全 文 ：［收稿日期］ 20140506(028)
［基金项目］ 吉林省高技术产业发展项目(吉发改高技［2009］633 号)
［第一作者］ 汪涵源，硕士，主管药师，从事中药学研究，Tel:13578660652，E-mail:ccucmwhy@ 163. com
［通讯作者］ * 邱智东，博士，博士生导师，教授，从事中药制剂研究，Tel:0431-86172208，E-mail:yxycczy@ 126. com
石韦总黄酮的大孔树脂纯化工艺优选
汪涵源1，2，董金香1，董雪莲1，邱智东1*
(1. 长春中医药大学，长春 130117;2. 长春市宽城区中医院，长春 130051)
［摘要］ 目的:优选石韦总黄酮的大孔树脂纯化工艺条件，为该成分的制剂开发提供参考。方法:采用紫外-可见分光光
度法测定总黄酮含量，检测波长 510 nm。以总黄酮含量为指标，通过静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号，利用单因素试验
考察上样量、径高比、洗脱剂用量等因素对石韦总黄酮大孔树脂纯化工艺的影响。结果:D101 型大孔树脂吸附-洗脱性能最
好，最佳纯化工艺条件为树脂柱径高比 1∶ 10 ～ 1∶ 8，树脂-生药(1∶ 2. 73)，上样液质量浓度 0. 5 g·mL －1，上样速度 2 BV·h －1，加
水 7 BV洗脱，加 60%乙醇 5 BV以流速 4 BV·h －1洗脱。石韦总黄酮纯度达 59. 06%。结论:D101 型大孔树脂对石韦总黄酮具
有良好的纯化效果，优选的纯化工艺合理、稳定可行。
［关键词］ 石韦;总黄酮;大孔树脂;芦丁
［中图分类号］ Ｒ283. 6;Ｒ284． 2 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)03-0027-03
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015030027
Optimization of Purification Technology for Total Flavonoids from Pyrrosiae Folium by Macroporous Ｒesin
WANG Han-yuan1，2，DONG Jin-xiang1，DONG Xue-lian1，QIU Zhi-dong1* (1. Changchun Univercity of Chinese
Medicine，Changchun 130117，China;2. Changchun City Kuancheng District Hospital of Traditional Chinese
Medicine，Changchun 130051，China)
［Abstract］ Objective:To optimize purification process of total flavonoids from Pyrrosiae Folium by
macroporous resin． Method:The content of total flavonoids was determined by UV-visible spectrophotometry，
detection wavelength was 510 nm． With the content of total flavonoids as index，types of macroporous resin were
screened by static adsorption-elution test，single factor tests were adopted to optimize purification technology with
sample volume，ratio of diameter to height，the amount of eluent and so on． Ｒesult:D101 macroporous resin
showed better adsorption-elution effect than others，optimum purification technology was as following:height-
diameter ratio of 6-10，ratio of resin to crude drug 1 ∶ 2. 73，the concentration of sample solution 0. 5 g·mL －1，
absorption velocity 2 BV·h －1，washed impurity with 8 BV of water，then eluted with 5 BV of 60% ethanol at
4 BV·h －1，collected eluent． Under these conditions，purity of total flavonoids was 59. 06% ． Conclusion:D101
macroporous resin has good purification effects on total flavonoids from Pyrrosiae Folium，this optimized purification
technology is reasonable，stable and feasible．
