全 文 ：收稿日期:2013-04-17; 修订日期:2013-09-02
基金项目:教育部长江学者 －创新团队计划( No． IＲT0871) ;
北京市科技新星计划( No． 2009A72) ;
北京市自然科学基金( No． 5132013) ;
中央民族大学“985 工程”( No． 9850304)
作者简介:阿里穆斯( 1974-) ，男( 蒙古族) ，内蒙古兴安盟人，中央民族大
学中国少数民族传统医学研究院副教授，博士学位，主要从事民族医药资
源保护与利用研究工作．
* 通讯作者简介:崔 箭( 1958-) ，男( 朝鲜族) ，黑龙江哈尔浜人，中央民
族大学中国少数民族传统医学研究院教授，博士学位，主要从事民族医学
方面的研究工作．
蒙古沙冬青中白藜芦醇含量的高效液相色谱法测定
阿里穆斯1，2，庄 丽1，2，苏德毕力格3，王 勇1，2，崔 箭1，2*
(1．中央民族大学 中国少数民族传统医学国家民委 －教育部重点实验室，北京 100081;
2．中央民族大学 中国少数民族传统医学研究院，北京 100081;
3．内蒙古师范大学地理科学学院，内蒙古 呼和浩特 010020)
摘要:目的 建立蒙古沙冬青中白藜芦醇的高效液相色谱测定方法。方法 采用正交试验优化样品处理的提取条件，采用
Merk Hibar Lichrospher ＲP － 18e ( 4． 6 mm × 250 mm，5 μm ) 色谱柱，流动相 24%乙腈，流速 1． 0 ml·min －1，紫外检测波长
为 306 nm。结果 沙冬青茎中白藜芦醇在 0． 104 1 ～ 6． 082 0 μg 呈良好的线性关系 ( r = 0． 999 9 ) ，平均回收率为
100． 31%，ＲSD为 1． 36%，叶中未检出白藜芦醇。结论 该方法精密、准确、重现性好，可用于沙冬青中白藜芦醇的含量测
定。
关键词:白藜芦醇; 正交试验; 高效液相色谱法; 蒙古沙冬青
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 02． 017
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 02-0295-03
Determination of Content of Ｒesveratrol in Ammopiptanthus mongolicus by HPLC
Borjigidai Almaz1，2，ZHUANG Li1，2，Sodbilig3，WANG Yong1，2，CUI Jian1，2*
( 1． State Nationalities Affairs Commission and Department of Educational Key Lab of Minority Traditional Medi-
cine，Minzu University of China，Beijing 100081，China; 2． Institute of Chinese Minority Traditional Medicine，
Minzu University of China，Beijing 100081，China; 3． College of Geographical Science，Inner Mongolia Normal
University，Huhhot 010020，China)
Abstract: Objective To establish a HPLC method for the determination of resveratrol in Ammopiptanthus mongolicus． Method-
s After using the orthogonal test to optimize extracting conditions，resveratrol was separated on Merk Hibar Lichrospher ＲP － 18e
( 4． 6 mm × 250 mm，5μm) column and detected at 306 nm，with 24% acetonitrile as mobile phase and the flow rate was 1． 0 ml·
min －1 ． Ｒesults Ｒesveratrol was linear in the range of 0． 1041 ～ 6． 082 0 μg ( r = 0． 999 9) and the average recovery of resveratrol
