全 文 ：4 包装
4. 1 包装车间 设在加工厂内，环境、要求等均与
加工厂相同。包装车间应配备磅秤、木铲、筛盘、簸
箕、捆扎带、标签及捆扎夹钳等设备和工具。
4. 2 包装人员 配备的专职人员，职责及要求均
同于加工人员。
4. 3 包装物 用于出口的茯苓药材包装，根据外
商的要求定制或由外商提供的专用包装。供应大型
制药企业的茯苓药材包装，为定制、专用的麻袋或扁
长方形瓦楞纸箱。专用麻袋应符合 LS /T 3801-1987
粮食包装麻袋的规定。瓦楞纸箱应符合 GB6266-86
中药材瓦楞纸箱包装件的规定。产区用于暂存、周
转使用的包装，多为大型带盖长方形聚丙烯(或聚
乙烯)周转箱。
4. 4 包装操作技术要点 茯苓药材进入包装前必
须再次对规格、等级及安全水分等指标进行检查，合
格后，过筛清除粉尘，异物及劣质品，备用。选用完
整、无损、洁净的包装物，检查、整形并清扫后，备用。
将准确称量的茯苓药材，放入包装内。包装物为聚
丙烯(或聚乙烯)周转箱者，立即盖上箱盖;包装物
为专用麻袋，立即缝合袋口;包装物为瓦楞纸箱者，
立即在药材上放置上盖衬板，盖好纸箱上盖，并用胶
带纸将纸箱下底上盖缝隙粘合封闭，箱外用塑料捆
扎带呈井字形捆扎牢固。准确填写包装原始记录及
“药材质量检验证”，检验项目包括品名、产地、批次
号、生产日期、规格(等级)及检验员等。将填好的
“质量检验证”粘贴在包装外，再次对包装件进行全
面检查，确认无误，即可进行储存或调运销售。包装
原始记录归档，保存，备查。
参 考 文 献
［1］中国药材公司． 中国常用中药材［M］． 北京:科学出版
社，1995:1076-1085．
［2］国家药典委员会． 中华人民共和国药典［S］． 一部． 北
京:中国医药科技出版社，2010:224-225．
［3］关立忠，陈建民，张宝旭，等． WM2-2001 药用植物及制
剂进出口绿色行业标准［S］．北京:中华人民共和国对
外贸易经济合作部，2001．
［4］湖北省食品药品监督管理局． 湖北省中药饮片炮制规
范［S］．武汉:湖北科学技术出版社，2009:477-479．
·鉴别·
海南裸花紫珠高效液相色谱法指纹图谱研究
马思遥1，盛 琳2，关薇薇2，刘明生1，3*
(1. 广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006;2. 海南医学院，海南 海口 571101;3. 海南省南药黎药
研究院，海南 海口 571101)
摘要 目的:建立海南裸花紫珠 HPLC指纹图谱，为其真伪鉴别和质量控制提供依据。方法:HPLC色谱条件:
Agilent TC-C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈(A)-0. 30%冰醋酸溶液(B)为流动相，梯度洗脱，流速 1. 0
mL /min，柱温 30 ℃，检测波长 254 nm，进样量为 20 μL。结果:以 12 批裸花紫珠样品的 20 个共有峰为评价指标，建
立了海南裸花紫珠 HPLC指纹图谱测定方法，相似度均大于 0. 90，并指认了 3 个峰。结论:此方法具有良好的精密
度、重复性和稳定性，可对裸花紫珠药材中的化学成分信息进行较全面的反映，适用于该药材的真伪鉴别及质量控
制。
关键词 裸花紫珠;HPLC指纹图谱
中图分类号:Ｒ282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)03-0404-05
收稿日期:2013-09-09
基金项目:国家“十二五”科技支撑计划课题(SQ2010BAJY1411-07-05);海南省重点科技计划项目(ZDXM20100040) ;2010 年度海南省自
然科学基金(310048)
作者简介:马思遥(1987-)，女，在读硕士研究生，专业方向:热带药用植物(南药黎药)研究与开发;Tel:13427554981，E-mail:314665943@
qq. com。
* 通讯作者:刘明生，Tel:0898-66893826。
HPLC Fingerprint of Callicarpa nudiflora
MA Si-yao1，SHENG Lin2，GUAN Wei-wei2，LIU Ming-sheng1，3
(1. School of Traditional Chinese Materia Medica，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China;2. Hainan
Medical College，Haikou 571101，China;3. Instituent of South Herbs and Li Nationality Medicines of Hainan Province，Haikou 571101，
