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.
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〔6
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收稿日期 : 20 0 6 一 07 一 14
酸性染料比色法测定复方颠茄合剂中草若碱含量
傅 翔 , 范尚坦 , 李金 兰 , 张一帆 ,谢宝英 (南京军区福州总医院 , 福建 福州 35 0 25 )
摘要 目的 :研究复方颠茄合剂 中筐营碱的含量测定方 法 。 方法 : 采用 酸性染料比 色法在 p H 6 . 6 磷酸盐缓
冲液条件下测定筐管碱的含量 ,检测 波长 ( 58 9 士 1 ) n m 。 结果 : 筐营碱在 1 , 2 一 7 . 2 卜岁 m L 浓度 范围 内呈线
性 , : 二 0 . 9 9 1 ,平均回收率为 10 0 . 02 % , ( RSD 二 0 . 69 % , n = 4) 。 结论 : 该法准确 、 方便 、灵敏 ,可供该制剂的
含量测定 。 该法关健在于调准 p H , 以免处 方中其它组分干扰测 定结果 。
关键词 酸性染料比 色法 ; 复方颠茄合剂 ;筐营碱 ; 含量
中图分类号 : R g 17 文献标识码 : A 文章编号 : 10 0 6 一 0 ] 1 1 ( 2 0 0 6 ) 0 6 一 0 3 3 4 一 0 3
D e t e r m i n a it o n o f c o n t e n t o f h y o s c y a m i n e i n c o m P o u n d b e l la d o n n a m ix t u r e b y
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a e id ( ly e e o lo r i m e t仃 ; e o m p o u n d b e l la d o n n a m i x t u r e ; h yo s o y a m i n e ; e o n t e n t
复方颠茄合剂为含有剧毒药物成分的口服标准
制剂 。 但 19 91 年版和 20 3 年版的咬中国人民解放
军医疗单位制剂规范》川 中的质量标准仅有对其性
状 、 鉴别反应和检查作出规定 ,而无含量测定 。 迄今
为止对该制剂中的剧毒有效成分蓑若碱尚无定量分
析的报道 。 因此对该制剂建立保证质控和用药安全
的定量分析方法是我院乃至全军医疗单位急待解决
的问题 。 作者就这一问题进行研究 , 寻找出准确 、灵
敏的定量分析法 ,现报道如下 :
1 仪器与材料
U V 一 25 01 P C 紫外可 见分光 光度计 ( 日本岛
津 ) ; 电子分析天平 ;硫酸阿托品 (标准品 , 中国药品
作者简介 : 傅翔 ( 19 7 2 一 ) ,男 ,硕士 ,主管药师 . 卜 I : ( 0 5 9 1 ) 2 2 85 9 4 5 8 ,
E
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.
生物制品检验所 ) ;复方颠茄合剂 (本院制剂 ) ;嗅 甲
酚紫 (上海试剂二厂 ) ; 磷酸二 氢钠 A R 级 ( 上海试
剂二厂 ) ;磷酸氢二钠 AR 级 (上海新华化工厂 ) ;氯
化钠 (江苏南通勤奋制药厂 ) ;氢氧化钠 AR 级 ( 广
东汕头西陇化 工厂 ) 。
2 测定方法与结果
2
.
1 计算 I M 的硫酸 阿托 品 ( C 1 7 H 2 3 N O 3 ) 2 ·
H Z S O
、 相当于 Z M 的蓑若碱 , 即 1卜g 的硫酸阿托品
相当于 0 . 8 5 3卜g 的蓑若碱 , 可用标准 曲线计算复
方颠茄合剂中蓑若碱的含量 [ Z j 。
2
.
2 溶液的配制
2
.
2
.
1 复方.颠茄合剂的配制 50 mL 颠茄配 , 50 撇 J 复
方樟脑配 , smL 聚山梨醋 80 置于配制桶混合均匀 ,再
缓缓加人适量蒸馏水至 l (x义)m L ,搅拌均匀 ’ 。
药学实践杂志 2 0 0 6 年第 24 卷第 6 期 3 3 5
照品溶液的平均吸光度分别为 0 . 5 8 87 , 0 . 7 23 l( 理
论值分别为 0 . 5 7 3 5 , 0 . 7 14 5 ) 。
00 4 7 x + 0 09 5
份 0 . 8
0
.国Và侧采彭
2
.
