全 文 ：第４４卷 第８期
２０１６年８月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．４４ Ｎｏ．８
Ａｕｇ．２０１６
网络出版时间：２０１６－０７－１２ ０８：４５ ＤＯＩ：１０．１３２０７／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｎｗａｆｕ．２０１６．０８．００７
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３９０．Ｓ．２０１６０７１２．０８４５．０１４．ｈｔｍｌ
小花棘豆中毒对家兔丘脑－垂体－性腺轴
α－甘露糖苷酶的影响
［收稿日期］ ２０１５－０１－２２
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３１４６０６７８）；国家星火计划项目（２０１５ＧＡ８９１０１５）
［作者简介］ 王 帅（１９８４－），男，山西长治人，实验师，硕士，主要从事动物毒理学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｓｈｕａｉｄｋｙ＠１２６．ｃｏｍ
［通信作者］ 马春晖（１９６６－），男，新疆哈密人，教授，博士，博士生导师，主要从事牧草资源开发利用研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｕｎｈｕｉｍａ＠１２６．ｃｏｍ
王 帅１，２，陈根元１，贾琦珍１，张 玲１，２，马春晖１，３
（１新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室，新疆 阿拉尔８４３３００；２塔里木大学 动物科学学院，
新疆 阿拉尔８４３３００；３石河子大学 动物科技学院，新疆 石河子８３２０００）
［摘 要］ 【目的】探讨小花棘豆中毒对家兔丘脑－垂体－性腺轴α－甘露糖苷酶（ＡＭＡ）的影响，揭示小花棘豆的
毒性作用机理。【方法】将２４只家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，对照组饲喂青干草，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲
喂添加１５％，３０％和４５％小花棘豆全草的混合饲料（其苦马豆素含量分别为３０，６０和９０ｍｇ／ｋｇ），分别于攻毒后第
１４，３５和７０天时每组随机采集２只家兔的丘脑、垂体和性腺，检测ＡＭＡ在家兔丘脑－垂体－性腺轴中的分布、活性及
其基因ｍＲＮＡ的表达量。【结果】ＡＭＡ在家兔丘脑、垂体和性腺中均有分布，小花棘豆中毒可导致家兔丘脑－垂体－
性腺轴ＡＭＡ活性和分布明显下降。试验组及对照组家兔丘脑－垂体－性腺轴高尔基体α－甘露糖苷酶Ⅱ（ＡＭＡ１）和溶
酶体α－甘露糖苷酶（ＡＭＡ２）均有表达，但各试验组表达转录水平总体低于对照组，攻毒第７０天时试验Ⅰ组家兔丘脑－
垂体－性腺轴的ＡＭＡ１和ＡＭＡ２，试验Ⅱ组家兔丘脑－垂体－性腺轴及试验Ⅲ组家兔丘脑和垂体中ＡＭＡ２的表达均与
对照组差异不显著（Ｐ＞０．０５）；试验Ⅲ组家兔丘脑－垂体－性腺轴和试验Ⅱ组家兔丘脑、垂体、睾丸中ＡＭＡ１ｍＲＮＡ表
达量均极显著低于对照组（Ｐ＜０．０１），试验Ⅱ组卵巢ＡＭＡ１ｍＲＮＡ表达量显著低于对照组（Ｐ＜０．０５），试验Ⅲ组家兔
睾丸和卵巢ＡＭＡ２ｍＲＮＡ表达量显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）。【结论】小花棘豆中毒可影响家兔丘脑－垂体－性腺轴
ＡＭＡ的活性及其基因的转录表达。
［关键词］ 小花棘豆；苦马豆素；α－甘露糖苷酶；丘脑－垂体－性腺轴
［中图分类号］ Ｓ８５６．９ ［文献标志码］ Ａ ［文章编号］ １６７１－９３８７（２０１６）０８－００４１－０８
Ｅｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｇｌａｂｒａ ＤＣ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ｏｎα－ｍａｎｎｏｓｉｄａｓｅ ｏｆ
Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－Ｇｏｎａｄ ｉｎ ｒａｂｂｉｔ
ＷＡＮＧ Ｓｈｕａｉ １，２，ＣＨＥＮ Ｇｅｎｙｕａｎ１，ＪＩＡ Ｑｉｚｈｅｎ１，ＺＨＡＮＧ Ｌｉｎｇ１，２，ＭＡ Ｃｈｕｎｈｕｉ １，３
（１ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔａｒｉｍ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ＆Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ Ｃｏｒｐｓ，
Ａｌａｒ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ８４３３００，Ｃｈｉｎａ；２ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔａｒｉｍ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｌａｒ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ８４３３００，Ｃｈｉｎａ；
３ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ８３２０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｇｌａｂｒａ ＤＣ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔ
ａｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆα－ｍａｎｎｏｓｉｄａｓｅ（ＡＭＡ）ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ｔｏ ｒｅｖｅａｌ ｉｔｓ ｔｏｘ－
ｉｃｉｔｙ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ２４ｒａｂｂｉｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｎｄ ｅｑｕａｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐｓⅠ，Ⅱ，ａｎｄⅢ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｆｅｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒｅｅｎ ｈａｙ ｏｎｌｙ ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｆｅｄ ｗｉｔｈ ｍｉｘｅｄ ｆｏｒａｇｅ ｗｉｔｈ １５％，３０％ａｎｄ ４５％ｄｒｉｅｄ Ｏ．ｇｌａｂｒａ ＤＣ ｐｌａｎｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ－
