全 文 ：番茄内生菌 St24 的鉴定及其对灰霉病的生防作用*
王美琴1 摇 马摇 林2 摇 韩巨才1**摇 刘慧平1 摇 贺运春1
( 1山西农业大学农学院, 山西太谷 030801; 2江苏省农业科学院蔬菜研究所, 南京 210014)
摘摇 要摇 从番茄植株根茎部分离到 1 株有抑菌活性的植物内生放线菌菌株 St24,对其分类地
位以及对灰霉病菌的防治效果进行研究.结果表明: 菌株 St24 为酒红链霉菌. St24 发酵液经
石油醚萃取得到的粗提物对多种病原菌有抑制作用,其中对灰霉病菌的抑制作用最强,抑制
菌丝生长的 EC50为 11. 78 mg·L-1 .粗提物处理灰霉菌后,菌丝量减少,菌丝体皱缩、断裂、原
生质外渗,菌体细胞表面有许多瘤状畸形.处理后的灰霉病菌培养液在 260 nm处比对照多出
现一吸收峰,说明粗提物对病原菌的细胞膜透性有影响. 经盆栽试验, St24 发酵液对番茄灰
霉病有保护和治疗的作用,100 mg·L-1粗提物叶面喷雾的保护作用效果最好,24 h 后防效达
到 94. 3% ,120 h后为 85. 4% .
关键词摇 植物内生放线菌摇 鉴定摇 灰霉病摇 病害防治
文章编号摇 1001-9332(2012)09-2529-07摇 中图分类号摇 Q935摇 文献标识码摇 A
Identification of endophytic actinomycete St24 tomato plants from and its application in bio鄄
control of gray mold disease. WANG Mei鄄qin1, MA Lin2, HAN Ju鄄cai1, LIU Hui鄄ping1, HE
Yun鄄chun1 ( 1College of Agriculture, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801, Shanxi, Chi鄄
na; 2 Institute of Vegetable Crops, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, Chi鄄
na) . 鄄Chin. J. Appl. Ecol. ,2012,23(9): 2529-2535.
Abstract: An endophytic actinomycete strain St24 with acaricidal activity was isolated from the
root鄄stem junction of tomato plants, with the taxonomic position of the strain and its control effect
against gray mold disease investigated. The St24 was identified as Streptomyces vinaceus, and its
broth爷s petroleum ether extracts could inhibit a variety of pathogens. The inhibitory effect of the ex鄄
tracts on Botrytis cinerea was the strongest, with the EC50 of inhibiting B. cinerea mycelia growth be鄄
ing 11. 78 mg·L-1 . After treated with the extracts, the amount of the mycelia decreased, and the
mycelia became crenate or broken, with the protoplast extravasated and the tuberculate malformation
appeared. The B. cinerea culture treated with the extracts showed the maximum absorption at 260
nm, which was absent in the control, indicating that the St24 extracts increased the pathogens cell
membrane permeability. Pot experiment showed that the extracts could protect tomato plants against
B. cinerea. Foliar spraying the extracts at 100 mg·L-1 had the best protective effect, with the con鄄
trolling effect reached 94. 3% after 24 h and 85. 4% after 120 h.
Key words: endophytic actinomycete; identification; Botrytis cinerea; disease control.
*山西省科技攻关项目(20100311038,20110311013鄄1)和山西省留
学归国人员科研基金项目(2009043,2011鄄52)资助.
**通讯作者. E鄄mail: sxndhjc@ yahoo. com. cn
2011鄄10鄄26 收稿,2012鄄06鄄04 接受.
