全 文 ：收稿日期:2008-04-21
基金项目:陕西米仓山自然保护区综合科学考察项目
作者简介:李晓丹(1981-), 女 , 植物学硕士研究生 , 主要从
事药用植物的研究。
＊通讯联系人:E-mail:yapingxiao@yahoo.com.cn
5种药用石韦总黄酮的提取及测定
李晓丹1 ,肖娅萍 2
(1.内蒙古医学院 基础医学院 ,内蒙古 呼和浩特 010050;2.陕西师范大学生命科学学院 ,陕西 西安 710062)
摘　要　采用正交实验设计探究石韦总黄酮的提取工艺 , 并用该工艺提取了 5种药用石韦总黄酮 , 采用分光光度
法测定总黄酮含量。旨在为石韦药材的黄酮提取及石韦药材质量控制和进一步有效利用提供参考。研究结果表
明 , 最佳提取方案为:55%乙醇 , 回流提取 3次 ,每次 2 h。测得毡毛石韦的总黄酮含量明显较高 ,而华北石韦总黄
酮含量最低 , 不同种石韦总黄酮含量存在显著差异。
关键词　药用石韦;总黄酮;评价指标
中图分类号:R284.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006-9690(2009)01-0059-03
DeterminationofTotalFlavonoidsfrom5SpeciesofPyrrosiaLeaf
LiXiaodan1 , XiaoYapping2
(1.SchoolofBasicMedicalSciences, InnerMongoliaMedicalColege, Hohhot010050, China;
2.ColegeofLifeScience, ShaanxiNormalUniversity, Xian710062 , China)
Abstract　Theoptimumextractionconditionfortotalflavonoidswasinvestigatedbyorthogonaldesign.
Usingthismethod, thetotalflavonoidsfrom5 diferentPyrosialeaveswereextractedanddeterminedby
UVspectrophotometer.Theobjectiveistoprovidereferenceforextractionofflavonoidsandqualitycon-
trolofPyrosiamaterials.Thebestconditionis55% ethanol, 2 hours, 3 times.Theresultshowedfla-
vonoidscontentofPyrrosiadrakeana(Franch.)Chingisobviouslyhighwhereasflavonoidscontentof
Pyrrosiadavidi(Bak.)Chingisthelowest.Flavonoidscontentofdiferentspecieshaslargedistance.
Keywords　Pyrosialeaf;totalflavonoids;evaluatedstandard
　　药用石韦为水龙骨科(Polypodiaceae),石韦属
(PyrrosiaMirbel)多种植物 ,主要分布于华北 、西北
及湖南等地 。其地上部分可作药用 ,具有利尿通淋 、
清热止血的功效。 2005年 《中华人民共和国药典 》
将同属 3种植物石韦 [ Pyrrosialingua(Thunb.)Fat-
wel] 、庐山石韦 [ Pyrrosiasheareri(Bak.)Ching]和
有柄石韦 [ Pyrosiapetiolosa(Christ)Ching]的干燥
叶作为石韦药材使用 ,但目前不同地区仍有其它种
如:毡毛石韦 ,北京石韦 ,华北石韦等石韦入药 。
石韦属植物中含黄酮类 、皂苷类及谷甾醇等多
种化合物 [ 1] 。不同种的石韦总黄酮及其它有效成
份的含量可能存在差异 ,这会导致不同种石韦在药
用功效上的不同。通过对这些物质的测定 ,可对药
材的品质进行评价[ 2] 。在药用石韦的化学成份研
究中 ,对绿原酸 、谷甾醇 、圣草酚等化合物有较多研
究 ,但将总黄酮含量作为评价指标 ,测定不同种的含
量并比较差别 ,尚未见报道。所以对石韦的总黄酮
提取工艺及不同石韦药材总黄酮含量的研究 ,可为
石韦药材进一步有效利用提供参考。
本实验采用正交实验设计探究石韦总黄酮的提
取工艺 ,利用最佳提取工艺提取 5种不同药用石韦
总黄酮并加以比较 。
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第 28卷第 1期
2009年 2月 　　　　　　　　　　　　　 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources　　　　　　　　　　 　Vol.28 No.1Feb.2009
1　材料和方法
1.1　试器与材料
723型可见光分光光度计(上海菁华科技仪器
有限公司)、恒温水浴锅 、旋转蒸发仪 、万分之一天
平 、循环水式多用真空泵 、乙醇 (AR)、氢氧化钠
(AR)、亚硝酸钠(AR)、硝酸铝(AR)
市售石韦药材 、毡毛石韦 [ Pyrrosiadrakeana
(Franch.) Ching] 、华 北石 韦 [ Pyrosiadavidi
(Bak.) Ching] 、有 柄 石 韦 [ Pyrosia petiolosa
(Christ)Ching] 、石韦 [ Pyrosialingua(Thunb.)
