海 、四川 、陕西秦岭等高海拔地区 ，主要生长在海
拔2500～3500 m 的山坡草地、路旁、高山草甸及灌丛
中[2]，是秦岭北坡关中中部的习用草药之一，目前尚未
由人工引种栽培，蕴藏量较大。
已有文献报道称龙胆科植物的主要活性成分为
环烯醚萜苷类化合物，包括龙胆苦苷、马钱酸、獐牙菜
苦苷及獐芽菜苷等[3]。 其中具有强烈苦味活性的龙胆
苦苷是其主要有效成分之一，是龙胆药苦寒的物质基
础 [4]，具有保肝、利胆、抗炎、抗过敏、健胃等多种药理
作用，是评价龙胆药材质量的重要指标[5-6]。
近年来龙胆商品药材使用量加大，但由于长期无
序采挖导致野生资源锐减，部分地区资源枯竭[7]。为扩
大药用资源，本文对六叶龙胆不同部位的主要化学成
分龙胆苦苷含量做了比较，对今后合理开发利用这一
药用植物资源提供指导。
高效液相色谱法测定六叶龙胆不同部位的
龙胆苦苷含量
孙 晓 1 郭耀武 2 杨瑞瑞 2
1.陕西中医学院，陕西咸阳 712046；2.陕西省食品药品检验所，陕西西安 710065
[摘要] 目的 采用高效液相色谱法测定六叶龙胆不同部位的龙胆苦苷含量， 比较不同部位龙胆苦苷的含量。 方法
CAPCELL PAK C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；流动相为甲醇-0.5%乙酸水溶液（25∶75）；检测波长为 270 nm；
流速为1.0 mL/min；柱温为 32℃。 结果 龙胆苦苷在 0.5~6.9 μg 范围内呈线性关系，回归方程为 Y=1.2908×106X+
4.8047×104，相关系数（r）=0.9999，测定方法的平均回收率为 98.56%，RSD = 1.01%（n = 6）。龙胆苦苷含量测量结果
为：花>根>茎>叶>枯龙胆。 结论 本研究所采用的高效液相色谱法快速简便，准确，精密度好；六叶龙胆不同部
位中龙胆苦苷含量有较大差异。
[关键词] 高效液相色谱法；六叶龙胆；不同部位；龙胆苦苷
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-7210（2014）09（a）-0095-04
Determination of gentiopicroside in different parts of the Gentiana hex-
phylla by HPLC
SUN Xiao1 GUO Yaowu2 YANG Ruirui2
1.Shaanxi University of Chinese Medicine, Shaanxi Province, Xianyang 712046, China; 2.Shaanxi Institute for Food
and Drug Control, Shaanxi Province, Xi′an 710065, China
[Abstract] Objective To compare gentiopicroside content in different parts of the Gentiana hexphylla by HPLC, and in
order to compare the content of gentiopicrin in different parts. Methods The HPLC analysis was performed on a CAP-
CELL PAK C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) with methanol-0.5% acetic acid (25∶75) as the mobile phase at a flow
rate of 1.0 mL/min; the detection wavelength was at 270 nm; the column oven temperature was set at 32℃. Results The
gentiopicroside content showed good linear in the range of 0.5-6.9 μg, regression equation: Y=1.2908×106X+4.8047×
104, correlation coefficient (r) = 0.9999. The average recovery was 98.56%, RSD = 1.01% (n = 6). The sequence of gen-
tiopicroside content was flower > root > stem > leaf > wither. Conclusion The method of HPLC is quick, simple, accu-
rate, reliable and good precision. There are obvious differences between the kind of different parts of Gentiana hexphylla.