摇 摇 从放线菌筛选生物活性物质一直是微生物药物
研究的热点,目前约有 2 / 3 的天然抗生素来自放线
菌[[1] .应用抗生素防治作物病害已有 70 多年历史,
放线菌是产生各种生物活性刺激代谢产物最丰富的
来源[2],不仅在医学上被大量使用,如链霉素、土霉
素、四环素等,而且在农业上也广泛应用,有很多抗
生素在防治病虫害中起着重要作用[3-4] . 由于其具
有无污染、不易使有害生物产生抗药性等特点,已成
为无公害农药的主体和未来农药的发展方向. 而植
物内生放线菌因其独特的生存方式,不受外界环境
影响等特点,近年来受到越来越多的关注. Castillo
等[5]和 Ezra等[6]分别从药用植物蛇藤(Kennedia ni鄄
griscans)和 Monstera sp. 的茎中分离到能够产生多
肽类新抗生素的链霉菌;梁亚萍等[7]和田新莉等[8]
从水稻中分离到对病原真菌有抑制作用的内生放线
应 用 生 态 学 报摇 2012 年 9 月摇 第 23 卷摇 第 9 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
Chinese Journal of Applied Ecology, Sep. 2012,23(9): 2529-2635
菌;王美英等[9]、涂璇等[10]和邱志琦等[11]从蔬菜中
分离的内生放线菌在田间试验中证实分别具有防病
和除草作用. 安登第等[12]从濒危植物银沙槐(Am鄄
modendron bifolium)根部分离到 3 株内生放线菌,对
大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staph鄄
ylococcus aureus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
均有抑制作用.
蔬菜灰霉病是保护地蔬菜最重要的病害之一,
给生产带来了巨大损失. 目前对灰霉病的生防菌株
主要从土壤中分离获得,易受外界条件的影响,并难
于在与土壤、植物根际或叶围习居微生物的竞争中
长期占优势,因而极大地影响了其实用价值[13] . 室
内测定拮抗作用强的菌株,在田间防治效果大多不
明显,如赵蕾等[14]分离出的枯草芽孢杆菌菌株防治
效果仅为 68. 6% .本实验室从番茄植株根茎接合部
分离得到植物内生放线菌 St24(Fq24),马林等[15]
和陈红兵等[16]证实了其对病原菌的抑制作用及杀
螨活性.本文通过对该菌株的形态特征、培养性状、
生理生化性状、细胞壁组分及 16S rDNA 序列分析
进行了分类鉴定,并研究了其对目前番茄生产上的
重要病害灰霉病的生防作用,为进一步开发应用该
菌株奠定了理论基础.
1摇 材料与方法
1郾 1摇 供试材料
供试内生放线菌 St24 从山西省运城地区番茄
植株根茎接合部分离并纯化所得;灰霉病菌(Botry鄄
tis cinerea)由山西农业大学植物病理实验室提供.
供试培养基为高氏合成 1 号琼脂、燕麦培养基、
GYM、Bennett琼脂和酵母淀粉琼脂.
供试化学试剂包括三氯甲烷(天津市化学试剂
三厂)、乙酸乙酯(天津市科密欧化学试剂有限公
司)、苯 (北京化工厂)、石油醚 (天津市科密欧化学
试剂有限公司)和乙醚(天津市大茂化学试剂厂).
1郾 2摇 菌株 St24 的鉴定
1郾 2郾 1 形态特征及培养性状摇 将 St24 在上述 5 种培
养基上插片,置于 28 益下培养 7 ~ 10 d 后取片,在
显微镜下观察菌体的形态特征及培养性状(包括菌
丝的色泽、质地以及有无色素等) [17] .
1郾 2郾 2 细胞壁化学组分分析 摇 采用 Hasegawa 等[18]
的薄板层析法对菌株 St24 进行全细胞水解液的氨
基酸和糖型分析.
1郾 2郾 3 生理生化性状 摇 参照《放线菌的分类和鉴
定》 [19]和《伯杰细菌鉴定手册(第八版)》 [20]对菌株
St24 进行生理生化性状测定.
1郾 2郾 4 16S rDNA 序列分析 摇 用溶菌酶法从新鲜菌
体提取基因组 DNA, 采用通用引物[21]进行 16S rD鄄
NA 扩增, PCR 产物经检测、纯化后直接用 Taq
DyeDeoxy Terminator Cycle Sequencing Kit测序,电泳
及数据收集用 Applied Biosystems DNA Sequencer
(model 3730)自动进行.所测的 16S rDNA序列经比
对、拼接后与 GenBank数据库中相关种属的序列进
行 BLAST比较,以确定该菌株分类地位.