2
.
2 缓冲液 的配制 p H 6 . 6 磷酸盐缓 冲液 , 按
中国药典中的方法配制 〔’ 二 ,取磷酸二氢钠 1 . 7 4 9 ,磷
酸氢二钠 2 . 7 9 与氯化钠 1 . 7 9 ,加水使溶解成 4 0 m L
即得 。
2
.
2
.
3 嗅 甲酚紫溶液 的配制 将嗅甲酚紫与 p H
6
.
6 的磷酸盐缓冲液配成 4 x lo 一 4 M 的溶液 ,加热使
溶解 ,放冷 ,再用 N a O H 使其 p H 调为 5 . 8 左右 ,为防
止染料 中一些有色杂质被有机溶剂提取而干扰测
定 ,将缓冲液与染料的混合液先以氯仿提取 ,提取液
弃去 ,除去染料杂质后 , 即为嗅甲酚紫溶液 ` · , 〕 。
2
.
2
.
4 硫酸阿托品对照品溶液配制 精密称取在
120 ℃干燥至恒重的硫酸阿托品 (蓑若碱的外消旋体 )
对照品 30 m g ,置 l o m L 容量瓶中用 70 % 乙醇溶解并稀
释至刻度 ,摇匀 ,得 30 m梦 lo nrL 的对照液 ;精密量取
10 mL 30 m岁 lo nrL 的对照液置 lo mL 容量中 ,加水稀释至刻度 ,得 30 峪 / mL 的对照液 ,摇匀备用 厂4 ,5j 。
2
.
3 吸 光 光 谱 的 测 定 精密 吸 取上 述 30 m留
l o m L 的对照品 0 . s m L和样品溶液 10 m L置于 2个
分液漏斗 中 ,分别加 p H 6 . 6 磷酸缓冲液 10 m L , 再加
配好的嗅 甲酚紫溶液 10 m L ,混匀 ,加氯仿 or m L ,振
摇 3m in , 静置 20 m in , 分层 , 再分别用 or m L 氯仿萃
取 3 次 ,合并氯仿液 ,用干燥滤纸过滤氯仿液 ,再用
0
.
I N 氢氧化钠溶液 25 m L 脱色 ,取水相稀释 10 倍 ,
置 I c m 比色杯中 ,用 0 . I N 氢氧化钠溶液作空白 ,在
4 0 0 一 SO0 n m 波长内扫描 , 结果均在 ( 5 8 9 士 l ) n m 波
长处有最大吸收 4 , , 。
2
.
4 标准曲线的制备 精密吸取上述 30 m岁10 毗
对照品液 0 . 1 、 0 . 2 、 0 . 3 、 0 . 4 、 0 . 5 、 0 . 6nIL 分别置于 6 个
分液漏斗中 , 以下按 2 . 3 项自“ 加 p H 6 . 6 缓冲液 10m L ,
再加配好的嗅甲酚紫 10 mL …… ,用 O . NI 氢氧化钠作
空白。 ” 在 ( 589 士 1 ) n m 波长处分别测定其吸光度 ,结果
表明当阿托品浓度在 1 . 2 一 7 . 2协g /mL 范围内具有 良好
的线 性关 系 。 计算得 回归 方程 为 A = 0 . 仪拜 x7 +
0
.
(I旧 5 , r = 0 . 9更) l ,见图 l 。
2
.
5 颠茄配中菠若碱的则定 取不 同批号的颠茄
配溶液 0 . s m L 置于分液漏斗 中 , 以下分别按 2 . 4 项
方法操作 ,在 5 89 n m 处测定吸光度 ,见表 1 。
2
.
6 样品溶液的稳定性 取样品溶液 ,分别于配制
后 。 、 4 、 s 、 2 4 、 3 6 h 测定在 5 8 9 n m 处的吸收度值 , 结
果基本不变 ,说明样 品溶液于 d2 内基本稳定 。
2
.