was 100． 31% with ＲSD 1． 36%，but resveratrol was not found in leaves． Conclusion This method is good in terms of precision，
accuracy and repeatability ( ＲSD ＜ 1． 0% ) and can be used for the quantitative determination of resveratrol in Ammopiptanthus
mongolicus．
Key words: Ｒesveratrol; Orthogonal test; HPLC; Ammopiptanthus mongolicus
蒙古沙冬青 Ammopiptanthus Mongolicus(Maxim)Cheng f． 隶
属豆科蝶形花亚科沙冬青属，为古第三纪孑遗种、亚洲中部荒漠
特有物种和国家二级保护植物［1，2］。蒙药大师占布拉·道尔吉
的《无误蒙药鉴》中记载其枝叶入蒙药，蒙药名为孟和哈日嘎讷
(Munk － hargen)，味辛、苦，性平，具祛风除湿，舒筋散瘀之功效，
蒙古族民间常用于治疗冻伤和慢性风湿性关节痛［3］。
近年来，国内外学者对沙冬青药用化学成分及其作用机理的
研究予以重视，特别是其地上部高抗氧化活性组分中主成分白藜
芦醇的发现［4］，为进一步开发利用这一宝贵资源开拓了新的视
野［5］。但是，目前有关沙冬青中白藜芦醇含量测定的方法尚未
见报道，本实验拟采用正交试验对沙冬青中白藜芦醇的提取工艺
进行优化，建立测定沙冬青中白藜芦醇含量的高效液相色谱法，
以期为沙冬青资源的有效开发及其质量控制提供科学依据。
1 材料
1． 1 仪器 岛津 HPLC － 20A高效液相色谱仪(日本岛津公司);
XP205 精密分析天平(瑞士梅特勒 －托利多公司);NW10VF型超
纯水器(上海康雷分析仪器有限公司);KQ － 500E型超声清洗仪
(昆山市超声仪器有限公司)。
1． 2 试药 沙冬青药材于 2012 年 8 月采自内蒙古杭锦旗，经崔
箭教授鉴定为豆科植物蒙古沙冬青的地上部分，凭证标本存放于
中央民族大学中国少数民族传统医学研究院标本室;植物样品自
然阴干，将茎、叶分开粉碎成细粉，并过 80 目筛后备用;白藜芦醇
对照品 (中国药品生物制品检定所，批号:111535 － 200502);乙
腈为色谱纯(Fisher公司，美国);提取用甲醇为分析纯(北京化工
厂);水为超纯水。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱为 Merk Hibar Lichro-
spher ＲP － 18e (4． 6 mm × 250 mm，5 μm)，流动相为乙腈 －水
(24∶ 76)，流速为 1． 0 ml·min －1，柱温为 30 ℃，检测波长为 306
nm，进样量为 10 μl。在此条件下，得到的对照品及沙冬青药材
的色谱图见图 1。在沙冬青茎的色谱图中，以白藜芦醇计，理论
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 2 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 2 期
塔板数为 12 308。样品中白藜芦醇的色谱峰的保留时间约为
19． 07 min，与相邻色谱峰达到基线分离，而叶中未检出白藜芦
醇。
2． 2 对照品溶液的制备 精密称取白藜芦醇对照品 4． 05 mg，置
5 ml棕色容量瓶中，加适量甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品
溶液。
2． 3 线性关系考察 分别精密吸取白藜芦醇对照品溶液 0． 1，
0． 2，0． 4，0． 8，2，4，8μl 进样检测，以进样量 X(μg)为横坐标，峰
面积 Y为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程为 Y = 7 × 106X －
545528(r = 0． 999 9)。结果表明，白藜芦醇在 0． 1041 ～ 6． 0820
μg进样量与峰面积呈良好的线性关系。
A －对照品;B －沙冬青茎供试品;C －沙冬青叶供试品;1．白藜芦醇
图 1 对照品及药材的 HPLC图
2． 4 精密度试验 精密吸取“2． 2”项下对照品溶液 5 μl，按
“2． 1”项下色谱条件连续进样 6 次，根据对照品峰面积考察精密
度，计算 ＲSD为 0． 76%，说明仪器精密度良好，方法可行。