ｉｎｇ ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ３０ｍｇ／ｋｇ，６０ｍｇ／ｋｇ，ａｎｄ ９０ｍｇ／ｋｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｗｏ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍ－
ｌｙ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｏｎ ｔｈｅ １４ｔｈ，３５ｔｈ ａｎｄ ７０ｔｈ ｄａｙｓ ｔｏ ｃｏｌｅｃｔ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ，ｐｉｔｕｉｔａｒｙ ａｎｄ ｇｏｎａｄ
ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＡＭＡ ａｓ ｗｅｌ ａｓ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｎｃｅ－
ｐｈａｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ．【Ｒｅｓｕｌｔ】ＡＭＡ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ，ａｎｄ Ｏ．ｇｌａｂｒａ ＤＣ ｒｅ－
ｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐｓ．ＡＭＡ ｉｎ ｇｏｌｇｉ
ａｎｄ ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ｏｆ ａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐｓ，ａｎｄ Ｏ．ｇｌａｂｒａ ＤＣ ｒｅ－
ｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ＡＭＡ１ａｎｄ ＡＭＡ２ｍＲＮＡ．Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ＡＭＡ１
ａｎｄ ＡＭＡ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐⅠａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａ－
ｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ａｔ ７０ｄ（Ｐ＞０．０５），ｓｏ ｗａｓ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ＡＭＡ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ｇｒｏｕｐｓⅡａｎｄⅢ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ＡＭＡ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｖｅｒｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘ－
ｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐⅢａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ａｔ ７０ｄ（Ｐ＜０．０１），ｓｏ ａｓ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒ－
ｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐⅡａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ，ｐｉｔｕｉｔａｒｙ ａｎｄ ｔｅｓｔｉｓ（Ｐ＜０．０１）．
Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐⅡａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｉｎ ｏｖａｒｙ（Ｐ＞０．０５），
ｂｕｔ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ＡＭＡ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐⅢａｎｄ ｃｏｎ－
ｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｉｎ ｔｅｓｔｉｓ ａｎｄ ｏｖａｒｙ（Ｐ＜０．０１）．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｏ．ｇｌａｂｒａ ＤＣ ｈａｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐ－
ｔｉｏｎａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＭＡ ｉｎ ｒａｂｂｉｔ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｇｌａｂｒａ ＤＣ；ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ；α－ｍａｎｎｏｓｉｄａｓｅ；ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ
小花棘豆是广泛分布于新疆天然草原的有毒植
物之一，具有耐旱、耐贫瘠、返青早、生命力强、繁殖
系数高等特点，已严重危害新疆草原畜牧业的发
展［１］。目前仅南疆阿克苏、和田地区广泛丛生小花
棘豆的草场面积已超过２０％，每年因采食小花棘豆
而中毒的家畜占放牧家畜总数的５％～１０％，其中
约５０％的中毒家畜死亡。中毒家畜表现为机体的
广泛性损伤，其中尤以神经系统和繁殖系统最为明
显［２］。国内外研究发现，苦马豆素（Ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ，
ＳＷ）是小花棘豆的主要毒性成分［３］，其可通过抑制
α－甘露糖苷酶（α－Ｍａｎｎｏｓｉｄａｓｅ，ＡＭＡ）活性，导致机
体甘露糖代谢发生异常而表现出毒性作用［４－５］。
ＡＭＡ按其在亚细胞器中的分布可分为高尔基体α－
甘露糖苷酶Ⅱ（ＡＭＡ１）和溶酶体α－甘露糖苷酶
（ＡＭＡ２）等，ＡＭＡ活性是动物小花棘豆中毒特异
性最强的指标［６］，中毒动物的 ＡＭＡ活性受到明显
抑制，但中毒对其基因转录、翻译、加工修饰等的影
响尚不清楚，而且中毒动物繁殖系统 ＡＭＡ活性及
表达的变化也未见相关报道。本试验以新疆南疆地
区小花棘豆为试验材料，采用ＥＬＩＳＡ、免疫组化和荧
光实时定量ＰＣＲ法研究了小花棘豆攻毒对家兔丘脑－
垂体－性腺轴ＡＭＡ活性、分布及其基因ｍＲＮＡ表达
的影响，为小花棘豆的中毒机制研究提供参考。
１ 材料与方法
１．１ 材 料
家兔２４只，雌雄各半，体质量（２．０±０．１）
ｋｇ／只，均由塔里木大学动物科学学院实验站提供。
小花棘豆，２０１４年６月下旬采集于阿克苏市乌什
县奥特贝希乡，由塔里木大学动物科学学院草业科学
学科组鉴定。取植株的地上部分，阴干、保存备用。
ＡＭＡ检测试剂盒和Ｓ－Ｐ超敏组化试剂盒，南
京建成生物技术有限公司产品；总 ＲＮＡ提取试剂
Ｔｒｉｚｏｌ、反转录试剂盒、ＰＣＲ扩增试剂盒 Ｈｏｔ－ｓｔａｒｔ
ＰＣＲ Ｍｉｘ、实时荧光定量 ＰＣＲ 试剂盒 ＳＹＢＲ?
Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ ＴａｑＴＭⅡ，均为美国 Ｔｈｅｒｍｏ公司产品；
其余试剂均为国产分析纯。试验用水为超纯水。
５３３１型 ＰＣＲ 仪、Ｒｅａｌｐｌｅｘ２型实时荧光定量
ＰＣＲ仪，德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ；ＰｏｗｅｒＷａｖｅ ＸＳ型全波长
酶标仪，美国ＢＩＯ－ＲＡＤ；ＤＹＹ－Ⅱ型电泳仪，北京六
一；ＰＲＯ２５０型组织匀浆仪，美国 Ｐｒｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；
ＧＥＬＤＯＣ－ＩＴ型凝胶成像分析仪，美国ＵＶＰ。
１．２ 试验动物分组与处理
将２４只家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
组，每组６只，雌雄各半，分笼饲养，自由采食和饮
水。对照组家兔饲喂青干草，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组家兔
分别饲喂含１５％，３０％和４５％粉碎小花棘豆的混合
饲料（ＳＷ 含量分别为３０，６０和９０ｍｇ／ｋｇ）攻毒。
试验持续７０ｄ。分别在攻毒后第１４，３５和７０天每
组随机取雄兔和雌兔各１只，剖杀后分别取丘脑、垂
体和性腺（睾丸或卵巢），各组织部分进行免疫组化
染色分析；部分利用冰生理盐水制成１００ｇ／Ｌ的组
织匀浆液用于ＡＭＡ活性检测；部分组织液氮保存，
用于检测ｍＲＮＡ水平表达的影响。所有解剖工具
２４ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４４卷
及冻存管均预先用ＤＥＰＣ水处理。
１．３ 小花棘豆对家兔丘脑－垂体－性腺轴中 ＡＭＡ
分布的影响
家兔丘脑、垂体、睾丸和卵巢组织均使用体积分
数４％多聚甲醛固定，梯度酒精脱水，二甲苯透明后
进行石蜡包埋。对包埋组织进行连续切片，片厚６
μｍ，二甲苯脱蜡，梯度酒精复水，然后按照试剂盒说
明进行免疫组化染色，其中生物素标记的第二抗体
稀释比为１∶１００，ＤＡＢ显色。常规脱水，透明，封
片，光镜下观察组织病理学变化，采用Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ
Ｐｌｕｓ ６．０软件对免疫组化获得照片进行分析。
１．４ 小花棘豆对家兔丘脑－垂体－性腺轴中 ＡＭＡ
活性的影响
按照南京建成家兔血清ＡＭＡ活性检测试剂盒
说明书，采用间接ＥＬＩＳＡ法测定家兔丘脑－垂体－性
腺轴组织中的ＡＭＡ活性。
１．５ 小花棘豆对家兔丘脑－垂体－性腺轴中ＡＭＡ基
因ｍＲＮＡ表达水平的影响
１．５．１ 引物设计与合成 根据 ＧｅｎＢａｎｋ中家兔
ＡＭＡ１、ＡＭＡ２和β－ａｃｔｉｎ基因的核苷酸序列（Ｇｅｎ－
Ｂａｎｋ登录号分别为：ＮＭ＿０１２９７９．２、ＮＭ＿１７４５６１．２
和ＮＭ＿００７３９３．２），采用Ｂｅａｃｏｎ Ｄｅｓｉｇｎｅｒ软件设计
引物，引物由宝生物工程（大连）有限公司合成，相关
信息见表１。
１．５．２ 总ＲＮＡ的提取与ｃＤＮＡ合成 参照Ｔｈｅｒ－
ｍｏ公司总ＲＮＡ提取试剂 Ｔｒｉｚｏｌ的说明书提取家
兔待测组织总 ＲＮＡ，用核酸蛋白检测仪测定其
ＯＤ２６０和ＲＮＡ浓度，用１０ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶电泳检测
ＲＮＡ的完整性。利用 ｇＤＮＡ Ｅｒａｓｅｒ去除合格
ＲＮＡ中的基因组ＤＮＡ，反应条件：４２℃２ｍｉｎ。以
除去基因组ＤＮＡ的ＲＮＡ为模板，用反转录试剂盒
采用两步法进行反转录，合成ｃＤＮＡ。
表１ 试验所用引物序列
Ｔａｂｌｅ １ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｔｅｓｔ
基因
Ｇｅｎｅ
引物序列（５′→３′）
Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
扩增产物长度／ｂｐ
Ｐｒｏｄｕｃｔ ｓｉｚｅ
ＡＭＡ１
Ｆ：ＴＣＡＧＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＣＴＣＣＴＣ
Ｒ：ＴＧＣＣＣＡＣＣＴＴＴＧＡＣＴＧＴＡＴＴ
１８９
ＡＭＡ２
Ｆ：ＡＡＡＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＧＡＴＧ
Ｒ：ＴＴＴＣＴＧＧＧＡＡＧＡＧＧＣＧＡＧ
１２０
β－ａｃｔｉｎ
Ｆ：ＧＡＣＡＧＧＡＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＧＡＴＴＡＣＴ
Ｒ：ＡＴＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＡＴＣＣＡＣＡＣＡＧ
１０４
１．５．３ 普通ＰＣＲ及基因测序 参照Ｔｈｅｒｍｏ公司
ＰＣＲ扩增试剂盒Ｈｏｔ－ｓｔａｒｔ ＰＣＲ Ｍｉｘ的说明书进行
ＰＣＲ反应，ＰＣＲ产物用１％琼脂糖凝胶电泳鉴定，
扩增阳性者送宝生物工程（大连）有限公司测序。
１．５．４ 家兔组织中ＡＭＡ 相对表达量的实时荧光
定量ＰＣＲ检测 采用ＳＹＢＲ? Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ ＴａｑＴＭⅡ
进行实时荧光定量ＰＣＲ反应，采用双标准曲线法对
所得实时荧光定量ＰＣＲ结果进行分析。
１．６ 数据分析
试验数据使用 ＳＰＳＳ １６．０软件中 Ｏｎｅ－Ｗａｙ
ＡＮＯＶＡ方法进行单因素方差分析。
２ 结果与分析
２．１ ＡＭＡ在家兔丘脑－垂体－性腺组织中的分布
结果表明，ＡＭＡ在对照组家兔分布于丘脑旁
中央核、室旁核、背内侧核、腹内侧核（图１－Ａ），垂体
前叶、后叶、正中隆起（图１－Ｂ），睾丸精曲小管、精直
小管、间质细胞（图１－Ｃ）及卵巢上皮细胞、绒毛细
胞、颗粒层细胞（图１－Ｄ）等区域。小花棘豆攻毒第
３５天时，家兔丘脑背内侧核细胞、丘脑室旁核、垂体
前叶和后叶、睾丸间质细胞及卵巢绒毛细胞中
ＡＭＡ分布明显下降；第７０天时试验Ⅱ和Ⅲ组家兔
丘脑室旁核（图１－Ｅ）、垂体前叶（图１－Ｆ）、睾丸间质
细胞（图１－Ｇ）和卵巢绒毛细胞（图１－Ｈ）中ＡＭＡ免
疫组化染色极淡，表明这些区域 ＡＭＡ已几乎不表
达。
２．２ 家兔丘脑－垂体－性腺轴中ＡＭＡ活性的变化
在整个试验期内，对照组家兔丘脑－垂体－性腺
ＡＭＡ活性无明显变化，试验组家兔丘脑－垂体－性腺
ＡＭＡ活性均有一定程度的下降。由表２可知，攻
毒第１４天时，试验Ⅲ组家兔丘脑、垂体 ＡＭＡ活性
显著低于对照组（Ｐ＜０．０５），但睾丸和卵巢组织
ＡＭＡ活性与对照组差异均不显著（Ｐ＞０．０５）。攻
毒第３５天时，试验Ⅲ组家兔丘脑－垂体－性腺 ＡＭＡ
活性均极显著低于对照及试验Ⅰ、Ⅱ组（Ｐ＜０．０１）。
攻毒第７０天时试验Ⅲ组家兔丘脑－垂体－性腺轴
ＡＭＡ活性均极显著低于对照组（Ｐ＜０．０１）；试验Ⅱ
组丘脑、垂体、睾丸ＡＭＡ活性均极显著低于对照组
（Ｐ＜０．０１），卵巢 ＡＭＡ活性显著低于对照组（Ｐ＜
０．０５）；试验Ⅰ组丘脑ＡＭＡ活性极显著低于对照组
３４第８期 王 帅，等：小花棘豆中毒对家兔丘脑－垂体－性腺轴α－甘露糖苷酶的影响
（Ｐ＜０．０１），垂体 ＡＭＡ活性显著低于对照组（Ｐ＜
０．０５），睾丸和卵巢ＡＭＡ活性与对照组差异不显著
（Ｐ＞０．０５）。结果表明，长时间、高剂量地摄食小花
棘豆可显著影响家兔丘脑－垂体－性腺轴中 ＡＭＡ的
活性，其中丘脑受到的影响最为明显。
图１ 小花棘豆中毒对家兔ＡＭＡ在丘脑－垂体－性腺轴分布的影响（ＩＨＣ×４００）
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ．分别为对照组丘脑、垂体、睾丸、卵巢组织；Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ．分别为攻毒第７０天时试验Ⅲ组丘脑、垂体、睾丸、卵巢组织
Ｆｉｇ．１ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｇｌａｂｒａ ＤＣ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ｏｎ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ＡＭＡ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－
ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ｏｆ ｒａｂｂｉｔｓ（ＩＨＣ×４００）
Ａ，Ｂ，Ｃ ａｎｄ Ｄ ｗｅｒｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ＡＭＡ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ，ｐｉｔｕｉｔａｒｙ，ｔｅｓｔｉｓ ａｎｄ ｏｖａｒｙ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，Ｅ，Ｆ，Ｇ ａｎｄ Ｈ ｗｅｒｅ
ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ＡＭＡ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ，ｐｉｔｕｉｔａｒｙ，ｔｅｓｔｉｓ ａｎｄ ｏｖａｒｙ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐⅢｉｎ ７０ｄ
表２ 小花棘豆中毒对家兔丘脑－垂体－性腺轴中ＡＭＡ活性的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｇｌａｂｒａ ＤＣ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＡＭＡ ｉｎ
ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ｏｆ ｒａｂｂｉｔｓ ｎｍｏｌ／（ｓ·Ｌ）
组别
Ｇｒｏｕｐ
攻毒第１４天１４ｄａｙ ｂｙ ｃｈａｌｅｎｇｅｄ
丘脑 Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ 垂体Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ 睾丸 Ｔｅｓｔｉｓ 卵巢 Ｏｖａｒｙ