7 样品的测 定 〔6 一 ’ 〕 精密吸取本院制剂复方颠
茄合剂 10 m L ,上述 3 o m岁 l o o m L 对照品溶液 0 . 4 m L
和 0 . s m L ,分别置于分液漏斗 , 按 2 . 3 项方法操作 ,
在 ( 58 9 士 1 ) n m 波长处测吸光度 , 结果 10 m L 复方颠
茄合剂 吸 光 度 为 0 . 646 6 , 代人 回 归 方程 A 二
0
.
004 7
x + 0
.
0 0 9 5计算 , 结果 见表 2 。 其相应 的对
5 0 1 0 0
加样量 ( 卜 g )
1 5 0 2 0 0
图 l 复方颠茄合剂含量测定标准曲线
表 l 颠茄配中食芸碱的测定结果
批号 含量 ( 协g ) 平均值 (林 g )
0 30 3 04
0 3 1 12 2
0 4 0 1 12
12 1 4 9
12 0
.
20
12 1
.
50
12 1
.
07
表 2 复方颠茄合剂 中颠茄碱含量测定结果
批号 含量 ( 件g ) 平均值 (卜 g )
0 4 0 3 0 7
0 40 4 0 8
04 04 2 5
12 0
.
7 6
1 2 1
.
0 7
1 2 1
.
2 3
12 1
.
0 2
2
.
8 加样回收率测 定 精密吸取已知含量复方颠
茄合剂批号 0 4 0 4 08 的样品 Zm L 4 管 , 分别加人 1 、
2
、
3
、
4 的上述 30 林岁 m L 对照品溶液 ,按 2 . 3 项方法
操作测定 , 结果见表 3 。
表 3 复方颠茄合剂加样回收率测定结果
回收率
渔
0
.
平均回收率
(% )
尺5口 (% )
10()
.
0 2 0
.
6 9
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1gn勺g0C,
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样品量
(协 g )
2 3 84
2 3
.
84
2 3
.
84
2 3
.
84
加人量
( 卜g )
2 5
.
6 6
5 1
.
3 1
7 6
.
9 7
10 2
.
6 2
测得量
(卜 g )
4 9
.
50
7 5
.
9 1
10 0
.
3 1
12 5
.
9 6
2
.
9 精密度试验 分别精密量取 30 m扩 10 m L 对
照品溶液 0 . 2 、 0 . 4 、 0 . 6 m L 置于分液漏斗中 , 按 2 . 3
项方法操作 , 在 ( 5 89 士 1 ) n m 波长处分别测定其吸
光度 ,每天测定 5 次 ,连续测定 5 次 。 计算各浓度的
日内 RS D 和 日间 R SD 。 结果见表 4 。
表 4 精密度试验结果
N
o
.
C (卜 g / m L )
R SD ( % )
日 内 日 间
1 2
.
4 0 0
.
9 1
.
2
2 4
.
80 0
.
5 0
.
8
3 7
.
2 0 0
.
7 1
.
0
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1
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.
6
3 讨论
3
.
1 根据药典规定颠茄配 中蓑若总碱 (包含东蓑
若碱等 ) 的含量为 0 . 0 28 % 一 0 . 0犯% , 其中蓑若碱
约占蓑若总碱的 75 . 93 % 一 86 . 79 % ,是 一蓑若总碱
的主要成分 ,本实验即采用测定复方颠茄合剂中的
蓑若碱 ,根据处方复方颠茄合剂中含 5% 的颠茄配 ,
则每 毫 升 复方 颠 茄 合 剂 中 含 蓖 若 碱 10 . 63 -
13
.
89 林g 。
3
.
2 复方颠茄合剂 中蓑若碱含量测定的难点在于
排除制剂中吗啡与樟脑的干扰 , 我们曾采用 了药典
中蓑若碱的测定方法 , 即选用酸性染料嗅甲酚绿溶
液 ,在一定 p H 中使其与蓑若碱 (或阿托品 )定量结
合成有色络合物 ,用氯仿提取后 ,在其最大吸收波长
4 2 0 n m 处测定其吸光度值 ,但实验结果表明标准品
阿托品及吗啡和樟脑在此条件下均有最 大吸收 ,且
三者扫描图谱基本平行 ,无法用二阶导数法排除二
者干扰 一 6 一 9 二
3
.
