全 文 ：收稿日期:2009-03-12
基金项目:海南省教育厅资助项目（Hjkj2008-27）；国家大学生创新性实验项目（081165814）
酸性染料比色法测定海南木莲中的总生物碱
毕和平， 李行璐， 刘 炜， 祁晓炜
摘 要：为了建立测量海南木莲中总生物碱含量的方法，采用了酸性染料比色法，并对线性范
围、加标回收率、精密度和稳定性等项目进行了方法学考察. 线性方程为 A = 0.038 1 C - 0.006 37，
r = 0.999 8. 结果表明，海南木莲叶中生物碱的平均含量为 0.179 %，RSD = 0.84 %（n = 5），枝中
平均含量为 0.089 %，RSD = 0.49 %（n = 5）. 本法操作简便，结果准确、可靠，可用于海南木莲的
质量控制.
关键词：海南木莲；酸性染料比色法；生物碱；含量测定
中图分类号：R 284.1 文献标识码：A 文章编号：1671-8747（2009）02-0160-04
（海南师范大学 化学化工学院，海南 海口 571158）
生物碱类化合物是许多中草药的有效成分 ，
其含量的高低与药材的质量密切相关 . 海南木莲
（Manglietia hainanensis Dandy） 为木兰科木莲属植
物，为海南特产，是集观赏与药用为一身的珍贵树
种，海南当地称为龙楠树、绿楠、绿兰等，主要分布
于海南定安、保亭、乐东、琼中、陵水、三亚、东方等
市县 ，属国家三级植物保护种. 文献 曾报道过
海南木莲生药的 TLC 鉴定. 为提供海南木莲用药
的科学依据，本文对其枝和叶中的生物碱含量进行
了测定.
1.1 仪器、试剂与材料
PHS-3C 型酸度计（上海大普仪器有限公司）；
T6 紫外可见分光光度计 （北京普析仪器厂 ）；
UV757型紫外可见分光光度计（上海分析仪器厂）；
FA1604 电子天平 （上海精科天平厂）；RE-52A 型
旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；D2F-200 型真
空干燥箱 （上海浦东荣丰科学仪器有限公司 ）；
FZ102 微型植物粉碎机（天津斯特仪器有限公司）；
Determination of Total Alkaloids in Manglietia hainanensis
Dandy with Acid Dye Colorimetry
BI Heping， LI Xinglu， LIU Wei， QI Xianwei
Abstract：To establish a method for quantitative determination of the total alkaloids in Manglietia hainanensis Dandy,
acid dye colorimetry was used and methodology was examined for linear range, average recovery, precision and stabili-
ty. The standard curve was A = 0.0381C - 0.006 37, r = 0.999 8. The average content of leaves was 0.179 %，RSD=
0.84 %(n = 5) and the average content of branches was 0.089 %，RSD = 0.49 %(n =5). The method is accurate, reli-
able, simple, which can be used for quality control of Manglietia hainanensis Dandy.
Key words：Manglietia hainanensis Dandy; acid dye colorimetry; Alkaloids; determination
（College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou 571158，China）
2009年 6月 Journal of Hainan Normal University（Natural Science） Jun. 2009
第 22 卷第 2 期 海南师范大学学报(自然科学版) Vo1.22 No.2
［1-2］
［3-4］
1 实验部分
［5］
第 2期 毕和平等： 酸性染料比色法测定海南木莲中的总生物碱 161
索氏提取器自制.
盐酸小檗碱（中国药品生物制品检定所，纯度
99.99 ％），溴甲酚绿，邻苯二甲酸氢钾，柠檬酸，柠
檬酸钠，氯仿，浓氨水，氢氧化钠等，所用试剂均为
国产分析纯. 所用水为蒸馏水.
海南木莲枝和叶于 2009 年 3 月采集于海南省
乐东县尖峰岭，经海南师范大学生命科学学院钟琼
芯高级实验师鉴定为 Manglietia hainanensis Dandy
的枝和叶. 自然晾干，粉碎备用.
