全 文 ：2
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2 地乌总普对 Con A刺激佐 剂性关节炎 大 鼠脾
细胞增殖的影响
2
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2
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1分组及处理: 同2 . 1. 1。
2
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2
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2 实验方法: 参照《新药 (西药 )临床前研究指
导原则汇编 (药学药理学毒理 ) )(第一版 )采用淋 巴
细胞转化实验 , 用药第 巧 天处死动物 , 无菌取脾 , 配
成 2 . 5 x l护 个 /而 在超净台上将脾细胞加人无菌 %
孔培养板孔 中 , 每孔 20 0 川 , 每样品六孔复孔 , 前 3
孔每孔加 co nA ( iS gam 公 司产品 )
, 终浓度为 s u 岁
而 。 后 3 孔 补加 l以0 20 川 作 为细胞 对 照 , 放 人
3 7℃ , 5% e o b盆 孵育 印 h , 每孔加 汗 一hT n (浓度为 l
uc i/ iln ) 20 川 , 继续培养 6 h 用微量多头细胞收集仪
(美国 Bac lun an 公司产品 ) ,将细胞抽吸在 49 型玻璃
纤维滤纸上 ,置 80 ℃ 烘箱 中干燥 30 m in 。 将干燥滤
纸片放人盛有闪烁液的小瓶 中 , 用 B C2 00 工型液 闪
仪测 CmP 值 。
2
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2
.
3 结果 : 由表 2 可见 ,高 、 中 、 低三个剂量地乌
总昔组均可使 CmP 值降低 ,表明可抑制淋巴细胞 的
转化 。
3 讨论
大鼠佐剂性关节炎是接种含有结核菌的完全佐
剂引起的慢性关节炎 , 其发病不仅有细胞免疫反应 ,
可能也有体液免疫反应 ,不仅关节受损 ,而且还有以
肝脏为首的内脏各器 官 , 淋 巴组织系统全面损伤 。
所以其发病机理 , 病变部位和病变性质都与人类的
类风湿性关节炎极为相似 。 注射佐剂脚爪的原发性
损害为非特异性关节炎症 , 未注射佐剂脚爪的继发
性损害则为免疫性炎症 。 因此佐剂性关节炎大 鼠机
体免疫功能紊乱 , 其特异性抗体形成 (及淋巴细胞的
转化 )均高于正常动物 。 地乌总昔均可抑制抗体形
成细胞的数量 ,从而抑制佐剂性关节炎大 鼠特异体
液免疫的功能 。 地乌总昔可抑制 C o nA 刺激的 T 淋
巴细胞的转化 , 3 H 一dT R 掺人率明显低于模型组 , 从
而抑制佐剂性关节炎大 鼠淋巴细胞的增殖和转化 。
从以上分析可以看出地乌总昔在调节机体特异性免
疫功能 ,治疗风湿病方面的作用 ,值得进一步研究 。
参 考 文 献
徐叔云 主编 . 药理实验方法学 (第二版 ) . 北京 : 人 民卫
生出版社 , 19 4 : 723
江俊 . 地乌总昔抗炎作用研究 . 湖北中医杂志 , 1卯3 , 巧
( 10 1 )
: 7 5
邮飞虹 . 地乌总贰对动物免疫功能的影响 . 实用 中医药
杂志 , 1望汉i , 1 2 ( 2 ) : 4()
江俊等 . 地乌总贰抗炎及抗过敏作用的实验研究 . 中药
药理与临床 , l望拓 , 1 2 ( 5 ) : 20
( 2X() 1
一 10 一 08 收稿 )
· 制剂与质 , ·
漏芦中蜕皮幽酮提取方法研究
中国地质大学材化学院 (武汉 4 3(X) 74 ) 陈莉莉 吴红权 李 颖 帅 琴
摘要 目的 :优选漏芦中蜕皮街酮的最佳提取工艺条件 。 方法 : 以蜕皮幽酮含量及固体物含量为指标 , 比较三
种不 同提取方法 : 不同溶剂回流法 ,超声提取法 , 冷浸法 。 结果 : 三种溶剂以甲醇提取蜕皮幽酮最完全 , 水其次 , 乙
醇受浓度影响很大 ;超声提取所需时间短 , 提取基本完全 ;冷浸法所需时间长 , 提取不完全 。 结论 : 甲醇热提取法效
果最好 。
关键词 漏芦 蜕皮幽酮 提取工艺
中药漏芦来源于菊科植物祁州漏芦 set
~
-
tha un 沙 ar ( L . ) iDt itr hc 的根 , 具有明显的抗动脉粥
样硬化及抗脂质过氧化作用 , 能降低血清中胆固醇
含量 ,减小血小板聚集性〔’ 周 。 漏芦成分复杂 , 欲利
用或研究其中的有效成分 ,则必须将它们从 中药中
提取出来 。 但漏芦提取方法的研究报道甚少 3j[ 。 目
前中药提取主要方法有溶剂提取法 、 水蒸气蒸馏法 、
超声提取法 、 冷浸法等 。 蜕皮 街酮为漏芦活性成分
之一 ,本研究采用 班】LC 法测定漏芦提取液中蜕 皮
街酮含量 , 采用重量法测定固体物含量 ,并以此为指
标 ,研究漏芦中蜕皮街酮提取方法闭 ,为合理提取漏
芦中的活性成分提供了实验依据 。
1 仪器与试剂
仪器 : Sh im 一卿k C砚一 o D S 色谱柱 ( l , m x 4 . 6
~
i
.
