全 文 ：文章编号:1001-4829(2002)04-0089-03
　　收稿日期:2002-02-27
　　基金项目:国家农业部丁家骏基金泰国研究项目
作者简介:苏振喜(1969-),女 ,副研究员 ,主要从事植物育种和
组培工作。
虾脊兰种子胚培养的最适培养基研究
苏振喜1 ,叶　华2 ,Chitrapan Piluek3
(1.云南省农业科学院油料所,云南 昆明　650205;2.思茅师范高等专科学校,云南 思茅　665000;3.泰国卡色萨大学园艺系,曼谷　10900)
摘　要:将虾脊兰的种子接种到添加了马铃薯提取液、复合维生素作为添加物的不同有机物的培养基上 ,研究不同蔗糖浓度下有
机添加物的效应。结果显示 ,单独添加有机物的促进效应 ,在 10 g/ L 蔗糖浓度下比在 20 g/ L 蔗糖浓度下更利于虾脊兰种子的萌
发和生长 ,但生长指数和对照比较差异不显著 ,说明维生素或马铃薯提取液单独加入培养基效果不明显。两种添加物一起加入 ,
对种子萌发和成苗的促进效应明显高于单独添加物的效应 ,生长指数高于单一添加物的生长指数 ,且差异显著 ,与对照的差异也
显著。在 10 g/ L 蔗糖浓度下 ,两者同时添加的促进效应最好。故虾脊兰种子胚培养的最适培养基为 VW+15%椰子汁+5%香蕉
+10%马铃薯汁+1粒/ L 复合维生素胶囊+1%蔗糖。
关键词:虾脊兰;胚培养;培养基
中图分类号:S188　文献标识码:A
A study on the optimum medium of Calanthe rubenus under in vitro seed germination
SU Zhen-xi1 , YE Hua2 , Chit rapan Piluek3
(1.Oilcrops Institute , Yunnan Academy of Agricultural S ciences , Kunming 650205 , China;2.S imao Normal College , Yunnan S imao
665000 , China;3.Department of Hort icultu re , Kasetsart Universi ty , Bangkok 10900 , Thai land)
Abstract:Embryos from seeds of Calanthe rubens w ere cultu red on modified VW+150 mL/ L coconut juice+50 g/ L banana , potato ex-
t ract and mult ivi tamins w hich w ere supplementd as additives to medium containing dif ferent level of sugar for seed germination and seedling
development.The result show ed that the promot ing effect s of adding a single additive in volume containing 10 g/ L sugar w as higher than
that containing 20 g/ L sugar ,but thei r grow th indices w ere not evidently higher than that of cont rast.T he effect s of mixed organic addi-
t ives w ere superior to the effect of single organic addit ive.So the most ly ef fective grow th enhancer for seed germination and seedlings de-
velopment w as the combinat ion of potato ext ract and mult ivi tamins under 10 g/ L sugar.The best medium for seed germinat ion and sequent
development of Calanthe ruben us w as medium of VW+15%coconut juice+5% banana+1%sugar+1 capsule/ L mult ivitamins+10%
potato ext ract.
