全 文 ： 2007, Vol. 28, No.11 食品科学 ※分析检测506
茶藨子中总黄酮的测定
张桂兰
(新疆大学化学化工学院，新疆 乌鲁木齐 830046)
摘 要：目的：测定茶藨子中总黄酮的含量，为进一步开发利用茶藨子提供科学依据。方法：选择茶藨子中总
黄酮的提取条件；用芦丁作对照品，三氯化铝作显色剂，测定波长在420nm，使用分光光度计比色测定吸光度，
计算茶藨子中黄酮含量；采用正交设计来确定各试验因素对茶藨子中总黄酮含量的影响水平，测定其回收率。实
验结果表明：提取条件为用70%的乙醇定容至100ml，回流2h，回流2次；各因素的最佳水平为：样品液用70%
的乙醇定容，加入1.5ml AlCl3，50℃，加热40min。平均回收率为98.76%。
关键词：茶藨子；总黄酮；正交设计；含量测定
Assay Study on Total Flavanoids in Chabiaozi(Ribes mandshuricum Komarov)
ZHANG Gui-lan
(College of Chemistry and Chemical Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China)
Abstract ：Objective: Assay study on total flavanoids to provide scientific basis for future developing and utilizing Chabiaozi
resources. Methods: The optimum extraction conditions were established. The contents of total flavonoids were assayed, with
rutin as control and aluminum trichloride as colorimetric reagent by clorimetric assay at 420 nm. By orthogonal design test, the
factors effect levels were ascertained. The reclaim coefficient was determined. Result: The optimum extraction conditions are:
2 h and twice with 70% ethanol in extraction volume 100 ml. The optimum conditions are: addition amount 1.5ml AlCl3, heating
for 40 min at 50℃. The average reclaim coefficient is 98.76%.
Key words：Chabiaozi；t tal flavonoids；orth gonal design test； termination
中图分类号：O623.54 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)11-0506-03　　
收稿日期：2006-07-05
作者简介：张桂兰(1965-)，女，副教授，硕士，主要从事固体废弃物资源化利用、废水处理技术的研究。
茶藨子，也叫黑加仑，哈熊果，虎耳草科(Ribes
mandshuricum Komarov)茶属的一种多分枝落叶灌木，
是一种野生植物的果实。果实成熟时为黑色圆形或卵圆
形，大小与小檗相似。茶藨子喜生于河谷林缘，灌木
丛中，广泛分布于伊犁地区和阿勒泰地区山谷，产量
较大[1]。
新疆人民自古以来不仅将茶藨子作为红色和黑色染
料，也将其作为维吾尔医药上常用的一种药物。它除了
有降血压、治疗月经不调、补血、活血、降血脂等作
用外，还对赤白痢疾、关节炎、肾炎等症疗效甚佳。
而黄酮类化合物是茶藨子的主要功能性成分之一[1]。
黄酮类化合物广泛分布在植物界中，在植物的叶子
和果实中少部分以游离形式存在，大部分与糖结合成苷
类以糖配基的形式存在。黄酮类化合物是一种生理活性
物质，具有降低血压、防止动脉硬化、抗氧化，抗
衰老以及增强机体免疫力等功能。三氯化铝与黄酮类化
合物作用后，生成黄色络合物[2]。目前国内尚未发现有
关茶藨子中黄酮类化合物测定的报道，本研究将对更有
效的开发利用该物可能起到一定的指导作用。
1 材料与仪器
1.1样品
茶藨子的干燥成熟果实，磨碎，过120目筛备用。
1.2对照品
芦丁由中国药品生物制品检定所提供，标示供含量
测定使用，标号为080-9303。
1.3试剂
9 5 %乙醇、乙酸钠、石油醚均为分析纯。
1.4仪器
722型分光光度计 上海第三分析仪器厂。
2 方法与结果
2.1对照品溶液的制备