1郾 3摇 St24 发酵液粗提物对病原菌的作用试验
1郾 3郾 1 St24 发酵液粗提物最佳萃取剂的选择摇 St24
发酵液经定性滤纸过滤后,取上清液 100 mL于分液
漏斗中,分别用等体积的三氯甲烷、乙酸乙酯、苯、石
油醚和乙醚对发酵液多次萃取. 分层后的有机相和
水相都经过真空减压浓缩至干,有机相用少量甲醇
溶解,水相用无菌水溶解后均稀释成相同浓度,与
PDA培养基按 1 颐 9 体积比混匀,接种番茄灰霉病
菌块,有机相的对照 PDA培养基中加入等体积含少
量甲醇的无菌水,水相的对照 PDA培养基中加等体
积无菌水,在 25 益条件下培养 5 d,计算抑制率.抑
制率最高的即为最佳萃取溶剂.
1郾 3郾 2 粗提物的抗菌谱测定 摇 将粗提物与百菌清、
腐霉利以 1. 3. 1 所述方法稀释为 6 个等比浓度,将
稀释液与 PDA培养基按 1 颐 9 的比例混合后,分别
接入不同的病原菌.在 25 益条件下恒温培养,当对
照快要长满全皿时,测量菌落直径,3 次重复,计算
出毒力回归方程、EC50值和 95%置信限.
1郾 3郾 3 粗提物对灰霉病菌菌丝形态的影响试验摇 将
灰霉病菌的孢子接种于理查培养液中,待长出均匀
的菌丝悬浮液,分别加入 100 mg·L-1的 St24 粗提
物稀释液,对照加入等量的无菌水,培养 48 h 后取
样,在光学显微镜下观察菌丝形态的变化.
1郾 3郾 4 粗提物对灰霉病菌菌丝细胞膜的影响试验摇
将灰霉病菌在理查培养液中悬浮培养,待菌丝生长
到对数生长期时,离心收集菌体,用 1% NaCl 洗涤,
离心,重复 3 次.再将菌体悬浮于 1% NaCl 溶液中,
处理加入 St24 粗提物,使最终浓度为 200 mg·L-1 .
以加 1%NaCl溶液的培养基为对照,置于 28 益静止
培养,分别于 12、24 h 后取样,离心,收集上清液.用
紫外分光光度计测 200 ~ 600 nm 间的吸收峰型及
260 nm处吸收值的变化.
1郾 4摇 盆栽试验
刮取 PDA平板上的灰霉病菌孢子和菌丝,匀浆
后稀释成 10伊10 倍镜下每视野 20 ~ 40 个孢子和菌
0352 应摇 用摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 23 卷
丝段的菌悬液;将 St24 发酵液粗提物稀释成 100、
50、25 mg·L-1的水溶液,备用.
1郾 4郾 1 拌土保护作用的测定 摇 用上述 3 个浓度的
St24 发酵液粗提液分别拌土后种入番茄种子,待幼
苗生长到 4 ~ 6 叶时接种灰霉病菌,5 d 后调查病叶
率、病情指数和防治效果,以等量蒸馏水拌土为对照
(CK).每处理 5 盆,每盆 5 株.
1郾 4郾 2 叶面喷施保护作用的测定 摇 番茄苗生长到
4 ~ 6叶期,在叶面上分别喷洒上述 3 个浓度的 St24
发酵液粗提液. 喷施 24、48 和 120 h 后分别接种灰
霉病菌.以叶面喷施清水为对照.接种灰霉病菌 5 d
后调查防效.每处理 5 盆,每盆 5 株.
1郾 4郾 3 叶面喷施治疗作用的测定 摇 番茄苗生长至
4 ~ 6叶时,接种灰霉病菌 24、48 和 120 h 后,分别叶
面喷施相应的上述 3 个浓度的 St24 发酵液粗提液.