对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ２１．２３±３．２７ａ ２０．１３±４．２４ａ １６．５８±２．６３ １４．３２±２．５８
试验Ⅰ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅠ ２１．３５±４．３４ａ ２１．０５±４．３７ａｂ １５．３７±２．１０ １３．９７±３．００
试验Ⅱ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅡ １７．１３±５．２８ａｂ １８．１５±３．９２ａｂ １４．６４±２．０４ １３．５３±２．７１
试验Ⅲ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅢ １５．０８±４．０５ｂ １５．０１±３．６３ｂ １３．５３±２．７１ １４．０４±２．９４
４４ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４４卷
表２（续） Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ ｔａｂｌｅ ２
组别
Ｇｒｏｕｐ
攻毒第３５天３５ｄａｙ ｂｙ ｃｈａｌｅｎｇｅｄ
丘脑 Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ 垂体Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ 睾丸 Ｔｅｓｔｉｓ 卵巢 Ｏｖａｒｙ
对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ２１．２２±３．０２ａＡ ２１．４０±３．８２ａＡ １７．０７±２．３５ａＡ １４．０５±２．４１ａＡ
试验Ⅰ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅠ １７．１６±３．５０ａｂＡ １８．０４±４．４１ａｂＡ １６．２１±１．９７ａＡ １３．１４±２．７９ａＡ
试验Ⅱ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅡ １６．２９±３．４７ｂＡ １５．３７±３．６９ｂＡ １３．１９±２．８７ａＡ １１．２５±３．８１ａＡ
试验Ⅲ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅢ １０．２４±２．６２ｃＢ １０．１８±２．０６ｃＢ ５．６２±０．８３ｂＢ ６．２６±１．０２ｂＢ
组别
Ｇｒｏｕｐ
攻毒第７０天７０ｄａｙ ｂｙ ｃｈａｌｅｎｇｅｄ
丘脑 Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ 垂体Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ 睾丸 Ｔｅｓｔｉｓ 卵巢 Ｏｖａｒｙ
对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ２０．５８±３．２４ａＡ ２０．９３±４．１２ａＡ １６．３１±２．１７ａＡ １３．５３±２．０６ａＡ
试验Ⅰ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅠ １３．２１±２．５７ｂＢ １６．９１±４．６２ｂＡ １４．７８±２．２３ａＡ １１．８６±３．１４ａＡ
试验Ⅱ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅡ １１．６４±２．８２ｂＢ １０．０９±３．１７ｃＢ ８．５０±１．１２ｂＢ ９．６５±２．７３ｂＡ
试验Ⅲ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅢ ９．８７±２．６６ｂＢ ８．６４±１．８９ｃＢ ４．４５±０．７６ｃＣ ５．２４±１．３４ｃＢ
注：同列数据后标不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５），标不同大写字母表示差异极显著（Ｐ＜０．０１）。下表同。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｍａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃａｐｉｔａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｖｅｒｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜
０．０１）．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
２．３ 小花棘豆对家兔丘脑－垂体－性腺轴ＡＭＡｍＲ－
ＮＡ表达水平的影响
２．３．１ 引物的特异性验证 普通ＰＣＲ结果如图２
所示。由图２可看出，β－ａｃｔｉｎ在１００ｂｐ左右出现条
带，ＡＭＡ１和ＡＭＡ２基因分别在１００和２００ｂｐ间
出现２条清晰条带，与试验预期的目的条带长度相
符，表明引物特异性良好。测序结果表明，β－ａｃｔｉｎ、
ＡＭＡ１和ＡＭＡ２基因的序列都与预期的片段长度
