全 文 ：2013 年 8 月第 15 卷第 4 期
August 2013，Vol. 15，No. 4
湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine
基金项目:国家自然科学基金项目(31170335) ;武汉市重点科技攻关计划项目(201160823265)。
作者简介:桂春(1989 －) ，女，湖北中医药大学 2012 级硕士研究生，研究方向:中药品种、质量及资源开发研究。
通讯作者:张秀桥(1965 －) ，女，教授，研究方向:中药品种、质量及资源开发研究，电子信箱:qiaoxzh2000@ yahoo． com． cn。
高效液相色谱法测定大叶蛇葡萄胶囊中
蛇葡萄素和杨梅素的含量
桂春，朱志凯，江灿，陈敏，涂媛，张秀桥
(湖北中医药大学药学院，湖北 武汉 430065)
摘要:目的 建立大叶蛇葡萄胶囊中蛇葡萄素、杨梅素含量测定的方法。方法 采用高效液相色谱法，Agilent C18
色谱柱(4． 6mm × 250mm，5μm) ;流动相:乙腈 － 0． 1%磷酸水溶液(15∶ 85) ;检测波长:275nm;流速:1． 0mL /min 。结
果 蛇葡萄素、杨梅素在 0． 241 － 3． 84μg范围内均与峰面积呈良好的线性关系(r蛇 = 0． 9994，r杨 = 0． 9997) ，蛇葡萄素
平均加样回收率为 98． 71%，RSD = 2． 93%;杨梅素平均加样回收率为 98． 45%，RSD = 2． 33%。结论 该方法准确、可
靠，可以用于大叶蛇葡萄胶囊中蛇葡萄素和杨梅素的含量测定。
关键词:大叶蛇葡萄胶囊;蛇葡萄素;杨梅素;含量测定;高效液相色谱法
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A doi:10. 3969 / j. issn. 1008 － 987x. 2013. 04. 11
Determination of Ampelopsin and Myricetin
in Ampelopsis Megalophylla Capsules by HPLC
GUI Chun，ZHU Zhikai，JIANG Can，CHEN Min，TU Yuan，ZHANG Xiuqiao
(College of Pharmacy，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065)
Abstracts:Objective To establish a method for determination of Ampelopsin and Myricetin in Ampelopsis megalophylla capsules．
Methods The separation was preformed on Agilent C18 column(4． 6mm × 250nm，5μm)by HPLC． The mobile phase consisted of acetonitrile
－ 0． 1% phosphoric acid water(15:85)． The diction wavelength was at 275 nm，the flow rate was 1． 0 mL /min，the column temperature was
30℃ ． Result The linear ranges was obtained between 0． 241 － 3． 84μg of both Ampelopsin and Myricetin． The coverage recovery rate of
Ampelopsin was 98． 71% respectively with corresponding RSD of 2． 93%;while the coverage recovery of Myricetin was 98． 45% respectively
with corresponding RSD of 2． 33% ． Conclusion This method is reliable，which can be used for the determination of Ampelopsin and Myr-
icetin in Ampelopsis megalophylla capsules．
Key words:Ampelopsis megalophylla capsules;Ampelopsin;Myricetin;Content determination;HPLC
大叶蛇葡萄胶囊以大叶蛇葡萄总黄酮标准提取物为原料
制成。本课题组前期研究已明确该药材有效部位为黄酮类成
分［1 － 3］，具有较好的降血压效果［4］。为了便于控制该胶囊的质
量，本研究建立了该胶囊中两种主要黄酮类有效成分含量的高
效液相色谱测定方法。
1 材料
1． 1 仪器
SHIMADZU UV － 1800 分光光度计(日本岛津公司) ，DI-
ONEX(P680)高效液相色谱仪，分析天平(瑞士 Metiler Toledo
公司) ，KQ －250B超声波清洗仪(昆山超声仪器有限公司)。
1． 2 试药
蛇葡萄素对照品(自制，高效液相色谱归一法确定其纯度
