全 文 ：ＤＯＩ：
［基金项目］海南省自然科学基金（８１３１９２）
［作者简介］王勇（１９８２－），男，湖北洪湖人，副研究员，硕士，电话：０８９８－３１３５０７７３、１３６９８９５４７４８，电子邮箱：ｗａｎｇｙｏｎｇ１９８２＿２００４＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ。
［收稿日期］２０１４－１０－３０　　［修回日期］２０１４－１１－０９　　网络出版时间：２０１４－０９－２６　０９：２６
正交试验优选裸花紫珠水提液的壳聚糖絮凝澄清工艺
王　勇，邹　韵，李永辉
（海南医学院药学院，海南 海口　５７１１９９）
　　［摘要］目的：研究壳聚糖澄清剂用于裸花紫珠水提液的澄清工艺。方法：以固形物去除率和毛蕊花糖
苷和异毛蕊花糖苷含量的保留率为指标，考察药液浓度、澄清剂的用量、澄清温度和搅拌速度４个因素，
采用正交试验优选壳聚糖的絮凝澄清条件。结果：壳聚糖澄清剂较佳的絮凝澄清条件为水提液浓缩至
０．０８３ｇ／ｍＬ，壳聚糖用量为药液体积的１２％（Ｖ／Ｖ），澄清温度为７０℃，搅拌速度为１００ｒ／ｍｉｎ。在此条
件下固形物去除率为２０．５１％，毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的保留率为９０．２４％。结论：壳聚糖澄清剂
处理裸花紫珠水提液的澄清效果良好，优选的澄清工艺稳定可行。
［关键词］裸花紫珠；壳聚糖；澄清剂；正交试验；纯化工艺
［中图分类号］Ｒ２８４　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００７－１２３７（２０１５）０１－０００７－０３
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ－ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃａｌｉ－
ｃａｒｐａｅ　Ｎｕｄｉｆｌｏｒａｅ　Ｆｏｌｉｕｍ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ
ＷＡＮＧ　Ｙｏｎｇ，ＺＯＵ　Ｙｕｎ，ＬＩ　Ｙｏｎｇ－ｈｕｉ
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｈａｉｎａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｉｋｏｕ５７１１９９，Ｃｈｉｎａ）
［Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｊｅｃｔ］：Ｈａｉｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（８１３１９２）
［Ａｕｔｈｏｒ］：ＷＡＮＧ　Ｙｏｎｇ （１９８２ －），Ｍａｌｅ，Ｈｏｎｇｈｕ　Ｈｕｂｅｉ，Ａｓｓｏｃｉａｔｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈｅｒ，Ｍ．Ｍ．，Ｔｅｌ：０８９８－３１３５０７７３，１３６９８９５４７４８，Ｅ－ｍａｉｌ：
ｗａｎｇｙｏｎｇ１９８２＿２００４＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ．
Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：２０１４－１０－３０　　Ｒｅｖｉｓｅｄ：２０１４－１１－０９　 ＪＨＭＣ，２０１５；２１（１）：７－９
Ｖｉｅｗ　ｆｒｏｍ　ｓｐｅｃｉａｌｉｓｔ：Ｉｔ　ｉｓ　ｃｒｅａｔｉｖｅ，ａｎｄ　ｏｆ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ａｎｄ　ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ　ｖａｌｕｅ．
［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｃａｌｉｃａｒｐａｅ　Ｎｕｄｉｆｌｏ－
ｒａｅ　Ｆｏｌｉｕｍ　ｗｉｔｈ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　ａｓ　ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｇｅｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｗｉｔｈ　ｓｏｌｉｄ　ｒｅｍｏｖａｌ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａｃｅｔｏｓｉｄｅ
ａｎｄ　ｉｓｏａｃｅｔｏｓｉｄｅ　ａｓ　ｉｎｄｅｘｅｓ，ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ　ｔｅｓｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｔｏ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｔｈｅ　ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ　ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｂｙ　ｔａｋｉｎｇ　ｓｏ－
ｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｃｌａｒｉｆｙｉｎｇ　ａｇｅｎｔ，ｃｌａｒｉｆｙｉｎｇ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｓｔｉｒｒｉｎｇ　ｓｐｅｅｄ　ａｓ　ｆａｃｔｏｒｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ
ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ　ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ：ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｔｏ　０．０８３ｇ／ｍＬ，ｔｈｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　１２％ （Ｖ／
Ｖ），ｔｈｅ　ｃｌａｒｉｆｙｉｎｇ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　５０℃ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｔｉｒｒｉｎｇ　ｓｐｅｅｄ　１００ｒ／ｍｉｎ．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅｓｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｓｏｌｉｄ　ｒｅｍｏｖａｌ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｔｅｎ－
ｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａｃｅｔｏｓｉｄｅ　ａｎｄ　ｉｓｏａｃｅｔｏｓｉｄｅ　ｗｅｒｅ　２０．５１％ａｎｄ　９０．２４％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｈｉｔｏｓａｎ　ａｓ　ｃｌａｒｉｆｙｉｎｇ　ａｇｅｎｔ　ｆｏｒ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｃａｌｉｃａｒｐａｅ　Ｎｕｄｉｆｌｏｒａｅ　Ｆｏｌｉｕｍ　ｉｓ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｉｓ
ｓｔａｂｌｅ　ａｎｄ　ｆｅａｓｉｂｌｅ．
［ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ］Ｃａｌｉｃａｒｐａｅ　Ｎｕｄｉｆｌｏｒａｅ　Ｆｏｌｉｕｍ；Ｃｈｉｔｏｓａｎ；Ｃｌａｒｉｆｉｅｒ；Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ；Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ
　　裸花紫珠为马鞭草科紫珠属植物裸花紫珠
（Ｃａｌｌｉｃａｒｐａ　ｎｕｄｉｆｌｏｒａ　Ｈｏｏｋ　Ｅｔ　Ａｒｎ．）的干燥叶，
其性凉、味苦涩，微辛，具有消炎，解毒，收敛，止血之
功效，用于化脓性炎症，急性传染性肝炎，外治烧、烫
伤，外伤出血等症［１］。紫珠属植物的化学成分研究