·404· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 3 期 2014 年 3 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2014.03.019
China)
Abstract Objective:To establish HPLC fingerprint method for the quality evaluation and discrimination of Callicarpa nudiflora．
Methods:The chromatographic fingerprint of the 12 samples was determined by injecting 20 μL of the sample solution each time on a re-
versed phase Agilent TC-C18 column with the gradient elution solvent system composed of 0. 30% HAc solution and acetonitrile. The
flow rate was 1. 0 mL /min，the column temperature was maintained at 30℃ and the detection wavelength was set at 254 nm. Ｒesults:
The HPLC fingerprint of Callicarpa nudiflora was set up，which included 20 common peaks，and the similarities of 12 samples were basi-
cally more than 0. 90. Also，3 components were identified. Conclusion:The method is accurate，repeatable，reliable and can fully reflect
the chemical composition information，which can be used for the discrimination and the quality control of Callicarpa nudiflora.
Key words Callicarpa nudiflora Hook. et Arn.;HPLC fingerprint
裸花紫珠来源于马鞭草科(Verbenaceae)紫珠
属植物裸花紫珠 Callicarpa nudiflora Hook. et Arn.
的干燥叶，别名贼子叶，黎药名“补阀”，为海南道地
药材，也是海南黎族医生常用药材之一〔1〕。裸花紫
珠在 2000 年版及之前的中国药典均有收载。2010
年版中国药典虽未收载，但在实际生产中，裸花紫珠
还是占据了不可取代的位置。裸花紫珠药用部位主
要为干燥的叶，化学成分主要包括黄酮类、萜类、挥
发油和酚类等，具有抗菌止血、消炎解毒、散瘀消肿、
驱风祛湿之功效〔2〕。据相关研究表明，其黄酮类化
合物木犀草素具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、免疫调节
等作用〔3，4〕。为了更好地控制裸花紫珠药材的质
量，了解海南省 5 个产地栽培裸花紫珠药材的区别，
保证其制剂质量的稳定可控，本实验采用 HPLC 法
建立裸花紫珠药材的指纹图谱。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 戴安 summit p680 高效液相色谱仪
(summit P680 A 低压四元泵、DIONEX-UVD170U 紫
外检测器、ASI-100 自动进样器、“变色龙”色谱工作
站，美国戴安公司);HH-4 电子恒温水浴锅(苏州威
尔实验用品有限公司);DTS 超声波清洗仪(宁波新
芝生物科技股份有限公司);SHB-Ⅲ 循环水式多用
真空泵(郑州长城科工贸有限公司);BS210S 型电
子天平(德国赛多利斯公司)等。
1. 2 试药 对照品:毛蕊花糖苷(批号:111530-
2010007，中国食品药品检定研究院)、木犀草素(批
号:111520-200504，中国食品药品检定研究院)、5，
4-二羟基-3，7，3-三甲氧基黄酮(沈阳药科大学提
供，质量分数 ＞ 98%)、芹菜素 (批号:MUST-
11123003，质量分数:98%HPLC，成都必须生物科技
有限公司)。HPLC 用甲醇、乙腈为色谱纯，水为超
纯水，冰醋酸、磷酸、提取用甲醇等其他试剂为分析
纯。
1. 3 试验样品 12 批裸花紫珠采自海南省儋州