为 98%) ，杨梅素对照品(自制，高效液相色谱归一法确定其纯
度为 98%) ，大叶蛇葡萄胶囊(课题组自制，规格:0． 304g /粒，
批号:20120612，20120614，20120616) ，甲醇(分析纯) ，乙腈(色
谱纯) ，水为重蒸馏水。
2 方法与结果
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2013 年 8 月第 15 卷第 4 期
August 2013，Vol. 15，No. 4
2． 1 色谱条件及系统适应性
Agilent C18色谱柱(4． 6mm × 250mm，5μm) ;流动相:乙腈 －
0． 1%磷酸水溶液(15∶ 85) ;流速:1． 0mL /min;柱温:30℃;检测
波长:275nm;进样量:10μL。在此色谱条件下，对照品和供试品
的色谱图见图 1。
图 1 对照品和供试品的液相色谱图
2． 2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的蛇葡萄素对照品和杨梅素对照品，分
别加甲醇制成浓度为 0． 481mg/mL的蛇葡萄素溶液和浓度为0． 483
mg/mL的杨梅素溶液，用孔径为 0． 45μm的微孔滤膜滤过即得。
2． 3 供试品溶液的制备
取胶囊内容物研细后称取适量，加甲醇超声提取 30min，滤
过;滤液加甲醇制成 0． 4 mg /mL的溶液，用孔径为 0． 45μm的微
孔滤膜滤过即得。
2． 4 线性关系考察
精密吸取两种对照品溶液各 0． 1、0． 2、0． 4、0． 8、1． 6 mL，加
甲醇定容至 2 mL;各个不同浓度的溶液分别进样 10μL，记录色
谱图，以测得峰面积(A)对进样量(m)进行线性回归。回归方
程分别为:A蛇 = 434． 1 m + 2． 044 1(r = 0． 9994) ;A杨 = 441m －
1． 0755(r = 0． 9997)。结果表明，在 0． 24 － 3． 84μg 范围内蛇葡
萄素、杨梅素的质量均和峰面积呈良好线性关系。
2． 5 精密度试验
取浓度为 0． 096 mg /mL 的蛇葡萄素、杨梅素对照品溶液，
各重复进样 6 次，进样量 10μL。蛇葡萄素峰面积的 RSD 值为
1． 86%，杨梅素峰面积的 RSD 值为 1． 46%，表明仪器精密度良
好。
2． 6 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在 0、2、4、6、8h 不同时间点进样，
进样量为 10μL，测得蛇葡萄素峰面积的 RSD值为 2． 54%，杨梅
素峰面积的 RSD值为 1． 76%，结果表明，供试品在 8h内稳定。
2． 7 重复性试验
取批号为 20120612 的胶囊内容物 6 份，按照供试品制备方
法制成样品溶液，测定含量。蛇葡萄素含量的 RSD 值为
2． 05%，杨梅素含量的 RSD值为 1． 89%。表明本方法重复性良
好。
2． 8 加样回收试验
取已知含量的样品(批号:20120612，蛇葡萄素含量为27． 47
g /粒，杨梅素含量为 5． 36g /粒)6 份，分别加入一定量的蛇葡萄
素、杨梅素对照品，按照上述方法测定、计算。蛇葡萄素平均加
样回收率为 98． 71%，RSD = 2． 93%;杨梅素平均加样回收率为
98． 45%，RSD = 2． 33%。
2． 9 样品含量测定
分别从 3 批样品(批号:20120612，20120614，20120616)各
取 3 份，按照 2． 3 项下方法制成供试品溶液，在上述色谱条件下
测定，结果见表 1。
表 1 3 批样品中蛇葡萄素、杨梅素平均含量
批号
蛇葡萄素平均含量
(mg /粒)
杨梅素平均含量
(mg /粒)
20120612 27． 47 5． 36
20120614 25． 80 4． 69
20120616 26． 47 5． 03
3 讨论
通过紫外分光光度法对两种对照品溶液进行全波长扫描
发现，蛇葡萄素最大吸收波长为 292nm，杨梅素最大吸收波长为
275nm。后通过将同一样品在此两波长下的色谱图比较后发
现，在 275nm波长条件下，二者分离度和峰形均较好，故选择
275nm作为测定波长。
将辅料制成的空白胶囊作为阴性对照，实验证明阴性样品
没有干扰。本方法重现性好，准确度高，可以用于测定胶囊样品
中蛇葡萄素、杨梅素含量。
参考文献:
［1］ 沈伟，孙晓杰，张一文，等．大叶蛇葡萄化学成分的研究［J］． 时珍
国医国药，2010，21(4) :866 － 867．
［2］ 姚汉林，沈伟，刘焱文，等． 霉茶不同提取部位对肾性高血压大鼠
降压作用的实验研究［J］． 中西医结合研究，2009，1(6) :285 －
287．
［3］ 孙晓杰，沈伟，张秀桥，等． 大叶蛇葡萄抗高血压有效部位筛选试
验研究［J］．齐鲁药事，2008，27(12) :747 － 749．
［4］ 张秀桥，沈伟，陈树和，等． 大叶蛇葡萄提取物对肾性高血压大鼠
降压作用的实验研究［J］．中国医院药学杂志，2008，28(24) :2095
－ 2096．
(收稿日期:2013 －04 －24 编辑:林飞)
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