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即得芦丁对照液，浓度为0.27mg/ml。
2.2测定波长的选择
精密量取芦丁对照液1ml，用50%乙醇稀释至5ml，
分别精密加入3ml 2.5% AlCl3，及5ml 10% NaAc溶液，
摇匀后室温放置40min，在400～500nm波长之间测定吸
收谱，结果最大吸收波长为420nm。
2.3标准曲线的制作与回归方程的建立
精密量取芦丁对照液0.20、 .40、 .60、 .80、
1.00ml，分别置于50ml容量瓶中，均用50%乙醇稀释至
5ml，按2.2项操作依照“精密加入3ml 2.5% AlCl3溶液
及5ml 10%的摇匀后室温放置40min”测定，设空白对
照，于420nm处测定吸光度(A)，以吸光度A为纵坐标，
浓度x为横坐标制标准曲线，得回归方程A=28.01x+0.0182
R=0.977(n=5)。结果表明，芦丁含量在0.0108～ .054mg范
围内与吸光度线形关系良好。如图1所示。
标准曲线计算总黄酮含量。结果见表1。
0 0.010.020.030.040.050.06
吸
光
度
浓度(mg/ml)
图1 标准曲线
Fig.1 Stand curve
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
2.4供试品溶液的制备
精密称取茶藨子精粉约3g，置于100ml容量瓶中，
以50%乙醇溶解，定容。所得溶液转移至索氏提取器
中，回流2 h，回流2次，所得溶液合并。再蒸除乙
醇，所得溶液转移至50ml容量瓶中，以50%乙醇定容。
容量瓶标号为1。
精密称取茶藨子精粉约3g，置于100ml容量瓶中，
以70%乙醇溶解定容。按以上相同步骤回流，蒸馏，
定容。容量瓶标号为2。
精密称取茶藨子精粉约3g，置于100ml容量瓶中，
以90%乙醇溶解定容。按以上相同步骤回流，蒸馏，
定容。容量瓶标号为3。
2.5样品中总黄酮的测定
从1、2、3号容量瓶中各精密量取供试液2ml，用
乙醇稀释至5ml，按2.2项操作依照“精密加入3ml AlCl3
溶液及5ml 10% NaAc溶液，摇匀后室温放置40min”
测定，设空白对照，于420nm处测定吸光度(A)，按
标号 1 2 3
A 0.011 0.358 0.006
总黄酮含量(mg/ml) 0 0.0121 0
表1 茶藨子样品中总黄酮的含量测定
Table 1 Content determination of total flavonnoids in sample
of Chabiaozi
实验结果表明：用70%乙醇作溶剂较好。
2.6脂溶性杂质实验
将2号容量瓶中溶液分成两份，取出一份用石油醚
萃取，然后按2.5项步骤在420ml处测吸光度，计算总
黄酮含量。结果见表2。
未经萃取 已萃取
A 0.306 0.642
总黄酮含量(mg/ml) 0.0103 0.0222
表2 脂溶性杂质实验
Table 2 Determination of fat soluble impurity
实验结果表明：用石油醚萃取出脂溶性杂质，得
到的溶液中总黄酮含量较大。
2.7正交试验
设计一个正交试验[3]，来确定各试验因素对检测样
品总黄酮含量的影响。
水平 A温度(℃) B时间(min)C乙醇含量(%) DAlCl3加量(ml)
1 30 20 50 1.5
2 50 40 60 3
3 70 50 70 5
表3 考察因素及水平
Table 3 Factors and levels of orthogonal design test
根据试验要求，取9个25ml容量瓶，分别加入供
试品溶液各2ml，按9个试验条件，分别加入AlCl3溶
液1.5、3、5ml；再分别各加入NaAc 5ml，然后按试
验条件分别以50%、60%、70%的乙醇定容，再分别
加热到30、50、或70℃，维持20、40或50min。所
得溶液冷却至室温，然后逐行空白，测其吸光度。所
得结果如表4所示。
试验结果表明，各因素的一个最佳水平即最佳组合
条件为A2B2C3D1，即样品液用70%的乙醇定容，加入
1.5ml AlCl3，加热到50℃，加热40min，所得结果最佳。
2.8回收率实验
精密量取样品液5份，每份各1ml，分别加入芦丁
液0、0.3、0.5、0.7、1.0ml；按2.3项操作，测定吸
光度，得平均样品回收率为98.76%。结果见表5。
3 讨 论
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便，回收率高。
参考文献：
[1] 杨普香, 黎小萍. 桑叶茶黄酮类化合物的测定方法研究[J]. 食品科
学, 2001, 22(10): 81-82.
[2] 马木提库尔班. 新疆茶藨子中紫红色素的萃取工艺和稳定性研究[J].
食品科学, 2002, 23(12): 85-87.
