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大叶蛇葡萄胶囊中总黄酮含量测定的研究



全 文 :件下主要的摄铁途径,同样在胎盘铁转运中也起关键作用。胎盘
合体滋养层细胞(syncytiotrophoblast,STB)母体侧(顶膜)主要表
达 TfR1,母体血液中 Fe3 + - Tf 与 STB 顶膜上 TfR1 结合成 Tf -
TfR复合物被内吞,在内吞小体酸性环境下,Fe3 +从 Tf中释放,脱
铁 Tf和 TfR被运回胞外可继续利用[10]。
本实验分别采用免疫组化与蛋白印迹方法检测了模型组、正
常组、寿胎丸高、中、低剂量组小鼠蜕膜组织的 Tf,结果显示,小鼠
模型组与正常组相比,蜕膜 Tf表达明显降低,差异有显著统计学
意义(P < 0. 01) ,由此提示,复发性流产时孕鼠的铁转运减少,铁
缺乏可能使在铁需求旺盛的生长发育关键期的胎鼠发育受限,导
致不良妊娠的发生。寿胎丸高剂量组与模型组相比,蜕膜 Tf 表
达升高,差异有显著统计学意义(P < 0. 01) ,而寿胎丸中、低剂量
组与模型组相比,蜕膜 Tf表达差异无统计学意义(P > 0. 05)。提
示寿胎丸能够提高摄取母血铁能力以供给胎儿,保证胎儿的铁代
谢和铁储存。有关 Tf参与母胎铁转运及其调节机制还有待于深
一步的研究。
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收稿日期:2012-11-28; 修订日期:2013-04-01
基金项目:国家自然科学基金项目( No. 31170335) ;
湖北省武汉市重点科技攻关计划项目( No. 201160823265)
作者简介:朱志凯( 1987-) ,男( 汉族) ,湖北仙桃人,现为湖北中医药大学在读硕士研究生,主要从事中药品种、质量及资源开发研究工作.
* 通讯作者简介:张秀桥( 1965-) ,女( 汉族) ,河北新乐人,现任湖北中医药大学教授,博士学位,主要从事中药品种、质量及资源开发研究工作.
大叶蛇葡萄胶囊中
总黄酮含量测定的研究
朱志凯,江 灿,陈 敏,张秀桥*
(湖北中医药大学药学院,湖北 武汉 430065)
摘要:目的 建立大叶蛇葡萄胶囊中总黄酮含量的测定方法。方法 采用紫外分光光度法进行测定,样品与 AlCl3 反应,
形成络合物,测定波长 310 nm。结果 以蛇葡萄素为对照,建立的含量测定方法在 0. 004 ~ 0. 012 mg·ml -1范围内,溶液
吸收度值和蛇葡萄素浓度呈良好线性关系( r = 0. 999 6) ,平均加样回收率为 98. 05%,RSD 为 1. 84%。结论 该方法准
确、可靠,可用于大叶蛇葡萄胶囊的质量控制。
关键词:蛇葡萄素胶囊; 总黄酮; 紫外分光光度法
DOI标识:doi: 10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2013. 08. 010
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 08-1828-02
Study on determination of Total Flavonoids in the Ampelopsis megalophylla Capsule
ZHU Zhi - kai,JIANG Can,CHEN Min,ZHANG Xiu - qiao*
( School of Pharmacy,Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065,China)
Abstract: Objective To establish a method for determination of total flavonoids in the Ampelopsis megalophylla capsule.Meth-
ods After the sample was reacted with aluminum trichloride,the total flavonoids were determined with the detection wavelength
310nm by UV. Results Ampelopsin was used as reference substance,a good linear relationship was found in the range of 0. 004 ~
0. 012 mg·ml -1 ( r = 0. 999 6) . The average rate of recoveries was 98. 05%,RSD was 1. 84% . Conclusion This method is relia-
ble,which can be used for the quality of the Ampelopsis megalophylla capsule.
