全 文 ：第 16卷　第 1期
2001年 4月
内蒙古民族大学学报(自然科学版)
Journal of Inner Mongolin University fo r Nationali ties
Vol.16 No.1
Apr.2001
正交设计研究蒙药多叶棘豆总黄酮提取工艺
巴根那 ,白玉霞 ,布日额 ,白翠兰
(内蒙古民族大学蒙医药学院内蒙古 通辽　028041)
摘　要:为多叶棘豆总黄酮提取工艺提供依据 , 采用正交设计优选了其最佳参数.结果表明 , 最佳提取工艺组
为 A2B2C2 , 即加药材 8 倍量的 75%乙醇 ,回流提取 2次 ,每次 1 h.
关键词:多叶棘豆;总黄酮;提取
中图分类号:R927.2　　文献标识码:A　　文章编号:1671—0185(2001)01-0077-03
Extractive Technology of Total Amount of Flavoids
from Mongolian Medicine Herba Euphorbiae
Humifusae with Orthogonal Test
Bagenna ,BAI Yu-xia , Burie ,BAI Cui-lan
(Mongolian Medical College , Inner Mongolia University for Nationalities , Tongliao 028041 , China)
Abstract:Optimum ex tractive technology of total f lavonoids f rom traditional Mongolian medicine
herba euphorbiae humifusae w as studied with orthogonal test here four factors.The results showed
that optimum ex tractive technology of coarse powder of herba euphorbiae humifusae was adding
eight times volume of 75%alcohol and immersing 12 h , and then reflux ex tracting 1h and ext ract-
ing 2 times.
Key words:Herba Euphorbiae Humifusae;Total f lavonoids;Extractive technology
多叶棘豆为豆科植物狐尾藻棘豆(Oxytropis myriophylla(pall.)DC.)的干燥地上部分 ,其蒙名为娜布
其尔哈格-敖日道扎 、查干-达克沙 、达林-敖日道扎 ,是蒙医常用的杀粘 、清热药〔1〕.多叶棘豆味苦 、甘 ,
性凉;具有杀粘 、清热 、燥黄水 、愈伤 、生肌 、合脉止血 、消肿 、软便之功效.主要用于瘟疫 、炎症 、丹毒 、腮腺
炎 、阵刺痛 、肠刺痛 、脑刺痛 、麻疹 、颈强病 、痛风 、游痛症 、创伤 、抽筋 、鼻衄 、创伤出血 、月经过多 、吐血 、咳痰
等症〔2〕.化学成分研究证实 ,多叶棘豆地上部分含有多种黄酮类化合物〔3〕 ,其含量较高〔3 ,4〕.我们曾对多叶
棘豆总黄酮提取液抗自由基作用进行研究 ,结果证明多叶棘豆有很强的清除和抑制自由基的作用〔5〕.为
探索多叶棘豆总黄酮提取最适条件 ,提取工艺提供信息 ,以总黄酮含量为考察指标 ,采用正交实验等方法
对多叶棘豆总黄酮提取工艺进行了系统研究.
1　材料与仪器
蒙药多叶棘豆 ,采自内蒙古通辽市罕山地区.经鉴定为多叶棘豆 Oxytropis myriophyl la(Pall.)DC.的
全草.芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供 ,批号为 0080-9504 ,甲醇 、乙醇等化学试剂均为 AR
级 ,实验用水为亚沸提纯水.日立 557 双波长双光束分光光度计 , 754分光光度计(上海三分厂), FA2004
电子天平(上海天平仪器厂).
收稿日期:2001-03-02
项目基金:内蒙古自然科学基金资助项目(20001306)
作者简介:巴根那(1960-),男(蒙古族),副教授 ,主要从事蒙药方剂及蒙药新药开发等方面研究.
