全 文 ：· 54·(总 ) 广西中医药 2007年 4月第 30卷第 2期
胞器增多 ,且星形细胞与正常微血管
和神经元的接触均增多 ,星形细胞也
明显增多 ,但以治疗组更多。第 3、4、
5疗程末:两组胶质星形细胞增殖和
神经元改变同第 4疗程。
3 讨 论
星形胶质细胞(astrocyte , AS)长
期以来被认为是脑组织中简单的堆
积物 ,发挥着连接 、支持 、固定脑组织
的作用。从 1990年开始 ,一系列对于
AS的研究证实:AS还可以调节神经
元的周围环境 ,分泌神经营养因子 [5] ,
参与血脑屏障的构成 [6] ,调节神经元
突触的生长和功能成熟 [7] ,调控神经
的发生 [8 ～9] ,参与脑中信号传递 [ 10]。
脑梗死后星形胶质细胞在其修复中
起着重要的作用 [4] 。
本研究结果显示两组在 MCAO
后第 1疗程末运动功能开始改善 ,说
明急性脑梗死后运动功能确实存在
着自然恢复过程 ,即运动功能有可塑
性。通过针刺治疗 1个疗程后脑梗死
大鼠 BWT评分明显提高 , 说明针刺
治疗在脑梗后的肢体功能恢复中具
有积极的促进作用。AS的改变在脑
梗死后的早期和后期是不同的。在
MCAO术后 AS 数目在梗死边缘区逐
渐升高 , 而凋亡的神经元逐渐减少 ,
结合电镜结果 , 说明 AS的这种改变
应当有利于全脑各组织成分的联系 ,
积极地进行功能代偿。
考虑针刺治疗急性脑梗死后运
动功能康复的可能机制为:反复的针
刺刺激可能通过机械刺激 ,经过感觉
传导通路或非特异性感觉传导通路
或网状结构 ,到达脑梗死边缘区功能
尚存的星形胶质细胞或神经元 ,激发
它们的活性 ,重建与周围神经元的信
息联络网 , 使脑内侧支循环开放 、脑
组织细胞供血 、供氧能力增强 , 代谢
加强 ,虽不能使坏死的神经元死而复
生 , 但却可以清除梗死边缘区的水
肿 , 挽救濒临失支功能的神经元 , 促
使星形胶质细胞增殖 , 加强功能修
复。由此可见星型胶质细胞在急性
脑梗死后运动功能康复中起着重要
的作用 , 但星型胶质细胞能否作为
急性脑梗死恢复评价的指标有待进
一步研究。
参考文献
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(2007-01-08收稿/编辑 刘 强)
毛叶黄杞 (Engelbardtia cole-
brookiana Lindl)为胡桃科属植物 ,
又名豆腐楂树 、胖母猪果树。毛叶
黄杞中含有多种营养成分 , 丰富的
矿质元素 、维生素及 β -胡萝卜素 ,
至少含有 17种氨基酸 [ 1] ,关于其药
用价值目前研究尚少。本研究就毛
叶黄杞对人肝癌 BEL-7404细胞
增殖的抑制作用进行初探 , 以进一
步揭示毛叶黄杞的药理作用 。
1 材 料
1.1 药物 毛叶黄杞提取物 , 由
广西中医学院中药化学教研室提取
分离 ,为一黄酮类粉状黄色结晶 。
1.2 细胞 人肝癌细胞 BEL-
7404 , 由广西中医学院分子生物学
实验中心惠赠。
1.3 试剂 RPMI-1640干粉(美
国 Gibco 公司产品);新生牛血清
(杭州四季青公司产品 , 批号
031101);四甲基二氮唑蓝(北京拜
尔迪生物公司分装 ,Amresco 0793);
二甲基亚砜(博大泰克公司产品);
0.25%胰蛋白酶 (美国 Hyclone Lab
公司产品);注射用生理盐水(徐州
莱 恩 药 业 公 司 产 品 , 批 号
051122)。
1.4 仪器 SUNRISE自动酶标仪
(奥地利 TECAN公司产品);311二
氧化碳培养箱(美国 ThermoForma公
司产品);DLF560型超净工作台(荷
兰 clear Air Techniek bv公司产品);
细胞培养瓶(加拿大 BIOFIL公司产
品);96孔板(上海 Sunub科技发展
公司产品);倒置显微镜 (广西梧州
光学仪器厂产品);微量移液器(法
国 Pipetman公司产品);十万分之一
电子天平(德国赛多利斯产品)。
2 方 法
2.1 BEL-7404细胞培养 在长
满 BEL-7404细胞的培养瓶内加
0.25%胰酶 , 37℃消化 3 ～ 4min;
116
·55·(总 )广西中医药 2007年 4月第 30卷第 2期
