全 文 ：56
第 1 8 卷 第 1 期
2016 年 1 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 18 No. 1
Jan .，2016
微信公众号：lnzyydxxb（或扫左侧二维码关注）
投稿平台：http://lzxb.cbpt.cnki.net
熊果酸是一种天然 - 香树脂醇型五环三萜类
化合物，生物活性广泛，尤其在护肝、抗肿瘤、抗
菌、抗病毒等方面有显著的作用 [1-3]。但熊果酸水
溶性差，口服吸收不好，生物利用度低 [4]，使其在
临床上的应用受到限制。自微乳给药系统可显著
提高难溶性药物的溶解度，可作为难溶性和难吸
收药物的优良载体 [5-6]。本实验制备了用于静脉
注射的熊果酸自微乳冻干制剂，并对其进行体外
评价。
1 材料与仪器
Lichrospher C18 柱（5 μm，4.6 mm×200 mm，
江苏汉邦科技有限公司）；高效液相色谱仪（美国
Waters 公司）；BP211D 电子天平（德国赛多利斯
公司）；85-2 型恒温磁力搅拌器（郑州长城科工贸
有限公司）；LGJ-10 冷冻干燥机（北京松源华兴科
技发展有限公司）；JEM-100CX Ⅱ透射电镜（日本
电子公司）；Zeta 电位及纳米粒分析仪（Beckman
Coulter）；pHB-4 便携式 pH 计（上海伟业仪器厂）；
NDJ-4 旋转黏度计（上海精密科学仪器有限公
司）；DDSJ-308A 电导率仪（上海仪电科学仪器股
份有限公司）；中链甘油三酸酯（MCT，铁岭北亚
药用油有限公司）；阿贝折光仪（石家庄光学仪器
厂）；聚乙二醇 15 羟硬酯酸酯（Solutol HS15，德国
BASF 公司）；无水乙醇（Alcohol，南京化学试剂有
限公司）；甘露醇（明月海藻集团）；透析袋（截留
相对分子质量 8000~14000）（上海易佰聚经贸有
限公司）；磷酸二氢钾（天津市广成化学试剂有限
公司） ；氢氧化钠（天津市广成化学试剂有限公
熊果酸自微乳冻干制剂体外评价
孙丹丹，闫雪生，徐新刚，于蓓蓓，生立嵩
（山东省中医药研究院，山东 济南 250014）
摘 要：目的：制备熊果酸自微乳冻干制剂并进行体外评价。方法：制备熊果酸自微乳冻干制剂，考察其形态、
粒径分布、Zeta电位、pH值、电导率、折光率、黏度、稳定性及体外释放度等。结果：熊果酸自微乳冻干制剂在透射
电镜下成球状或类球状，平均粒径为34.5 nm，Zeta电位为-9.72，pH值为5.72，电导率为16.2 μs·cm-1，折光率为
1.3354，黏度为2.4 mPa·s，冻干制剂在6个月内稳定性良好，与药物溶液相比，熊果酸自微乳制剂在体外具有一定缓
释效果。结论：熊果酸自微乳冻干制剂物理和化学稳定性良好，体外释药表明熊果酸自微乳制剂呈现一定的缓释效
果。
关键词：熊果酸；自微乳；体外评价
中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2016) 01- 0056- 04
收稿日期：2015-07-14
基金项目：山东省科技发展计划项目（2011GSF11902）
作者简介：孙丹丹（1985-），女，山东威海人，研究实习员，硕士，研究方向：中药制剂及新剂型研究。
In Vitro Evaluation of Ursolicacid Self-microemulsifying
Preparations After Freeze-drying
SUN Dandan，YAN Xuesheng，XU Xingang，YU Beibei，SHENG Lisong
（Shandong Academy of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250014，Shandong，China）
Abstract：Objective：To investigate the preparation and in vitro evaluation of Ursolicacid（UA）
self-microemulsion after freeze-drying. Methods：The quality of the UA self-microemulsion was
evaluated after freeze-drying. Including partical size and its distribution，configuration，Zeta potential，
pH，viscosity，refractive，conductivity，releasing characteristic in vitro and stability. Results：The self-
microemulsion was spheroidal shape through observing by transmission electron microscopy，the mean
partical size was 34.5 nm，the Zeta potential was -9.72，the pH value was 5.72，the conductivity was
16.2 μs·cm-1，the refractive was 1.3354，the viscosity was 2.4 mPa·s，the stability test showed
that the properties of the preparation were stable in six mounths after freeze-drying，and releasing
characteristic in vitro showed prolonged release characteristic. Conclusion：The stability experiments
indicate that the physical and chemical stability of the UA self-microemulsion is favorable after freeze-
drying. Comparing with UA solution，UA self-microemulsion exhibited a certain delayed release
profile.
