全 文 ：第 29卷 ,第 3期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 9 , No . 3
2 0 1 2年 5月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory May , 2 0 1 2
RP-HPLC测定有边瓦韦中的蜕皮甾酮①
① 国家“十一五”科技支撑计划 ( 2006BAI06A12-04)
② 联系人 ,手机: ( 0) 18702920570; E-mail: zhangxiaojing311@ 163. com
作者简介:张晓静 ( 1987— ) ,女 ,西安市人 ,在读硕士 ,主要从事秦岭药用蕨类植物资源研究工作。
收稿日期: 2011-07-15;接受日期: 2011-08-17
张晓静②　马 骥　朱贞贞　张 昊
(陕西师范大学生命科学学院西北濒危药材资源开发国家工程实验室　西安市长安南路 199号　 710062)
摘　要　采用色谱柱 Shimadzu C18 ( 250mm× 4. 6mm, 5μm) ,流动相为甲醇 -水 ( 49∶ 51, V /V ) ,流速为
0. 8m L /min,检测波长为 324nm,柱温为 30℃ ,建立测定有边瓦韦中蜕皮甾酮含量的反相高效液相色谱法。
结果为蜕皮甾酮在 0. 11— 1. 65μg范围内线性关系良好 (R2= 0. 9991) ,平均回收率为 103. 4% , RSD为
1. 53%。 本方法简便准确、灵敏度高、重复性好 ,可用于有边瓦韦中蜕皮甾酮的含量测定。
关键词　有边瓦韦 ;蜕皮甾酮 ;反相高效液相色谱法
中图分类号: O657. 7+ 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1004-8138( 2012) 03-1834-04
1　引言
有边瓦韦为蕨类植物水龙骨科瓦韦属有边瓦韦的全草 ,具有清热解毒 ,利尿消肿 ,止血 ,止咳等
功效 [1 ]。含黄酮类 ,蜕皮甾酮等多种化学成分 [ 2]。蜕皮甾酮具有较强的生物活性 ,如有文献报道蜕皮
甾酮具有调节糖、脂类成分代谢 ,促进蛋白质、核酸等物质合成 ,免疫调节等作用 [3 ]。 瓦韦属植物在
我国分布较广 ,但国内外学者主要对瓦韦属植物的形态学和分类学方面进行了研究 [4, 5 ] ,对瓦韦属
植物的化学成分研究报道较少 ,对于有边瓦韦中蜕皮甾酮含量色谱测定的方法研究也未见报道。为
更好的利用这一丰富的植物资源 ,本文研究了用反相高效液相色谱法测定有边瓦韦中蜕皮甾酮含
量 ,对有边瓦韦进一步的开发和利用具有科学的指导意义。
2　实验部分
2. 1　仪器与试剂
Shimadzu LC-2010型高效液相色谱仪 (日本岛津公司 ) ; KQ-300DE型超声波清洗器 (昆山超
声仪器有限公司 ) ; SL 202N型药物电子天平 (上海明桥精密科学仪器有限公司 ) ; S HB-Ⅲ循环水式
多用真空泵 (郑州南北仪器设备有限公司 ) ; RE-52AA型旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂 )。
蜕皮甾酮对照品 (美国 Sigma公司 ,批号 5289-74-7) ;流动相所用甲醇 (色谱纯 ,美国 Fisher公
司 ) ;其他试剂均为分析纯。 实验用水为超纯水。
样品于 2010年 8月采收于陕西安康市旬阳坝地区 ,经陕西师范大学生命科学学院肖娅萍教授
鉴定。
2. 2　色谱条件
色谱柱: Shimadzu C1 8 ( 250mm× 4. 6mm, 5μm);流动相为 V (甲醇 )∶ V (水 )= 49∶ 51;流速:
0. 8mL /min;检测波长: 324nm;进样量: 10μL;柱温: 30℃。
2. 3　对照品溶液的制备
准确称取 1. 1mg蜕皮甾酮对照品 ,用色谱甲醇溶解并定容至 10mL容量瓶中作为对照品储备
液 ( 0. 11mg /mL) ,过 0. 22μm滤膜后置于 4℃冰箱中避光保存。
2. 4　供试品溶液的制备
将实验材料清洗干净 ,晾干 ,分为根状茎部分和营养叶部分打磨成粉 (过 65目筛 )。 准确称取
0. 5g干粉 ,置于 100mL具塞锥形瓶中 ,加入 60%乙醇 15mL,于 270W功率下超声提取 40min,抽
滤。 滤液于 60℃旋转蒸发器中减压蒸干 ,用色谱甲醇复溶并定容至 10mL容量瓶中 ,摇匀 ,过
0. 22μm微孔滤膜后置于 4℃冰箱中保存 ,待测。
3　结果与讨论
3. 1　样品提取方法的选择
目前有边瓦韦中蜕皮甾酮的提取研究未见报道 ,在文献 [6, 7 ]基础上 ,对有边瓦韦中蜕皮甾酮
的提取工艺进行了探讨。考察了乙醇浓度、料液比、提取时间及提取功率等因素对提取率的影响 ,在
单因素试验的基础上进行正交试验得出最优提取条件:提取溶剂 60%乙醇、料液比 1∶ 30(g /mL)、
提取功率 270W、提取时间 40min。
3. 2　流动相的选择
参考文献 [8]的洗脱条件 ,考察了不同比例的甲醇 -水系统。结果发现用 V (甲醇 )∶V (水 )=
49∶ 51时 ,柱效最高 ,蜕皮甾酮与其他组分达到基线分离 ,峰形良好 ,色谱图见图 1。 蜕皮甾酮的保
留时间约为 9. 1min。
图 1　蜕皮甾酮对照品 (a )和有边瓦韦样品 (b )的色谱图
1——蜕皮甾酮 ,保留时间为 9. 1min。
3. 3　线性关系的考察
取对照品溶液 ( 0. 11mg /mL) ,分别进样 1、 2、 4、 6、 8、 10、 15μL,记录峰面积 ,以峰面积 y为纵坐
标 ,蜕皮甾酮进样量 x (μg )为横坐标 ,进行线性回归 ,回归方程为 y = 2× 106x + 18891
(R
2= 0. 9991) ,结果表明蜕皮甾酮在 0. 11— 1. 65μg范围内呈良好的线性关系。