2． 5 正交试验设计
2． 5． 1 供试品处理的正交试验 采用正交试验 L9(3
4)进行白藜
芦醇的提取工艺研究。以白藜芦醇的含量为评价指标，选择甲醇
用量、甲醇浓度、超声时间 3 个因素，每个因素设 3 个水平。因素
水平见表 1。精密称取同一批次沙冬青茎的粉末 9 份，每份约重
0． 5 g，分别置具塞锥形瓶中，照表 2 分别精密加适量体积和浓度
的甲醇，密塞，称定质量;然后分别超声提取适当时间，放冷，用甲
醇补足减失的质量，摇匀。提取液过滤，取续滤液用 0． 45 μm 的
微孔滤膜滤过以“2． 1”项色谱条件，精密吸取各样品 10 μl 进样
分析，试验结果见表 2。将试验结果用统计软件 SPSS19． 0 进行
方差分析 /结果见表 3。
2． 5． 2 最佳提取工艺的确定 表 2 极差大小显示，各因素作用主
次为 A ＞ B ＞ C，即提取溶剂体积对提取率的影响最大，其次为提
取溶剂浓度，超生时间对提取率的影响最小，结合极差分析应选
择最佳工艺 A3B2C2。但从表 3 方差分析可知因素 B、C对结果无
显著性影响，从节约成本考虑应选择 C1，故得到最佳提取工艺
A3B2C1，即 80%甲醇 30 ml，超声提取 30 min。
表 1 试验因素与水平表
水平
A
甲醇体积 /ml
B
甲醇浓度 /%
C
超声时间 /min
1 10 60 30
2 20 80 45
3 30 100 60
表 2 正交试验表 L9(34)
No．
因素
A B C D
白藜芦醇含量 /
mg·g － 1
1 1 1 1 1 0． 370 8
2 1 2 2 2 0． 443 2
3 1 3 3 3 0． 434 1
4 2 1 2 3 0． 428 9
5 2 2 3 1 0． 570 1
6 2 3 1 2 0． 569 6
7 3 1 3 2 0． 724 2
8 3 2 1 3 0． 753 5
9 3 3 2 1 0． 678 8
K1 0． 416 0 0． 506 0 0． 564 6 0． 539 9
K2 0． 522 9 0． 588 9 0． 516 9 0． 579 0
K3 0． 718 8 0． 560 8 0． 576 1 0． 538 8
极差 Ｒ 0． 302 8 0． 082 9 0． 059 2 0． 039 1
表 3 方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F值 P值
A 0． 142 2 0． 071 45． 021 0． 022
B 0． 010 2 0． 005 3． 226 0． 237
C 0． 006 2 0． 003 1． 879 0． 347
D(误差) 0． 002 2 0． 002
2． 5． 3 验证试验 精密称取同一批次沙冬青茎的粉末 3 份，每份
约 0． 5 g，各置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 30 ml，密塞，称定质
量，超声提取 30 min，放冷，用甲醇补足减少的质量，摇匀后静置，
取上清液过 0． 45 μm的微孔滤膜，即得供试品。以“2． 1”项色谱
条件精密吸取 10 μl 进样分析。结果吉白藜芦醇含量分别为
0． 758 8，0． 760 2，0． 758 6 mg·g －1，ＲSD 为 0． 65%，表明本法的
提取效果稳定。
2． 6 稳定性试验 取同一份样品，按“2． 5． 3”项下方法制备供试
品溶液，以 2． 1 项下色谱条件分别在 0，2，4，8，12，18，24 h 进样
10 μl，根据白藜芦醇峰面积考察样品的稳定性，计算 ＲSD 为
1． 46%，说明样品在室温下稳定。
2． 7 重复性试验 同一批次沙冬青茎的粉末均匀取样 6 份，分别
按“2． 5． 3”项下方法制备供试品溶液，以“2． 1”项下色谱条件各
进样 10 μl，根据对照品的含量计算结果考察重复性，计算 ＲSD
为 1． 03%，表明本法重复性良好。
2． 8 加样回收试验 取同一产地已知含量的供试品 6 份，分别精
密加入一定量的白藜芦醇对照品，按“2． 5． 3”项下方法制备供试
品溶液，以“2． 1”项下色谱条件进样，测定白藜芦醇的含量。结
果白藜芦醇的平均回收率为 100． 31%，ＲSD为 1． 36%，表明本法
准确度较好。结果见表 4。
3 结论与讨论
本文采用正交实验法对样品的提取条件进行优化，确定了采
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 2 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 2
