全 文 ：2014 年 4 月 第 16 卷 第 4 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Apr. 2014 Vol. 16 No. 4
△ ［基金项目］ 国家自然科学基金项目(31170335) ;武汉市重点科技攻关计划项目(201160823265)
* ［通信作者］ 张秀桥，教授，研究方向:中药的品种、质量及资源开发研究;Email:qiaoxzh2000@ 163. com
不同产地及不同药用部位大叶蛇葡萄中
蛇葡萄素和杨梅苷的含量测定
△
陈敏，凃媛，桂春，程佩佩，严瀛灏，张秀桥*
(湖北中医药大学 药学院，湖北 武汉 430065)
［摘要］ 目的:建立 ＲP-HPLC同时测定不同产地、不同药用部位大叶蛇葡萄中蛇葡萄素和杨梅苷含量的方法。
方法:大叶蛇葡萄样品先用石油醚超声脱脂，再用甲醇超声提取;分析柱选用 Angilent TC-C18(250 mm × 4. 6 mm，
5 μm)色谱柱，以乙腈 － 0. 1%磷酸水溶液进行洗脱(20∶80，v /v) ，柱温 25 ℃，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 254
nm。结果:蛇葡萄素在 16. 6 ～ 415. 0 μg·mL －1与峰面积呈现良好的线性关系(r = 0. 999 8) ，平均回收率为 98. 25%，
ＲSD = 1. 14%(n = 6) ;杨梅苷在 1. 0 ～ 25. 5 μg·mL －1与峰面积呈现良好的线性关系(r = 0. 999 5) ，平均回收率为
98. 19%，ＲSD = 1. 16%(n = 6)。结论:蛇葡萄素和杨梅苷成分因产地和药用部位不同，含量差异较大。该方法操作
简便、可靠，可为大叶蛇葡萄的质量控制和开发利用提供实验依据。
［关键词］ 大叶蛇葡萄;蛇葡萄素;杨梅苷;ＲP-HPLC
Determination of Ampelopsin and Myricitrin in Ampelopsis megalophylla from Different Places and
Medicinal Parts by ＲP-HPLC
CHEN Min，TU Yuan，GUI Chun，CHENG Peipei，YAN Yinghao，ZHANG Xiuqiao*
(Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China)
［Abstract］ Objective:Establish ＲP-HPLC method for determining of Ampelopsin and Myricitrin in
Ampelopsis megalophylla from different places and medicinal parts. Methods:After ultrasonic treatment with
petroleum ether and methanol， the separation was achieved on a Angilent TC-C18(250 mm × 4. 6 mm，
5 μm)column at 25 ℃ using methyl cyanide-0. 1% phosphoric acid solution(20 ∶80，v /v)as the mobile
phase at a flow rate of 1. 0 mL·min －1. The detection wavelength was 254 nm. Ｒesults:Ampelopsin showed
good linear at the range of 16. 6 ～ 415. 0 μg·mL －1(r = 0. 999 8). The recovery was 98. 25% and ＲSD was
1. 14%(n = 6). Myricitrin showed good linear at the range of 1. 0 ～ 25. 5 μg·mL －1(r = 0. 999 5). The
recovery was 98. 19% and ＲSD was 1. 16%(n = 6). Conclusion:The contents of the two components are
obviously different because from different places and medicinal parts. The proposed method is simple and
reliable. It can provide experimental evidence for quality control，development and utilization of Ampelopsis
megalophylla.
