全 文 ：取 10μl进样测定 ,每一样品取 5份平行测定 ,结果
所测药品中均添加了枸橼酸西地那非 。
2.7 　加样回收率试验　精密称取样品 0.1000 g,
共 6份 ,分别置于具塞烧瓶中 ,精密加入对照品贮备
液 1 ml,先加入 20 ml水溶解 ,超声 30 min,离心 、过
滤 ,滤渣同法提取 2次 ,合并滤液 ,用氨水调 pH值
至 9,用氯仿萃取 3次 ,合并氯仿液 ,水浴蒸干 ,残渣
用甲醇溶解并定容至 100 ml,然后精密量取 1 ml用
甲醇定容至 10ml,取 10μl进样测定 ,计算回收率 。
结果见表 1。
　表 1 　加样回收率结果(n=6)
样品中已知量(mg) 对照品加入量(mg) 实验测出量(mg) 回收率(%) RSD(%)
3.542 1.00 4.533 99.8
3.542 1.00 4.665 102.7
3.542 1.00 4.492 98.9
3.542 1.00 4.583 100.9
3.542 1.00 4.624 101.8
3.542 1.00 4.519 99.5
1.45
3 　讨论
3.1 　西地那非结构中含有 6个 N原子 ,具有碱性 ,
与枸橼酸成盐而溶于水 ,在碱性条件下游离出西地
那非而形成沉淀 。本文利用这一性质 ,在水提取液
中加入氨水进行碱化 ,使西地那非游离出来 ,然后用
氯仿萃取。未经预处理样品溶液的色谱图上有较多
的吸收峰 ,说明成分多 ,易损坏色谱柱;在目标成分
附近存在其他吸收峰 ,干扰大 。经过预处理的样品
溶液色谱图上的吸收峰明显减少 ,目标成分附近没
有其他吸收峰。说明通过预处理后 ,能有效地去除
共存干扰物和对色谱柱有害的物质 ,提高了检测率
和减少了对色谱柱的损坏。
3.2　本研究初期曾以乙腈-水-冰醋酸-三乙胺(35
∶65∶0.8∶0.4, v/v)为流动相 〔4〕。甲醇 、乙腈极性相
近 ,但两者相比 ,甲醇廉价低毒 ,适用性更广。经反
复试验 ,本文确定以甲醇-水-冰醋酸 -三乙胺(60∶40
∶0.8∶0.3, v/v)作为流动相 。并以不同流动相组成
比例考察色谱的分离效果 ,发现当流动相中甲醇与
水的体积比为 60∶40时 ,保留时间为 13min,理论塔
板数为 5678。为了确保目标成分与其他成分能够
完全分离 ,流动相中甲醇与水的体积比以 60∶40为
宜。
3.3　本文所确定的样品前处理方法能获得较高提
取率 ,能达到分离 、纯化目标成分的目的 ,结果满意 ,
方法可行 。
参 考 文 献
[ 1] 雷灼雨 , 罗萍 ,周渝南 .补肾壮阳药中枸橼酸西地那非
的含量测定 .中国药业 , 2005, 14(30):40-41.
[ 2] 魏晓舒 .HPLC测定保健品中西地那非的含量 .华西药
学杂志 , 2004, 19(2):144-145.
[ 3] 张启明 , 尹华 ,黄海伟 , 等.检查中药中非法掺入枸橼酸
西地那非的方法研究 .药物分析杂志 , 2002, 22(4):
315-317.
[ 4] 梁丽梅.3种补肾壮阳类中药制剂中违法添加枸橼酸西
地那非的含量测定方法研究 .中药材 , 2006, 29(6):
613-614.