以叶面喷施清水为对照. 接种灰霉病菌 5 d 后调查
防效.每处理 5 盆,每盆 5 株.
1郾 4郾 4 防效调查摇 番茄灰霉病的分级标准(以叶片
为单位) [22]:0 级:无病斑,叶片绿色;1 级:病斑面积
占叶片面积的 5%以下或叶片微黄;2 级:病斑面积
占叶片面积的 6% ~ 15%或叶片稍黄;3 级:病斑面
积占叶片面积的 16% ~30%或叶片黄色;4 级:病斑
面积占叶片面积的 31% ~50%或叶片褐色;5 级:病
斑面积占叶片面积的 50%以上或叶片黑褐色.根据
番茄灰霉病的分级标准分别记录植株病级,计算病
情指数和防治效果.
病情指数=移(各级病叶伊相对级数值) / (调查
总叶伊最高级数值)伊100%
防病效果= (对照区病情指数-处理区病情指
数) /对照区病情指数伊100%
1郾 5摇 数据处理
采用 Microsoft Excel软件对数据进行处理和绘
图,采用 SAS统计分析软件对数据进行差异显著性
检验(LSD法).
2摇 结果与分析
2郾 1摇 St24 菌株的分类鉴定
2郾 1郾 1 形态特征及培养性状摇 菌株 St24 革兰氏染色
阳性;在高氏合成 1 号和燕麦等培养基上生长 7 d
后,基内菌丝发育良好,无横隔,不断裂;气生菌丝生
长良好,多分枝;孢子丝长,直或柔曲;孢子卵圆形至
椭圆形,表面光滑(图 1).菌株 St24 在 5 种鉴定培养
基上都不产生可溶性色素.其中,在燕麦培养基上气
生菌丝生长丰茂,呈灰粉色,基内菌丝呈米色(表 1).
图 1摇 菌株 St24 的孢子丝特征 (8000伊)
Fig. 1 摇 Scan electron micrograph of St24 showing the spore
chains (8000伊).
表 1摇 菌株 St24 的培养特征
Table 1摇 Culture characteristics of St24
培养基
Medium
气生菌丝
Aerial hyphae
基内菌丝
Substrate
mycelium
可溶色素
Soluble
pigment
高氏合成 1 号琼脂
Gause爷s No. 1 agar
鲑色
Salmon
米色
Offwhite
无
None
燕麦培养基
Oat power agar
灰粉色,丰茂
Ash pink, abundant
米色
Offwhite
无
None
GYM琼脂
GYM agar
白至灰白色,较稀薄
White to ash white, thin
黄粉色
Yellow pink
无
None
Bennett琼脂
Bennett爷s agar
微白色,稀少
Light white, Scarce
微粉色
Light pink
无
None
酵母淀粉培养基
Yeast starch agar
鲑粉色
Salmon pink
淡黄色
Yellowish
无
None
2郾 1郾 2 生理生化性状摇 菌株 St24 能利用葡萄糖、阿
拉伯糖、木糖、果糖、甘露醇和甘油等,但不能在鼠李
糖、肌醇、蔗糖和棉子糖等上生长;对明胶液化、牛奶
胨化、淀粉酶和硝酸盐还原等反应呈阳性;不产生类
黑色素和 H2S等(表 2).
2郾 1郾 3 细胞壁类型分析摇 菌株 St24 的全细胞水解液
含有 L,L鄄二氨基庚二酸(diaminopimelic acid,L,L鄄
DAP),且含有甘氨酸. 无特征性糖;细胞壁属于 I
型,糖型 C.
2郾 1郾 4 16S rDNA 序列测定和系统发育分析 摇 菌株
St24 的 16S rDNA序列与 GenBank中相关序列 Blast
比对结果表明,该菌株属于链霉菌属;菌株 St24 的
16S rDNA序列长度为 1389 bp,将其与目前发表的
相关菌株相比,菌株 St24 与酒红链霉菌(Streptomy鄄
ces vinaceus)的序列相似性最高,为 99. 3% .