毛叶黄杞提取物对人肝癌细胞
增殖抑制作用的实验研究
李 刚 桂林市人民医院 541002 广西桂林市文明路 12号
郑作文 广西中医学院 530001 广西南宁
唐云丽 广西中医学院 2006级研究生 530001
摘 要 目的:探讨毛叶黄杞体外抗肿瘤的作用 。方法:以 MTT法观察毛叶黄杞对人肝癌 BEL-7404细胞
的体外抑制作用。结果:毛叶黄杞终浓度为 50 、33.33、22.22 、14.81、9.88μg/ml时 ,均能有效地抑制体外培养的
BEL-7404细胞的生长 ,与细胞对照组比较 ,差异有显著性意义(P<0.01),MTT法 IC50为 27.05μg/ml。结论:毛
叶黄杞提取物对体外培养的 BEL-7404细胞有抑制作用。
关键词 毛叶黄杞提取物;抗肿瘤;BEL-7404
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1003-0719(2007)02-0054-02
3733/10万已上升到目前的 8002/
10万 , 其中肝癌死亡率高居第三
位 [4]。本研究采用 MTT法 , 对毛叶
黄杞提取物进行了体外抗人肝癌
细胞的实验。MTT法是运用 MTT显
色剂被活细胞线粒体中的琥珀酸
脱氢酶还原为难溶性的蓝紫色结
晶物甲瓒 , 而间接反映出活细胞数
量 , 该方法有灵敏度高 、重复性好 、
操作简便 、经济等特点 。本研究结
果提示 , 毛叶黄杞提取物体外对人
源性肝癌 BEL-7404细胞的增殖
有较好的抑制作用。
参考文献
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(2007-01-26收稿/编辑 陈明伟)
1∶3传代 , 3～ 5d长满 。置 37℃,
5%CO2培养箱中培养 。
2.2 MTT法测定 [ 2 , 3] 取对数生
长期的细胞消化 , 配制成 1×104
个/ml细胞悬液 ,接种于 96孔培养
板中 ,每孔 180μl。设 6个浓度的药
物组 , 1个细胞对照组 ,每组 4个复
孔。药物组加不同浓度的毛叶黄杞
提取物 , 每孔 20μl , 使其终浓度分
别为 50、33.33、22.22 、14.81 、9.88、
6.58μg/ ml;细胞对照组加培养液
20μl。置 37℃, 5%CO2培养箱中预
培养 48h;48h后取出每孔加 MTT
5mg/ml(用生理盐水配制),每孔10μl。
继续培养 4h , 弃上清液 , 加入不含
血清的 1640培养液 , 每孔 150μl ,
洗板 1次 。弃上清液 , 加入二甲基
亚砜 150ml ,震荡。在 550nm波长处
用酶标仪测 OD值。计算抑制率 ,用
对数回归方程求出半数杀伤浓度
(IC50)。肿瘤细胞生长抑制率按下
式计算:肿瘤细胞生长抑制率=
(1-实验组平均 OD值/ 对照组平
均 OD值)×100%。
3 结 果 见表 1。
由表 1可知当毛叶黄杞终浓
度为 50.00、 33.33 、 22.22、 14.81、
9.88μg/ml时 , 抑瘤率与细胞对照
组相比差异均有非常显著性意义
(P<0.01);按对数回归方程计算 ,
其 IC50为 27.05μg/ml , 提示毛叶黄
杞有较强的体外抑制 BEL-7404
细胞作用。
4 讨 论
恶性肿瘤死亡率目前呈上升
趋势 , 恶性肿瘤死亡率由过去的
表 1 毛叶黄杞对 BEL-7404细胞的抑制作用 (-x±s , n=4)
注:与细胞对照组比较 , ①P<0.01
药物浓度(μg/ml) OD值 抑制率(%) IC50(μg/ml)
细胞对照组 ——— 0.609±0.080 ———
毛 50.00 0.247±0.013 ① 59.44
叶 33.33 0.290±0.031 ① 52.24 27.05
黄 22.22 0.354±0.028 ① 41.87
杞 14.81 0.315±0.076 ① 48.28
组 9.88 0.348±0.138 ① 42.86
6.58 0.552±0.041 9.36
27.05
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