基本一致，且与 ＧｅｎＢａｎｋ中的物种序列进行比对
后，ＡＭＡ１和ＡＭＡ２基因与家兔序列的相似性均在
９６％以上。
图２ 家兔β－ａｃｔｉｎ、ＡＭＡ１和ＡＭＡ２
基因的ＰＣＲ扩增
Ｍ．ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ；１．ＡＭＡ１扩增产物；
２．ＡＭＡ２扩增产物；３．β－ａｃｔｉｎ扩增产物
Ｆｉｇ．２ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆβ－ａｃｔｉｎ，ＡＭＡ１ａｎｄ
ＡＭＡ２ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ
Ｍ．ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ；１．ＡＭＡ１ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ；２．ＡＭＡ２
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ；３．β－ａｃｔｉｎ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ
２．３．２ ＡＭＡ１ｍＲＮＡ的表达水平 由表３可知，
各试验组家兔丘脑－垂体－性腺中ＡＭＡ１均有表达。
攻毒第１４天时，试验Ⅲ组家兔ＡＭＡ１ｍＲＮＡ在丘
脑中表达量较对照组显著下降（Ｐ＜０．０５），而垂体、
睾丸和卵巢中的表达量均与对照组差异不显著
（Ｐ＞０．０５）；试验Ⅰ和Ⅱ组家兔丘脑－垂体－性腺中
ＡＭＡ１ｍＲＮＡ表达量均与对照组差异不显著（Ｐ＞
０．０５）。攻毒第３５天时，试验Ⅲ组家兔丘脑－垂体－
性腺轴中ＡＭＡ１ｍＲＮＡ表达量均极显著低于对照
组（Ｐ＜０．０１）；试验Ⅱ组家兔丘脑的表达量极显著
低于对照组（Ｐ＜０．０１），垂体的表达量显著低于对
照组（Ｐ＜０．０５）；试验Ⅰ组的表达量与对照组差异
不显著（Ｐ＞０．０５）。攻毒第７０天时，试验Ⅲ组家兔
丘脑－垂体－性腺中ＡＭＡ１ｍＲＮＡ表达量极显著低
于对照组（Ｐ＜０．０１）；试验Ⅱ组家兔丘脑、垂体和睾
丸中的表达量极显著低于对照组（Ｐ＜０．０１），而卵
巢的表达量显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）；试验Ⅰ组
家兔的表达量与对照组差异不显著（Ｐ＞０．０５）。试
验结果表明，大剂量、长时间饲喂小花棘豆可显著影
响家兔丘脑－垂体－性腺轴中ＡＭＡ１ｍＲＮＡ的表达
水平。
２．３．３ ＡＭＡ２ｍＲＮＡ的表达水平 由表４可知，
ＡＭＡ２在各试验组家兔丘脑－垂体－性腺轴中均有表
达。与对照组相比，攻毒第１４和３５天时，试验Ⅰ、
Ⅱ和Ⅲ组家兔丘脑－垂体－性腺轴中ＡＭＡ２ｍＲＮＡ
表达量均与对照组差异不显著（Ｐ＞０．０５）。攻毒第
７０天时，试验Ⅲ组家兔睾丸和卵巢组织中ＡＭＡ２
ｍＲＮＡ表达量显著低于对照组（Ｐ＜０．０５），而丘脑
和垂体组织中的表达量与对照组差异不显著（Ｐ＞
０．０５）；试验Ⅰ和Ⅱ组家兔丘脑－垂体－性腺轴中
ＡＭＡ２ｍＲＮＡ 表达量与对照组差异不显著（Ｐ＞
０．０５）。结合表３结果可知，小花棘豆中毒对家兔丘
脑－垂体－性腺轴中ＡＭＡ１ｍＲＮＡ表达量的影响较
５４第８期 王 帅，等：小花棘豆中毒对家兔丘脑－垂体－性腺轴α－甘露糖苷酶的影响
为显著，对ＡＭＡ２ｍＲＮＡ表达量的影响不明显。
表３ 小花棘豆中毒对家兔丘脑－垂体－性腺轴中ＡＭＡ１基因ｍＲＮＡ相对表达量的影响
Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｇｌａｂｒａ ＤＣ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ｏｎ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＡＭＡ１ｍＲＮＡ ｉｎ
ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ｏｆ ｒａｂｂｉｔｓ
组别
Ｇｒｏｕｐ
攻毒第１４天１４ｄａｙ ｂｙ ｃｈａｌｅｎｇｅｄ
丘脑 Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ 垂体Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ 睾丸 Ｔｅｓｔｉｓ 卵巢 Ｏｖａｒｙ
对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ １．３３±０．２９ａ １．２５±０．３４ ０．８４±０．２０ ０．８０±０．１６
试验Ⅰ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅠ １．３６±０．２８ａ １．３２±０．３２ ０．７８±０．１７ ０．７７±０．１７
试验Ⅱ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅡ ０．８９±０．１１ａｂ １．１７±０．３１ ０．７５±０．１６ ０．７８±０．１６
试验Ⅲ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅢ ０．７４±０．１６ｂ ０．９２±０．２４ ０．６９±０．１２ ０．７５±０．１２