2郾 2摇 St24 发酵液粗提物对病原菌的作用
2郾 2郾 1 最佳有机溶剂的选择摇 从图 2 可以看出,5 种
萃取溶剂的有机相和水相对番茄灰霉病菌都有一定
的抑制作用,但是水相浓缩液的抑制率明显低于有
机相浓缩液,最大的三氯甲烷水相浓缩液抑制率为
4 0郾 0% .而有机相浓缩液除苯外,其他抑制率都在
13529 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 王美琴等: 番茄内生菌 St24 的鉴定及其对灰霉病的生防作用摇 摇 摇 摇 摇 摇
表 2摇 菌株 St24 的生理生化特征
Table 2摇 Physiological characteristics of St24
特征
Characteristics
结果
Result
碳源利用 Sugar utilization
葡萄糖 Glucose +
阿拉伯糖 Arabinose +
木糖 Xylose +
果糖 Fructose +
鼠李糖 Rhamnose -
肌醇 Inositol -
甘露糖 Mannitose +
甘油 Glycerine +
蔗糖 Sucrose -
棉子糖 Raffinose -
明胶液化 Gelatin liquefaction +
牛奶凝固 Milk solidification -
牛奶胨化 Milk peptonization +
淀粉酶 Starch hydrolysis +
类黑色素产生 Melanin鄄like substance production -
酪氨酸酶 Tyrosinase -
产 H2S H2S production -
硝酸盐还原 Nitrate reduction +
图 2摇 不同萃取溶剂有机相和水相抗菌活性的比较
Fig. 2 摇 Comparison of antagonistic ability of extracts in water
and organic phases.
A:乙醚 Ether; B:三氯甲烷 Chloroform; C:乙酸乙酯 Ethylacetate; D:
石油醚 Petroleum ether; E:苯 Benzene. 玉:水相 Water; 域:有机相
Organic.
50%以上,石油醚的抑制率高达 95. 7% ,其次为乙
醚.所以石油醚为最佳萃取溶剂.
2郾 2郾 2 粗提物的抑菌效果摇 以 9 种病原菌为指示菌
进行平板抑菌测定.结果表明,植物内生放线菌 St24
粗提物对 9 种病原菌均有不同程度的抑制作用. 其
中对番茄灰霉病菌的抑制作用最强,EC50为 11. 78
mg· L-1;其次是番茄早疫病菌, EC50 为 14. 33
mg·L-1;对其他 7 种病原菌也有不同程度的抑制作
用.由表 3 和表 4 可知,St24 菌株粗提物对番茄灰霉
病菌的EC50明显小于腐霉利和百菌清的EC50 ,且
表 3摇 St24 粗提物对病原真菌菌丝生长的抑制作用
Table 3 摇 Inhibition effects of St24 extract against mycelia
growth
病原菌
Pathogen
回归方程
Regression
equation
抑制中浓度
EC50
(mg·L-1)
95%置信限
95%FL
(mg·L-1)
弯孢霉
Curvularia lunata
y=3. 7501+0. 3786x 18. 27f 4. 59 ~ 60. 57
核盘菌
Sclerotinia sclerotiorum
y=3. 7445+0. 6431x 89. 54b 24. 46 ~ 158. 95
水稻稻瘟病菌
Pyricularia oryzae
y=4. 3174+0. 4234x 40. 95d 12. 12 ~ 89. 32
辣椒疫病菌
Phytophthora capsici
y=4. 2756+0. 5073x 126. 78a 74. 58 ~ 142. 46
番茄灰霉病菌
Botrytis cinerea
y=3. 7548+1. 1626x 11. 78h 6. 31 ~ 33. 19
棉花炭疽病菌
Colletotrichum gossypii
y=3. 4988+0. 9399x 39. 56d 16. 89 ~ 103. 70
小麦赤霉病菌
Fusarium graminearum
y=3. 8416+0. 6151x 76. 43c 32. 65 ~ 152. 52
番茄早疫病菌
Alternaria solani
y=3. 3410+1. 4348x 14. 33g 10. 98 ~ 18. 70
辣椒枯萎病菌
Fusarium oxysporium
y=2. 7622+1. 6227x 23. 94e 12. 37 ~ 49. 85
同列不同小写字母表示处理间差异显著(P<0. 05) Different small letters in the
same column meant significant difference at 0. 05 level among treatments.下同 The
same below.