(2007-10-28收稿)
漏芦总甾酮质量标准研究
李肇进 1 ,张　蕴 2
(1.河南中医学院 ,河南郑州 450008;2.深圳太太药业有限公司 ,广东深圳 518057)
　　摘要　目的:建立漏芦总甾酮的质量标准。方法:采用薄层色谱法对漏芦总甾酮作定性鉴别 , 用高效液相色谱
法对漏芦总甾酮中 β-蜕皮甾酮进行定量分析 , 用紫外可见分光光度法对漏芦总甾酮含量进行检测。结果:定性鉴
别斑点整齐 , 分离度好 ,易于区别;β-蜕皮甾酮含量测定平均加样回收率为 99.8%, RSD=2.6%。结论:方法简便 、
准确 , 重现性好 ,阴性对照无干扰 ,可用于漏芦总甾酮的质量控制。
关键词　漏芦;漏芦总甾酮;β-蜕皮甾酮;质量标准
中图分类号:R286.02　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)07-1088-03
　　中药漏芦为菊科(Composite)漏芦属(Rhaponti-
cum)多年生草本植物祁州漏芦 Rhaponticumunifo-
rum(L.)DC.的干燥根。主产于我国的河北 、辽
宁 、内蒙等地 。其功能主要为清热解毒 、消痈下乳 、
舒筋通脉 ,用于治疗乳痈肿痛 、乳汁不通 、湿痹拘挛
等证 〔1, 2〕。通过对漏芦总甾酮进行系统的化学成分
·1088· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 7期 2008年 7月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.07.052
研究 〔3〕 , 证明其中主要含有植物甾酮类成分 (占
60%以上),其它成分有噻吩类 、植物甾醇类 、微量
的酚酸性色素和糖类等。药理研究结果表明漏芦中
以 β -蜕皮甾酮为主成分的漏芦总甾酮具有显著的
抗脑缺血 、抗缺氧 、抗血小板聚集 、抑制脑水肿 、改善
脑功能障碍等作用 〔4〕 ,是主要药效成分。本文对漏
芦总甾酮的鉴别 、含量测定等方面进行了质量标准
制订研究 ,现报道如下 。
1 　仪器 、试剂与样品
UV-265FW型紫外 -可见分光光度仪;HP1100-
高效液相色谱仪;YOKO-SY紫外分析摄影仪;GF254
硅胶薄层板 。
漏芦对照药材 (购自中国药品生物制品检定
所), β -蜕皮甾酮对照品(含量 99.7%, HPLC归一化
法测定),甲醇(色谱纯)。
漏芦总甾酮样品的制备:将漏芦药材用一定浓
度乙醇回流提取两次 ,合并提取液减压回收乙醇 ,得
无醇味水溶液 ,经大孔树脂初步分离的中间产物 ,浓
缩至稠浸膏 ,用定量氧化铝拌样烘干 ,得烘干的样品
再用氧化铝柱层析纯化 ,先用一定比例氯仿 -甲醇洗
脱杂质 ,洗脱液回收溶剂后弃去 ,再用一定比例氯
仿 -甲醇洗脱有效成分。减压回收溶剂得浸膏 ,再将
浸膏减压干燥 ,所得干燥品为漏芦总甾酮 ,作为试验
样品备用。
2 　方法与结果
2.1 　鉴别试验
2.1.1　性状鉴别:从多次试验结果得知 ,漏芦总甾
酮样品应为黄棕色粉末 ,气微 ,味微苦。易溶于甲
醇 、乙醇 ,微溶于水。
2.1.2　薄层鉴别:在基础研究实验中可知漏芦总
甾酮中以 β-蜕皮甾酮含量最高 ,其性质稳定 ,所以
将 β -蜕皮甾酮作为对照品 。取漏芦总甾酮样品 10
mg,加甲醇 10 ml,超声溶解 20 min,过滤 ,滤液作为
供试品溶液 。取 β-蜕皮甾酮对照品 ,同法制成每 1
ml含 0.3mg的溶液作为对照品溶液;另取漏芦对
照药材粉末 1g,加甲醇 20 ml,超声处理 20 min,过
滤 ,滤液蒸干 ,残渣加甲醇 1 ml使溶解 ,作为对照药
材溶液 。照薄层色谱法试验 ,吸取上述三种溶液各
5 μl,分别点于硅胶 GF254薄层板上 ,以氯仿 -甲醇(3