市、海口市、五指山市、临高县、白沙县 5 个地区，均
由海南九芝堂药业有限公司提供，并经李伟高级工
程师鉴定为马鞭草科紫珠属植物裸花紫珠 Callicar-
pa nudiflora Hook. et Arn. 的干燥叶。见表 1。
表 1 裸花紫珠样品来源
样品编号 批号 产地 采收时间
S1 BS-100309 海南省白沙县 2010-03-09
S2 WZS-130213 海南省五指山市 2013-02-13
S3 WZS-120409 海南省五指山市 2012-04-09
S4 DZ-120419 海南省儋州市 2012-04-19
S5 BS-110412 海南省白沙县 2011-04-12
S6 BS-120410 海南省白沙县 2012-04-10
S7 BS-130116 海南省白沙县 2013-01-16
S8 LG-130118 海南省临高县 2013-01-18
S9 LG-130427 海南省临高县 2013-04-27
S10 HK-100322 海南省海口市 2010-03-22
S11 HK-110402 海南省海口市 2011-04-02
S12 HK-120427 海南省海口市 2012-04-27
2 方法
2. 1 色谱条件 Agilent TC-C18(250 mm ×4. 6 mm，
5 μm)色谱柱，以乙腈(A)-0. 30%冰醋酸溶液(B)
为流动相，梯度洗脱程序见表 2，流速:1. 0 mL /min，
检测波长:254 nm，柱温:30 ℃，进样量:20 μL。所
有组分在 105 min内检测完毕。
表 2 梯度洗脱条件
T /min A /% B /%
0 5 95
25 15 85
55 21 79
65 26 74
75 35 65
90 55 45
105 85 15
2. 2 供试品溶液的制备 精密称取裸花紫珠药材
粉末(过 60 目筛)2. 0 g 于 100 mL 具塞锥形瓶中，
加入 50 mL 50%甲醇，称重，80 ℃水浴回流提取 30
min，放至室温后，用 50%甲醇补足减失的重量，摇
匀，经 0. 45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
2. 3 对照品溶液的制备 取毛蕊花糖苷、木犀草
·504·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 3 期 2014 年 3 月
素、5，4-二羟基-3，7，3-三甲氧基黄酮、芹菜素等 4
个对照品适量，用色谱纯甲醇配制成适当浓度的溶
液，作为对照品溶液。
3 结果
3. 1 精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样 6
次，测定指纹图谱，用“中药色谱指纹图谱相似度评
价系统”(2004 A版)计算，结果相似度均大于 0. 99，
表明仪器精密度良好。
3. 2 重复性试验 取同一批裸花紫珠药材粉末 6
份，按照“2. 2”项下方法制备供试品溶液，并测定指
纹图谱，用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”
(2004 A版)计算，结果相似度均大于 0. 99，表明方
法重复性良好。
3. 3 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在 0、
3、6、9、12、24 h 测定指纹图谱，用“中药色谱指纹图
谱相似度评价系统”(2004 A版)计算，结果相似度
均大于 0. 99，表明供试品溶液在 24 h内保持稳定。
3. 4 指纹图谱共有峰的标定 根据不同产地 12
批裸花紫珠供试品 HPLC 色谱图，共确定共有峰 20
个。其中 11 号为毛蕊花糖苷(36. 17 min)，16 号为
木犀草素(64. 42 min)，18 号为 5，4-二羟基-3，7，3-
三甲氧基黄酮(92. 37 min)，HPLC指纹图谱共有峰
标定见图 1。
图 1 裸花紫珠供试品 HPLC指纹图谱(示共有峰)
3. 5 12 批裸花紫珠药材的指纹图谱相似度评价
12 批裸花紫珠药材样品按“2. 2”项下方法制备供试
品溶液，进行测定，测得指纹图谱导入“中药色谱指
纹图谱相似度评价系统”(2004 A版)，生成对照指
纹图谱。不同批次裸花紫珠药材指纹图谱相似度见
表 3，不同批次指纹图谱与对照指纹图谱的相似度
见表 4，从 12 批裸花紫珠药材的相似度结果看出各
产地裸花紫珠药材表现出较高的相似度，药材所含
的化学成分随产地变化较小。
表 3 12 批裸花紫珠药材指纹图谱的相似度
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12
S1 1． 000