表 4摇 St24 菌株粗提物与杀菌剂对番茄灰霉病菌的抑制作
用
Table 4 摇 Inhibition effects of St24 extracts and fungicides
against mycelia growth of Botrytis cinerea
供试药剂
Fungicide
回归方程
Regression equation
抑制中浓度
EC50
(mg·L-1)
95%置信限
95%FL
(mg·L-1)
St24 发酵液粗提物
Extraction from St24
y=3. 7548+1. 1626x 11. 78c 6. 31 ~ 33. 19
腐霉利 Procymidone y=3. 5017+0. 7142x 125. 31a 82. 87 ~ 169. 93
百菌清 Chlorothalonil y=3. 7641+0. 6870x 62. 95b 45. 84 ~ 91. 08
St24 菌株粗提物与两种农药之间有显著性差异,说
明 St24 菌株粗提物的抗菌效果明显.
2郾 2郾 3 粗提物对病菌菌丝形态的影响摇 由图 3 可以
看出,在理查液体培养基中加入 100 mg·L-1的 St24
萃取物 48 h后,番茄灰霉病菌菌丝量减少,菌丝体
皱缩,呈块状,而对照菌丝体则生长旺盛,菌丝均匀
分布.将上述处理和对照组菌丝捞出,用蒸馏水冲
洗,在显微镜下观察表明,经 St24 萃取物处理的病
菌菌丝体断裂,原生质外流,菌体细胞表面有许多瘤
状畸形;而对照菌丝体粗细均匀且表面光滑,原生质
正常.
2郾 2郾 4 粗提物对病原菌菌丝细胞膜的影响摇 用紫外
分光光度计(200 ~ 500 nm)测定 200 mg·L-1 St24
粗提物处理的番茄灰霉病菌,在 12 和 24 h 内,培养
液在 260 nm 处出现一个吸收峰. 而对照在 260 nm
处则无吸收峰.说明经St24粗提物处理番茄灰霉病
2352 应摇 用摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 23 卷
图 3摇 St24 萃取物对番茄灰霉病菌菌丝生长的影响(40伊16)
Fig. 3摇 Effect of St24 extracts on mycelial growth of Botrytis ci鄄
nerea (40伊16).
菌后引起病菌细胞膜透性增加,一些核酸大分子物
质外渗,导致 260 nm处出现峰值(图 4).可见,St24
粗提物对番茄灰霉病菌的细胞膜透性有影响.
2郾 3摇 St24 发酵液粗提物对盆栽植株的防治效果
从表 5 可以看出,不同处理 St24 发酵液粗提物
对番茄灰霉病都具有一定的保护作用,但防治效果
并不明显,当浓度为 100 mg· L-1 时,防效仅为
50郾 4% .由表 6 可知,叶面喷施不同浓度 St24 粗提
液在不同处理时间下都有保护和治疗作用,且持效
期在 120 h 以上,但保护防治明显优于治疗防效.在
保护作用试验中,叶面喷施 100 mg·L-1的 St24 粗
提液后 24 h接种番茄灰霉病,防效达到 94. 3% ,在
120 h后也达到85. 4% ;25 mg·L-1组在24、120 h
图 4摇 St24粗提物对番茄灰霉病菌菌丝细胞膜渗透性的影响
Fig. 4摇 Influence of St24 extracts on cell membrance of Botrytis
cinerea.
CK:对照 Control; T:处理 Treatment.