［Key words］ Ampelopsis megalophylla;Ampelopsin;Myricitrin;ＲP-HPLC
doi:10. 13313 / j． issn. 1673-4890. 2014. 04. 006
大叶蛇葡萄 Ampelopsis megalophylla Diels et. Gilg
为葡萄科蛇葡萄属植物，曾以 “霉茶”之名收载于
《湖北中草药志》，为湖北西部地区常用中草药，药
用其叶和嫩茎。性凉，味微涩，具有清热凉血等功
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效，用于高血压、头昏目胀等治疗［1］。本课题组前
期对大叶蛇葡萄进行了药材性状、显微鉴别研究［2］
以及化学成分研究［3］，从中分离和鉴定了蛇葡萄素、
杨梅素及杨梅苷等 9 个成分;并对其提取物进行了
药理活性筛选，确定乙酸乙酯部位为降血压有效部
位［4］，且进一步确定了蛇葡萄素、杨梅苷等为降血
压活性成分［5］。本文采用 ＲP-HPLC 对湖北鄂西自治
州来凤县不同产地大叶蛇葡萄样品及同一样品不同
药用部位中活性成分蛇葡萄素和杨梅苷的含量进行
测定及比较分析，为大叶蛇葡萄的质量控制和开发
利用提供实验依据。
1 材料
Dionex-P680 高效液相色谱仪(四元泵系统、
Dionex-UVD170U 紫外检测器、色谱柱恒温箱、
Dionex-chemistation色谱工作站，德国) ;分析天平
(瑞士 Mettler-Toledo公司) ;KB-250B 型超声波清洗
器(昆山市超声仪器有限公司)。
乙腈(色谱纯，天地公司) ，双蒸水，甲醇、石
油醚(60 ～ 90 ℃)及磷酸均为分析纯。蛇葡萄素对照
品(上海源叶生物科技有限公司，批号:20120916，
供含量测定用) ，杨梅苷对照品(上海同田生物技术
有限公司，批号:11060222，供含量测定用)。大叶
蛇葡萄药材共 11 批，见表 1，分别采集于湖北省鄂
西自治州来凤县，经湖北中医药大学药学院张秀桥
教授鉴定为 Ampelopsis megalophylla Diels et. Gilg 的茎
叶、花、果实。
表 1 大叶蛇葡萄药材来源
编号 采集地
采集时间 /
年-月-日 药用部位
S1 来凤县革勒乡桐麻村 2011-08-23 叶和嫩茎
S2 来凤县革勒乡土家寨村 1 2011-08-24 叶和嫩茎
S3 来凤县革勒乡土家寨村 2 2011-08-24 叶和嫩茎
S4 来凤县革勒乡土家寨村 3 2011-08-24 叶和嫩茎
S5 来凤县革勒乡土家寨村 4 2011-08-24 叶和嫩茎
S6 来凤县革勒乡小河村 2 组 1 2011-08-24 叶和嫩茎
S7 来凤县革勒乡小河村 2 组 2 2011-08-24 叶和嫩茎
S8 来凤县革勒乡小河村 1 组 1 2012-07-24 叶和嫩茎
S9 来凤县革勒乡小河村 2 组 3 2012-07-24 叶和嫩茎
S10 来凤县革勒乡小河村 1 组 2 2012-08-10 叶和嫩茎
S11 来凤县革勒乡小河村 2 组 4 2012-08-15 叶和嫩茎
S12 来凤县革勒乡土家寨村 2 2011-08-24 茎
S13 来凤县革勒乡土家寨村 2 2011-08-24 果实
S14 来凤县革勒乡土家寨村 2 2011-08-24 花
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液的制备
大叶蛇葡萄样品于 60 ℃干燥至恒重，用粉碎机
粉碎，过 60 目筛。精密称取样品约 0. 5 g，置锥形
瓶中，加入石油醚 25 mL，浸泡 30 min，超声(功率
250 W，频率 40 kHz)提取 30 min，过滤，挥干溶
剂;滤渣加甲醇 25 mL，称重，浸泡 30 min，超声
(功率 250 W，频率 40 kHz)提取 30 min 后放冷，称
重，用甲醇补足损失的质量，振荡摇匀，过滤;精
密吸取续滤液 1 mL于 25 mL容量瓶中，加甲醇稀释
至刻度，振荡摇匀，用 0. 45 μm 微孔滤膜过滤，取