d
.
)
,
SDP
一
10 AV 紫外 一可 见分 光光 度检 测 器 。
对照品 :蜕皮街酮由北京医科大学提供 。 漏芦药材 :
由湖北中医院提供 。 其他试剂均为分析纯 。
2 色谱条件
Sh i-m卿k C优 一ODS 色谱 柱 ( 150 m x 4 . 6 inm
i
.
d
.
) ; G OD S保护 柱 ( 10 m x 4
.
0 m
i
.
d
.
) ; 柱温 :
中药材第 25 卷第 3 期 2X() 2 年 3 月
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2002. 03. 022
40℃ ;流动相 :甲醇 一水 (4O :团 ) ;流速 : 1. 0耐 /m i ;n检
测波长 :428 nm ;记录纸速度 : 5 l n l n /m in。
3 蜕皮街酮含鱼及固体物含量测定囚
3
.
1对照品溶液配制 准确称取 sm g蜕皮街酮对
照品于 sml 具塞刻度管中 , 用甲醇溶解并稀释至所
需浓度 。
3
.
2 固体物测定 准确称量已制备好的提取液 10
ml
,倾入经干燥称重的小蒸发皿中 ,水浴浓缩至干 ,
移人 105 ℃烘箱中干燥 Z h , 称重 ,得到固体物重量 ,
然后用固体物的质量除以提取液质量 , 计算固体物
含量 (用质量百分数表示 ) 。
3
.
3 蜕皮苗酮含量刚定 准确吸取一定的提取液
于小烧杯中 , 蒸至小体积 , 加人 0 . 5 9 氧化铝拌匀 ,
低温挥尽溶剂 , 装 人一 根预先装 填好的氧 化铝柱
( 10 ml
n x s ~
i
.
d
.
)的顶部 ,用氯仿 一甲醇 ( 4 : l) 洗 ,
收集洗液 50 时 , 低温挥尽溶剂 ,准确加入 5 耐 甲醇
溶解 ,按色谱条件进行测定 。
4 提取方法
4
.
, 不 同溶剂提取法 漏芦药材于 印℃干燥 4 h ,
粉碎后过 80 目。 称取漏芦粉末 2 9 3 份 , 分别采用
水 、 甲醇 、 乙醇为溶剂 ,加人量均为 20 耐 , 低温回流
提取 Z h ,提取 2 次 ,合并提取液 。
4
.
2 超声提取 法 称取漏芦粉末 2 9 , 加人 20 间
甲醇 ,超声提取 15 、 30 、 45 、 6() m i n o
4
.
3 冷浸法提取 称取漏芦粉末 2 9 , 加人 20 耐
甲醇 , 分别冷浸 12 、 24 、 36 、 4 8 、 7 2 h 。 将各 自的提取
液经过滤后浓缩 ,用甲醇定容至 5 0 耐 。
5 结果与讨论
5
.
, 不 同溶 剂对提取效果的影响 由表 l 可看
出 , 用水提取 , 蜕皮街酮含量和固体物的含量都比较
理想 , 因此 , 用水煎中药漏芦药用比较合理 。 使用甲
醇提取时 ,蜕皮 街酮提取最完全 ,而固体物的含量则
比水提取法低 , 这种提取方法对于采用 H l〕LC 法测
定漏芦中蜕皮街酮非常有利 , 因为引人的杂质相对
较少 ,色谱峰受干扰的程度减少 。 而用乙醇提取时 ,
提取效果与乙醇浓度有关 , 见表 2 。
5
.