Keywords：Ursolicacid；self-microemulsion；in vitro evaluation
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2016.01.018
57
1 8 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
司）；泊洛沙姆 Kolliphor P 407（上海运宏化工制
剂辅料技术有限公司）；泊洛沙姆 Lutrol F68（上
海运宏化工制剂辅料技术有限公司）；泊洛沙姆
188（上海运宏化工制剂辅料技术有限公司）；十
二烷基硫酸钠（SDS，天津市广成化学试剂有限公
司）；吐温 80（Tween 80，天津市广成化学试剂有
限公司）；熊果酸对照品（批号：110742-200518，
中国药品生物制品检定所）；熊果酸原料药（实验
室自制，纯度 99%）。
2 方法与结果
2.1 熊果酸HPLC分析方法的建立[7]
2.1.1 色谱条件
Lichrospher C18 色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），
流动相乙腈 - 水（90∶10），流速 1.0 mL·min-1，检测
波长 210 nm，柱温 35 ℃，进样量 10 μL。
2.1.2 方法学验证
精密称取熊果酸对照品适量，用甲醇配制
4.38、10.96、21.91、32.87、43.82、54.78、65.74、76.69、
87.65、98.60、109.56、120.52 mg·L-1 系列质量浓度
溶液，进样测定，以峰面积为纵坐标，质量浓度为
横坐标，得回归方程 Y=8056X-3213.7（r=0.9995），
线性范围 4.38~120.52 mg·L-1。加样回收实验，
高、中、低 3 种浓度的回收率为 100.10%~102.88%
（n=3），日内精密度的 RSD 均小于 2%（n=3），24 h
稳定性实验，RSD 为 2.08%，表明该溶液在 24 h 内
稳定性良好。
2.2 熊果酸自微乳冻干制剂的制备
熊果酸自微乳冻干制剂的制备工艺：按照处方
比 例 m（MCT）∶m（HS15）∶m（Alcohol）=12.5∶
62.5∶25，称取各成分共 1 g，加入 6 mg 熊果酸，超声
溶解，得到熊果酸自微乳，在 37 ℃、200 r/min 磁力搅
拌下滴加到 50 mL 蒸馏水中，加入 8% 甘露醇为支架
剂，分装于西林瓶中，在 -80 ℃条件下快速预冻 3 h，
干燥 12 h，即得。
2.3 熊果酸自微乳冻干制剂的体外评价
为确保熊果酸静脉注射用自微乳的质量、安全
性，本部分对熊果酸自微乳冻干制品的形态、粒径分
布、Zeta 电位、pH 值、电导率、折光率、黏度、稳定性
及体外释放度等方面进行了研究和评价。
2.3.1 显微形态观察
熊果酸自微乳冻干制剂加入原体积蒸馏水再
分散后，室温条件下，滴加在铜网上，用质量分数为
2.0% 的磷钨酸钠液染色，用滤纸吸走多余的液体，
自然干燥后在 EM-100CX Ⅱ透射电镜下观察并拍摄
照片，成球状或类球状，如图 1。
图 1 熊果酸自微乳冻干后形态（×120000）
2.3.2 冻干制剂粒径测定及分布
取 3 批冻干制剂，加入原体剂蒸馏水再分散
后，测再分散液的粒径及分布，结果为粒径 1 为
35.2 nm，粒径 2 为 34.4 nm，粒径 3 为 34.0 nm，平均粒
径为 34.5 nm，见图 2。
样品 1 冻干制剂粒径及分布（35.2 nm）
样品 2 冻干制剂粒径及分布（34.4 nm）
样品 3 冻干制剂粒径及分布（34.0 nm）
图 2 3 批样品冻干后粒径及分布
2.3.3 冻干制剂Zeta电位
Zeta 电位是微粒表面荷电性质与荷电大小
的标志，是表征分散体系稳定性的重要指标。取
3 批冻干制剂的再分散溶液测其电位结果为 Zeta
电位 1 为 -8.64 mV，Zeta 电位 2 为 -11.03 mV，Zeta
电位 3 为 -9.49 mV，平均 Zeta 电位为 -9.72 mV，见
图 3。
样品 1 冻干制剂电位 -8.64 mV
58
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 8 卷
样品 2 冻干制剂电位 -11.03 mV