表明，苯乙醇苷类成分是该属植物的主要类群成分
７
海南医学院学报　２０１５，２１（１）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈａｉｎａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　
10.13210/j.cnki.jhmu.2015.01.001
之一［２］。在前期研究中发现，毛蕊花糖苷和异毛蕊
花糖苷是裸花紫珠水提液中的主要成分。作为苯乙
醇苷的代表性成分，毛蕊花糖苷具有止血［３］、保肝降
酶［４－５］、抗菌［６］、抗炎［７］、抗氧化［８］、抗肿瘤［９］等多种
药理作用，可能是其发挥药效的主要活性成分。
裸花紫珠水提取液固形物收率在３０％以上，其
中蛋白质、粘液质、叶绿素、无机盐、重金属等的含量
较高，这些成分多为杂质成分或无效成分。为提高
裸花紫珠制剂的产品质量，有必要对其水提取液进
行精制纯化，在保留有效成分的同时最大限度地除
杂，并尽可能减少有效成分的损失。目前中药水提
取液常用纯化方法有水提醇沉、高速离心、澄清剂吸
附、膜分离、大孔吸附树脂、微滤等［１０］，而壳聚糖澄
清剂对蛋白质、粘液质、鞣质、核酸等物质均具有吸
附能力，除杂完全，并且能有效保留功能性成分。因
此本研究采用壳聚糖澄清技术对裸花紫珠水提液进
行澄清处理，采用正交试验优选较佳的澄清工艺条
件，为裸花紫珠水提取液进一步精制纯化奠定基础。
１　材料与方法
１．１　仪器
ＬＣ－２０１０ＡＨＴ高效液相色谱仪，配有紫外检测器，自动
进样器，ＬＣ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ色谱工作站（日本岛津公司）；ＡＬ－１０４
电子天平（梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司）；８５－２Ａ 磁
力加热搅拌器（金坛市城东新瑞仪器有限公司）；ＤＫ－９８－ⅡＡ
型电热恒温水浴锅（天津泰斯特仪器有限公司）；ＴＤＬ－５离心
机（上海安亭科学仪器厂）；２０２ＡＢ－１电热干燥箱（上海申光
仪器仪表有限公司）；九阳电磁炉（九阳股份有限公司）。
１．２　材料与试剂
裸花紫珠药材与２０１３年８月采自海南省白沙县，经鉴
定为马鞭草科紫珠属植物裸花紫珠（Ｃ．ｎｕｄｉｆｌｏｒａ　Ｈｏｏｋ　Ｅｔ
Ａｒｎ．）的干燥叶；甲醇，冰醋酸，无水乙醇均为分析纯，购自
广州化学试剂厂；乙腈为色谱纯，水为超纯水；壳聚糖购自山
东奥康生物科技有限公司；毛蕊花糖苷（批号：１２０８０４）与异
毛蕊花糖苷对照品（批号：１３０５１２）购自四川维克奇生物科技
有限公司。
１．３　裸花紫珠水提取液的制备
取裸花紫珠叶３００ｇ，置１０Ｌ圆底烧瓶中，加入６Ｌ蒸
馏水浸泡２ｈ，加热回流提取１ｈ，过滤，滤渣再加蒸馏水加热
回流提取２次，每次４．５Ｌ，过滤，合并三次滤液，浓缩至６００
ｍＬ（每毫升水提取液含生药０．５ｇ），作为原药液。分别加水
稀释至１∶４（０．２５ｇ／ｍＬ）、１∶８（０．１２５ｇ／ｍＬ）和１∶１２
（０．０８３ｇ／ｍＬ）的溶液备用。
１．４　壳聚糖溶液的配制
取壳聚糖粉末１ｇ，加１％ 冰醋酸溶液适量，静置２ｈ，搅
拌使其溶解，再加１％冰醋酸溶液至１００ｍＬ，配成含壳聚糖
质量分数为１％ 的溶液，静置２４ｈ使充分溶胀，双层纱布过
滤，即得。
１．５　毛蕊花糖苷（ＡＳ）和异毛蕊花糖苷（ＩＡＳ）的测定
１．５．１　色谱条件　色谱柱：Ｌｕｎａ　Ｃ１　８（２）（１５０ｍｍ ×４．６
ｍｍ，５μｍ），流动相：乙腈－０．１％醋酸溶液（１５∶８５）；流速：
１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长：３３２ｎｍ；柱温：３０℃。
１．５．２　对照品溶液的制备　精密称取毛蕊花糖苷和异毛蕊
花糖苷对照品，置２５ｍＬ量瓶中，加５０％甲醇溶液溶解并稀
释至刻度，摇匀，配成每毫升溶液含毛蕊花糖苷０．１０４　４ｍｇ，
异毛蕊花糖苷０．１０２　４ｍｇ的混合对照品溶液。取适量，过
０．４５μｍ微孔滤膜，取续滤液备用。
１．５．３　供试品溶液的制备　取裸花紫珠水提取液澄清前后
溶液适量，置２５ｍＬ量瓶中，加入５０％甲醇溶液稀释至刻
度，取适量，过０．４５μｍ微孔滤膜，取续滤液，即得。
１．５．４　标准曲线的绘制　精密吸取混合对照品续滤液，注
入高效液相色谱仪，进样体积分别为１、２、４、８、１０、１２、１６