[Key words] HPLC; Gentiana hexaphylla; Different parts; Gentiopicroside
[基金项目 ] 国家中医药管理局中医药行业科研专项课题
（编号 201207002）；陕西省中医管理局中医药科研课题（编
号 13-ZY054）。
[作者简介] 孙晓（1988.2-），男，陕西中医学院 2012 级中药
学专业在读硕士研究生。
[通讯作者] 郭耀武（1963.5-），男，陕西西安人，主任药师，硕
士研究生导师，陕西省食品药品检验所质量管理科科长；研
究方向：中药资源与开发利用。
95
·药品检验· 中国医药导报 2014 年 9 月第 11 卷第 25 期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 25 September 2014
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津 LC-20AD 型液相色谱仪；色谱柱；CAPCELL
PAK C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；电子分析德
国赛多利斯 Sartorius BP 系列天平；KQ500DE 台式数
控超声波清洗器；大德药机摇摆式离心机。
1.2 材料与试药
本文所采用实验材料六叶龙胆均采自秦岭，采挖
时间为 7～9月份，经陕西省食品药品检验所郭耀武主
任药师鉴定为龙胆科植物六叶龙胆（Gentiana hexa-
phylla Maxim. ex Kusnez.），其中编号 1 的样品采自户
县光头山，编号 2 的样品采自周至县厚畛子，编号 3
的样品采自长安县终南山。
龙胆苦苷对照品（供含量测定用，含量以 96.9%
计，批号为 110770-201013）购自中国药品生物制品
检定所；实验过程中所用试剂均为国药“沪试”牌分析
纯，流动相为色谱纯，微孔滤膜统一为 0.45 μm 有机
系尼龙微孔滤膜，水为去离子水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：CAPCELL PAK C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；
流动相：甲醇-0.5%乙酸水溶液（25∶75）；检测波长：
270 nm；流速：1.0 mL/min[8]；进样量：10 μL；柱温 32℃。
理论塔板数以龙胆苦苷计算应不低于 4500。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取龙胆苦苷对照品
10 mg，置 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，
摇匀，得质量浓度为 0.4 mg/mL 的溶液，用 0.45 μm
的微孔滤膜滤过，作为对照品溶液，备用[9]。
2.2.2 供试品溶液的制备 分取六叶龙胆干燥根、 茎、
叶、花、全草、枯六叶龙胆等六部分，分别放于旋转式
离心机中粉碎。 精密称取各部位粉末各 0.5 g，置具塞
锥形瓶中，精密加甲醇 25 mL，称定并记录重量[10]。 考
虑到龙胆苦苷自身的不稳定性会导致分解从而提取
率下降，故超声处理分为两阶段 [11]。 第一阶段超声频
率设置为 500 W，超声时间设置为 15 min，取出自然
冷却至室温，第二阶段再次超声 15 min，频率设置依
旧为 500 W。 超声结束后取出冷却至室温后称定重
量，对比超声前重量记录，用甲醇补定减失重量。振摇
后静置取上清液，用 0.45 μm 的微孔滤膜过滤，作为
供试品溶液[12-13]。
2.3 系统适应性试验
按上述色谱条件，将制备好的对照品溶液、供试
品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，结果供试品溶液
在与对照品溶液相同保留时间处有一致的色谱峰，且
吸收峰达到基线分离，分离度均大于 1.6，理论塔板数
均大于 4500，说明上述色谱条件适用于六叶龙胆中
龙胆苦苷含量测定。 见图 1。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液 2、5、10、15、20、25 μL，
按上述色谱条件依次进样，以对照品进样量为横坐标，
相应峰面积为纵坐标，计算得回归方程 Y=1.2908×
106X+4.8047×104，相关系数（r）=0.9999，计算结果表明
龙胆苦苷在 0.5~6.9 μg之间线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取龙胆苦苷对照品溶液 10 μL，在上述色
谱条件下连续重复进样 5 次，记录每次峰面积，计算
得 RSD为 1.10%，表明本实验方法精密度良好。
2.6 稳定性试验
取按上述制备条件制备的对照品溶液和供试品
溶液，分别精密吸取 10 μL，在 18 h 内各进样 5 次，各
自记录峰面积 ，计算得到对照品溶液的 RSD 值为
0.55%（n = 5），结果表明对照品溶液在 18 h 内稳定性
良好；供试品溶液的 RSD 值为 0.98%（n = 5），表明
供试品溶液在18 h内稳定性良好。
2.7 重复性试验
取同批六叶龙胆样品按上述方法平行制备 6 份
供试品溶液，按上述色谱测定条件方法，测定，记录各
自峰面积，计算 RSD 为 1.10%（n = 6），结果表明，本
方法重复性良好。
A.对照品；B.供试品
图 1 龙胆苦苷的高效液相色谱图
信
号
强
度
（ m
V
）
时间（min）
B
时间（min）
A
0.00