∶1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,置紫外灯(254 nm)
下检视 。供试品色谱中 ,在与对照品色谱和对照药
材色谱相应的位置上 ,显相同颜色的斑点 。
2.2 　含量测定　本品为漏芦药材提取精制后的漏
芦总甾酮。分别证明其漏芦总甾酮中主要为 β -蜕
皮甾酮 ,另含有部分其他甾酮 ,如筋骨草甾酮 、牛膝
甾酮 、漏芦总甾酮等〔4〕及其它一些脂溶性成分。因
β-蜕皮甾酮含量高 ,结构清楚 ,性质稳定 ,所以选择
β-蜕皮甾酮作为含量测定的指标成分。用高效液相
色谱法测定 β -蜕皮甾酮 ,方法可靠 ,结果稳定。另
由于有效部位为漏芦总甾酮 ,以 β -蜕皮甾酮为对
照 ,采用紫外分光光度法测定漏芦总甾酮含量。
2.2.1 　β-蜕皮甾酮含量测定:
对照品溶液的制备:精密称取 β -蜕皮甾酮对照
品 ,加甲醇溶解并稀释成每 1 ml含 β -蜕皮甾酮 80
μg的溶液 ,即得 。
供试品溶液的制备:取漏芦总甾酮样品约 15
mg,精密称定 ,置 50 ml的量瓶中 ,加甲醇 30 ml,超
声溶解 10min,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,取滤
液作为供试品溶液 。
色谱条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
乙腈 -水(16∶84)为流动相;检测波长为 242 nm;理
论塔板不低于 2000。
线性关系考察:精密称取 β -蜕皮甾酮对照品
(纯度 99.7%)9.69 mg,置于 10 ml容量瓶中 ,加甲
醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 。精密量取该溶液 0.4、
0.8、1.2、1.8、2.0 ml分别置于 10 ml容量瓶中 ,加
甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,各取 20μl注入高效液相色
谱仪检测 ,以 β-蜕皮甾酮峰面积对浓度作图 ,计算
得回归方程 Y=6.667 ×106 +2.322 ×104 , r=
0.9992。
精密度试验:精密吸取上述对照品溶液 20 μl
重复进样 6次 ,测定峰面积 , RSD为 1.2%,结果表
明精密度良好 。
重复性试验:取同一批号样品(061201),分别
测定 6次 ,测得 β-蜕皮甾酮平均含量为 31.94%,
RSD为 2.0%。
稳定性试验:精密吸取上述供试品溶液 20 μl,
每间隔 2 h进样一次 ,共进样 6次 ,结果表明供试液
在 12 h内基本稳定 , RSD为 1.2%。
回收率试验:精密称取 061201批号的漏芦总甾
酮(32.23%)粉末约 15mg,分别精密加入 β-蜕皮甾
酮对照品溶液 1.0、0.5、0.1 ml,按供试品溶液制备
项下操作 , 结果平均回收率为 99.8%, RSD为
2.6%。
样品测定:按拟定的供试品溶液制备方法和色
谱条件对 6批样品进样分析 ,以外标法计算含量 ,结
果见表 1。
　　根据六批漏芦总甾酮样品含量测定结果 ,规定
漏芦总甾酮样品中 β-蜕皮甾酮含量不得低于
26.0%。
·1089·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 7期 2008年 7月
　表 1　六批漏芦总甾酮样品中 β-蜕皮甾酮含量测定结果
批次 061201 061202 061203 070101 070102 070103
含量(%) 32.13 31.56 31.82 31.33 31.73 31.95
2.2.2　漏芦总甾酮含量测定:
标准曲线的制备:精密称取 β -蜕皮甾酮对照
