全 文 ：第３９卷第１期
２０１６年３月 　　　　　
辽宁师范大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌｉａｏｎｉｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
　　　　　
Ｖｏｌ．３９　Ｎｏ．１
Ｍａｒ．　２０１６
　　收稿日期：２０１５－０９－１２
基金项目：辽宁省教育厅高等学校科学技术研究重点实验室项目（２００８Ｓ１３５）
作者简介：姜华（１９５８－ ），女，黑龙江富裕人，辽宁师范大学教授，博士．Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｈｕａ１２２５＠１６３．ｃｏｍ
　　文章编号：１０００－１７３５（２０１６）０１－００９３－０５
　　ｄｏｉ：１０．１１６７９／ｌｓｘｂｌｋ２０１６０１００９３
药用观赏植物———鸟巢蕨叶斑病病原菌鉴定初报
姜　华１，　鲍　竹１，　王　晶２
（１．辽宁师范大学 生命科学学院，辽宁 大连　１１６０８１；２．大连森林动物园，辽宁 大连　１１６０１３）
摘　要：鸟巢蕨（Ｎｅｏｔｔｏｐｔｅｒｉｓ　ｎｉｄｕｓ）是一种集药用、食用、美化、净化于一身的蕨类植物，
具有巨大的开发价值．采用单斑分离法于染病的鸟巢蕨植株中分离出２株真菌Ｐ１和
Ｐ２，经形态学及分子生物学鉴定，Ｐ１为芸苔链格孢（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、Ｐ２为交互枝
顶孢（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ）．两者对鸟巢蕨均具有致病性，但其生物学特性不同：Ｐ１
菌丝生长及产孢最适温度均为２５℃，产孢最适湿度为３５％，最适ｐＨ值为６，菌丝致死
温度为５０℃；而Ｐ２菌丝生长及产孢最适温度均为２５℃，产孢最适湿度为５５％，最适
ｐＨ值为５，菌丝致死温度为６０℃．光照对２种菌的菌丝生长影响不大，但全黑暗有利于
两者产孢．Ｐ１的最适碳源、氮源、生长因子、无机盐分别为乳糖、酵母膏、吲哚乙酸和
ＭｇＳＯ４，而Ｐ２的分别为蔗糖、ＫＮＯ３、吲哚丁酸和ＮａＨ２ＰＯ４．
关键词：鸟巢蕨；叶斑病；芸苔链格孢；交互枝顶孢
中图分类号：Ｑ９３９；Ｓ４１　　　文献标识码：Ａ
　　鸟巢蕨（Ｎｅｏｔｔｏｐｔｅｒｉｓ　ｎｉｄｕｓ）又名山苏花［１］，是铁角蕨科（Ａｓｐｌｅｎｉａｃｅａｅ）巢蕨属（Ｎｅｏｔｔｏｐｔｅｒｉｓ　Ｊ．
Ｓｍ．）下的一个种，野生于温暖潮湿的林荫地带，多年生草本，其植株叶片美观可供观赏．鸟巢蕨也可食
用和药用，除基本营养外，还富含氨基酸、矿质元素等［２］，并具有强筋健骨、活血化瘀、促进骨细胞增长、
加快骨折愈合［３］，治疗感冒、发烧、胸痛、咳嗽等［４－５］作用．鸟巢蕨作为花卉，不但有美化作用，同时对甲
醛、苯、甲苯等具有一定的吸附作用［６－７］．鉴于鸟巢蕨的食用、药用及生态价值，人们给予了诸多关注，例
如，营养成分分析［２］、食用及药用价值［２－３］、环境监测及空气净化［６－７］、生态价值［８］、组织培养［９］等，但有
关鸟巢蕨叶斑病等病害及病原菌研究国内外鲜有报道．
调查发现，鸟巢蕨易发生叶斑病，笔者采集病样进行了叶斑病病原菌鉴定及其生物学特性研究，旨
为鸟巢蕨培植过程中的叶斑病防治提供理论依据．
１　材料与方法
１．１　材料
鸟巢蕨（Ｎ．ｎｉｄｕｓ）：健康及染病植株．
病原菌：Ｐ１为芸苔链格孢（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ），Ｐ２为交互枝顶孢（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ），两
者由鸟巢蕨病叶分离得到，经形态学及分子生物学鉴定．
培养基：ＰＤＡ培养基、萨氏（Ｓａｂｏｕｒａｕｄ’ｓ）培养基．
９４　 辽宁师范大学学报（自然科学版） 第３９卷
主要试剂：ＤＮＡ提取所用试剂均购于辽宁省大连宝生物公司．
１．２　方法
１．２．１　病原菌分离纯化　采用单斑分离法［１０］分离病原菌，挑取菌丝尖端进行纯化．
１．２．２　病原菌鉴定　将单斑分离纯化后的菌株在ＰＤＡ平板上培养５～７ｄ，肉眼观察菌落形态，光镜
下观察菌丝及孢子形态，进行形态学鉴定［１１－１２］．分子生物学鉴定采用ＳＤＳ法提取致病菌的ＤＮＡ［１３］．