2 溶剂浓度对提取效果的影响 三种溶剂相 比
较 , 乙醇受浓度的影响最大 。 试验 以不同浓度的乙
醇为溶剂回流 Z h 提取漏芦 中蜕皮 街酮 , 所得结果
见表 2 。 可以看 出 ,蜕皮 街酮的提取效果受 乙醇浓
度的影响很大 , 采用 50% 一 75 % 的乙醇提取时 , 固
体物含量高 ,蜕皮幽酮的提取效果好 。
5
.
3 超声提取时间及次数对提取效果的影响 采
用甲醇为溶剂 , 以超声提取法提取 ,研究了提取时间
对提取效果的影响 ,表 3 表明 : 超声提取 30 m in 后 ,
结果稳定 ,但固体物 含量和蜕皮 街酮的提取结果都
不及热提取法好 。 按上面提取方法对漏芦作两次超
声提取 ,测得两次的蜕皮街酮总含量 , 结果发现 , 第
一次的提取率即有 % % (每次超声 30 m in ,多次平行
结果作为总含量 ) , 可见第二次作用较小 , 提取 一次
即可 。
5
.
4 冷浸法提取时间对提取效果的影响 采用甲
醇为溶剂 , 以冷浸法提取 , 分别试验 了冷浸 12 h 、 24
h
、
36 h
、
4 8 h
、
7 2 h 后的提取效果 ,表 4 表明 : 冷浸提
取 2 4 h 后 , 固体物含量基本稳定 ,但蜕皮街酮的提
取仍不完全 ,不及热提取法和超声提取法好 。)
表 1 不同溶剂对提取效果的影响
溶剂 水 乙醇 甲醇
固体物 ( % ) 2 1 . 25 13 . 58 15 . 49
蜕皮幽酮 ( % ) 0 . “ 礴 .0 以 5 0 . 108
表 2 不同浓度的乙醉对提取效果的影响
乙醇 ( % ) 3() 50 75 85 9 5
固体物 ( % ) 18 . 3 0 2 1 . 0 5 20 . 17 15 . 2 2 13 . 5 8
蜕皮出酮 ( % ) 住的 3 住《阴 ) .0 的 5 0 . 087 0 .砚” 5
表 3 超声提取时间对提取效果的影响
时间 (而 n ) 15 3 0 45 团
固体物 (% ) 1 1 . 2 2 14 48 14 . 40 14 4 5
蜕皮街酮 ( % ) .0 057 0 . 【期 ) .0 的2 住 《冷〕
表 4 冷浸法提取时间对提取效果的影响
时 I司 ( h ) 12 24 36 4 8 7 2
固体物 ( % ) 9 . 75 14 . 49 14 . 83 1 5 . 1 8 16 . 7 4
蜕皮街酮 ( % ) 0 03 2 0 07 2 0 . 07 5 0 0 82 0 . 084
6 结论
采用超声提取法 ,操作简便 ,提取时间短 , 但蜕
皮街酮提取得不是很完全 ;使用乙醇回流提取 ,提取
效果受溶剂浓度的影响很大 ;冷浸法设备简单 ,成本
低廉 ,但提取不完全 , 时间长 ,效率低 ;采用 甲醇热提
取法对蜕皮街酮的提取是最完全的 , 且所需设备简
便 。 因此 , 三种方法相比较 ,选用甲醇热提取对漏芦
样品进行处理最佳 。
参 考 文 献
侯世祥 , 等 . 华西药学杂志 , 19 89 , 4 (2 ) : 120
姜晓峰 , 等 . 中草药 , 19 7 , 28 ( 5 ) : 26 2
张玲 , 等 . 中药材 , 19 7 , 20 ( 5) : 24
徐南杰 , 等 . 沈阳药科大学学报 , 1卯 7 , 14 : 30
帅琴 , 等 . 分析科学学报 , 1哭旧 , 巧 : 293
( 2X() l
一 1 1 一 20 收稿 )
刁..
2345
中药材第 25 卷第 3 期 2《X )2 年 3 月
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e x tar c t io n Of ec 街st e or n e l
弓 .St em, 刀硬双 u n lha “ 12如o(r l
e X lm C t l o n
;
cE d y
s t e m en : xE actr
ti o n p溉 e s
H P L C 法测定乳核散结片中淫羊蕾普的含量
广州市药品检验所 (广州 51 01团 ) 林巧玲 张紫佳
广东省 中医院 (广州 5 101 20 ) 杨 柳
广州中药一厂 (广州 51 06 2 0 ) 王 蔚
摘要 目的 : 用高效液相色谱法测定乳核散结片中淫羊蕾昔的含量 。 方法 : 选用 IP S x〕 h e ir os ht O DsZ 柱 ( 5脚 ,
250
x 4
~ )
, 流动相为乙睛 一水 ( 30 : 70) ,检测波长 270 lun , 柱温 25 ℃ , 流速 I n 止/而 n 。 结果 :淫 羊蕾昔的线性范围为
0
.