用 80%甲醇 30ml为提取溶液，超声提取 30min 的样品前处理方
法;在流动相的选择上参照文献［6 ～ 10］的方法，最终选取流动相乙
腈 －水(24∶ 76)等度洗脱。通过方法学考察，证明本实验建立
的 HPLC测定沙冬青中白藜芦醇含量的方法精密、准确、重复性
好，适用于蒙古沙冬青中白藜芦醇含量的测定。
表 4 样品中白藜芦醇加样回收率测定
No．
加入量
/mg
已知量
/mg
测得量
/mg
回收率
/mg
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
1 0． 378 0． 3765 0． 7598 101． 40
2 0． 378 0． 3771 0． 7653 101． 89
3 0． 378 0． 3767 0． 7623 99． 10 100． 31 1． 36
4 0． 378 0． 3770 0． 7555 100． 13
5 0． 378 0． 3786 0． 7646 98． 39
6 0． 378 0． 3775 0． 7591 100． 95
n =6
沙冬青叶中未检测到白藜芦醇的存在，说明沙冬青叶中白藜
芦醇含量极低或者不存在该物质成分，今后可通过精密更高的仪
器分析和验证这一结论。
程建蕊等［11］认为，白黎芦醇是植物体在恶劣环境下或遇到
病原侵害时，植物自身分泌的一种抗毒素。沙冬青中白藜芦醇含
量可能受到药材产地的气候和地理条件等因素影响。因此，今后
需要采集不同生境样本，进一步归类、比较，使其质量控制更具科
学性。
至今为止，仅在 12 个科 31 个属的 72 种植物中发现有白藜
芦醇的存在，且含量较低［12］。本文测定结果表明沙冬青茎中白
藜芦醇含量可高达近 0． 76 mg·g －1，仅次于虎杖中白藜芦醇含
量，可作为天然白藜芦醇的提取原料。但是，由于人类活动的干
扰和其生境的恶化，野生沙冬青群落遭到严重破坏，天然分布区
正在迅速缩小，现已被列为国家二级保护植物［2，13］。因此，开展
蒙古沙冬青的引种驯化和规范化栽培，有望解决天然沙冬青资源
的保护与可持续利用问题。
参考文献:
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社，2012:32．
收稿日期:2013-04-23; 修订日期:2013-09-16
基金项目:江西省自然科学基金( No． 20114BAB205073) ;
江西省卫生厅中医药科研项目( No． 2011A142; 2012A031)
作者简介:谢 珍( 1988-) ，女( 汉族) ，湖北十堰人，江西中医药大学硕士研究生，学士学位，主要从事内分泌代谢药理学研究工作．
* 通讯作者简介:刘 波( 1972-) ，男( 汉族) ，江西莲花人，江西中医药大学副教授，博士学位，主要从事内分泌代谢药理学研究工作．
二仙汤及其拆方
对去卵巢大鼠血常规的影响
谢 珍，刘 波* ，徐 彭，谈伟锋，周 年，曹 怡
(江西中医药大学药学院，江西 南昌 330004)
摘要:目的 探讨二仙汤及其拆方对去卵巢大鼠血常规的影响，并比较各个拆方作用的差异。方法 实验 SD大鼠分为假
手术组、模型组和二仙汤整方及其 4 个拆方组，共 7 个组，除假手术组行假手术外，其余均行手术彻底摘除卵巢，连续给药
90 d，考察血常规的变化。结果 假手术组的 HCT，HGB，ＲBC，LYMPH，PLT，WBC 与模型组相比均有差异性，C 方能明显
降低 HGB、HCT，D方可显著降低 WBC，B方和 E方可使 PLT明显升高。结论 各个拆方对去卵巢大鼠的血液成分起着不
同的调节作用，具有临床指导意义。
关键词:二仙汤及其拆方; 卵巢摘除; 血常规
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 02． 018
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 02-0297-02
Effects of Er － Xian Decoction and its separate prescriptions on routine blood tests in o-
variectomy rats
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 2 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 2 期