样品 3 冻干制剂电位 -9.49 mV
图 3 3 批样品冻干制剂 Zeta 电位
2.3.4 冻干制剂理化性质测定
取三批熊果酸自微乳冻干制剂再分散溶液，分
别测其电导率、折光率、黏度及 pH，结果示电导率为
（16.2±0.28）μs·cm-1，折 光 率 为（1.3354±0.12），
黏度为（2.4±0.16）mPa·s，pH 为（5.72±0.30）。
2.3.5 熊果酸自微乳冻干制剂稳定性考察
取三批熊果酸自微乳冻干制剂，用加速实验
法 [（40 ℃ ±2）℃，相对湿度（75±5）%]，分别考
察 0、1、2、3、6 个月冻干样品再分散溶液的外观性
状、粒径、含量等，结果见表 1。
表 1 熊果酸自微乳冻干制剂稳定性考察结果
样品 时间（月） 外观性状 粒径（nm） 含量（mg/g）
熊果酸自
微乳冻干
制剂
0 无色澄明 34.2 6.00
1 无色澄明 33.9 5.95
2 无色澄明 35.7 5.99
3 无色澄明 38.9 5.93
6 无色澄明 42.0 5.90
熊果酸自微乳冻干剂稳定性加速实验结果表
明其稳定性良好，考察的各项指标均无明显变化，说
明熊果酸自微乳制剂冻干后，可以提高其物理和化
学稳定性。
2.3.6 熊果酸自微乳冻干制剂体外释放度的测定
（1）确定释放介质。对于难溶性药物，可
通过在释放介质中加入适量表面活性剂或有机
溶剂来满足漏槽条件 [8]。本试验首先测定了熊
果 酸 在 不 同 浓 度 的 SDS、Kolliphor P 407、188、
Lutrol- F68、吐 温 80 水 溶 液 及 磷 酸 盐 缓 冲 液
（PBS）中的溶解度，熊果酸在表面活性剂的 PBS
溶液中的溶解度明显高于表面活性剂的水溶液，
含 1% SDS（w/v）的 PBS 溶液对熊果酸的溶解度
较高，能够满足漏槽条件，乳剂体外释药试验为
了模拟人体内条件，可采用 PBS 作为释放介质，
最终确定选用含 1% SDS（w/v）的 PBS 溶液做释
放介质。因此最终确定释放条件为：温度：（37±
1）℃、pH 值：7.4、释放介质：含 1% SDS（w/v）
的 PBS 溶液。
（2）透析袋对药物的吸附。以释放介质为
溶剂，配制熊果酸溶液 100 mL，取样测定释放
介质中药物浓度 C0，将 2.5 cm×15 cm 透析袋浸
入其中 24 h 后，取出透析袋，控干液体，使释放
介质的体积仍维持 100 mL，再取样测定释放介
质中药物的浓度 C1。结果 C0=78.30 μg·mL
-1，
C1=77.92 μg·mL
-1，因此可以认为透析袋本身
对熊果酸无吸附。
（3）体外释放度的测定。本文采用总体液
平衡反相透析法 [9-10] 考察熊果酸静脉注射自微
乳制剂的体外释药行为。以含 1% SDS 的 PBS 溶
液（pH=7.4）为释放介质，将 10 个大小形状相同，
内含 l mL 释放介质的透析袋（2.5 cm×15 cm）置
于其中，37 ℃条件下平衡过夜。精密称取熊果
酸自微乳 5.3 g（相当于熊果酸 32 mg），磁力搅拌
下加入释放介质中，并维持 37 ℃，分别于 10 min、
20 min、30 min、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h 取
出 1 个透析袋，测定透析袋内药物浓度 Ci。其中
1 个透析袋在释放介质中保留 24 h 后测定熊果酸
浓度 C24，作为熊果酸从乳剂中完全释放后，释放
介质中熊果酸的总浓度。按累积释放度 =Ci/C24×
100％，计算累积释放百分率。另以释放介质为溶
剂，配置相同浓度（80 μg·mL-1）的熊果酸溶液，
其它同熊果酸自微乳制剂处理方法。释放曲线如
图 4 所示。
图 4 熊果酸自微乳制剂及熊果酸 PBS 溶液的体外释放曲线
与熊果酸原料药相比，熊果酸自微乳具有明显
的缓释作用，这是由于自微乳液滴中，熊果酸大量分
布在内油相和乳化界面膜上，药物的释放必须经过
油相—界面膜—外水相的过程，从而延缓了药物的
释放，达到缓释效果。
3 讨论
熊果酸的溶解性极差，溶解速度慢，口服生
物利用度低，本实验将熊果酸制成可供静脉注射
的自微乳冻干制剂，通过对其理化性质的考察，
符合静脉注射剂的要求，加速稳定性实验对熊果
酸自微乳冻干制剂再分散溶液的形态、粒径、含
量等进行了考察，结果表明其粒径和含量变化很
小，冻干后，熊果酸自微乳化系统物理和化学稳
定性良好。