续滤液即得供试品溶液。
2. 2 对照品溶液的制备
分别精密称取减压干燥至恒重的蛇葡萄素和杨
梅苷对照品适量，置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶
解并稀释至刻度，摇匀，制成每 1 mL 含蛇葡萄素
830. 0 μg、杨梅苷 51. 0 μg的溶液，作为混合对照品
溶液。
2. 3 色谱条件
Angilent TC-C18色谱柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)，
流动相为乙腈 －0. 1%磷酸水溶液(20∶80，v /v)，流速
为 1. 0 mL·min －1，柱温为 25 ℃，检测波长为 254 nm，
进样量为 20 μL。混合对照品及样品色谱图见图 1。
A. 混合对照品 B. 样品 1. 蛇葡萄素 2. 杨梅苷
图 1 混合对照品及大叶蛇葡萄样品 HPLC图
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2. 4 线性关系考察
精密量取上述混合对照品溶液 0. 2，2，3，4，
5 mL于 10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。
分别按 2. 3 项下色谱条件进样，记录色谱峰面积。
以质量浓度 X为横坐标，峰面积 Y 为纵坐标，进行
线性回归分析。蛇葡萄素回归方程:Y = 132. 27X +
0. 192 6 (r = 0. 999 8) ;杨梅苷回归方程:Y =
0. 318 5X + 0. 115 9(r = 0. 999 5)。结果表明蛇葡萄
素和杨梅苷分别在 16. 6 ～ 415. 0 μg·mL －1、1. 0 ～
25. 5 μg·mL －1呈现良好的线性关系。
2. 5 精密度试验
精密吸取蛇葡萄素和杨梅苷混合对照品溶液 20
μL，重复进样 6 次，测定峰面积，蛇葡萄素和杨梅
苷峰面积 ＲSD分别为 1. 48%，1. 44%，结果表明仪
器精密度良好。
2. 6 稳定性试验
取 S9号样品 1 份，按 2. 1 项下的方法制备供试
品溶液，分别于 0，2，4，8，12，24 h进行测定，蛇
葡萄素和杨梅苷峰面积的 ＲSD 分别为 1. 76%、
1. 78%。结果表明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 7 重复性试验
取 S9 号样品 6 份，分别按 2. 1 项下方法制备供
试品溶液，按 2. 3 项下色谱条件测定蛇葡萄素和杨
梅苷峰面积，以外标法计算含量，蛇葡萄素和杨梅
苷含量的 ＲSD分别为 2. 59%、2. 78%。结果表明供
试品溶液制备方法重复性良好。
2. 8 加样回收率试验
精密称取已知蛇葡萄素和杨梅苷含量的 S9 号样
品 6 份，每份约 0. 25 g，分别精密加入蛇葡萄素对
照品和杨梅苷对照品适量，按 2. 1 项下方法制备供
试品溶液，按 2. 3 项下色谱条件测定蛇葡萄素和杨
梅苷峰面积，计算含量和回收率，结果见表 2 和
表 3。
表 2 大叶蛇葡萄中蛇葡萄素回收率试验
称样量
/ g
样品中含
量 /mg
对照品加
入量 /mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
ＲSD
/%
0. 250 3 57. 633 9 46. 11 102. 664 9 97. 66 98. 25 1. 14
0. 249 9 57. 541 7 46. 11 103. 684 0 100. 07
0. 249 5 57. 449 6 57. 45 113. 928 7 98. 31
0. 250 8 57. 749 0 57. 45 113. 308 9 96. 71
0. 251 1 57. 818 1 69. 38 125. 435 8 97. 46
0. 249 7 57. 495 7 69. 38 125. 411 8 97. 89
表 3 大叶蛇葡萄中杨梅苷回收率试验