组别
Ｇｒｏｕｐ
攻毒第３５天３５ｄａｙ ｂｙ ｃｈａｌｅｎｇｅｄ
丘脑 Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ 垂体Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ 睾丸 Ｔｅｓｔｉｓ 卵巢 Ｏｖａｒｙ
对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ １．３３±０．２６ａＡ １．２５±０．３４ａＡ ０．８６±０．２１ａＡ ０．８１±０．２０ａＡ
试验Ⅰ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅠ ０．９４±０．１２ａＡ ０．９６±０．２５ａＡ ０．８２±０．１９ａＡ ０．７７±０．１８ａＡ
试验Ⅱ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅡ ０．７７±０．１４ｂＢ ０．７６±０．１９ｂＡＢ ０．６８±０．１７ａＡ ０．７１±０．２６ａＡ
试验Ⅲ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅢ ０．６９±０．１６ｃＢ ０．７０±０．１３ｃＢ ０．２８±０．０４ｂＢ ０．３２±０．１４ｂＢ
组别
Ｇｒｏｕｐ
攻毒第７０天７０ｄａｙ ｂｙ ｃｈａｌｅｎｇｅｄ
丘脑 Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ 垂体Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ 睾丸 Ｔｅｓｔｉｓ 卵巢 Ｏｖａｒｙ
对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ １．２８±０．２２ａＡ １．２３±０．３０ａＡ ０．７９±０．１６ａＡ ０．８０±０．１８ａＡ
试验Ⅰ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅠ ０．８６±０．１８ａＡ ０．８４±０．２１ａＡ ０．７５±０．２２ａＡ ０．７２±０．２０ａＡ
试验Ⅱ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅡ ０．６９±０．１０ｂＢ ０．６３±０．１４ｂＢ ０．４５±０．０８ｂＢ ０．６０±０．１３ａＡ
试验Ⅲ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅢ ０．６４±０．１１ｂＢ ０．４５±０．０６ｂＢ ０．２０±０．０３ｃＣ ０．２６±０．０９ｃＢ
表４ 小花棘豆中毒对家兔丘脑－垂体－性腺轴中ＡＭＡ２基因ｍＲＮＡ相对表达量的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｇｌａｂｒａ ＤＣ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ｏｎ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＡＭＡ２ｍＲＮＡ ｉｎ
ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ－ｇｏｎａｄ ｏｆ ｒａｂｂｉｔｓ
组别
Ｇｒｏｕｐ
攻毒第１４天１４ｄａｙ ｂｙ ｃｈａｌｅｎｇｅｄ
丘脑 Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ 垂体Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ 睾丸 Ｔｅｓｔｉｓ 卵巢 Ｏｖａｒｙ
对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ０．３５±０．０７ ０．３５±０．０８ ０．３６±０．０９ ０．３２±０．０８
试验Ⅰ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅠ ０．３６±０．０８ ０．３２±０．０６ ０．３５±０．０７ ０．３１±０．０７
试验Ⅱ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅡ ０．３５±０．１０ ０．３７±０．０８ ０．３５±０．０８ ０．３１±０．０８
试验Ⅲ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅢ ０．３４±０．０６ ０．３２±０．０８ ０．３３±０．０６ ０．３２±０．０８
组别
Ｇｒｏｕｐ
攻毒第３５天３５ｄａｙ ｂｙ ｃｈａｌｅｎｇｅｄ
丘脑 Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ 垂体Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ 睾丸 Ｔｅｓｔｉｓ 卵巢 Ｏｖａｒｙ
对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ０．３３±０．０６ ０．３４±０．０７ ０．３６±０．０８ ０．３２±０．０７