1.2 试验方法
1.2.1 样品中生物碱提取
称取干燥的海南木莲叶和枝粉末各 10.0 g，加
浓氨水约 3 mL 浸湿，拌匀，加氯仿 200 mL，用索氏
提取器提取 5h. 提取液减压浓缩后，转移到 100 mL
容量瓶中用氯仿定容.
1.2.2 缓冲溶液与显色剂制备
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液：准确称量 10.507 g
柠檬酸和 14.705 g柠檬酸钠，用蒸馏水分别溶解于
500 mL的容量瓶中并定容至刻度，得浓度为 0.1 mol/
L的溶液，备用. 分别取 16 mL 0.1 mol/L 的柠檬酸
溶液和 34 mL 0.1 mol/L 的柠檬酸钠溶液放置于
100 mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至 100 mL，得 pH
为 5.4的缓冲溶液.
参照文献 配制溴甲酚绿指示液：精密称取溴
甲酚绿 0.125 g，用 0. 1 mol/L的 NaOH 25. 00 mL溶
解后，加入邻苯二甲酸氢钾 2.55 g，用少量蒸馏水
溶解后，转移至 250 mL的容量瓶中，加蒸馏水定容
至刻度线，摇匀备用.
1.2.3 对照品溶液配制与标准曲线绘制
精密称取盐酸小檗碱 10.0 mg 放入小烧杯中，
用少量蒸馏水溶解后，转移到 50 mL 容量瓶中，用
蒸馏水定容至刻度，得浓度为 200 μg/mL 的对照品
溶液.
精密量取对照品溶液 0.1，0.2，0.3，0.5，0.7，0.9 mL
于分液漏斗中，各加水至 1.0 mL，用吸量管加入 pH=
5.4 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液 5.0 mL，再依次精密加
入溴甲酚绿指示液 2.0 mL，氯仿 10.0 mL，充分振
摇 1 min，放置分层，静置 1h，取氯仿层液在最大波
长处测吸光度，以未加生物碱的氯仿为随行空白. 以
对照品浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准
曲线.
2.1 最大吸收波长选择
准确量取 0.2 mL 对照品溶液，以 1.2.3 项下标
准溶液绘制方法配制溶液，在 350-700 nm波长范围
内进行扫描，以未加生物碱的氯仿为随行空白，选
择最大吸收波长. 结果显示在 410 nm 有最大吸收
值，而空白对照液在 410 nm几乎没有吸收，故选择
410 nm为测定波长. 波长扫描曲线见图 1.
2.2 标准曲线与回归方程
按标准曲线绘制项下的方法测定，标准曲线见
图 2.
实验结果表明，盐酸小檗碱溶液在 2.0-18.0 μg/
mL范围内呈现良好的线性关系. 得回归方程为：
2 结果与讨论
［6］
0.10
0.08
0.06
0.04
0.02
0.00
-0.02
340 400 450 500 550 600 650 700 750
A
波长（nm）
图 1 最大波长扫描曲线图
Fig. 1 UV-visible absorption spectrum of standard
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
A
C/（μg/mL）
图 2 标准曲线图
Fig.2 Calibration curve of berberine hydrochloride
162 海南师范大学学报（自然科学版） 2009年
A=0.038 1C-0.006 37；相关系数 r=0.999 8.
2.3 稳定性实验
准确量取一定体积的标准品溶液，按 1.2.3 项
下的方法制备标准品和样品溶液，在 1~90 min时间
内测定其吸光度变化值，考察对照品溶液和样品溶
液的稳定性. 测定结果见图 3. 实验表明，在本实验
的测定时间内，显色液稳定性良好.
2.4 精密度实验
准确量取 0.4 mL 叶和 1.0 mL 枝的提取液于
分液漏斗中， 余下按照 1.2.3 项下的标准曲线绘制
方法配制溶液，平行测定 5 次，RSD 分别为 0.84 %
（叶）和 0.49 %（枝）.