μＬ，测定毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的峰面积，分别以毛蕊
花糖苷、异毛蕊花糖苷的进样质量（μｇ）为横坐标（Ｘ）、峰面
积为纵坐标（Ｙ），绘制标准曲线，得毛蕊花糖苷的回归方程
为ＹＡ　Ｓ＝ １６２８３８５　Ｘ －２２２６３．７（ｒ＝０．９９９８），线性范围为
０．１０４４～１．６７０４μｇ；异毛蕊花糖苷的回归方程为ＹＩＡ　Ｓ＝
１４５８３５０　Ｘ－２４５７９．６（ｒ＝０．９９９９），线性范围为０．１０２４～
１．６３８４μｇ。
１．５．５　含量测定　分别精密吸取对照品和供试品溶液各
１０μＬ，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图峰面积，计算
毛蕊花糖苷（ＡＳ）和异毛蕊花糖苷（ＩＡＳ）含量，即得。
１．６　评价指标
１．６．１　固形物去除率的测定　 精密量取裸花紫珠水提液
澄清前后溶液各２０ｍＬ置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴
蒸干，并于１０５℃加热干燥３ｈ，迅速转移至干燥器中冷却
３０ｍｉｎ后精密称定质量，按以下公式计算固形物去除率。
固形物去除率＝ （澄清前固形物质量－澄清后固形物质量）
／澄清前固形物质量×１００％
１．６．２　毛蕊花糖苷（ＡＳ）和异毛蕊花糖苷（ＩＡＳ）含量的保留
率　 采用 ＨＰＬＣ分别对澄清前后溶液中毛蕊花糖苷和异毛
蕊花糖苷的含量进行测定，根据以下公式计算毛蕊花糖苷和
异毛蕊花糖苷含量的保留率。（ＡＳ＋ＩＡＳ）保留率＝澄清后
溶液中（ＡＳ＋ＩＡＳ）的含量／澄清前溶液中（ＡＳ＋ＩＡＳ）的含量
×１００％
１．６．３　综合评分　（Ｏｖｅｒｒａｌ　Ｄｅｓｉｒａｂｉｌｉｔｙ，ＯＤ）在用壳聚糖
澄清剂对裸花紫珠水提取液进行除杂处理时，既需要最大限
度地保留目标有效成分，又需要保证较好的澄清效果，所以
选取固形物去除率（Ｙ１）和（ＡＳ＋ＩＡＳ）保留率（Ｙ２）一同作为
评价指标进行综合评分，将Ｙ１ 的权重设为０．４，Ｙ２ 的权重设
为０．６，则 ＯＤ＝（Ｙ１／Ｙ１ｍａ　ｘ×０．４＋Ｙ２／Ｙ２ｍａ　ｘ×０．６）×
１００％。
２　结果
２．１　壳聚糖澄清工艺参数考察
参考相关文献［１１－１３］，影响水提液澄清效果的因素主要
有药液浓度、澄清剂用量、澄清温度、搅拌速度、溶液的ｐＨ、
静置时间、水浴保温时间等，通过预试验，本研究选取药液浓
度（Ａ）、壳聚糖用量（Ｂ）、澄清温度 （Ｃ）、搅拌速度 （Ｄ）４个
因素进行考察，每个因素考察３个水平，因素水平见表１。
表１　裸花紫珠水提取液壳聚糖澄清工艺正交试验因素水平
水平
因素
Ａ药液浓度
（ｇ／ｍＬ）
Ｂ壳聚糖用量
（％）
Ｃ澄清温度
（℃）
Ｄ搅拌速度
（ｒ／ｍｉｎ）
１　 ０．２５　 ４　 ６０　 １００
２　 ０．１２５　 ８　 ７０　 ２００
３　 ０．０８３　 １２　 ８０　 ３００
８ 　海南医学院学报 Ｖｏｌ．２１Ｎｏ．１Ｊａｎ．２０１５
　　按Ｌ９（３４）正交表安排试验，以固形物去除率和 ＡＳ＋
ＩＡＳ含量的保留率为考察指标，进行综合评分。对综合评分
值进行直观分析和方差分析，试验安排及结果见表２，方差
分析结果见表３。
表２　裸花紫珠叶水提取液的壳聚糖澄清工艺Ｌ９（３４）正交试验安排
Ｎｏ．
因素
Ａ　 Ｂ　 Ｃ　 Ｄ
Ｙ１／％ Ｙ２／％ ＯＤ／％
１　 １（０．２５） １（４） １（６０） １（１００） ３．６２　９４．６９　６７．０９
２　 １（０．２５） ２（８） ２（７０） ２（２００） ９．８７　８３．８２　７２．４４
３　 １（０．２５） ３（１２） ３（８０） ３（３００） １３．４０　８９．２４　８２．７８
４　 ２（０．１２５） １（４） ２（７０） ３（３００） ７．７４　９４．２５　７４．８８
５　 ２（０．１２５） ２（８） ３（８０） １（１００） １０．８５　８６．８０　７６．２４
６　 ２（０．１２５） ３（１２） １（６０） ２（２００） １５．０４　８５．３４　８３．５２
７　 ３（０．０８３） １（４） ３（８０） ２（２００） ８．９０　８８．５５　７３．５３
８　 ３（０．０８３） ２（８） １（６０） ３（３００） １０．８０　８８．２０　７７．０３
９　 ３（０．０８３） ３（１２） ２（７０） １（１００） ２０．４３　８７．１５　９５．２２
ｋ１　 ７４．１０３　 ７１．８３３　 ７５．８８０　 ７９．５１７
ｋ２　 ７８．２１３　 ７５．２３７　 ８０．８４７　 ７６．４９７
