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紫茎泽兰液对孔雀球虫活性的影响



全 文 :云南农业大学学报 Journal of Yunnan Agricultural University,2013,28 (6) :917 - 919 http:/ /xb. ynau. edu. cn
ISSN 1004 - 390X;CODEN YNDXAX E-mail:xb@ ynau. edu. cn
收稿日期:2012 - 02 - 25 修回日期:2012 - 03 - 21 网络出版时间:2013 - 11 - 13 04∶55
* 基金项目:家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金项目 (SKLVEB2010KFKT009) ;云南省应用基础研究面
上项目 (2010ZC242) ;云南省高端科技人才引进计划项目 (2009CI125) ;云南高校科技创新团队支持
计划资助项目 [云教科 (2011)14 号]。
作者简介:王荣琼 (1978 -) ,女,云南泸西人,副教授,主要从事动物寄生虫病学和小动物疾病学教学和临床
工作。E-mail:1425190597@ qq. com
**通信作者Corresponding author:邹丰才 (1976 -) ,四川成都人,主要从事动物寄生虫学与寄生虫病学的研究。
E-mail:zoufengcai@ ynau. edu. cn
网络出版地址:http: / /www. cnki. net /kcms /detail /53. 1044. S. 20131113. 1655. 201306. 917_025. html
DOI:10. 3969 / j. issn. 1004 - 390X (n). 2013. 06. 028
紫茎泽兰液对孔雀球虫活性的影响*
王荣琼1,袁飞洲2,吕瑞青2,杨建发2,刘永张3,段 纲2,邹丰才2**
(1. 云南农业职业技术学院,云南 昆明 650212;2. 云南农业大学 动物科学技术学院,云南 昆明 650201;
3. 云南省昆明动物园,云南 昆明 650021)
摘要:为了解紫茎泽兰液对孔雀球虫活性的影响,分别将质量分数为 0. 1%,0. 5%,1%,2. 5%,5%的紫茎
泽兰液作用于新鲜的未孢子化的孔雀球虫卵囊,计算各组的孢子化率。再用经紫茎泽兰液处理后的孢子化的
卵囊接种小鸡,通过观测小鸡存活数、克卵囊数、病变记分指标,评价经紫茎泽兰作用后的孔雀球虫卵囊的
致病性。结果表明,紫茎泽兰对孔雀球虫的活性具有抑制作用,这为球虫病的防控及球虫致弱疫苗的研究提
供了新的思路。
关键词:紫茎泽兰;孔雀球虫;抗球虫活性
中图分类号:S 852. 71 文献标志码:A 文章编号:1004 - 390X (2013)06 - 0917 - 03
Anticoccidial Activity of Eupatorium adenophorum Liquid
against Peacock Coccidian Oocysts
WANG Rongqiong1,YUAN Feizhou2,LV Ruiqing2,YANG Jianfa2,
LIU Yongzhang3,DUAN Gang2,ZOU Fengcai2
(1. Department of Animal Husbandry and Veterinary,Yunnan Agricultural Vocational Technical College,Kunming 650212,China;
2. College of Animal Science and Technology,Yunnan Agricultural University,Kunming 650201,China;
3. Kunming Zoo of Yunnan Province,Kunming 650021,China)
Abstract:The potential anticoccidial activity of Eupatorium adenophorum liquid was evaluated against
peacock coccidian oocysts,which are common parasites in peacocks of Kunming zoo. Fresh unsporu-
lated coccidian oocysts were exposed to 0. 1%,0. 5%,1%,2. 5%,5% of E. adenophorum extracts
and the sporulation rate was measured after 48 hours. Chickens were inoculated with those attenuated
oocysts by E. adenophorum liquid,and killed all chickens on the 10th day after the challenge infec-
tion,the survival rate,oocyst per gram feces (OPG)and lesion score were measured and calculated.
The results showed that the liquid of E. adenophorum were found to be significantly inhibitory action to
peacock coccidian oocyst,and the results also provides new ideas for prevention and control coccidiosis
and attenuated vaccine.