S2 0. 982 1. 000
S3 0. 973 0. 988 1. 000
S4 0. 991 0. 988 0. 981 1. 000
S5 0. 967 0. 931 0. 913 0. 957 1. 000
S6 0. 991 0. 993 0. 989 0. 996 0. 942 1. 000
S7 0. 902 0. 834 0. 823 0. 892 0. 964 0. 894 1. 000
S8 0. 948 0. 893 0. 882 0. 936 0. 985 0. 917 0. 989 1. 000
S9 0. 994 0. 973 0. 964 0. 991 0. 976 0. 986 0. 926 0. 965 1. 000
S10 0. 993 0. 979 0. 975 0. 994 0. 975 0. 988 0. 918 0. 957 0. 994 1. 000
S11 0. 957 0. 902 0. 895 0. 946 0. 981 0. 928 0. 985 0. 994 0. 971 0. 965 1. 000
S12 0. 996 0. 990 0. 980 0. 994 0. 962 0. 994 0. 885 0. 934 0. 989 0. 993 0. 942 1. 000
表 4 12 批裸花紫珠药材指纹图谱与对照指纹图谱的相似度
计算方法
批次
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12
中位数 0. 997 0. 979 0. 973 0. 995 0. 974 0. 991 0. 919 0. 959 0. 997 0. 997 0. 966 0. 995
平均数 0. 996 0. 990 0. 985 0. 998 0. 964 0. 996 0. 897 0. 943 0. 994 0. 997 0. 951 0. 997
3. 6 系统聚类分析 本研究以形态学鉴定的 12
个不同批次的裸花紫珠样品为研究对象，进行指纹
图谱研究，选择 20 个共有峰。将各色谱峰相对于内
参比峰(18 号峰)的峰面积量化，得到 12 × 20 阶原
始数据矩阵，运用“IBM SPSS Statistics”软件对其进
行系统聚类分析，采用组间连接法，利用平方 Eu-
clidean距离作为度量标准。聚类分析将 12 个裸花
紫珠样品分为 2 类。聚类分析图见图 2。
3. 7 成分峰的指认 根据相关文献报道，裸花紫
珠药材中酚苷类的主要成分为毛蕊花糖苷，黄酮类
·604· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 3 期 2014 年 3 月
成分有木犀草素〔5〕、芹菜素、5，4-二羟基-3，7，3-三
甲氧基黄酮〔6〕等，因此，在本研究中采取结合文献、
保留时间、成分对应峰的纯度及紫外吸收光谱图等
资料初步确定成分峰的方法，对裸花紫珠指纹图谱
中的峰进行指认。结果初步确定 11 号峰为毛蕊花
糖苷，16 号峰为木犀草素，18 号峰为 5，4-二羟基-
3，7，3-三甲氧基黄酮(图 3)，芹菜素的出峰位置在
裸花紫珠指纹图谱中没有对应的峰，因此得出裸花
紫珠中可能并没有芹菜素的存在或含量微乎甚微的
结论。
图 2 12 批裸花紫珠样品系统聚类分析图
图 3 裸花紫珠指纹图谱色谱峰指认图
A. 毛蕊花糖苷、木犀草素、5，4-二羟基-3，7，3-三甲氧基黄
酮对照品混合溶液 B. 芹菜素对照品溶液 C. 裸花紫珠
样品 11. 毛蕊花糖苷 16. 木犀草素 18. 5，4-二羟基-3，
7，3-三甲氧基黄酮
4 讨论
本文采用 HPLC 梯度洗脱的方法对 12 批不同
批次的裸花紫珠药材进行了指纹图谱研究，建立了
裸花紫珠 HPLC指纹图谱，并确定了其中的 3 个共
有峰为毛蕊花糖苷、木犀草素和 5，4-二羟基-3，7，
3-三甲氧基黄酮。
试验中考察了 5 种流动相系统，结果发现乙腈-
0. 30%冰醋酸溶液作为流动相时，指纹图谱中峰的
分离较好。比较 3 根色谱柱，发现 Agilent TC-C18的
图谱效果最好，色谱峰峰形好，且检测时间相对较
短。对比 5 个波长的图谱发现，254 nm 的色谱峰数
多，且图谱整体效果较好。
供试品处理中，考察了提取方法、提取溶剂种
类、提取溶剂用量、提取时间。其中考察 3 个不同的
提取时间时，发现主要成分峰的峰面积呈现 30 min
＞ 45 min ＞ 60 min 的现象，猜测可能是由于提取的
时间过长，成分被破坏所致，因此，选择 30 min 水浴
回流提取时间。
虽然从相似度计算的结果看到海南省 5 个地区
12 批裸花紫珠样品的相似度都比较高，但是聚类分
析将 12 批药材分成了 2 类，S2 和 S3 都是五指山产