ｋ３　 ８１．９２７　 ８７．１７３　 ７７．５１７　 ７８．２３０
Ｒ　 ７．８２４　 １５．３４　 ４．９６７　 ３．０２０
因素主次顺序：Ｂ＞
Ａ＞Ｃ＞Ｄ
表３　综合评分值的方差分析
方差来源 ＳＳ　 ｆ　 Ｆ　 Ｐ
Ａ　 ９１．８８５　 ２　 ６．６６８ ＞０．０５
Ｂ　 ３８９．３８２　 ２　 ２８．２５７ ＜０．０５
Ｃ　 ３８．４３５　 ２　 ２．７８９ ＞０．０５
Ｄ（误差） １３．７８　 ２　 １．０００
注：Ｆ０．０１（２，２）＝９９．００，Ｆ０．０５（２，２）＝１９．００。
２．２　结果分析
根据壳聚糖澄清剂对裸花紫珠叶水提取液澄清工艺考
察结果可知，以综合评分值进行直观分析，各因素影响大小
顺序为Ｂ＞Ａ＞Ｃ＞Ｄ，方差分析结果，因素Ｂ（壳聚糖用量）
对结果具有显著性差异，故最优方案为Ａ３Ｂ３Ｃ２Ｄ１，即药液浓
缩至含生药质量浓度１∶１２（０．０８３ｇ／ｍＬ），壳聚糖澄清剂
加入量为药液体积的１２％，絮凝温度７０℃ ，搅拌速度为
１００ｒ／ｍｉｎ。
２．３　工艺验证
取裸花紫珠水提药液３份，每份２５ｍＬ，按优选的澄清
工艺进行处理，结果固形物去除率分别为１９．８５％、２０．
６２％、２１．０５％，平均去除率为２０．５１％，ＲＳＤ为２．９６％；毛蕊
花糖苷和异毛蕊花糖苷含量之和的保留率分别为８９．３５％、
９１．２８％、９０．１０％，平均保留率为９０．２４％，ＲＳＤ为１．０８％，
说明优选的工艺稳定可行。
３　讨论
吸附澄清法是在中药提取液或提取浓缩液中加
入一种絮凝剂，通过高分子的电中和、吸附架桥等作
用，使体系中的悬浮物及胶体粒子除去，使体系的澄
明度得以提高的一项高新技术。壳聚糖用于中药水
提液的澄清主要与其吸附性能和絮凝作用有关，可
除去药液中的蛋白质、粘液质、果胶等大分子物
质［１４］。
在运用吸附澄清技术除杂时必须考虑到有效成
份的保留率。同时，也要考察固形物的收率，即是否
能够有效地降低服用剂量，达到精制的目的，更重要
的是保证成品制剂的有效性。因此，通常应从有效
成份保留率、固形物收率以及主要药效学等多方面
进行指标考察，筛选合理可行的除杂工艺，对中药水
提液进行精制处理。
本研究采用壳聚糖对裸花紫珠水提取液进行澄
清处理，以固形物去除率和水提液中有效成分－毛蕊
花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量的保留率为考察指标
并对其澄清工艺进行优化，得到壳聚糖澄清裸花紫
珠水提液的较佳工艺。在此工艺条件下固形物平均
去除率为２０．５１％，毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷含
量的平均保留率为９０．２４％。研究结果表明，壳聚
糖对裸花紫珠水提液有明显的絮凝澄清作用，固形
物去除率较高，药液的澄清度高，而且有效成分毛蕊
花糖苷和异毛蕊花糖苷的损失率较低。应用过程中
不会带入无机离子，具有加量少，操作简单，安全无
毒等优点，是一种适用于工业化生产的絮凝工艺。
该工艺克服了传统醇沉法存在的缺点，工艺简单，成
本低廉，为工业化生产应用提供了参考。
参考文献
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ｃａｌ，ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｒｅｖｉｅｗ ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
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ｉｔｓ　ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ，（ｂｉｏ）ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｄｖａｎｃｅｓ，２０１４，３２（６）：１０６５－１０７６．
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ｇａｌ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｉｘ　Ｌｉｐｐｉａ　ｓｐｅｃｉｅｓ（Ｖｅｒｂｅｎａｃｅａｅ）ｆｒｏｍ　Ｂｒａ－
ｚｉｌ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，１３５（３）：２０８６－２０９４．