3 经过进一步探索 ,我们发现采用酸性染料 比色
法在 p H 6 . 6 磷酸缓冲液中食若碱与酸性染料嗅甲
酚紫能够进行选择性络合 ,形成有色络合物可被氯
仿提 取 , 氯仿层 经碱脱色 , 水相用 分光 光度法 在
( 58 9
士 1 ) n m 波长处具有最大吸收 ,且溶液浓度在
1
·
2 一 7
.
2林岁m L 时呈线性关系 ,符合比尔定律 并
且 ,经实验表明 ,在此条件下 , 东 一蓑若碱 、 阿托品以及
吗啡对反应无干扰 其原因经分析可能为嗅甲酚紫
与氮原子结合形成络合物 , 东蓑若碱中氧环 的氧原
子与氮原子形成 N一O 键 , 从而阻碍氮原子与澳甲
酚紫形成络合物 ,此外吗啡分子 中酚经基和叔氮原
子为两性物质 , p K a = 9 . 7 9 5 , PK b = 6 . 12 5 ,在 p H 6 . 6
的条件下成盐溶解 ,形成的络合物分布在水相 。
3
.
4 本法测定结果准确度的关键在于溶液的 p H ,
一般中性 、酸性及弱碱性的物质对分析无干扰 ; 强酸
由于可改变染料溶液或缓冲液 的 p H 而有十扰 , 具
有较高缓冲指数的缓冲液 , 可以消除这种干扰 根
据澳 甲酚紫的 p K a 为 6 . 3 ,缓冲液 p H 可控制在 5 . 8
一 6 . 8 ,我们的经验是缓冲溶液 p H 值 6 . 6 为宜 二 此
外 , 由于复方颠茄合剂中含有苯甲酸 p H 为 4 . 6 , 测
定时应将其调到 p H 二 6 如不预先调节 p H ,直接测
定的话 , 回收率可高达 1 10 . 2% 一 1 13 . 0% ( 8 次测定
平均值 ) , 这是因为 p H 过低染料 分配到氯仿层所
致 ,而调节 p H 后平均回收率为 10 0 . 02 % 。
3
.
5 嗅甲酚紫溶液浓度以 4 x 10 一 “ M 为宜 , 浓度过
高 , 氯仿振摇提取络合物时则易形成难于破坏的乳
化层 用氯仿提取时 ,静置时间要在 20 m in 以上 ,使
氯仿与水层严格分开 ,否则 ,微量的水分可使氯仿层
发生浑浊 ,而且带人水相中的过量染料 ,会影响测定
结果 ;其次 , 氯仿萃取过程中应 防止氯仿挥发 , 否则
会使测定结果偏高 。
3
.
6 本法采用酸性染料 比色法测定了复方颠茄合
剂中食茄碱的含量 ,方法简便 ,结果准确 ,灵敏度高 ,
重现性好 ,为完善制剂的质量标准提供了科学依据
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收稿 日期 : 2 0 0 6 一 0 1 一 13
川
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H P L C 法同时测定复方酮康哇凝胶剂中酮康哩和丙酸氯倍他索的含量
张 倩 , , 宋洪涛 , , 陈雅聘 ’ , 康鲁平 2 (l . 福建医科大学药学院 , 福建 福州 3 5 0 004 ; 2 . 南京军 区福州总 医院药剂科 , 福建
福州 3 5 0() 2 5 )
摘要 目的 : 建立复方酮康哇凝胶剂 中酮康哇和丙酸氯倍他索的含量测 定方法 。 方法 : 采用 高效液相 色谱
— 法 , 色谱柱为 H y p e r s il O D SZ C , 、柱 , 甲醇 一 0 . 2% 三 乙胺作者简介 : 张倩 ( 19 7 2 一 ) , 女 , 硕士 , [一程师 . T e l : 13 8 50 15 3 20 0 , (醋酸调 p H 至 6 . 9 , V : F = 7 5 : 2 5 ) 为流动相 ,流速 1 . 0E 一 m a i l : s o h 0 00 · s o h u · 〔 ` ), , 1 m u m in , 检 坝」波 长 2 3 9 n m 。 结果 : 酮 康哇 在 10 · 0 8 -