称样量
/ g
样品中含
量 /mg
对照品加
入量 /mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
ＲSD
/%
0. 250 3 4. 587 5 3. 67 8. 115 8 96. 14 98. 19 1. 16
0. 249 9 4. 580 2 3. 67 8. 143 8 97. 10
0. 249 5 4. 572 9 4. 57 9. 068 0 98. 36
0. 250 8 4. 596 7 4. 57 9. 052 5 97. 50
0. 251 1 4. 602 2 5. 52 10. 127 7 100. 10
0. 249 7 4. 576 5 5. 52 10. 080 0 99. 70
2. 9 样品含量测定
精密称取不同来源及不同药用部位的样品粉末
各 0. 5 g，按 2. 1 项下方法制备供试品溶液，按 2. 3
项下色谱条件测定蛇葡萄素和杨梅苷峰面积，以外
标法计算含量，结果见表 4。
表 4 不同来源及不同药用部位大叶蛇葡萄中
蛇葡萄素和杨梅苷含量测定
/%
NO. 蛇葡萄素含量 杨梅苷含量
S1 — 0. 799 1
S2 12. 196 9 2. 075 1
S3 16. 691 6 2. 414 1
S4 12. 750 8 1. 057 7
S5 11. 790 5 1. 020 4
S6 13. 288 8 0. 658 6
S7 22. 871 1 0. 914 9
S8 19. 468 0 2. 273 2
S9 23. 025 9 1. 832 8
S10 19. 121 1 0. 391 5
S11 16. 069 6 1. 842 9
S12 3. 679 4 0. 290 8
S13 — —
S14 26. 568 3 0. 602 2
注:—表示未检出
3 讨论
3. 1 检测波长的选择
杨梅苷在 254 nm 处有最大吸收，蛇葡萄素在
292 nm处有最大吸收，在 254 nm处有吸收，故选择
检测波长为 254 nm。
3. 2 流动相的选择
本文考察了乙腈 － 0. 1%磷酸水溶液、乙腈 －
0. 2%磷酸水溶液和乙腈 － 0. 4%磷酸水溶液，其中
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0. 1%和 0. 4% 的流动相系统得到的峰型较好，但
0. 4%磷酸水溶液酸度较高，对色谱柱损坏较大，故
选择乙腈 － 0. 1%磷酸水为流动相。同时比较了等度
洗脱和梯度洗脱，结果显示等度洗脱分离效果已较
好，故选择乙腈 － 0. 1%磷酸水溶液(20∶80，v /v)等
度洗脱 30 min。
3. 3 柱温的选择
在等度洗脱条件下，分别比较了 25，30，40 ℃
柱温条件下的分离效果，结果显示 25 ℃分离效果良
好，故选择柱温 25 ℃。
3. 4 供试品溶液制备方法的选择
考察了不加石油醚脱脂、石油醚超声脱脂和石
油醚回流脱脂 3 种方法制备供试品溶液，结果显示
不加石油醚脱脂，色素易对色谱柱造成死吸附，且
常出现肩峰;石油醚超声脱脂和石油醚回流脱脂后
的峰型相似，由于石油醚回流脱脂需回流 2 h，耗时
较长，故选择石油醚超声脱脂。
3. 5 不同产地样品中蛇葡萄素和杨梅苷的含量分析
该两种成分因产地不同，含量差异较大，其中
来凤县革勒乡小河村 2 组 3(S9)蛇葡萄素含量最高，
来凤县革勒乡土家寨村 2(S3)杨梅苷含量最高。
3. 6 不同药用部位中蛇葡萄素和杨梅苷的含量分析
大叶蛇葡萄不同药用部位的蛇葡萄素和杨梅苷
含量差异较大。比较 S3 号样品叶和嫩茎、茎、果
实、花 4 个部位中蛇葡萄素和杨梅苷的含量，结果
蛇葡萄素的含量为:花 ＞叶和嫩茎 ＞茎 ＞果实，杨
梅苷的含量为:叶和嫩茎 ＞花 ＞茎 ＞果实，果实中
蛇葡萄素和杨梅苷的含量几乎不能检出。实验结果
提示传统习用其叶和嫩茎的准确性，同时提示其花
具有药用价值。
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