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.01
0.00
信
号
强
度
（ m
V
）
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.01
96
中国医药导报 2014 年 9月第 11卷第 25期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 25 September 2014
·药品检验·
2.8 回收率试验
精密称取已知含量的六叶龙胆全草样品 6 份，分
别精密加入龙胆苦苷对照品适量，按“2.2.2”项下方法
制备供试品溶液。 测定并计算其各自的回收率，然后
计算得到平均回收率为 98.56%，RSD为 1.01%（n = 6），
结果表明，本实验方法可行。 见表 1。
表 1 龙胆苦苷回收率实验结果（n = 6）
2.9 样品含量测定
分别取六叶龙胆根，茎，叶，花，全草，枯龙胆干燥
粉末，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，各平行
制备 2 份，每份精密吸取 10 μL，注入高效液相色谱
仪进行含量测定。 见表 2。
表 2 含量测定结果
3 讨论
3.1 龙胆苦苷含量测定
《中国药典》2010 年版龙胆项下规定的龙胆苦苷
含量限度龙胆不少于 3.0%，坚龙胆不少于 1.5%[14-16]。
本文六叶龙胆测定结果根含量为 1.74%，花含量为
2.91%，全草含量 1.02%，表明六叶龙胆确有一定的应
用价值。
3.2 提取条件研究
3.2.1 提取时间的考察 按照“2.2.2”项下供试品溶液
的制备方法，对六叶龙胆提取时间进行考察 ，分为
15、30、45、60 min，结果发现随着超声波提取时间的
延长，提取率在 30 min 前呈上升趋势，30 min 后趋于
平缓。
3.2.2 料液比的考察 按照“2.2.2”项下供试品溶液的
制备方法，设定料液比为 1∶40、1∶50、1∶60、1∶70，结果
发现随着提取溶剂比例的不断加大，提取率呈上升趋
势，并在料液比 1∶50 后趋于平缓。
3.2.3 提取条件的确定 比较静态热回流提取法、动态
热回流提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法
等方法各自的提取率。综合温度因素对龙胆苦苷稳定
性的影响，考虑到龙胆苦苷自身的对热不稳定性，可
能会导致龙胆苦苷分解从而使提取率下降。最终确定
提取条件为：料液比 1∶50、超声处理两阶段。第一阶段
超声频率设置为 500 W，超声时间设置为 15 min，取
出自然冷却至室温，第二阶段再次超声 15 min，频率
依旧设置为 500 W。
3.3 六叶龙胆采收时间
六叶龙胆根部相比《中国药典》2010 年版收录的
龙胆药材根部较小，其主要药理成分龙胆苦苷在六叶
龙胆各个部位有所不同，其中以花中含量最大，为
2.91%，根中次之，为 1.74%，茎叶中龙胆苦苷含量较
低，提示应在盛花期 7～9 月份采挖。
3.4 六叶龙胆入药部位
六叶龙胆资源主要在秦岭高海拔区域分布，六叶
龙胆植株较小且全草均含有龙胆苦苷，总体含量在
1.0%以上，考虑到药用植物资源的充分利用，建议以
全草入药，考虑到六叶龙胆往年生的干枯植株根系中
龙胆苦苷含量仅为 0.1%，故建议在六叶龙胆产地加
工时需把根部干枯的植株根系剔除。
[参考文献]
[1] 曹斐华，李冲.龙胆属植物化学成分及药理作用的研究
进展[J].中国新药杂志，2008，17（1）：27-32.
[2] 青海高原生物研究所植物室.青藏高原药物图鉴[M].西
宁：青海人民出版社，1976.
[3] 冯波，朱鹤云，关皎，等.HPLC同时测定龙胆中 4种活性
成分含量[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（13）：82-85.
[4] 郑虎占，董泽宏，余靖.中药现代研究与应用[M].2 卷.北
京：学苑出版社，1997：1398．
1
2
3
4
5
6
0.3289
0.3102
0.3200
0.3307
0.3173
0.3092
3.3669
3.1755
3.2758
3.3854
3.2482
3.1653
3.3797
3.1600
3.2395
3.3712
3.2496
3.2143
6.7335
6.2562
6.4673
6.7276
6.4601
6.2882
99.18
98.84
99.25
99.14
97.19
97.78
98.56 1.01
序号
取样量
（g）
样品中含量
（mg）
对照品加入
量（mg）
测得量
（mg）
回收率
（%）
平均回收
率（%）
RSD
（%）
根（当年生）
编号 1
编号 2
编号 3
茎
编号 1
编号 2
编号 3
叶
编号 1
编号 2
编号 3
花
编号 1
编号 2
编号 3
全草
编号 1
编号 2
编号 3
根（枯根）
编号 1
编号 2
编号 3
1.74
1.74
1.75
1.14
1.14
1.14
0.38
0.39
0.38
2.90
2.92
2.92
1.01
1.01
1.03
0.10
0.10
0.10
1.74
1.14
0.38
2.91
1.02
0.10
部位 龙胆苦苷含量（%） 平均含量（%）
97
·药品检验· 中国医药导报 2014 年 9 月第 11 卷第 25 期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 25 September 2014
[5] 王建科，高言明，陈惠玲.坚龙胆中龙胆苦苷含量的测定[J].
贵州农业科学，2013，41（2）：47-49.