DOI :10.14045/j.cnki.15-1220.2001.01.024
2　实验方法
2.1　实验条件的选择
2.1.1　最大吸收波长及稳定性考察　精密量取芦丁对照品液和样品液各 5.0 ml ,分别置 25 ml容量瓶
中 ,加水至 6 ml ,加 5%的亚硝酸钠液 1.0 ml ,使混匀 ,放置 6 min ,加 10%硝酸铝试液1.0 ml ,摇匀 ,放置 6
min ,加 10%氢氧化钠试液 10 ml ,加水至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min ,以相应试剂作空白 ,于 557双光束/双波
长分光光度计上进行全波长扫描 ,最大吸收波长为λmax500 nm ,同时 ,在 500 nm 波长处进行时间扫描 ,结
果见表 1.显示 150 min内基本稳定.
表 1　放置时间对吸收度的影响
Table 1　Effects of stored time on rate of absorption
放置时间(min) 5 10 15 20 25 30 45 60 100 150
对照品(A) 0.057 0.057 0.056 0.056 0.056 0.057 0.056 0.056 0.056 0.057
供试液(A) 0.228 0.227 0.225 0.223 0.223 0.221 0.220 0.217 0.213 0.206
2.1.2　标准曲线的制备〔6〕　精密称取在 120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品 11.1 mg ,加甲醇溶解 ,转入
100 ml容量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度摇匀 ,即得对照品液(0.111 mg/ml).精密吸取该液 0.0 , 1.0 , 2.0 ,
3.0 ,4.0 ,5.0 ,6.0 m l ,分别置 25 ml容量瓶中 ,加水至 6 ml ,加 5%亚硝酸钠试液 1.0 ml ,使混匀 ,放置 6
min ,加 10%硝酸铝试液 1.0 ml ,摇匀 ,放置 6 min ,加 10%氢氧化钠试液 10 ml ,再加水至刻度 ,摇匀 ,放置
15 min ,以相应试剂作空白 ,于 500 nm 处测定吸收度 ,结果见表2.以浓度(C)与吸收度(A)进行直线回归 ,
得回归方程为 C=1.9338A +0.0157 , r=0.9998.
表 2　芦丁对照品浓度与吸收度
Table 2　The concentration of rutin density and rate of absorption
浓度(mg/ ml) 0.111 0.222 0.333 0.444 0.555 0.666
吸收度 A 0.049 0.107 0.166 0.218 0.281 0.336
2.1.3　加样回收率测定　称取多叶棘豆粗粉 3.0 g ×3份 ,精密称定 ,分别精密加入芦丁对照品 ,按样品
制备法制备 ,并照标准曲线制备方法测定 ,计算其回收率 ,结果见表 3.
表 3　加样回收率测定结果
Table 3　Results of rate of recovery of sample
编号 样品总黄酮量(mg) 加入量(mg) 测定值(mg) 回收率(mg) x±s(%) CV(%)
1 53.009 1 5.4 58.067 4 99.41
2 53.395 8 5.0 58.711 8 100.54 99.91±0.58 0.58
3 54.169 4 5.0 59.036 6 99.77
2.2　提取方法的选择
2.2.1　水提取法　精密称取多叶棘豆粗粉 3.0 g×3份 ,加 10倍量水 ,煮沸 60 min ,过滤.共煎煮 3次.合
并滤液定容至 100 ml备用.
2.2.2　乙醇提取法　精密称取多叶棘豆粗粉 3.0 g ×3份 ,加10倍量的 75%乙醇 ,水浴回流1 h ,过滤.共
提取 3次.合并滤液定容至 100 ml备用.
2.2.3　样品液总黄酮含量测定　精密吸取样品液 1.0 ml ,置 25 ml容量瓶中 ,按标准曲线制备方法测定
吸收度 ,计算含量.结果见表 4.