[3] 滕素珍, 姜炳蔚. 数理统计[M]. 2版. 大连: 大连理工大学出版社,
1996: 344-358.
[4] 杜薇, 刘国文. 刺梨总黄酮的含量测定及资源利用[J]. 食品科学,
2003, 24(1): 112-114.
试验号 A B C D 吸光度
1 1(30) 1(20) 1(50%)1(1.5ml)0.107
2 1(30) 2(40) 2(60%)2(3ml) 0.159
3 1(30) 3(50) 3(70%)3(5ml) 0.281
4 2(50) 1(20) 2(60%)3(5ml) 0.172
5 2(50) 2(40) 3(70%)1(1.5ml)0.198
6 2(50) 3(50) 1(50%)2(3ml) 0.125
7 3(70) 1(20) 3(70%)2(3ml) 0.261
8 3(70) 2(40) 1(50%)2(5ml) 0.154
9 3(70) 3(50) 2(60%)1(1.5ml)0.213
K1 0.547 0.540 0.386 0.618
K2 0.595 0.611 0.544 0.545
K3 0.628 0.619 0.840 0.607
R 0.081 0.079 0.454 0.073
表4 试验方案及结果分析因素表(420nm)
Table 4 Test scheme and analysis of results
1 2 3 4 5
样品(ml) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
芦丁(ml) 0.0 0.3 0.5 0.7 1.0
吸光度 0.179 0.349 0.486 0.5980.720
理论值 0.00520.01150.01570.0220.0262
计算值 0.00570.01180.01670.02070.025
回收率(%) 91.23 97.46 94.01 106.28104.8
表5 回收率实验
Table 5 Recovery experiments results
3.1实验结果表明，茶藨子中含有黄酮，为其具有降
血压，将血脂作用提供了理论依据。提示可以以茶藨
子为原料，加工成各种保健食品。
3.2实验方法表明，用乙醇索氏提取法，测定方法简
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信 息
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《细胞》子刊解析植物激素研究
来自杜克大学生物学系，明尼苏达州大学园艺系及微生物植物基因组研究所的研究人员发现水杨酸(salicylic
acid，SA)能通过抑制生长素信号途径影响植物病原体生长，从而证明这种对于生长素信号的抑制效应是SA介导疾
病抗性机制的一个重要组成部分。这一研究成果公布在《Current Biology》杂志上。
领导这一研究的是杜克大学的华裔女科学家董欣年博士，毕业于武汉大学学士，在哈佛大学完成博士后研究，
其主要研究方向为水杨酸和茉莉酸介导的信号转导途径及其相互作用(Cross-talk)机制，研究成果曾发表于《Cell》
《Science》杂志。
植物激素是植物新陈代谢产生的一系列天然化合物，它能以极微量的浓度影响植物细胞的分化、分裂、伸长、
发育及植物整体形态的建立、生理生化活动等。
狭义的植物激素仅指植物体内的天然激素物质；近年来随着生物化工的发展，人工合成了许多类似物则称为植
物生长调节剂。故广义的植物激素包含了植物生长调节剂。植物激素包括：生长素家族、细胞分裂素家族、赤
霉素、乙烯和生长抑制素。其中前三者为正向激素，后两者则为负向激素。
其中生长素(auxin)，即吲哚乙酸，是最早发现的促进植物生长的激素。这种激素对植物生长的几乎方方面面都
起作用，在分子水平上，生长素通过与TIR1-like F box蛋白的直接接触诱导基因表达，从而解除了Aux/IAA家族
的转录抑制作用。
越来越多的研究表明许多植物病原体可以自我产生生长素，或者操纵宿主生长素合成来介入宿主的正常发育过
程。作为回应，植物可能会在这个侵染过程中作出防御，抑制生长素的信号传导。植物如果过量积累了防御信号
分子水杨酸(salicylic acid，SA)就会经常呈现出形态学上的表型：生长素缺陷或者生长素迟缓突变，这说明SA也
许参与了生长素应答的过程。
从而，研究人员利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)ATH1 Ge eChip(Affymetrix)对S在生长素信号途径中的作用
进行了全面的研究分析，结果发现SA能引起生长素基因，譬如TIR1受体基因的全面抑制，从而增加了Aux/IAA
抑制蛋白的稳定性，减少了生长素的应答。研究人员认为这种对于生长素信号的抑制效应是SA介导疾病抗性机制
的一个重要组成部分。