的裸花紫珠，这可能是五指山的气候和地理位置的
差异造成，五指山地处海南省中部，而另外的 4 个地
方都在沿海或沿湖地区。另外，在试验过程中运用
“IBM SPSS Statistics”软件进行系统聚类分析时，对
Euclidean距离、平方 Euclidean 距离、余弦、Pearson
相关性、Minkowski距离等均做了尝试，其中以平方
Euclidean 距离分类效果最佳。
在本研究中采取结合相关文献、保留时间、峰的
纯度及紫外吸收光谱图等资料初步确定成分峰的方
法，对裸花紫珠指纹图谱中的峰进行指认。由于中
药成分复杂，即使图谱中显示为单一的峰，但是其中
可能夹杂着含量较低、性质相近的杂峰，在本实验中
11 号、16 号、18 号的峰纯度都能够达到 98%以上，
而且样品指纹图谱中色谱峰的紫外吸收光谱图与对
照品的紫外吸收光谱图基本一致，所以可以初步确
定 11 号峰为毛蕊花糖苷(36. 17 min)，16 号峰为木
犀草素(64. 42 min)，18 号峰为 5，4-二羟基-3，7，3-
三甲氧基黄酮(92. 37 min)，芹菜素未检出。
指纹图谱相似度计算中，一般将所选的色谱峰
同时比较计算，反映指纹图谱的整体相似性，可对药
材产品质量做出较为全面、准确的评价〔7〕。利用
HPLC指纹图谱结合几种成分的含量测定来控制药
材的质量是切实可行的，它比单纯依靠测定药材中
某个成分的的含量更能全面客观的反映药材的内在
质量。因此，裸花紫珠指纹图谱的研究结合其中几
个主要成分的含量测定对裸花紫珠的真伪鉴别、规
范化种植及质量控制意义较大。
参 考 文 献
［1］刘明生．黎药学概论［M］．北京:人民卫生出版社，2008:
165-197．
［2］蔡金平，董琳，关薇薇，等．裸花紫珠的研究进展［J］．现
代药物与临床，2012，27(1):1-5．
［3］ Hu C，Kitts DD． Antioxidant，prooxidant and cytotoxic activ-
ities of solvent fractionated dandelion flower extracts in vitro
［J］． J Agric Food Chem，2003，52(2) :301-310．
［4］ Xagorari A，Papapetropoulos A，Mauromatis A，et al． Luteo-
·704·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 3 期 2014 年 3 月
lin inhibits an endotoxin-stimulated phosphorylation cas-
cade and proin flammatory cytokine production in macro-
phage［J］． J Pharm Exp Ther，2001，296(1):181-187．
［5］蔡金平，董琳，盛琳，等． HPLC 同时测定裸花紫珠药材
中毛蕊花糖苷和木犀草素［J］． 中国实验方剂学杂志，
2013，19(1):81-84．
［6］高飞鹏，汪豪，叶文才，等．裸花紫珠叶的化学成分［J］．
中国药科大学学报，2010，41(2):120-123．
［7］任德权．中药指纹图谱质控技术的意义与作用［J］． 中
药材，2001，24(4):235-239．
基于 ITS2 序列鉴别木槿及其混伪品基原植物
刘义梅，靳李娜，熊永兴，邬 兰，陈科力*
(教育部中药资源和中药复方重点实验室 /湖北中医药大学，湖北 武汉 430065)
摘要 目的:利用 ITS2 序列鉴别木槿及其常见混伪品基原植物。方法:提取木槿及其混伪品共 9 个样本
DNA、PCＲ扩增和测序，得到 ITS2 序列，结合 GenBank 下载的 12 条 ITS2 序列，计算种内种间 Kimura 2-parameter
(K2P)遗传距离并构建 NJ系统聚类树。结果:木槿与其混伪品之间的 K2P遗传距离为 0. 236 ～ 0. 301，远大于木槿
种内 K2P遗传距离(0. 009 ～ 0. 056);木槿种内序列变异位点为 2 ～ 9 个，远少于与混伪品的变异位点(45 ～ 52 个);
NJ系统聚类树显示木槿种内不同个体聚在一起，与其混伪品明显分开。结论:ITS2 条形码可准确鉴别木槿及其混
伪品基原植物，为木槿及其混伪品鉴定提供了分子依据。
关键词 ITS2;木槿;分子鉴定
中图分类号:Ｒ282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)03-0408-03
收稿日期:2013-09-25
基金项目:国家科技支持计划课题(2011BAI07B08)
作者简介:刘义梅(1971-)，女，博士，副教授，主要从事中药资源及其品质研究;E-mail:617656021@ qq. com。