ＰＣＲ扩增引物为ＩＴＳ１（５’－ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ－３’）和ＩＴＳ４（５’－ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴ－
ＧＡＴＡＴＧＣ－３’）．反应总体积为５０μＬ．反应体系为：Ｔａｑ　０．５μＬ；１０×ＰＣＲ　Ｂｕｆｆｅｒ　５μＬ；ｄＮＴＰ　Ｍｉｘ－
ｔｕｒｅ　４μＬ；ＤＮＡ　１μＬ；引物ＩＴＳ１　１μＬ；引物ＩＴＳ４　１μＬ；ｄｄＨ２Ｏ　３７．５μＬ．ＰＣＲ 扩增程序为：预变性
９４℃、５ｍｉｎ；变性９４℃、１ｍｉｎ；退火５３℃、１ｍｉｎ；延伸７２℃、５ｍｉｎ；３５个循环．ＰＣＲ产物送上海生工
测序．在 ＮＣＢＩ网站上用ＢＬＡＳＴ软件对测序后菌株的ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列进行序列比对，结合形态学鉴
定结果确定致病菌的分类地位．
１．２．３　致病性测定　将健康的鸟巢蕨叶片表面消毒后，用无菌水冲洗，以灭菌针头针刺叶片形成创伤
后，将病菌菌饼有菌的一面贴于叶片上保湿培养，以接种相同大小的培养基饼为空白对照［１４］．每处理
接种５片叶，３次重复，２４ｈ后移除菌饼，５ｄ后观察叶片发病情况．叶片发病后，用单斑分离法重新分
离病原菌，观察其菌落和孢子形态，与接种菌进行比较，确认其致病性．
１．２．４　病原菌生物学特性测定
１．２．４．１　温度、湿度、ｐＨ、培养时间及光照对菌丝生长和产孢量影响　取直径为８ｍｍ病原菌菌饼置
于ＰＤＡ平板中央，２５℃培养４ｄ后，以十字交叉法测量菌落直径、观察菌落厚度及颜色，７ｄ后用无菌
水洗脱孢子，以血球计数板计数，每处理３次重复．温度测定范围为５～７０℃、梯度为５；湿度测定采用
小容器空气湿度调节法，范围为３５％～９５％、梯度为１０；ｐＨ值测定范围为５～９、梯度为１；光照测定采
用全光照、全黑暗和光暗交替（１２Ｌ／１２Ｄ）培养．
１．２．４．２　最适培养基的筛选　以蛋白胨为氮源，分别测定可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、Ｄ－
果糖、Ｄ－木糖（含量２５ｇ／Ｌ）等碳源对病菌菌丝生长和产孢量的影响；以蔗糖为碳源，分别测定ＫＮＯ３、
ＮＨ４ＮＯ３、（ＮＨ４）２ＳＯ３、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏和尿素（含量２５ｇ／Ｌ）等氮源对病菌菌丝生长和产孢量
的影响；以萨氏培养基为基础培养基，分别测定 Ｋ２ＨＰＯ４、ＭｇＳＯ４、ＺｎＳＯ４、ＦｅＳＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４ 和 ＮａＣｌ
（含量０．５ｇ／Ｌ）等无机盐以及ＶＢ１、ＶＢ２、吲哚乙酸、ＶＢ６、吲哚丁酸和萘乙酸（含量为０．０５ｇ／Ｌ）等生
长因子对病菌菌丝生长和产孢量的影响．
以十字交叉法测量菌落直径，以血球计数板对孢子进行计数，每处理３次重复．
２　结果与分析
２．１　病害症状
鸟巢蕨发病初期，叶片感病部位发黄，随着时间的推移，病斑处颜色逐渐加深至深褐色，最终干枯
或穿孔．病斑会逐渐扩大，最后导致整个叶片枯萎．叶片边缘、叶脉等都可见病斑，病斑分布无规律性
（见图１）．
２．２　病原菌鉴定
以单斑分离法分离出２株真菌Ｐ１和Ｐ２，两者的单斑分离率分别为２９．５％和２５％．纯化的菌株进
行形态学和分子生物学鉴定，其结果如下：
２．２．１　形态学鉴定　（１）在ＰＤＡ培养基上，Ｐ１菌落正面呈灰白色，反面呈墨绿色；菌丝褐色至灰褐
色；分生孢子浅褐色至褐色，手雷状或倒棒状，具横隔与纵膈，单生或２～３个串生．（２）Ｐ２菌落生长缓
慢，初期紧凑而湿润，菌落正面呈白色、反面呈微黄色；菌丝细并透明，匍匐生长，瓶梗不分支；分生孢子
为单细胞、聚成团，透明、倒卵圆形或圆柱状．
第１期 姜　华等：　药用观赏植物———鸟巢蕨叶斑病病原菌鉴定初报 ９５　
图１　鸟巢蕨叶斑病症状
Ｆｉｇ．１　Ｌｅａｆ　ｓｐｏｔ　ｏｆ　Ｎ．ｎｉｄｕｓ
２．２．２　分子生物学鉴定　纯化后的Ｐ１和Ｐ２培养
５～７ｄ，刮其菌丝提取ＤＮＡ，电泳检测其纯度后进
行ＰＣＲ扩增，在６００ｂｐ左右处有明显的特异性条
带，条带清晰且明亮，说明ＰＣＲ产物浓度及纯度均
较高．将ＰＣＲ产物送上海生工测序，获得２种病原
菌的ｒＤＮＡ－ＩＴＳ碱基序列，Ｂｌａｓｔ对比、系统发育树