2.5 加标回收率试验
准确量取海南木莲叶提取液 0.3 mL，共 5 份，
分别加入对照品溶液 0.3 mL，余下按 1.2.3项下的方
法制备叶的供试液，以未加提取液的氯仿为随行空
白，在波长 410 nm 处测定. 同法，准确量取海南木
莲枝 0.5 mL，共 5份，分别加入对照品溶液 0.2 mL，
余下按 1.2.2 项下的方法制备枝的供试液，以未加
提取液的氯仿为随行空白，在波长 410 nm 处测定.
实验结果见表 1和表 2，测定结果表明，海南木莲叶
的平均回收率为 96.4 %，RSD=1.4 %（n=5），枝的平
均回收率为 99.6 %，RSD= 0.86 %（n=5）.
2.6 海南木莲中生物碱含量的测定结果
海南木莲不同部位中的生物碱含量的测定及
计算结果见表 3和表 4.
0.62
0.60
0.58
0.56
0.54
0.52
0.50
20 40 60 80 1000
A
t/(min)
图 3 测定曲线稳定性图
Fig.3 Effect of time on stability of test solution
表 1 叶的加标回收率（n=5）
Table 1 Recovery of matrine added in total alkaloids samples (n=5)
样品 吸光度 试样量（μg） 加标量（μg） 回收量（μg） 回收率（μg） 平均回收率 RSD（%）
1
2
3
4
5
0.425
0.420
0.420
0.417
0.420
54.05
54.05
54.05
54.05
54.05
60
60
60
60
60
113
112
115
116
115
98.6
96.2
96.2
98.9
96.2
96.4 1.4
表 2 枝的加标回收率（n=5）
Table 2 Recovery of matrine added in total alkaloids samples (n=5)
样品 吸光度 试样量（μg） 加标量（μg） 回收量（μg） 回收率（μg） 平均回收率 RSD（%）
1
2
3
4
5
0.316
0.315
0.313
0.315
0.316
44.8
44.8
44.8
44.8
44.8
40
40
40
40
40
85
85
84
85
85
100.3
99.7
98.2
99.7
100.3
99.6 0.86
从测定结果可知，海南木莲叶中的生物碱平均
质量分数为 0.179 %，RSD=0.84 %（n=5）. 枝中的生
物碱平均质量分数为 0.0893 %，RSD=0.49 %（n=
5）. 结果表明，叶中生物碱的含量较高.
本文采用的酸性染料比色法，是根据在一定酸
性条件下，生物碱类与氢离子成盐后与溴甲酚绿结
3 结论
合成有色的络合物而定量显色，可被有机溶剂定量
提取的原理 ，用盐酸小檗碱为标准物质，在 pH
值 = 5.4 的条件下进行测定，从而求得相对总生物
碱的含量. 本法灵敏度高，结果稳定，操作简便，易
于推广应用，可用于海南木莲的的质量控制.
参考文献
［1］
［2］
［3］
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［7-10］
责任编辑：黄 澜
表 3 海南木莲叶中生物碱含量测定结果
Table 3 Determination of total alkaloid of
leaves of Manglietia hainanensis Dandy
样品 A 生物碱含量(%) 生物碱平均值(%) RSD(%)
0.265
0.267
0.270
0.267
0.264
0.178
0.179
0.181
0.179
0.177
0.179 0.84
1
2
3
4
5
样品 吸光度 生物碱含量(%) 生物碱平均值(%) RSD（%）
0.336
0.333
0.332
0.333
0.335
0.089 9
0.089 1
0.083 3
0.089 1
0.089 6
0.089 3 0.49
1
2
3
4
5
表 4 海南木莲枝中生物碱含量测定结果
Table 4 Determination of total alkaloid of
branches of Manglietia hainanensis Dandy
第 2期 毕和平等： 酸性染料比色法测定海南木莲中的总生物碱 163