熊果酸自微乳制剂的释放度考察采用的是总
体液平衡反相透析法，反向透析法在能保证满足漏
槽条件的前提下，由于直接与释放介质接触并被大
量稀释，能够更好地模拟药物注射到达体内的状态，
与熊果酸原料药相比，熊果酸自微乳具有明显的缓
释作用。◆
参考文献
[ 1 ] 申月明，朱萱，张焜和，等 . 熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的
影响 [ J ] . 中华肝脏病杂志，2008，16 ( 4 )：298-301.
[ 2 ] 张新华，朱萱 . 熊果酸药理学的最新研究进展 [ J ] . 中国中西
医结合杂志，2011，31 ( 9 )：1285-1289．
[ 3 ] 杨新河，吕帮玉，毛清黎 . 熊果酸的药理研究进展 [ J ] . 贵阳中
医学院学报，2006，28 ( 6 )：52-54．
59
第 1 8 卷 第 1 期
2016 年 1 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 18 No. 1
Jan .，2016
微信公众号：lnzyydxxb（或扫左侧二维码关注）
投稿平台：http://lzxb.cbpt.cnki.net
巴天酸模（Polygonum Rumex Patientia L.）系蓼
科酸模属植物，又名洋铁酸模、牛西西、土大黄等，在
我国东北、华北及西北各省区均有分布。其根肥厚，
显黄色，是常用的中草药，具凉血止血、清热解毒、杀
HPLC-MS/MS 法测定巴天酸模中 7 个蒽醌类成分含量
王鹏 1，2，王晓明 1，潘桂湘 1，冯红 1
（1.天津中医药大学，天津市现代中药国家重点实验室，天津 300193；2.天津国际生物医药联合研究院，天津 300457）
摘 要：目的：采用HPLC-MS/MS法测定巴天酸模中7个蒽醌类成分的含量。方法：采用SB-C18 色谱
柱（4.6 mm×100 mm，1.8 μm），流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）。梯度洗脱程序为：0~8.5 min，95%~95% A；
8.5~8.51 min，95%~40% A；8.51~12 min，40%~40% A。流动相流速为0.4 mL/min，柱温为20 ℃，进样量为10 μL。
结果：大黄酸、芦荟大黄素在2.5~50 ng/mL，大黄素、大黄素甲醚在10~250 ng/mL，大黄酚在25~1000 ng/mL，大黄
素-8-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷在10~500 ng/mL范围内，进样量与峰面积具有良好线性关系（r2
均>0.98）。同时，其平均加样回收率在90.32%~106.75%（n=6）。结论：该方法简便、准确、灵敏，可用于巴天酸模中
蒽醌类成分的含量测定。
关键词：液质联用；巴天酸模；蒽醌；含量
中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2016) 01- 0059- 03
收稿日期：2015-07-15
基金项目：国家自然基金项目（81173523、81303182）；国家科技支撑计划项目（2011BAI07B08）
作者简介：王鹏（1988-），男，河北石家庄人，硕士，研究方向：药物分析。
通讯作者：潘桂湘（1976-），男，福建泉州人，副研究员，博士，研究方向：药物分析。
Determination of Seven Anthraquinones Constituents in
Polygonum Rumex Patientia L. by HPLC-MS/MS
WANG Peng1，2，WANG Xiaoming1，PAN Guixiang1，FENG Hong1
（1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin State Key
Laboratory of Modern Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Tianjin
International Joint Academy of Biomedicine，Tianjin 300457，China）