同源性比较结果表明：Ｐ１的ＩＴＳ碱基序列与芸苔
链格孢的碱基序列相似度达９９％，Ｐ２的ＩＴＳ碱基
序列与交互枝顶孢的碱基序列相似度达９９％．结合
两者的形态学鉴定结果，认为 Ｐ１为芸苔链格孢
（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、Ｐ２为交互枝顶孢（Ａｃｒｅｍｏ－
ｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ）．
２．３　致病性测定
依据柯赫氏法则检验分离菌是否具有侵染致病性，分别进行了Ｐ１、Ｐ２单独侵染和二者混合侵染
的接种试验．其结果表明：３种处理均可使接种叶片发病，接种５ｄ后的发病率分别为７５％、６６．７％和
７７．８％；接种叶片发病后的症状与自然发病的症状一致．再分别对显症叶片进行单斑分离，获得的菌株
形态学特征与Ｐ１、Ｐ２菌株一致，由此表明，Ｐ１和Ｐ２均为鸟巢蕨叶斑病的致病菌．
２．４　２种病原菌的生物学特性比较
２．４．１　温度、ｐＨ值、湿度、培养时间及光照对菌丝生长及产孢量的影响
２．４．１．１　温度影响　在１０～３５℃下，２种病原菌均可生长，但１０℃时培养４ｄ，Ｐ２菌饼周围无菌丝长
出，Ｐ１的菌落直径为１．８８５ｃｍ；培养７ｄ后，Ｐ２菌饼周围有菌丝长出，其直径为０．９８１ｃｍ，说明Ｐ１较
Ｐ２耐低温．Ｐ１、Ｐ２的菌丝生长及产孢的最适温度均为２５℃．在２５℃下，两者的菌落直径（４ｄ）和产孢
量（７ｄ）分别为４．６６１ｃｍ、１×１０６个／ｍＬ和１．９３０ｃｍ、６×１０７个／ｍＬ，Ｐ２的生长速度明显低于Ｐ１，但其
产孢量高于Ｐ１．
２．４．１．２　ｐＨ值影响　在ｐＨ为５～９范围内，２种病原菌均可生长并产孢．当ｐＨ值为６时，Ｐ１的生
长速率最快、产孢量最大，菌落直径（４ｄ）和产孢量（７ｄ）分别为４．７３５ｃｍ、６×１０５个／ｍＬ；当ｐＨ 为５
时，Ｐ２的生长最快，但其最适产孢的ｐＨ为８，分别为１．９３０ｃｍ、６×１０７个／ｍＬ．同为最适ｐＨ值下，Ｐ１
的生长速度明显快于Ｐ２，但其产孢量明显低于Ｐ２．
２．４．１．３　湿度影响　当湿度达到９５％时，Ｐ１和Ｐ２的菌丝生长速度最快、菌落长势最好，菌落直径
（４ｄ）分别为４．３０６、１．８４７ｃｍ；２种病原菌在３５％～９５％湿度下均可产孢，Ｐ１的适宜产孢湿度为３５％，
产孢量为１．１３×１０５个／ｍＬ，Ｐ２的最适产孢湿度为５５％，产孢量为２×１０７个／ｍＬ．
２．４．１．４　培养时间影响　培养２～３ｄ的时候，Ｐ１的菌丝生长速度最快，为０．９０９ｃｍ／ｄ，随后变缓；培
养４ｄ的时候，Ｐ２的菌丝生长速度最快，为０．３６４ｃｍ／ｄ，随后变缓．两者相比，相同培养时间下，Ｐ１的生
长速度和菌落直径均明显高于Ｐ２，但其产孢量远低于Ｐ２．如培养４ｄ时，Ｐ１的菌落直径为４．１８６ｃｍ，
产孢量为２．３×１０５个／ｍＬ，而Ｐ２的菌落直径为２．２５６ｃｍ，产孢量为３．１２×１０７个／ｍＬ．
２．４．１．５　光照影响　在全黑暗、全光照和光暗交替的条件下，２种病原菌均可生长，且３种条件对Ｐ１
和Ｐ２菌落生长的影响不大，菌落直径（４ｄ）分别为４．１３２、４．３５６、４．１５６和１．７２０、１．６８４、１．７３２ｃｍ，但
全黑暗条件下有利于２种病原菌产孢，其产孢量分别为６．９２×１０５、６．８×１０７个／ｍＬ．
２．４．２　碳源、氮源、无机盐及生长因子对菌丝生长及产孢量的影响
２．４．２．１　碳源　Ｐ１菌丝在以乳糖为碳源的培养基上生长最快，其生长速度排序为乳糖＞葡萄糖＞蔗
糖＞Ｄ－果糖＞Ｄ－木糖＞麦芽糖＞可溶性淀粉，而Ｐ２菌丝适宜在以蔗糖为碳源的培养基上生长，其排
９６　 辽宁师范大学学报（自然科学版） 第３９卷
序为蔗糖＞Ｄ－果糖＞乳糖＞可溶性淀粉＞葡萄糖＞麦芽糖＞Ｄ－木糖；２种病原菌在不同的碳源培养基
上均可产孢，但适宜的碳源有别，Ｐ１在麦芽糖培养基上易产孢，培养７ｄ后的产孢量较大，为１．０１×
１０６个／ｍＬ，Ｐ２在Ｄ－果糖培养基上易产孢，产孢量为１．２×１０７个／ｍＬ．
２．４．２．２　氮源　Ｐ１菌丝生长适宜的氮源是酵母膏，其生长速度排序为酵母膏＞蛋白胨＞牛肉膏＞
ＫＮＯ３＞ＮＨ４ＮＯ３＞（ＮＨ４）２ＳＯ４＞尿素，而Ｐ２的是ＫＮＯ３，其排序为ＫＮＯ３＞蛋白胨＞酵母膏＞牛肉膏＞
尿素＞ＮＨ４ＮＯ３＞（ＮＨ４）２ＳＯ４；２种菌在不同的氮源培养基上均可产孢，Ｐ１适宜以ＫＮＯ３为氮源的培养