表 5摇 St24 粗提液拌土对植株对抗番茄灰霉病的保护作用
Table 5 摇 Protective effect of soil mixing St24 extracts on
plants against Botrytis cinerea
处理浓度
Treatment concen鄄
tration
(mg·L-1)
病叶率
Rate of
disease leaf
(% )
病情指数
Disease
index
防治效果
Control effect
(% )
100 100 62. 05 50. 4a
50 100 68. 68 35. 9b
25 100 77. 19 20. 9c
对照 CK 100 93. 33 -
表 6摇 St24 粗提液叶面喷施对植株对抗番茄灰霉病的保护
和治疗作用
Table 6摇 Protective and therapeutic effects of leaf spraying
St24 extracts on plants against Botrytis cinerea
处理浓度
Treatment
concentration
(mg·L-1)
保护防效
Protective effect (% )
24 h 48 h 120 h
治疗防效
Therapeutic effect (% )
24 h 48 h 120 h
100 94. 3a 92. 6a 85. 4a 80. 0a 78. 3a 75. 4a
50 92. 8a 89. 8a 78. 4b 74. 7a 70. 1b 61. 8b
25 85. 3b 73. 87b 54. 1c 50. 4b 43. 6c 35. 1c
后分别达到 85. 3%和 54. 1% . 在治疗作用试验中,
100 mg·L-1发酵液在接种番茄灰霉菌 24 h 后喷施
治疗作用达 80. 0% ;25 mg·L-1发酵液在接种灰霉
菌 24 h 后喷施治疗效果为 50. 4% . 在 24 h 时,100
和 50 mg·L-1的保护防效和治疗防效差异不明显,
而到了 120 h后差异明显.
3摇 讨摇 摇 论
通过菌种鉴定及研究其产生的次生代谢产物是
农用抗生素开发的途径之一[23] . 根据形态特征、培
养性状、生理生化性状、细胞壁组分和 16S rDNA 序
列分析,菌株 St24 为链霉菌属酒红链霉菌. 酒红链
霉菌在医药[24]、微生物絮凝剂[25]等方面的应用有
所报道,但是在农用杀菌活性方面的还未见报道.通
过试验本文筛选出石油醚为提取 St24 次级代谢产
物中抑菌物质的最佳萃取溶剂,其粗提物对多种病
原菌丝生长有一定的抑制作用,抗菌谱广,尤其是对
灰霉病菌的抑菌作用显著,盆栽试验也证实了 St24
粗提物对该病具有较好的保护和治疗作用,而灰霉
病是多种花卉、蔬菜及水果类一种危害极大的病害.
有关生防放线菌代谢产物中活性物质的主要成分,
高小宁等[26-27]研究了黄色长孢链霉菌(Streptomyces
longisporoflavus) GKSHJA 产生的几丁质酶与 茁鄄1,3
葡聚糖酶,对油菜菌核病菌的抑制作用明显;马林
等[28]和陈红兵等[29]发现,娄彻氏链霉菌(Streptomy鄄
ces rochei)Lj20 的代谢产物中含有 2,6鄄二叔丁基对
33529 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 王美琴等: 番茄内生菌 St24 的鉴定及其对灰霉病的生防作用摇 摇 摇 摇 摇 摇
甲酚和 3,5鄄二叔丁基鄄4鄄羟基鄄苯甲醚,这两种化合物
对灰霉病菌的抑制作用明显. 陈红兵等[16]报道了
St24(Fq24)菌株代谢产物中具有杀螨活性的主要化
学成分为棕榈酸甲酯,该活性物质对病原菌的抑制
作用将进一步研究.对于生防放线菌的其他方面,胡
江春等[30]报道了海洋放线菌 MB鄄97 能在重茬大豆
根际成功定殖,并能促进连作大豆增产. 刘晓光
等[31]综述了生防菌诱导植物抗性方面的寄主防御
反应的生化和细胞学机制.有关菌株 St24 在防病的
生化和细胞学机制以及在田间的防病效果方面有待
于进一步研究.
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作者简介摇 王美琴,女,1973 年生,副教授,博士. 主要从事
植物病害生物防治研究. E鄄mail: sxndwmq1973@ 163. com
责任编辑摇 肖摇 红
53529 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 王美琴等: 番茄内生菌 St24 的鉴定及其对灰霉病的生防作用摇 摇 摇 摇 摇 摇