[6] 袁廷伟，孙芳玲，艾厚喜 ，等 .龙胆苦苷的研究进展及
抗炎前景 [J].中国药理学与毒理学杂志，2012，26（3）：
425.
[7] 庄绪会，张超，张庆芝.昆明龙胆不同部位龙胆苦苷的含
量测定[J].云南中医中药杂志，2010，31（1）：55-58.
[8] 杨慧玲，司庆文，侯勤正，等 .HPLC 法测定不同海拔长
柄秦艽中龙胆苦苷、马钱酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷[J].
中草药，2010，41（10）：1720-1722.
[9] 郝彩琴，冷晓红，郭鸿雁，等.不同提取方法对宁夏六盘
山栽培秦艽中龙胆苦苷提取率的影响[J].西北药学杂志，
2013，28（1）：13-15.
[10] 郭小存，朱鹤云，李兵，等. 正交设计优选龙胆中龙胆
苦苷的提取工艺[J].吉林医药学院学报，2012，33（2）：
78-79.
[11] 李超，韩永萍.响应面优化龙胆草中龙胆苦苷提取工艺
的研究 [J].西南民族大学学报：自然科学版 ，2013，39
（2）：204-208.
[12] 赵明，孙菲，隋译 .HPLC 法测定复方龙胆碳酸氢钠片
中龙胆苦苷的含量[J].中国医药导报，2009，6（22）：65-
66.
[13] 张妍，丁永辉，张晓萍，等，HPLC 法测定十五味龙胆花
丸中龙胆苦苷和丁香酚[J].中成药，2011，33（12）：2094-
2097.
[14] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科
技出版社，2010.
[15] 许秋霞，李小芳，舒予，等 .干燥方法对龙胆炮制品中
龙胆苦苷含量的影响[J].中国药房，2013，24（7）：622-
624.
[16] 陈祯桢，罗珍妹.HPLC 法同时测定茵胆平肝胶囊中栀
子苷、龙胆苦苷、芍药苷的含量[J].中国药房，2012，23
（36）：3442-3444.
（收稿日期：2014-05-23 本文编辑：卫 轲）
[参考文献]
[1] 李世亨，王旭辉.面肌痉挛的诊断与治疗[J].中华神经外
科疾病研究杂志，2011，10（6）：481-484.
[2] 张圳平，崔岩霞，张圳红.104 例氟哌啶醇治疗面肌痉挛
临床疗效观察[J].中国农村卫生，2014，2：72-74.
[3] 李世亭，王旭辉.面肌痉挛的诊断与治疗[J].中华神经外
科疾病研究杂志，2011，12（9）：178-179.
[4] 吕海莲，罗树彬，许道洲，等.MR3DFLASH—WE 技术对
特发性面肌痉挛显微血管减压的术前诊断价值[J].中国
微侵袭神经外科杂志，2012，17（5）：201-203.
[5] 焦伟.面肌痉挛的病因及发病机制研究进展[J].国际神
经病学神经外科学杂志，2012，39（1）：62-65.
[6] 叶飞，余艳，席刚明.肌电图导引下面神经毁损治疗 Meige
综合征临床疗效观察[J].医学理论与实践，2010，11（11）：
134-135.
[7] 陈睦虎，陈礼刚.面肌痉挛术中电生理监测的临床价值[J].
中国社区医师，2011，10（5）：214-215.
[8] 黄赛忠，陈卫元.熄风止痉方联合卡马西平治疗面肌痉
挛 38例[J].吉林中医药，2012，32（10）：1038-1039.
[9] 孙秀萍，井辉明.天麻白芍汤联合针刺治疗面肌痉挛 30
例[J].陕西中医，2011，32（2）：166-167.
[10] 李世亭，王旭辉 .面肌痉挛的诊断与治疗[J].中华神经
外科疾病研究杂志，2011，10（6）：481.
[11] 闫洪琪，尹瑞卿，刘衍兴 .天麻牛膝胶囊治疗面肌痉挛
30例[J].世界中医药，2012，7（6）：519-521.
[12] 蔡霞 .止痉散治疗面肌痉挛 36 例疗效分析 [J].中国现
代药物应用，2013，7（18）：146-147.
[13] 朱志农.牵正散治疗面肌痉挛疗效观察[J].实用中西医
结合，2010，5（10）：62.
[14] 尹光山.面肌痉挛的治疗[J].中国医学创新，2013，10（8）：
158.
[15] 魏小刚，王孝文，康雅萍，等.面肌痉挛面神经的组织学变化
和超氧化物歧化酶[J].中国医学创新，2012，9（12）：16-17.
（收稿日期：2014-04-21 本文编辑：张瑜杰）
（上接第 94页）
98