Key words: Ampelopsis megalophylla capsule; Total flavonoids; Spectrophotometry
大叶蛇葡萄胶囊以大叶蛇葡萄总黄酮标准提取物为原料制 成。课题组前期研究已明确该药材有效部位为黄酮类成分[1 ~ 3],
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 8 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL. 24 NO. 8
具有较好的降血压效果[4]。为了便于控制该胶囊的质量,本文
建立了该胶囊总黄酮含量的测定方法。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 SHIMADZU UV -1800 分光光度计(日本岛津公司) ,
分析天平(瑞士 Metiler Toledo 公司) ,KQ - 250B 超声波清洗仪
(昆山超声仪器有限公司)。
1. 2 试药 蛇葡萄素对照品(课题组自制,高效液相色谱归一法
确定其纯度为 98%) ,大叶蛇葡萄胶囊(课题组自制,规格;0. 304
g /粒,批号:20120612,20120614,20120616) ;三氯化铝,95%乙醇
等试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液的制备 取胶囊内容物适量,研细,精密称取 20
mg加 95%乙醇溶解,超声 10 min 后滤过,滤液加 95%乙醇定容
至 25 ml,作为供试品溶液。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取 60℃干燥至恒重的蛇葡萄素
对照品,加 95%乙醇溶解并定容,制成每毫升含蛇葡萄素 0. 100
mg的溶液作为对照品溶液。
2. 3 测定波长的选择 精密吸取对照品溶液 2. 5ml,供试品溶液
1ml及阴性溶液 1 ml(按大叶蛇葡萄胶囊处方比例及工艺自制,
不含大叶蛇葡萄总黄酮标准提取物) ,各加入适量 5% AlCl3 显色
剂后,再加 95%乙醇定容至 25 ml,显色 30 min后在 200 ~ 600 nm
范围扫描,随行空白,吸收光谱如图 1 ~ 2。
图 1 对照品溶液 图 2 供试品溶液
紫外吸收光谱 紫外吸收光谱
试验结果表明对照品溶液和供试品溶液均在 310 nm处有最
大吸收,阴性溶液在此处无吸收,故选择 310 nm作为测定波长。
2. 4 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液 0. 4,0. 6,0. 8,1. 0,
1. 2 ml置于 10 ml容量瓶中,各加入 5% AlCl3 溶液 3 ml,加 95%
乙醇定容至刻度;摇匀后放置 30min,在 310nm处测量其吸收度。
以蛇葡萄素浓度为横坐标,吸收度值为纵坐标,绘制标准曲线,得
回归方程为:Y = 59. 55X - 0. 023 8,r = 0. 999 6,线性范围为 0. 004
~ 0. 012 mg·ml -1。
2. 5 精密度试验 精密吸取对照品溶液 0. 8ml,按上述方法连续
测定 6 次,结果吸收度值的 RSD值为 0. 80%,表明本方法中仪器
精密度良好。
2. 6 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 1 ml,分别在 0,1,2,3,4
h按上述方法测定吸收度,结果吸收度值的 RSD 值为 1. 02%,表
明供试品溶液在 4h 内稳定。2. 7 重复性试验 取同批胶囊
(20120612)内容物 5 份,按上述方法测定其吸收度值,计算总黄
酮含量,总黄酮含量的 RSD 值为1. 91%,表明本方法重复性良
好。
2. 8 加样回收试验 取一批已知总黄酮含量的胶囊,倾出内容
物,研细后各称取 20 mg,共计 6 份,向其中加入一定量蛇葡萄素
对照品,制备供试品溶液,按上述方法测定吸收度。结果如表 1。
计算平均回收率为 98. 05%,RSD 值为 1. 84%,表明本方法回收
率良好。
表 1 大叶蛇葡萄胶囊总黄酮加样回收试验结果


取样量
/mg
总黄酮原有量
/mg
对照品加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 20. 1 5. 33 4. 00 9. 25 98. 00
2 20. 5 5. 44 4. 00 9. 28 95. 25
3 20. 4 5. 41 5. 00 10. 26 97. 00 98. 05 1. 84
4 19. 8 5. 25 5. 00 10. 21 99. 20
5 20. 1 5. 33 6. 00 11. 23 98. 33
6 20. 3 5. 39 6. 00 11. 42 100. 5
2. 9 样品含量的测定 取三批胶囊,按照上述建立方法测定其总
黄酮含量。结果如表 2。
表 2 胶囊样品中总黄酮含量测定结果
批号 吸收度值(Abs) 总黄酮含量(mg /粒)
2012612 0. 477 88. 92
2012614 0. 438 81. 18
2012616 0. 482 89. 91
3 讨论
本文采用紫外分光光度法[5,6[测定大叶蛇葡萄胶囊中总黄
酮的含量,方法学考察符合要求。此方法稳定可靠,可用于大叶
蛇葡萄胶囊中总黄酮含量的测定,为大叶蛇葡萄胶囊的质量控制
提供了一定的实验依据。
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