78　　　　　　　　　　　内　蒙　古　民　族　大　学　学　报 　　　　　　　　　　　2001年
表 4　多叶棘豆提取条件与含量关系
Table 4　The relation between extractive
condition and content　　　　n =3
试验号 提取条件 含量(x±s) CV%
1 水提取法 23.015 9±0.314 1.36
2 乙醇提取法 26.303 3±0.437 1.66
　　t=8.6397 , t 0.1(1 , 1)=6.314
表 5　因素水平表
Table 5　Factor levels table
水
平
因　　　　素
A乙醇浓度(%) B 提取时间(h) C 提取次数 D 空白
1 60 0.5 1 —
2 75 1.0 2 —
3 90 2.0 3 —
2.3　乙醇提取条件优选
从表 4可知 ,乙醇提取法优于水提取法(P <0.1),可采用正交实验设计 ,选用乙醇浓度 、提取时间及
提取次数 3个因素 ,每个因素选择 3个水平 ,用 L9(34)正交表进行实验设计优选 ,结果见表 5 ,6.
表 6　正交试验设计及结果分析
Table 6　Orthogonal design and results analysis
表头设计 A B C D(空白) 试验结果
列　号 1 2 3 4 总黄酮含量(mg/ g)
1 1 1 1 1 21.820 5
2 1 2 2 2 25.420 8
3 1 3 3 3 24.692 1
4 2 1 2 3 28.365 3
5 2 2 3 1 26.873 5
6 2 3 1 2 26.303 3
7 3 1 3 2 20.419 6
8 3 2 1 3 18.705 1
9 3 3 2 1 19.821 8
k1 71.933 4 70.605 4 66.828 9 68.515 8 G=212.422 0
k2 81.542 1 70.999 4 73.607 9 72.143 7 CT=5 013.68
k3 58.946 5 70.817 2 71.985 2 71.762 5 Q=1/3∑K2
R 22.595 6 0.394 0 6.779 0 3.627 9 S=Q-CT
S 85.726 0 0.024 4 8.351 3 2.648 2
3　方差分析及讨论
多叶棘豆总黄酮含量方差分析 ,结果见表 7.
表 7　多叶棘豆总黄酮含量方差分析表
Table 7　ANOVA of contens of TF from Humifusae
方差分析 离差平方和 自由度 均方 F 值 显著性
A 85.726 0 2 42.863 0 31.95 P <0.05
B 0.024 4 2 0.012 2 1 P >0.05
C 8.351 3 2 4.175 7 3.15 P >0.05
误差 2.648 2 2 1.324 1 —
　　F1-0.05(2.2)=19.0
(下转第 107页)
79第 1期　　　　　　　　巴根那等:正交设计研究蒙药多叶棘豆总黄酮提取工艺　　　　　　　　　
过 Topo Ⅱ降解 DNA和抑制胸腺嘧啶转运先于直接抑制 DNA 合成.DDP 是非特异性周期广谱化疗药物 ,
可抑制 DNA的合成 ,从细胞增殖周期分析 Vm-26与 BCNU联合应用对控制肿瘤细胞的增殖较为合理.
NMD为一种 Ca拮抗剂 ,与肿瘤化疗药物具有协同作用 ,并可逆转肿瘤细胞对化疗的耐药性〔3～ 5〕.由此可
见联合用药优于单独用药 ,具有低浓度 、抑制率高的疗效 ,降低了药物的毒副作用 ,同时也增加了药物对瘤
组织的抑制作用.说明联合用药 ,具有协同和相加作用.
参　考　文　献
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〔责任编辑　赵贤芳〕
(上接第 79页)
　　从实验结果表明 ,乙醇提取法优于水提取法(P <0.1).乙醇提取最佳方法是 A2B2C2 ,即用 8倍量的
75%乙醇回流提取 1.0 h ,共提取 2次.
乙醇提取工艺对多叶棘豆总黄酮含量的主要影响因素为乙醇浓度 ,其次是提取次数.按 A2B2C2 方案
提取多叶棘豆总黄酮 ,可增加得率 85%,可充分利用低浓度乙醇 ,并且用量小 ,降低生产成本 ,简便易行.
参　考　文　献
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〔责任编辑　赵贤芳〕
107第 1期　　　　　　　商战平等:化疗作用对 C6胶质瘤细胞药物敏感性的实验研究