Key words:Calan the rubenus;emb ryo culture;media
　　虾脊兰是一种地生兰 ,主要分布于我国长江流
域及南部各省区 ,日本 、泰国也有分布。虾脊兰植株
清秀 ,花色丰富 ,作盆栽 ,供室内外装饰或插花材料 ,
是一个正待开发的兰花种 。虾脊兰种子细小 ,种子
胚发育不全 ,无胚乳 ,仅含脂类作为储存营养物质 ,
自然条件下难于萌发 。采用种子胚培养是一条有效
途径。虾脊兰种子在 VW 培养基上能萌发 ,但萌发
成苗率很低 ,故欲通过添加有机物的方式寻找最适
培养基 。大量的有机添加物如椰汁[ 1] 、马铃薯提取
液[ 1] 、番茄汁[ 2] 、豆芽汁[ 2] 被认为对兰花种子萌发
有非常大的促进作用。但关于虾脊兰种胚离体培养
中有机添加物的研究很少。
1　材料与方法
在虾脊兰(Calanthe rubenus)的花(由泰国卡色
萨大学园艺系提供)授粉 120 d 后 ,得到未开裂蒴
果 。先用洗洁精和水洗净 ,然后用 95%酒精擦洗表
面 ,在无菌操作台用镊子夹住蒴果浸入酒精 ,拿出后
在酒精灯上高温灭菌 ,切开蒴果把种子抖入无菌水
瓶中 。然后用吸管把种子均匀播在培养基上 ,培养
温度 25 ～ 28 ℃,每日光照 10 ～ 12 h ,光照度 1 600-
2 000 Lx 。
试验设计为 3因素:A(蔗糖)、B(维生素)、C(马
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2002年 15卷 4期
Vol.15　　No.4 　　　　　　　　　　　　　　
西　南　农　业　学　报
S outhwest China Jou rnal of Agricultu ral Sciences
图 1　种胚发育大小的五级划分标准
Fig.1　The standard of five grades of size for embryo culture
铃薯),各因素 2 水平(蔗糖为 10 g/L 、20 g/L;马铃
薯提取液 、维生素分别为加与不加 2水平)共 8个处
理 ,3次重复(表 1)。90 d后分 5级标准(图 1)统计
数目 ,然后计算出生长指数 ,对生长指数作方差分
析 ,并进行新复极差测验(SSR)。5级生长指数被定
义为每级百分数乘以相应级数之和 ,即 1级%×1+
2级%×2+3级%×3+4级%×4+5级%×5。
2　结果与分析
2.1　单独有机添加物的效应
在蔗糖浓度为 10 g/L 条件下加入复合维生素 ,
其生长指数为 163.63(表 2),高于不加入维生素的 ,
说明加入复合维生素有一定促进作用 ,但与对照差
异不显著(表 2)。在蔗糖为 20 g/L 培养基中加入复
合维生素 ,效果反而不好 ,生长指数为 130.82 ,是所
有处理中效果最差的 。若加入马铃薯提取液 ,则在
两种蔗糖浓度下都能促进胚的萌发 ,但在 10 g/ L 蔗
糖浓度下其促进作用较明显 ,说明蔗糖浓度影响有
机添加物的效应(表 2)。从表 2 看 ,复合维生素对
胚培养中的成苗率影响不大 ,在 10 g/L 蔗糖浓度条
件下 ,第 4级和 5级的百分数之和为 6.58%。添加
马铃薯提取液则大大促进成苗的形成 ,第 4级和第
5级的百分数之和为 9.20%。在 20 g/L 蔗糖浓度
条件下 ,添加复合维生素或马铃薯提取液后 ,第 4级
和第 5级的百分数之和分别为 2.18%和 6.13%(表
2),表明马铃薯提取液的加入比复合维生素更有利
于成苗的形成。
2.2　混和添加物的效应
对 8个处理的生长指数进行方差分析(表 2)显
示 ,培养基中添加有机物效果是明显的 ,而且复合维
生素 、马铃薯提取液和蔗糖之间有明显的互作效应。
马铃薯提取液和维生素同时添加到不同蔗糖浓度的
培养基中 ,比单独添加的效应明显 ,生长指数分别在
5%水平上差异显著(表 2),与对照的差异也显著。
从表 2看 ,在 10 g/L 蔗糖条件下的生长指数 ,高于
在 20 g/L 蔗糖浓度条件下的生长指数 , 分别为
185.89和 178.36 ,但差异不显著 。对生长级数的百
分比和生长指数的总体效应以及混合添加物的效应
大于单独有机添加物的效应进行分析 ,在 10 g/L 蔗
糖浓度条件下同时添加该两种有机物组成的培养基
更适合虾脊兰的胚培养 。
表 1　方法设计
Table 1　Design of method
因素 Factors
A(蔗糖)Sugar B(维生素)
Multivitamins
C(马铃薯提取液)