1835第 3期 张晓静等: RP-HPLC测定有边瓦韦中的蜕皮甾酮
3. 4　精密度实验
取蜕皮甾酮对照品溶液 ,连续进样 6次 ,记录蜕皮甾酮的峰面积 ,计算峰面积的 RSD为
1. 73% ,表明仪器的精密度良好。
3. 5　重现性实验
准确称取同一批样品 0. 5g ,按“ 2. 4”项平行制备 6份 ,按照“ 2. 2”项下色谱条件 ,分别测定 ,峰
面积的 RSD为 1. 43% ,说明方法的重现性良好。
3. 6　稳定性实验
取新制备的供试品溶液 ,室温放置 ,分别在 0、 4、 8、 12、 16、 24h进样 ,按上述色谱条件测定峰面
积 ,以峰面积计算 RSD为 1. 67% ,说明样品溶液中的蜕皮甾酮在 24h内稳定 ,可满足测定的需要。
3. 7　加标回收实验
取 6份已知含量的同一样品干粉各约 0. 5g ,分别加入蜕皮甾酮对照品储备液各 1mL,按“ 2. 4”
项下操作 ,配制成加标回收供试液 ,按照“ 2. 2”项下色谱条件进样分析 ,样品的回收率结果见表 1。
表 1　回收率测定结果 (n= 6)
序号 样品含量
( mg)
加标量
( mg)
测得量
( mg)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 0. 9287 1. 1000 2. 0387 100. 9
2 0. 9360 1. 1000 2. 0603 102. 2
3 0. 9274 1. 1000 2. 0825 105. 0 103. 4 1. 53
4 0. 9323 1. 1000 2. 0700 103. 4
5 0. 9369 1. 1000 2. 0857 104. 4
6 0. 9371 1. 1000 2. 0869 104. 5
3. 8　样品测定
分别称取瓦韦叶和根状茎干粉各 0. 5g ,按“ 2. 4”项下方法制备供试品溶液和“ 2. 2”项色谱条件
下进行测定 ,用外标法计算样品中蜕皮甾酮含量 ,结果见表 2。
表 2　样品含量测定结果 (n= 3)
有边瓦韦 含量
( mg /g )
平均含量
( mg /g)
RSD
(% )
根状茎 1. 942 1. 931 1. 964 1. 946 0. 87
营养叶 0. 774 0. 772 0. 777 0. 774 0. 33
4　结论
有关 RP-HPLC测定蜕皮甾酮的文献有见报道 ,多为牛漆和漏芦属植物的含量测定 ,本文首次
建立反相高效液相法测定蕨类植物有边瓦韦中蜕皮甾酮的含量 ,选用甲醇-水 ( 49∶ 51)为流动相 ,
该方法简便、快速、准确、重复性好 ,可作为有边瓦韦中蜕皮甾酮的定量分析方法。 本实验对有边瓦
韦的地上部分和地下部分分别进行了测定 ,经测定有边瓦韦根状茎中蜕皮甾酮平均含量为
1. 946mg /g ,叶中平均含量为 0. 774mg /g ,说明有边瓦韦的根状茎是生产蜕皮甾酮的最佳原料 ,同
时其营养叶也具有一定的利用价值 ,为有边瓦韦在药用领域的应用提供了理论依据。
参考文献
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1836 光谱实验室 第 29卷
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[8 ]刘姣 ,周亚球 ,彭超 .怀牛膝蜕皮甾酮的含量测定 [ J ].安徽中医学院学报 , 2005, 24( 3): 43— 44.
Determination of Ecdysterone in Lepisorus marginatus Ching
by RP-HPLC
ZHANG Xiao-Jing　 MA Ji　 ZHU Zhen-Zhen　 ZHAN G Hao
(Col lege of Lif e Sciences , Shaanxi Normal University, National Engineering Laboratory for Resource
Development o f Endangered Crude Drugs in Nor thwest of China ,X i an 710062, P. R.China)
Abstract　 A method for the determination of ecdysterone in Lepisorus marginatus Ching by
RP-HPLC was established. The Shimadzu C18 ( 250mm× 4. 6mm, 5μm) was used for analy sis, wi th
detection waveleng th 324nm, flow rate 0. 8mL /min, column temperature 30℃ and methanol-H2O
( 49∶ 51) as mobile phase. A good linear curve in the range of 0. 11— 1. 65μg ( R2= 0. 9991) w as
obtained. The average recovery w as 103. 4% with a relativ e standard deviation( RSD) of 1. 53% . The
method is simple and accurate, sensi tiv e and reproducible, and can be effectiv ely applied fo r the
determination.
Key words　 Lepisorus marginatus Ching; Ecdy sterone; RP-HPLC
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