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ａｎｉｓｍｓ　ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ　ｗｏｕｎｄ　ｈｅａｌｉｎｇ　ａｎｄ　ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｐｒｏｐｅｒ－
ｔｉｅｓ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌｙ　ｏｃｃｕｒｉｎｇ　ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌｙ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｐｈｅｎｙｌｅ－
ｔｈａｎｏｉｄ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ［Ｊ］．Ｃｅｌ　ａｎｄ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｎｏｉｓｙ－
ｇｒａｎｄ），２００７，５３（５）：８４－８９．
８　Ｃａｒｄｉｎａｌｉ　Ａ，Ｐａｔｉ　Ｓ，Ｍｉｎｅｒｖｉｎｉ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ，ｉｓｏｖｅｒｂａｓ－
ｃｏｓｉｄｅ，ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｄｅｒｉｖａｔｅｓ　ｒｅｃｏｖｅｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｏｌｉｖｅ　ｍｉｌ　ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ
ａｓ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｆｏｏｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ
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（下转第１３页）
９王勇等．正交试验优选裸花紫珠水提液的壳聚糖絮凝澄清工艺
ＩＶ型胶原（ＣⅣ）均在Ｓ０与Ｓ１无显著差异，其他各
期之间差异均有统计学意义，其中Ｓ０为无纤维化；
Ｓ１为汇管区扩大伴纤维增生；Ｓ２为汇管区周围纤
维化，小叶结构保留；Ｓ３纤维间隔伴小叶结构紊乱，
无肝硬化；Ｓ４为重度纤维化或确定肝硬化，表明肝
纤维化的病理分期与肝纤维化指标具有一定的关
系。血清２５－（ＯＨ）Ｄ３ 水平在肝纤维化Ｓ０～Ｓ４期水
平依次降低，除Ｓ０与Ｓ１、Ｓ３期与Ｓ４期差异无统计
学意义外，其他各期之间之间差异均有统计学意义，
Ｓ０与Ｓ１无显著差异可能是由于在肝纤维化初期，
对维生素Ｄ的影响较小，而Ｓ３期与Ｓ４期由于肝脏
纤维结缔组织的过度沉积，会使各类血管间失去正
常关系，肝细胞内营养障碍，导致肝功能代偿不全，
对维生素Ｄ的影响较大导致，相关性分析发现：血
清２５－（ＯＨ）Ｄ３ 水平与肝纤维化分期有负相关性，血
清２５－（ＯＨ）Ｄ３ 与 ＨＡ、ＬＮ、ＰⅢ、ＣⅣ 有负相关性。
Ｇｕｚｍáｎ－Ｆｕｌｇｅｎｃｉｏ等［１３］发现在 ＨＩＶ／ＨＣＶ双重感
染感染患者中伴有严重肝纤维化者维生素缺乏率达
９２．６％。也有研究认为１，２５－（ＯＨ）２－Ｄ３ 可以适度
增加肝脏弹性，抑制肝纤维化的发生［１４］；Ａｂｒａｍｏｖ－
ｉｔｃｈ等［１５］进行的动物研究发现１，２５－（ＯＨ）２－Ｄ３ 对
细胞外基质以及基质金属蛋白酶（ＭＭＰ）起到重要
调节作用，具有抑制肝星状细胞增殖与抗纤维化的
作用，肝脏纤维化大鼠模型中，１，２５－（ＯＨ）２－Ｄ３ 亦可
降低肝脏纤维化评分，本研究从一定程度上支持维
生素Ｄ可以抑制肝纤维化的说法。
虽然乙型肝炎是进展性疾病，而且病情进展是
由多种因素决定的，但乙型肝炎患者维生素Ｄ的缺
乏状况与维生素Ｄ对肝脏及人体的积极性作用是
值得关注的，本研究证实了乙肝患者血清２５－（ＯＨ）
Ｄ３ 水平的降低与肝功能的下降及肝纤维化加重有
关，维生素Ｄ对乙肝患者的病情的控制及相关机制
值得更进一步的探索。
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