［Key words］ Pyrrosiae Folium;total flavonoids;macroporous resin;rutin
石韦具有利尿通淋、清肺止咳、凉血止血的功
效，临床用于治疗热淋、血淋、石淋、淋沥涩痛、崩漏
等证［1］，含有木犀草素、芒果苷、山柰酚苷、绿原酸、
咖啡酸、蔗糖、挥发油等化学成分［2-4］，市场开发前
景良好。大孔吸附树脂是近年发展迅速的分离纯化
技术，结合了吸附性和筛选性，在中药研发及生产中
应用广泛。在前期研究已优选石韦总黄酮提取工艺
的基础上，本实验选取大孔树脂对石韦总黄酮进行
纯化，通过单因素试验优化工艺条件，为石韦的基础
研究和临床应用研究提供参考。
1 材料
UV-9200 型紫外-可见分光光度计(北京瑞利分
析仪器公司)，BP211D 型电子分析天平(德国赛多
利斯公司)。石韦药材购自长春宏检药材公司，经
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 21，No． 3
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长春中医药大学邓明鲁教授鉴定为水龙骨科植物有
柄石韦 Pyrrosia petiolosa 的干燥叶;芦丁对照品(中
国食品药品检定研究院，批号 100080-200707)，
D101 型大孔吸附树脂(天津农药股份有限公司树脂
分公司)，AB-8 和 NKA 型大孔吸附树脂(南开大学
化工厂)，DM130 和 D312 型大孔吸附树脂(山东鲁
抗股份有限公司树脂分公司)，水为蒸馏水，试剂均
为国产分析纯。
2 方法与结果
2. 1 总黄酮的含量测定 精密称取于 120 ℃干燥
至恒重的芦丁对照品 10. 06 mg，置 50 mL 量瓶中，
加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得储备液。吸取该
储备液 1，2，3，4，5，6，7 mL，分别置于 25 mL 量瓶
中，加水 6 mL和 5%亚硝酸钠试液 1 mL，摇匀，放置
6 min;加入 10%硝酸铝试液 1 mL，摇匀，放置6 min;
加 4. 3%氢氧化钠试液 10 mL，加水稀释至刻度，摇
匀，放置 15 min。另取相同量甲醇，同法制备空白
液。照紫外分光光度法于 510 nm 处测定吸光度
(A)。以芦丁质量浓度(C)为横坐标，A 为纵坐标，
得回归方程 A = 13. 885C － 0. 007(r = 0. 999 9)，表
明芦丁对照品在 8. 048 ～ 56. 336 mg·L －1线性关系
良好。
2. 2 树脂预处理［5-6］ 取各型号新树脂适量，加等
量乙醇浸泡 24 h，湿法装柱，加 2 BV乙醇浸泡 4 h，
用乙醇洗至流出液加水不呈白色浑浊为止，加水洗
净乙醇。加 5%盐酸溶液 2 BV浸泡 6 h，以流速 4 ～
6 BV·h －1通过树脂柱，加水洗至中性;加 2%氢氧化
钠溶液 2 BV浸泡 6 h，以流速 4 ～ 6 BV·h －1通过树
脂柱，加水洗至中性，备用。
2. 3 石韦提取液的制备 在前期研究基础上，石韦
药材加 8 倍量 60%乙醇回流提取 3 次，每次 1 h，滤
过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至 0. 5 g·mL －1，静置
24 h，抽滤，即得。
2. 4 大孔树脂型号筛选
2. 4. 1 静态吸附试验 分别取经过预处理的
D101，AB-8，NKA，DM130，D312 型大孔树脂 10 g，取
石韦提取液 40 mL浸泡 6 h，每隔 1 h 搅拌 1 次，滤
过，按 2. 1 项下方法测定滤液中总黄酮含量，计算各
树脂的饱和吸附量分别为 203. 576，202. 955，
142. 037，210. 386，125. 649 mg·g －1，说明 D101，
AB-8，DM130 型树脂静态吸附量高于 NKA，D312 型
树脂。
2. 4. 2 动态吸附试验 分别取预处理好的 D101，
AB-8，DM130 型大孔树脂 40 g，各 2 份，湿法装柱
(径高比 1∶ 8)，取石韦提取液 100 mL分别加至树脂
柱至吸附饱和，加水和 60%乙醇各 8 BV(1 BV =
25 mL)以流速 4 BV·h －1洗脱，收集乙醇洗脱液，按
2. 1 项下方法测定石韦总黄酮含量。计算吸附量分
别为 116. 354，95. 326，132. 921 mg·g －1，洗脱率分别
为 92. 20%，89. 58%，83. 70%。综合分析，选择
D101 型大孔吸附树脂进行纯化试验。
2. 5 纯化工艺考察
2. 5. 1 树脂柱径高比 取经预处理的 D101 型大
孔树脂 3 份，每份 40 g，湿法装柱，调节径高比分别
为 1∶ 10，1 ∶ 8，1 ∶ 6，吸取石韦提取液 40 mL 以流速
2 BV·h －1上样，吸附 3 h 后加水 8 BV 洗脱，弃去洗
脱液，加 60%乙醇 8 BV以 4 BV·h －1的流速洗脱，收
集乙醇洗脱液，总黄酮收率 =(C × V)/(C1 × V1)×
100%，式中 C 和 V 分别为洗脱液中总黄酮质量浓
度和洗脱液体积，C1 和 V1 分别为吸附前溶液生药
质量浓度和体积。计算总黄酮收率分别为 3. 58%，
3. 59%，3. 46%，在树脂高径比 10 ～ 6 倍间无差异。