Potato ext ract
8处理
Eight
t reatments
B1(不加)Non-
addit ive
C1(不加)Non-additive A1B1C1
A1(10g/ L) C2(加)Additive A1B1C2
B2(加)Additive C1(不加)Non-additive A1B2C1
C2(加)additive A1B2C2
B1(不加)Non-
addit ive
C1(不加)Non-additive A2B1C1
A2(20g/ L) C2(加)Additive A2B1C2
B2(加)Additive C1(不加)Non-additive A2B2C1
C2(加)additive A2B2C2
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表 2　不同有机添加物对胚培养的影响
Table 2　Effect of dif ferent organic addit ives on embryo culture
处理
T reatments
10 g/ L 的蔗糖量 Sugar(10 g/ L)
级数
Grades(%)
1 2 3 4 5
生长指数
Grow th
indices
SSR
5% 1%
20 g/ L 的蔗糖量 Sugar(20 g/ L)
级数
Grades(%)
1 2 3 4 5
生长指数
Grow th
indices
SSR
5% 1%
不添加有机物 67.67 16.90 10.39 4.35 0.66 153.24 b B 81.09 8.00 5.11 5.28 0.51 138.35 c B C
Non-addi tive
添加维生素 61.25 20.21 11.94 6.58 0 163.63 b AB 80.50 11.76 5.54 2.18 0 130.82 c C
With vitamin
添加马铃薯提取液 65.36 15.28 10.14 8.73 0.47 162.84 b AB 67.82 15.67 9.88 5.96 0.17 154.94＊ b B
With potato extract
添加维生素和马铃薯提取
液 With vitamin and potato
ext ract
55.77 21.78 9.58 12.44 0.43185.89＊＊ a A 62.21 13.96 9.03 13.75 1.02178.36＊＊ a A
　　注:所有方差分析数据均为均方值;＊差异达显著水平。 ＊＊差异达极显著水平 , SSR新复极差测验。
Note:Data of variance analysis is MS , ＊＊=signi ficant at 1% level;＊=significant at 5% level.
3　讨　　论
从试验知 , 10 g/L 蔗糖的量更适宜虾脊兰的胚
培养 , 10 g/ L 和 20 g/L 蔗糖量之间差异达到了显
著。Mead &Bulavd[ 3]认为 ,10 g/ L 和 20 g/L 蔗糖
量对兰花种子萌发效果相同 ,只有 80 g/ L 蔗糖才会
抑制种子萌发。本结果与此不同 ,也许这与品种有
关。 Ichihashi指出[ 4] ,碳源浓度很难有一个标准 ,它
会因培养对象而异。石斛兰属种子萌发和幼苗生长
多用 20 g/L 的蔗糖量[ 5] 。
复合维生素加到 VW 培养基中 ,对种子萌发和
成苗效果不佳 。Mead&Bulayd[ 3] 报道在共生萌发
中 ,维生素对原球茎的形成没有影响。在非共生萌
发中即本试验中维生素添加到培养基中 ,虽然有一
些促进效应 ,但生长指数和对照比较差异不显著 ,说
明维生素对原球茎的形成没有太大影响 。也许维生
素主要促进幼苗的壮苗生根[ 6] ,在种子胚培养中作
用不明显 。
加入马铃薯汁的主要作用是促进幼苗生长 ,对
原球茎的形成影响不大 ,这个结论基本上一致 ,很少
因兰花的种或属不同而改变[ 1 , 5] ,而且和维生素一
起加入更能促进幼苗生长。
在大多数热带兰的胚培养中 ,通常将椰汁 、香蕉
汁加到种子萌发培养基中 ,而马铃薯提取液则加入
幼苗继代培养的生根培养基中[ 5] 。对于 Calanthe
这样的地生兰 ,在无菌培养中也同样需要有机添加
物的加入 ,以促进种子萌发和成苗生长。
参考文献:
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(责任编辑　刘星昌)
914期 苏振喜等:虾脊兰种子胚培养的最适培养基研究