试验Ⅰ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅠ ０．３４±０．０８ ０．３２±０．０６ ０．３２±０．０６ ０．３０±０．０６
试验Ⅱ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅡ ０．３７±０．０７ ０．３１±０．０９ ０．３０±０．０７ ０．３０±０．０７
试验Ⅲ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅢ ０．２９±０．０６ ０．３０±０．０５ ０．３０±０．０６ ０．３０±０．０６
组别
Ｇｒｏｕｐ
攻毒第７０天７０ｄａｙ ｂｙ ｃｈａｌｅｎｇｅｄ
丘脑 Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ 垂体Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ 睾丸 Ｔｅｓｔｉｓ 卵巢 Ｏｖａｒｙ
对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ０．３６±０．０８ ０．３３±０．０７ ０．３５±０．０６ａ ０．３０±０．０７ａ
试验Ⅰ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅠ ０．３１±０．０８ ０．３４±０．０８ ０．３２±０．０７ａ ０．３１±０．０７ａ
试验Ⅱ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅡ ０．２９±０．１０ ０．３０±０．０８ ０．２７±０．０４ａｂ ０．２８±０．０４ａｂ
试验Ⅲ组 Ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐⅢ ０．２８±０．０５ ０．２８±０．０６ ０．２４±０．０３ｂ ０．２１±０．０４ｂ
３ 讨 论
ＳＷ是小花棘豆的主要毒性成分，可强烈地、特
异性地与ＡＭＡ结合，从而使机体甘露糖代谢发生
异常，导致甘露糖在细胞中大量蓄积而造成细胞空
泡变性，最终导致细胞损伤［７］。贾琦珍等［８］研究表
明，小花棘豆中毒可导致家兔脑组织与性腺损伤，而
且脑指数、睾丸指数、卵巢指数与小花棘豆中毒均极
显著相关（Ｐ＜０．０１）。丁伯良等［９－１０］研究认为，甘肃
棘豆（主要毒性成分为ＳＷ）中毒山羊睾丸、附睾、卵
巢、胎盘组织细胞的空泡变性与 ＡＭＡ活性下降有
关。本试验发现，ＡＭＡ在家兔丘脑－垂体－性腺轴中
均有分布，但在小花棘豆中毒家兔该组织中的
ＡＭＡ活性显著下降，而且与时间－剂量呈正相关，表
明ＳＷ 可通过影响ＡＭＡ导致动物中毒。
ＡＭＡ在机体糖蛋白合成和代谢方面具有重要
的作用，可在 Ｎ－糖基化过程中对甘露糖进行加工。
该过程与蛋白的折叠、运输、成熟、构象维持、半衰期
６４ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４４卷
及生物活性密切相关。ＡＭＡ既是Ｎ－聚糖成熟的必
要酶，也参与Ｎ－聚糖的降解［１１］。荣杰［５］、宋岩岩［１２］
研究发现，ＳＷ 可显著影响大鼠 ＡＭＡ在脑组织中
的相对表达量；张建军等［１３］研究发现，小花棘豆中
毒可显著影响小鼠肝脏组织内 ＡＭＡ的相对表达
量，中、高剂量攻毒组可显著降低肝脏组织内的
ＡＭＡ基因的相对表达量。本试验结果发现，小花
棘豆毒性成分ＳＷ 可显著影响家兔丘脑－垂体－性腺
轴中ＡＭＡ１和ＡＭＡ２在 ｍＲＮＡ水平的表达量，而
且其对ＡＭＡ１ｍＲＮＡ表达量的影响更为显著，该
结果与文献［５，１２－１３］的研究结果一致。另外免疫
组化试验发现，小花棘豆中毒家兔丘脑－垂体－性腺
轴中ＡＭＡ分布均有一定程度的下降。ＡＭＡ按其
在亚细胞器中的分布可分为ＡＭＡ１、ＡＭＡ２和细胞
质α－甘露糖苷酶，动物小花棘豆中毒主要抑制哪种
ＡＭＡ尚不明确，对其转录、翻译、加工修饰是否产
生影响还不清楚。本试验结果表明，小花棘豆毒性
成分可从 ｍＲＮＡ水平和蛋白表达水平影响ＡＭＡ
的表达，这为揭示小花棘豆中毒的机理奠定了基础。
丘脑和垂体是动物内分泌的控制中心，并分泌
大量与生殖相关的激素，性腺是多种性激素的受体。
丘脑－垂体－性腺轴任何部位出现功能紊乱或病变，
都会影响动物性激素的分泌，从而导致一系列的临
床病症出现。ＡＭＡ活性受到抑制可导致细胞内糖
蛋白的Ｎ－糖基化合成、加工、转运等过程发生变化，
临床上表现为生殖、内分泌和免疫功能紊乱［１４］。本
试验结果表明，中、高剂量小花棘豆攻毒对家兔丘
脑－垂体－性腺ＡＭＡ的活性与表达产生显著影响。
本项目组前期研究表明，小花棘豆中毒可导致动物
性欲下降，其原因是否与中毒导致丘脑－垂体－性腺
轴损伤有关有待于进一步研究。
４ 结 论
小花棘豆中毒可导致家兔丘脑－垂体－性腺轴
ＡＭＡ活性与表达水平显著下降，而且下降程度与
小花棘豆摄入量呈正相关。小花棘豆中毒对
ＡＭＡ１的影响较为显著，其可通过 ｍＲＮＡ水平和
蛋白表达水平影响ＡＭＡ１在机体中的作用。
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８４ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第４４卷