or 一 2
.肠 滩 , 回归方程 : Y = 2 131 .胆 92 1X 一 8 . 161 97 , r 二 0 .望珍〕 ; 平均 回收率为 卯 . 8% , l` I) = 2 . 7 % 。 结论 :方法简
便 、灵敏 ,结果准确 。
关键词 乳核散结片 淫羊霍昔 11】〕L〔:
乳核散结片由当归 、黄茂 、 淫羊蕾等十味药材制
成 ,具有舒肝解郁 、 软坚散结 、 理气活血的功效 ,用于
治疗乳腺囊性增生 、 乳痛症 、 乳腺纤维腺瘤和男性乳
房发育等 。 方 中淫羊霍用量较大 , 本文采用 H P LC
法测定淫羊蕾昔含量 , 以此作为该药的质量控制指
标 。
1 仪器与试药
美国 HP l o 型高效液相色谱仪 。 乳核散结 片
(广州中药一厂 ) 。 淫羊霍昔对照品 (中国药品生物
制品检 定所 , 供含 量测定 用 ) 。 聚酞 胺 ( 10 一 2叨
目 ) ,浙江省台州市路桥四青生化材料厂生产 。 乙睛
为色谱纯 , 其余试剂均为分析纯 。
2 色谱条件
色谱柱 : PH S ph e ir so ht OD SZ ( 5 脚 , 2 5o x 4 nr ) ,流动相 : 乙 睛 一水 ( 3 0 : 70 ) , 检测波 长 2 70 nl , 柱 温
2 5℃ ,流速 l m l /而 n 。
3 方法与结果
3
.
1 供试品溶液制备 取样品 or 片 ,洗去糖 衣 ,
素片干燥 (置硅胶干燥器 中放置过夜 )后 ,称重计算
平均片重 。 研细 , 精 密称取 相当于 2 片样 品重 (约
0
.
7 9 )的粉末 , 加 70 % 乙 醇回流提取 3 次 ,每 次 50
耐 , 30 m in , 滤过 , 滤液蒸至近干 , 残渣用水约 10 耐
溶解 , 加于 已装填好 的聚酞胺柱 ( 10 一 2 0 目 , 1 . 5
中药材第 25 卷第 3 期 2X( )2 年 3 月
g
,直径 2 c m , 湿法装柱 )上 ,用水 10 而 洗脱 , 弃去
水洗脱液 , 再用 30 % 乙醇 10 耐 洗脱 , 收集 30 % 乙
醇洗脱液 ,蒸干 ,残渣用 7 0% 乙醇溶解置 10 耐 量瓶
中 ,加 7 0% 乙醇至刻度 , 摇匀 , 作为供试品溶液 。
3
.
2 对照品溶液制备 精密称取淫羊霍昔对照品
适量 ,加 甲醇制成每 1 而 含 0 . l mg 的溶液 , 即得 。
3
.
3 阴性 对照 实验 按处方 比例及生产制备方
法 , 制备不含淫羊蕾的阴性样品 ,按照供试品溶液制
备法制备阴性对照溶液 , 精密吸取 10 川进样测定 ,
结果表明 , 阴性对照无干扰 。
3
.
4 线性范围与校正曲线 分别精密吸取淫羊蕾
营对照品溶液 ( 0 . 2伪 m g /血 ) 0 . 5 讨、 2 . 5 川 、 5 . 0 川 、
7
.
5 川 、 10 闪 ,按上述色谱条件进样测定 , 以对照品量
为横坐标 ,测定的峰面积积分值为纵坐标 ,绘制标准
曲线 , 得到回归方程 : Y = 2 13 1 . O29 2 l X 一 8 . 16 197 , r =
0 月列哭列〕 , 淫羊霍昔在 0 . 10 ~ 2 . 06 滩 之间呈 良好的线
性 。
3
.
5 稳定性试验 取样品按供试品制备项下方法
进行操作 , 制得供试液 , 立 即测定 , 之后分别于 Z h
和 24 h 进行测定 ,结果供试品中淫羊霍峰峰面积积
分值 SH D = 1 . 0% ( n 二 3 ) ,表明稳定性较好 。
3
.
6 重复性试验 取同批号样 品 5 份 , 按供试品
制备方法重复进行试验 , RS D 二 1 . 64 % ( n = 5 ) 。
1 97
·