Fatwel] 5种材料的干燥叶均研成粉末 ,过 65目筛
备用。除石韦药材购于西安市药材市场外 ,材料均
采于秦岭。
1.2　方法
1.2.1　标准曲线的绘制
精密称取芦丁标品(干燥)5mg,置于 70%微热
乙醇中超声溶解 ,定容至 50 mL,摇匀(浓度为 0.1
mg/mL),精确量取标准溶液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、
5.0mL于 6只 15mL具塞试管中 ,分别加 70%乙醇
至 5 ml, 加 5% NaNO2 溶液 0.3 mL, 摇匀 , 放置
6 min,加 10%Al(NO3)3溶液 0.3 mL,摇匀 ,放置
6 min,加 1mol/LNaOH溶液 4mL,加 70%乙醇 0.4
mL,摇匀 ,放置 10 ～ 15 min,于 510 nm波长处以第
一支试管溶液为空白对照 ,测定吸光度。以浓度为
横坐标 ,吸光度为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,建立回归
方程 A=15.837C-0.003 (r=0.999 , P<0.01),芦
丁在 0 ～ 0.5 mg范围内线性关系良好 。
1.2.2　供试品溶液的制备及测定
精确称取供试品(毡毛石韦)9份 ,每份 1.0 g,
按照三因素三水平实验设计(见表 1)的 9种提取方
案 ,分别回流提取材料中的总黄酮 ,过滤收集滤液 ,
定容至 100mL。精密量取 0.25 mL的供试品溶液 ,
自 “加 70%乙醇溶液至 5 mL……”同上 ,测定吸光
度 ,将 9份供试品溶液分别测定。重复 3次 。利用
回归方程可求得总黄酮含量。
分别精确称取 5种材料各 1.0 g,利用正交实验
选取的最佳提取方案 ,分别提取 5种材料的总黄酮 ,
过滤收集滤液 ,并定容至 100 mL。测定方法同上 ,
将 5份供试品溶液分别测定 。重复 3次。利用回归
方程可求得总黄酮含量 。
表 1　因素水平
水平 A(乙醇浓度 /%) B(提取时间 /h) C(提取次数)
1 55 1 2
2 70 2 3
3 85 3 4
1.2.3　精密度实验
称取供试品(毡毛石韦)1.0 g,利用正交实验选
取的最佳方案制备供试品溶液 。测定方法同上 ,连
续测定 5 次。计算相对标准偏差 , RSD值为
0.499%,表明该方法精密度良好。
1.2.4　重现性实验
称取供试品(毡毛石韦)5份 ,每份 1.0 g,利用
正交实验选取的最佳方案制备供试品溶液。测定方
法同上 ,将 5份供试品溶液分别测定 。计算相对标
准偏差 , RSD值为 1.542%,表明该方法重现性良
好。
1.2.5　回收率实验
称取供试品(毡毛石韦)5份 ,每份 1.0 g,分别
加入 5 mg芦丁对照品 ,利用正交实验选取的最佳方
案制备供试品溶液。测定方法同上 ,将 5份供试品
溶液分别测定 。计算回收率为 98.27%, RSD值为
3.75%。
2　结果与分析
2.1　总黄酮提取正交实验的结果与分析
正交实验提取总黄酮并测定含量 ,结果见表 2。
经结果分析 ,可知乙醇浓度为总黄酮提取的主要影
响因素 ,最佳提取方法是用 55%乙醇 ,回流提取 3
次 ,每次 2 h。而在王自军等人的研究[ 3]中 ,提取时
间为总黄酮提取的主要影响因素 ,这可能是因为试
验选取的提取时间太短(20min, 40 min, 60min),还
不能较充分的提取总黄酮。
2.2　不同石韦总黄酮含量比较
5种药用石韦总黄酮含量测定结果见表 3。利
用 SPSS多重比较对数据进行分析 ,从表 3可知:毡
毛石韦与石韦药材总黄酮含量较高 ,且显著高于有
柄石韦 、石韦及华北石韦;华北石韦黄酮含量最低 ,
并且与其它几种存在显著性差异;另外 ,药典中石韦
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　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 28卷
的两种基源植物黄酮含量差别也较大 。总黄酮含量
的巨大差别启示不同种石韦可能具有不同的药用功
效 。所以不同种石韦应区别对待。
表 2　正交实验结果
实验号 A B C 总黄酮含量 /mg·g-1
1 55 1 2 100.78
2 55 2 3 103.81
3 55 3 4 101.53
4 70 1 3 84.86
5 70 2 4 84.61
6 70 3 2 81.33
7 85 1 4 69.46
8 85 2 2 69.96
9 85 3 3 72.24
Kj1 306.12 255.10 252.07
Kj2 250.80 258.38 260.91
Kj3 211.66 255.10 255.60
Rj 94.46 3.28 8.84
主次因素 A>C>B
最优组合 A1B2C2
表 3　5种药用石韦总黄酮含量的多重比较
材料 N Subsetforalpha=0.05
1 2 3 标记字母
华北石韦 3 37.80 c
石韦 3 48.75 c
有柄石韦 3 73.96 b
石韦药材 3 80.97 80.97 ab
毡毛石韦 4 95.85 a
　注:相同标记字母代表差异不显著
3　讨　论
如何利用有限的石韦资源 ,得到最高的黄酮产
量 ,是很有意义的 。本文得到石韦黄酮的最佳提取
方法是 ,用 55%乙醇 ,回流提取 3次 ,每次 2 h,在提
取时间和次数较完全的情况下 ,乙醇浓度为提取效
率的主要影响因素 。
黄酮类化合物是一大类天然产物 ,是石韦等许
多中草药的有效成分 ,具有抗肿瘤 、抗心脑血管疾
病 、抑菌抗病毒 、抗氧化 、抗衰老 、抗辐射等功效 [ 4] 。
通过对 5种药用石韦总黄酮含量测定可知 ,不同种
石韦总黄酮含量存在显著差别 ,而总黄酮含量的巨
大差别启示不同种石韦可能具有不同的药用功效。
所以把总黄酮这一类重要的有效成分及其它主要成
分作为石韦中药质量控制的指标成分 ,对不同种石
韦分别制定评价标准 ,区别对待 ,是很有必要的。这
与马建功等关于不同种石韦的圣草酚 7-O-β -D
吡喃葡萄糖醛酸苷等化合物含量的研究 [ 5] 结论是
一致的。
参考文献:
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版社 , 2006:98-99.
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工艺 [ J] .时珍国医国药 , 2007, 18(2):463-464.
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第 1期　　　　　　　　　　　　　　李晓丹 ,等:5种药用石韦总黄酮的提取及测定