Abstract：Objective：To establish a HPLC-MS/MS method for determining the content of seven
anthraquinones constituents in Polygonum Rumex Patientia L. Methods：A SB-C18 column（4.6
mm×100 mm，1.8 μm）was used with a mobile phase of acetonitrile（A）-0.1% acetic acid in water
（B）. The gradient elution program was as follows：0~8.5 min，95%~95% A；8.5~8.51 min，95%~40%
A；8.51~12 min，40%~40% A. The column temperature was set at 20 ℃ . The flow rate was kept at 0.4 mL/
min and the sample volume was 10 μL. Results：All calibration curves had good linearity（r2>0.98）
over the concentration ranges of 2.5~50 ng/mL for rhein and aloe rhein，10~250 ng/mL for emodin and
physcion，25~1000 ng/mL for chrysophanol，10~500 ng/mL for emodin-8-O-glucoside and physcion-8-
O-glucoside. And the average recoveries were all ranged in 90.32%~106.75%（n=6）. Conclusion：The
method is simple，accurate and sensitive for the determination of anthraquinones constituents in Polygonum
Rumex Patientia L..
Keywords：HPLC-MS/MS；Polygonum Rumex Patientia L.；anthraquinones；content
[ 4 ] 赖玲，杨光，杨昕 . 熊果酸固体分散体的制备与体外溶出度测
定 [ J ] . 医药导报，2005，24 ( 6 )：517-518．
[ 5 ] PoutonCW. Formulationof self-emulsifyingdrugdelivery system[ J ] .
Adv Drug Deliv Rev，1997，25 ( 1 )：47.
[ 6 ] Bogman K，Ernebrand F，Alsenz J，et al. The role of surfactants in
the reversal of active transport mediated by multidrug resistance
proteins[ J ] .J Pham Sci，2003，92 ( 2 )：1250-1261.
[ 7 ] 孙丹丹，徐新刚，生立嵩，等 . 星点设计 - 效应面法优化熊果
酸自微乳给药系统 [ J ] . 中国实验方剂学杂志，2013，19 ( 8 )：
46-50.
[ 8 ] Panayiotis P Constantinides，Karel J Lambert，Alex K Tustian，
et al.Formulation development and antitumor activity of a filter-
sterilizable emulsion of paclitaxel[ J ] . Pharm Res，2000，17 ( 2 )：
175-181.
[ 9 ] 刘颖，张萍，冯年平，等 . 冬凌草甲素自微乳给药系统的体外释
放动力学研究 [ J ] . 中国中药杂志，2008，33 ( 18 )：2049-2051.
[ 10 ] 和平 . 齐墩果酸静脉注射乳剂的研制 [ D ] . 郑州：河南大学，
2009.
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2016.01.019