* 通讯作者:陈科力，Tel:027-68890106，E-mail:kelichen@ 126. com。
Molecular Identification of Hibiscus syriacus and Its Adulterants Using ITS2 Barcode
LIU Yi-mei，JIN Li-na，XIONG Yong-xin，WU Lan，CHEN Ke-li
(Key Laboratory of Ministry of Education on Traditional Chinese Medicine Ｒesource and Compound Prescription ＆ Hubei University of
Chinese Medicine，Wuhan 430065，China)
Abstract Objective:To identify Hibiscus syriacus and its adulterants using DNA barcoding technique. Methods:Nine samples of
five species were PCＲ amplified and sequenced，and twelve samples were downloaded from the GenBank. The intra-specific and inter-
specific K2P distances were calculated，and neighbor-joining(NJ)tree was constructed by MEGA 5. 0. Ｒesults:The results showed the
intra-specific genetic distances of Hibiscus syriacus were ranged from 0. 009 to 0. 056，which were far lower than inter-specific genetic
distances between Hibiscus syriacus and its adulterants(0. 236 ～ 0. 301). Variable sites within Hibiscus syriacus ranged from 2 to 9 which
were far less than the adulterants(45 ～ 52);Different samples of Hibiscus syriacus were gathered together and could be distinguished
from its adulterants by NJ tree. Conclusion:ITS2 can discriminate Hibiscus syriacus from its adulterants correctly. The ITS2 region is an
efficient barcode for authentication of Hibiscus syriacus and its adulterants.
Key words ITS2;Hibiscus syriacus L.;Molecular identification
木槿 Hibiscus syriacus L. 为锦葵科木槿属落叶
灌木或小乔木，其花、叶、皮和果实均可入药，有清热
凉血、解毒消肿的功效，用于治疗痢疾、痔疮出血、白
带、疮疖痈肿、烫伤等〔1〕。中国木槿属植物约有 24
种〔2〕，其中大麻槿 Hibiscus cannabinus L. 、朱槿 Hibis-
cus rosa-sinensis L. 、玫瑰茄 Hibiscus sabdariffa L. 等
近缘植物形态特征比较相近，临床用药时容易混淆，
难以用传统的鉴定方法鉴定。DNA 条形码技术基
于物种基因型的差异，为植物分类和鉴定提供本质
依据，是传统鉴定方法的有效补充〔3〕，在中药材物
种鉴定方面具有一定的研究价值。为确保木槿叶、
花、皮等药材来源的准确性，本研究利用 ITS2 序列
对木槿及其混伪品基原植物进行鉴别，从分子生物
学的角度为木槿中药材的鉴定提供证据。
1 材料
21 个样本来自木槿属 7 个物种:木槿 Hibiscus
syriacus L. 、大麻槿 Hibiscus cannabinus L. 、红秋葵
Hibiscus coccineus(Medicus)Walt. 、朱槿 Hibiscus rosa-
·804· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 3 期 2014 年 3 月