Key words:Eupatorium adenophorum;peacock coccidian;anticoccidial activity
紫茎泽兰 (Eupatorium adenophorum)是一种
有毒外来入侵杂草,其对自然生态环境影响极大,
对人和畜禽动物等具有较强的毒性作用,人接触
后,可以引起人皮肤的红肿和皮炎,家畜误食后,
能引起腹泻、气喘、鼻腔糜烂流脓等病症,因此,
紫茎泽兰又名破坏草,被称为“生物癌症”,采取
各种方法对紫茎泽兰进行防治和利用是目前研究的
重点之一[1 - 2]。据报道,紫茎泽兰提取物对螨虫、
菜青虫、蚜虫、棉铃虫等植物害虫具有较好的毒杀
作用[3 - 7]。前期研究表明,紫茎泽兰对线虫卵及幼
虫、椎实螺、钉螺等也具有抑制活性或杀灭作
用[8 - 11]。紫茎泽兰对动植物的病虫害具有毒杀作
用,那么其对孔雀球虫是否具有同样效果,需要做
进一步的验证,为此,开展本实验研究,以为球虫
病防控提供新的思路。
1 材料与方法
1. 1 材料
紫茎泽兰液:采集云南农业大学后山,清水
洗净,晾干,剪碎,置于 60℃恒温干燥,再用粉
碎机磨碎后过 40 目筛,称取 100 g 装于烧杯中,
加入 400 mL 蒸馏水,封口后,放入 60℃水浴过
夜。先用灭菌纱布过滤,滤液再通过滤菌器,滤
菌的母液于 4℃保存备用。
孔雀球虫:从昆明动物园死亡孔雀的肠道中
分离,经鉴定为球虫。取肠道粪样经反复漂浮水
洗沉淀后纯化后,用少量生理盐水暂存,镜检确
认尚未孢子化时,即用于后续试验。
试验小鸡:1 日龄小鸡 60 只,购于昆明恒港
禽苗有限公司。饲养于消毒笼中,自由饮用凉开
水,饲喂不掺任何兽药的玉米面、小米、米糠,
使用前检查其健康状况。
1. 2 方法
1. 2. 1 紫茎泽兰对孔雀球虫孢子化率的影响试验
在培养皿中均加入 2 mL 0. 5%重铬酸钾液和
10 × 103 个未孢子化的新鲜孔雀球虫卵囊,试验
组的培养皿中分别加入紫茎泽液,将其质量分数
分别调整为 0. 1%,0. 5%,1%,2. 5%,5%,
每个质量分数做 3 个平行;对照组的培养皿中不
加紫茎泽兰液,空白对照加入适量的蒸馏水,阳
性对照加入适量 3%的 NaOH。阴、阳性对照组分
别做 3 个平行。将培养皿放入 28℃温箱中孵育,
每隔 8 h 用胶头吸管吹气,48 h 后显微镜观察、
计算各培养皿中球虫卵囊的孢子化率。
1. 2. 2 紫茎泽兰处理后的卵囊对鸡的致病性试验
考虑到孔雀成本价值,选用小鸡作为试验动
物模型 (鸡对孔雀球虫同样具有易感性,另见报
道)。将上述试验中 5 个不同质量分数处理后的
试验组的卵囊分别接种 15 日龄健康的小鸡,接种
剂量为 5 000 孢子化卵囊 /只,每组接种 15 只小
鸡。空白对照接种适量消毒蒸馏水,阳性对照接
种未经紫茎泽兰处理的孢子化卵囊 5 000 个 /只。
接种后第 10 天,计算各组鸡只存活数,收集粪
样,计算每克粪样卵囊数 (OPG)[12],并全部剖
杀,观测病变记分[13]。
2 结果与分析
2. 1 紫茎泽兰对孔雀球虫孢子化率的影响
采用不同紫茎泽兰质量分数作用孔雀球虫卵
囊后,其孢子化率与对照组比,均有不同程度的
减少,见表 1。紫茎泽兰液质量分数越高,孢子
化率则越低,低质量分数组间 (0. 1% ~ 1%)、
高质量分数组间 (2. 5% ~ 5%)差异不明显;高
质量分数 (5%)、低质量分数 (0. 1%)和空白
对照组对比数据,表现出较大差异。这说明紫茎
泽兰液对卵囊孢子化起到了抑制作用。
表 1 不同质量分数紫茎泽兰对孔雀球虫的活性影响
Tab. 1 Anticoccidial activity of E. adenophorum against peacock coccidian oocysts
评价指标
indexes
紫茎泽兰各质量分数组 /%
mass fractions of E. adenophorum extract
0. 1 0. 5 1 2. 5 5
空白对照
blank control
阳性对照
positive control
孢子化率 /% sporulating rates 56 55 43 32 24 95 58
存活数 survival number 11 12 12 14 14 15 8
克卵囊数 × 200 oocyst per gram feces (OPG) 145 140 105 56 42 0 210
病变记分 (平均值)lesion mean score 4 3 3 2 2 0 5
819 云南农业大学学报 第 28 卷
2. 2 紫茎泽兰处理后的卵囊对鸡的致病性影响
孔雀球虫卵囊经不同质量分数处理后,有部
分卵囊依然能进行孢子化,这些孢子化的卵囊同
样具有一定致病性。质量分数越高的试验组,鸡
只存活数相对偏高、克卵囊数成倍减少、病变记
分也随之减弱,见表 1。和对照组比较说明,经
处理后的卵囊,其对鸡的致病力减弱、自身的繁
殖力降低,特别是高质量分数组 (2. 5% ~ 5%)
表现更为明显。
3 讨论
紫茎泽兰为恶性有毒杂草,对其进行开发利
用,可以起到“变害为宝”的作用。已证实紫茎
泽兰中含有杀虫生物活性的物质[14],且对动植物
病虫害具有毒杀或抑制活性的效果,有研究者直
接将紫茎泽兰作为药物治疗鸡球虫病,具有一定
的效果[15],但是其对鸡本身是否具有毒性,还需
进一步研究。采用化药治疗球虫病是目前最为常
见的措施,为避免因化药耐药性和药物残留导致
的食品安全等问题,从 “控制环境卫生”角度入
手防控球虫病显得更为重要,即对球虫生活史的
体外孢子化阶段进行切断或抑制其活性,将是控
制球虫病最为生态的方法之一。本试验结果表明,
紫茎泽兰液对孔雀球虫具有抑制活性作用,这为
球虫病的防控、研制致弱球虫疫苗的研究提出了
新的思路。
云南为 “孔雀之乡”,其中绿孔雀为国家一
级保护动物,昆明动物园饲养有云南所有品种的
孔雀共计 300 多只,可谓是 “孔雀王国”的缩
影,调查发现,孔雀感染球虫较为严重[16],且发
生过因球虫病导致 30 ~ 50 日龄孔雀死亡的情况,
死亡率高达 15%,笔者采用磺胺喹噁啉钠治疗
后,效果尚可,用药后近 2 个月,依然有孔雀感
染球虫的病例出现,并在孔雀散养区和舍饲区均
检测出了球虫卵囊。鉴于此,若将紫茎泽兰开发
为环境“杀虫剂”或 “抑制剂”,即可有效减少
或消灭球虫病原在环境中的数量。
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919第 6 期 王荣琼,等:紫茎泽兰液对孔雀球虫活性的影响