基，而Ｐ２适宜以蛋白胨为氮源的培养基，培养７ｄ后产孢量分别为２．２５×１０５、３．９×１０７个／ｍＬ．
２．４．２．３　无机盐　Ｐ１菌丝生长适宜的无机盐是 ＭｇＳＯ４，其生长速度排序为 ＭｇＳＯ４＞Ｋ２ＨＰＯ４＞
ＮａＨ２ＰＯ４＞ＣａＣｌ２＞ＺｎＳＯ４＞ＦｅＳＯ４，而Ｐ２的是ＮａＨ２ＰＯ４，其排序为ＮａＨ２ＰＯ４＞ Ｋ２ＨＰＯ４＞ ＭｇＳＯ４
＞ＦｅＳＯ４＞ＣａＣｌ２＞ＺｎＳＯ４；２种菌在不同的无机盐培养基上均可产孢，但Ｐ１适宜在含ＮａＨ２ＰＯ４的培
养基上产孢，而Ｐ２适宜在含Ｋ２ＨＰＯ４的培养基上产孢，培养７ｄ后的产孢量分别为２．５×１０６、６．４×
１０７个／ｍＬ．
２．４．２．４　生长因子　Ｐ１菌丝生长适宜的生长因子是吲哚乙酸，其生长速度排序为吲哚乙酸＞ＶＢ１＞
ＶＢ６＞吲哚丁酸＞ＶＢ２＞萘乙酸，而Ｐ２的是吲哚丁酸，其排序为吲哚丁酸＞ＶＢ６＞ＶＢ２＞萘乙酸＞
ＶＢ１＞吲哚乙酸；２种菌在不同生长因子培养基上均可产孢，均在含生长因子ＶＢ１的培养基上适宜产
孢，培养７ｄ后产孢量分别为２×１０５、１．４９×１０７个／ｍＬ．
３　结论
从鸟巢蕨（Ｎ．ｎｉｄｕｓ）叶斑病的感病植株单斑分离出２种真菌Ｐ１和Ｐ２，形态学与分子生物学鉴定
结果表明：Ｐ１为芸苔链格孢（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、Ｐ２为交互枝顶孢（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ），２种
菌对鸟巢蕨均有致病性．但它们的生物学特性不同：两者菌丝生长及产孢的最适温度均为２５℃，Ｐ１的
致死温度为５０℃，Ｐ２的为６０℃，１０℃下培养４ｄ，Ｐ１菌落周围有菌丝长出，Ｐ２无菌丝长出；Ｐ１的最适
ｐＨ值为６，此时菌丝的生长速度和产孢量均最大，Ｐ２在ｐＨ＝５时菌丝生长速度最快，ｐＨ＝８时产孢
量最大；当湿度达到９５％时，Ｐ１和Ｐ２的菌丝生长速度最快，菌落长势最好，Ｐ１的适宜产孢湿度为
３５％，Ｐ２的适宜产孢湿度为５５％；光照有无对Ｐ１和Ｐ２菌丝生长影响不大，但全黑暗条件下更有利于
两菌产孢；Ｐ１的最适碳源、氮源、生长因子和无机盐分别为乳糖、酵母膏、吲哚乙酸、ＭｇＳＯ４，Ｐ２的分别
为蔗糖、ＫＮＯ３、吲哚丁酸、ＮａＨ２ＰＯ４．
４　讨论
本文以形态学及分子生物学法对鸟巢蕨叶斑病病原菌进行了鉴定，明确了引起鸟巢蕨叶斑病的病
原菌为芸苔链格孢（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ）和交互枝顶孢（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ）．链格孢属真菌的
寄主范围很广，相关研究报道很多，芸苔链格孢（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ）作为链格孢属的一个种，可侵染
多种植物，如十字花科花椰菜［１５］等；交互枝顶孢（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ）可以引起沉香枝顶孢茎枯
病［１６］．但国外有人将植物内生的交互枝顶孢（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ）作为生防制剂加以应用［１７］，其
降低温室番茄白粉病的作用机理是诱导抗性，即热杀死后的孢子会释放诱导寄主抗性的物质［１８］．
本研究发现，芸苔链格孢（Ｐ１）和交互枝顶孢（Ｐ２）同为鸟巢蕨叶斑病的病原菌，但两者对温度、湿
度和ｐＨ值的要求不尽相同，１０℃下培养４ｄ，Ｐ１菌落周围有菌丝长出，Ｐ２无菌丝长出；Ｐ１在ｐＨ值为
６条件下，菌丝生长最好和产孢量最大，而Ｐ２在ｐＨ＝８时产孢量最大；Ｐ１的适宜产孢湿度为３５％，而
Ｐ２的为５５％．由此可见，芸苔链格孢（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ）比交互枝顶孢（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ）
耐低温、耐干燥、适宜偏酸环境．侵染试验中发现，在相同条件下，Ｐ２的生长速度明显慢于Ｐ１，侵染后
病斑大小也明显小于Ｐ１．从单斑分离率和侵染发病率来看，Ｐ１（２９．５％和７５％）高于 Ｐ２（２５％和
第１期 姜　华等：　药用观赏植物———鸟巢蕨叶斑病病原菌鉴定初报 ９７　