2. 5. 2 上样液质量浓度 取 1. 5，1. 0，0. 5 g·mL －1
的上样液 40，60，120 mL，分别以 2 BV·h －1通过预处
理好的 D101 型大孔树脂 40 g，吸附 3 h后加水 8 BV
洗脱，弃去洗脱液，加 60%乙醇 8 BV以 4 BV·h －1流
速洗脱，收集洗脱液。计算总黄酮收率分别为
3. 28%，3. 58%，3. 57%，故选择 0. 5 g·mL －1 上
样液。
2. 5. 3 洗脱剂 取0. 5 g·mL －1石韦提取液40 mL以
2 BV·h －1加至 D101 型树脂柱上，共 4 份，每份 40 g，
各加水 8 BV 洗脱，弃去洗脱液，分别加 20%，40%，
60%，80%的乙醇溶液 4 BV 以 4 BV·h －1流速洗脱，
收集乙醇洗脱液。计算总黄酮质量分别为
475. 992，614. 501，671. 121，673. 633 mg，故选择
60%乙醇为洗脱剂［7］。
2. 5. 4 洗脱流速 取 0. 5 g·mL －1石韦提取液
40 mL以 2 BV·h －1加至 D101 型树脂柱上吸附 3 h，
共 3 份，每份 40 g，各加水 8 BV 洗脱，弃去洗脱液，
加 60%乙醇 8 BV 分别以 2，4，6 BV·h －1洗脱，收集
乙醇洗脱液，计算总黄酮收率分别为 3. 42%，
3. 43%，3. 40%，故选择洗脱速度 4 BV·h －1。
2. 5. 5 水洗用量 取 0. 5 g·mL －1石韦提取液
40 mL，以 2 BV·h －1通过 D101 型树脂柱，吸附 3 h，
加水洗脱，连续收集洗脱液，每 50 mL(2 BV)为
1 份，将洗脱液浓缩并干燥至恒重，结果当收集洗脱
液至第 8 份时，洗脱液近无色，当洗至第 7 份时，干
燥物质量极少，说明已基本洗脱完全，故选择加水
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
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7 BV洗脱。
2. 5. 6 乙醇用量 取经水 7 BV 洗脱的大孔树脂
柱，用 60%乙醇以 4 BV·h －1洗脱，连续收集洗脱液，
每 50 mL为 1 份，共收集 7 份，按 2. 1 项下方法测定
每份洗脱液中总黄酮含量，结果前 5 份洗脱液中总
黄酮质量 664. 671 mg，第 6 份洗脱下来的总黄酮质
量太少，洗脱意义不大，故 60%乙醇用量选择 5 BV。
2. 5. 7 上样量 D101 型大孔树脂的最大吸附量
116. 354 mg·g －1，换算成生药量 2. 875 g，即 D101 型
大孔干树脂的最大吸附量 2. 875 g·g －1。选择最大吸
附量的 100%，95%，90%，85%(干树脂-生药分别为
1∶ 2. 88，1∶ 2. 73，1∶ 2. 59，1∶ 2. 44)生药提取物溶液上
柱。取经预处理的 D101 型大孔湿树脂40 g，共 4 份，
湿法装柱(径高比 1∶ 8)，分别吸取 0. 5 g·mL －1石韦提
取液(总黄酮 20. 234 g·L －1)50，47，44，41 mL 以
2 BV·h －1上样，吸附 3 h，加水 7 BV洗脱，加 60%乙
醇 5 BV以 4 BV·h －1洗脱，收集洗脱液，测定每份洗
脱液中总黄酮含量，结果洗脱率分别为 71. 66%，
74. 62%，74. 75%，76. 21%，说明上柱量越小，洗脱
率越高，结合生产效率考虑，选择最大吸附量的
95%药材提取物溶液上柱，即树脂-生药(1∶ 2. 73)。
2. 6 大孔树脂再生时间 取药材提取液加至处理
好的大孔树脂上，按优选的工艺条件反复应用树脂
纯化，重复 8 次，测定洗脱液中总黄酮含量。结果当
树脂使用 6 个周期后，洗脱下来的总黄酮含量下降
了 10%，且树脂颜色加深，考虑到大孔树脂的重复
利用，提示树脂使用 6 次后应对树脂进行再生处理。
2. 7 验证试验 取经预处理的 D101 型大孔树脂，
按优选的工艺条件进行纯化，收集洗脱液，回收乙
醇，减压干燥，结果石韦总黄酮质量分数分别为
60. 29%，55. 14%，61. 74%，说明该纯化工艺稳定
可行。
3 讨论
曾比较了大孔吸附树脂与聚酰胺的纯化作用，
结果大孔树脂纯化效果优于聚酰胺，故采用大孔树
脂纯化。试验使用的乙醇可回收重复使用，纯化成
本较低，对环境不会造成污染。总黄酮含量采用硝
酸铝络合法，显色试验中考察了 3 种试剂———亚硝
酸钠、硝酸铝、氢氧化钠，其中亚硝酸钠和氢氧化钠
只是提供碱性环境，而起显色作用的是铝离子，铝离
子与黄酮类化合物酚羟基反应产生络合物，经空白
试验及方法学考察，证明该方法准确合理。
研究表明石韦黄酮类化合物具有活性作
用［8-9］，但采用大孔树脂纯化石韦总黄酮的研究尚
未见报道。经本文优选的工艺处理后，石韦提取物
中总黄酮纯度 ＞ 50%，一方面可为阐明物质基础的
作用机制提供参考，为发现石韦中含有的新黄酮类
化合物化学结构及其质量控制提供数据支持;另一
方面为疗效确切的石韦复方制剂揭示组方原理、各
化学成分间的相互作用及在人体内的作用机制提供
实验依据。
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［责任编辑 刘德文］
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