品 ,加甲醇溶解稀释成每 1 ml含 β -蜕皮甾酮 25 μg
的溶液 。再精密吸取对照品溶液 1.0、 2.0、 4.0、
6.0、8.0、10.0 ml分别置于 10ml的容量瓶中 ,以甲
醇稀释至刻度 ,摇匀 ,以甲醇为空白。照分光光度
法 ,在 242 nm波长处测定吸收度 ,以吸收度为纵坐
标 ,浓度为横坐标 ,绘制标准曲线。
供试品溶液的制备:精密称取漏芦总甾酮样品
(批号 061201)适量 ,加甲醇溶解稀释成每 1 ml含
25 μg的溶液 ,即得。
线性关系考察:精密称取 β-蜕皮甾酮标准品
6.6mg。置于 100 ml容量瓶中 ,甲醇溶解 、定容至
刻度 ,浓度即为 66 μg/ml,用移液管分别定量移取
1、2、4、6、8、10 ml至 10 ml量瓶中 ,用甲醇定容 。以
甲醇为空白对照 ,在波长 242 nm处测定标准系列溶
液的吸光度 。计算线性回归方程为 Y=0.0229X+
0.0437, r=0.9999。说明 β -蜕皮甾酮甲醇溶液在浓
度 6.6 ～ 66.0 μg/ml范围内 ,浓度对吸光度的线性
关系良好。
精密度试验:取上述 25 μg/mlβ-蜕皮甾酮标准
溶液 4ml置 10ml容量瓶中 ,甲醇稀释至刻度 ,以甲
醇为空白对照 ,在波长为 242 nm处测定吸光度 ,平
行测定 5次 , RSD为 0.4%,表明精密度良好。
重复性试验:取同一批样品 061201按含量测定
方法 ,平行测定 5次 ,测得漏芦总甾酮含量平均值为
71.87%, RSD为 1.07%。
稳定性试验:精密量取 25μg/ml漏芦总甾酮样
品供试液 ,以甲醇为空白对照 ,在波长 242 nm处测
定吸光度 ,分别测定 0、1、3、5、8、12、16 h的吸光度 ,
考察稳定性 ,测得吸光度平均值为 0.6291, RSD为
0.05%。实验证明本方法稳定 。
样品测定:分别精密称取六批供试品溶液 ,测定
吸收度 ,从标准曲线上读出供试品溶液中相当于 β -
蜕皮甾酮的量 ,计算 ,即得 。以 β -蜕皮甾酮的量计 ,
六批漏芦总甾酮的含量测定结果见表 2。
　表 2　六批漏芦总甾酮样品中漏芦总甾酮含量测定结果
批号 061201 061202 061203 070101 070102 070103
总甾酮(%) 72.05 72.88 72.33 67.80 68.60 68.30
　　根据以上六批样品结果 ,规定漏芦总甾酮含量
限度为不低于 60%。
3　讨论
由于漏芦总甾酮中以 β -蜕皮甾酮含量最高 ,且
性质稳定 ,所以将 β -蜕皮甾酮作为漏芦总甾酮定性
鉴别指标成分 。 β -蜕皮甾酮在硅胶 G薄层板上 ,在
紫外光(254及 365 nm)下 ,荧光均较弱 ,所以改用
硅胶 GF254薄层板 ,在展开剂的选择上 ,经大量实验 ,
最后筛选出以氯仿 -甲醇(3∶1)为展开剂 ,在紫外光
(254 nm)下观察 ,薄层图谱斑点清晰 , 效果明显。
同时本方法简单易重复 ,可作为漏芦总甾酮的定性
检测指标 。
参 考 文 献
[ 1] 国家药典委员会 .中华人民共和国药典 .一部 .北京:
化学工业出版社 , 2005.
[ 2] 江苏新医学院 .中药大辞典(下册).上海:上海人民出
版社 , 1977.
[ 3] 李希强 , 王金辉等.祁州漏芦中的植物甾酮类成分.沈
阳药科大学学报 , 2000, 17(4):260-262.
[ 4] 刘民生 .祁州漏芦中改善脑功能障碍的有效成分研
究 .沈阳药科大学博士论文 .
(2007-11-04收稿)
《中药材 》杂志为国家首批公布的可登处方药广告的专业媒体 。
·1090· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 7期 2008年 7月