６６．７％），由此说明在自然生境下，芸苔链格孢（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ）的抗逆性和致病性要强于交互枝
顶孢（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ），引起叶斑病的概率要大于交互枝顶孢（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ）．
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［１８］　ＫＡＳＳＥＬＡＫＩ　Ａ　Ｍ，ＳＨＡＷ　Ｍ　Ｗ，ＭＡＬＡＴＨＲＡＫＩＳ　Ｎ　Ｅ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｌｅｖｅｉｌｌｕｌａ　ｔａｕｒｉｃａｉｎ　ｔｏｍａｔｏ　ｂｙ　Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒ－
ｎａｔｕｍｉｓ　ｂｙ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｎｏｔ　Ｈｙｐｅｒｐａｒａｓｉｔｉｓｍ［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００６，１１５（２）：２６３－２６７．
Ｔｈｅ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｒｅｐｏｒｔ　ｏｎ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｃａｕｓｉｎｇ　ｌｅａｆ　ｓｐｏｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ
ａｎｄ　ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ　ｐｔｅｒｉｄｏｐｈｙｔｅｓ，Ｎｅｏｔｔｏｐｔｅｒｉｓ　ｎｉｄｕｓ
ＪＩＡＮＧ　Ｈｕａ１，　ＢＡＯ　Ｚｈｕ１，　ＷＡＮＧ　Ｊｉｎｇ２
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ　１１６０８１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄａｌｉａｎ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｚｏｏ，Ｄａｌｉａｎ　１１６０１３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎｅｏｔｔｏｐｔｅｒｉｓ　ｎｉｄｕｓ　ｉｓ　ａ　ｋｉｎｄ　ｏｆ　ｐｔｅｒｉｄｏｐｈｙｔｅ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｇｏｏｄ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ，ｏｒｎａ－
ｍｅｎｔａｌ　ａｎｄ　ａｉｒ　ｐｕｒｉｆｙｉｎｇ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ，ｔｗｏ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　ｆｕｎｇｉ，Ｐ１ａｎｄ　Ｐ２，ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ
ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｎ．ｎｉｄｕｓ　ｕｓｉｎｇ　ｓｉｎｇｌｅ　ｓｐｏｔ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇ－
ｉｃａｌ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　Ｐ１ｗａｓ　Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ　ａｎｄ　Ｐ２ｗａｓ　Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ．Ｂｏｔｈ　ｏｆ　ｔｈｅｍ
ｗｅｒｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｔｏ　Ｎ．ｎｉｄｕｓ．Ｂｕｔ　ｔｈｅｉｒ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ
ｇｒｏｗｔｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｓｐｏｒｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｐ１ｗｅｒｅ　２５℃，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｓｐｏｒｅ　ｐｒｏｄｕｃ－
ｔｉｏｎ　ｈｕｍｉｄｉｔｙ　ｗａｓ　３５％，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ｗａｓ　６，ａｎｄ　ｌｅｔｈａｌ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　５０℃．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉ－
ｍｕｍ　ｇｒｏｗｔｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｓｐｏｒｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｐ２ｗｅｒｅ　２５℃，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｓｐｏｒｅ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｈｕｍｉｄｉｔｙ　ｗａｓ　５５％，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ｗａｓ　５，ａｎｄ　ｌｅｔｈａｌ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　６０℃．Ｔｈｅ
ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｌｉｇｈｔ　ｏｎ　ｍｙｃｅｌｉｕｍ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｆｕｎｇｉ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｓｌｉｇｈｔ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｏｔａｌ　ｄａｒｋｎｅｓｓ　ｗａｓ
ｇｏｏｄ　ｆｏｒ　ｂｏｔｈ　ｓｐｏｒｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃａｒｂｏｎ　ｓｏｕｒｃｅ，ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｓｏｕｒｃｅ，ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ
ｉｎｏｒｇａｎｉｃ　ｓａｌｔ　ｏｆ　Ｐ１ｗｅｒｅ　ｌａｃｔｏｓｅ，ｙｅａｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔ，ｉｎｄｏｌｅ　ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ＭｇＳＯ４，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｎｄ　ｔｈａｔ
ｏｆ　Ｐ２ｗｅｒｅ　ｓｕｃｒｏｓｅ，ＫＮＯ３，ｉｎｄｏｌｅ　ｂｕｔｙｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ＮａＨ２ＰＯ４，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｎｅｏｔｔｏｐｔｅｒｉｓ　ｎｉｄｕｓ；ｌｅａｆ　ｓｏｐｔ；Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ；Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　ａｌｔｅｒｎａｔｕｍ