全 文 ：紫外分光光度法测定海南木莲叶·枝中总三萜酸的含量
鲍长余 1 ,刘冰晶 1 ,毕和平 1, 2＊ ,陈光英 1, 2 ,范超君 1　
(1.海南师范大学化学与化工学院 ,海南海口 571158;2.海南省热带药用植物化学重点实验室,海南海口 571158)
摘要　[目的 ]测定海南木莲叶和枝中总三萜酸的含量。 [方法]以熊果酸为对照品 ,以质量分数 5%香草醛-冰醋酸和高氯酸系统为显
色剂 ,采用紫外分光光度法在 546nm波长处测定样品的吸光度。 [结果 ]熊果酸对照品在 0.2 ～ 1.6μg/ml时呈良好线性关系 ,回归方程
为A=0.154 8C+0.028 6, r=0.999 3。海南木莲叶和枝中总三萜酸的含量分别为 1.95%和 0.47%。 [结论]该方法操作简便 ,结果稳
定 ,重复性好 ,易于推广。
关键词　海南木莲;三萜酸;紫外分光光度法
中图分类号　R284.2　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)23-12460-02
UltravioletSpectrophotometricDeterminationofTritepenoidicAcidintheLeavesandStemsofManglietiahainanensis
BAOChang-yuetal　(ColegeofChemistryandChemicalEngineering, HainanNormalUniversity, Haikou, Hainan571158)
Abstract　[ Objective] TheaimwastodeterminethecontentofthetritepenoidicacidintheleavesandthestemsofManglietiahainanensis.
[ Methed] Undertheexperimentalconditionsincludingursolicacidasthereference, 5%vanillin-aceticacidandperchloricacidascolorsys-
tem, thecontentoftriterpenoidicacidintheleavesandstemsofManglietiahainanensiswasdeterminedbyultravioletspectrophotometricmeth-
odat546nm.[ Result] Thecalibrationcurvewaslinear(r=0.999 3)intherangeof0.2-1.6μg/ml, andthecurvewasA=0.154 8C+
0.028 6, thecontentwas1.95%and0.47%.[ Conclusion] Theresultwasstable, andhadgoodrepeatability.Themethodoperatedconven-
ientlyandspreadeasily.
Keywords　Manglietiahainanensis;Tritepenoidicacid;Ultravioletspectrophotometricmethod
基金项目　海南省教育厅资助项目(HjKi2008-27);海南省热带药用植
物重点实验室资助项目。
作者简介　鲍长余(1980-),男,山东济宁人 ,硕士研究生 , 研究方向:
天然产物化学。 ＊通讯作者。
收稿日期　 2010-05-04
　　海南木莲(Manglietiahainanensis)属木兰科植物 ,为海南
特产 ,是集观赏与药用于一身的珍贵树种 ,当地称为龙楠树 、
绿楠 、绿兰等 ,主要分布于海南省定安 、保亭 、乐东 、琼中 、陵
水 、三亚 、东方等市县 ,民间用于治疮和消炎 [ 1-5] 。三萜酸具
有广泛的生物活性 ,可以降低胆固醇 、降血糖 、抗炎 、抗菌 、抗
病毒 、抗肿瘤活性等 [ 6] 。笔者以熊果酸为对照品 ,以质量分
数 5%香草醛 -冰醋酸和高氯酸系统为显色剂 ,采用紫外分
光光度法测定海南木莲叶和枝中总三萜酸的含量 ,为海南木
莲的开发利用提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　材料　海南木莲采自海南省乐东尖峰岭森林公园 ,经
海南师范大学生命科学学院钟琼芯高级实验师鉴定为文兰
科木莲属植物海南木莲的叶和枝 ,标本现存于海南省热带药
用植物化学重点实验室。
1.2　仪器与试剂　UV2600紫外分光光度计(上海国美科学
仪器有限公司);EYEL4OSB-2100旋转蒸发仪(日本东京理
化);索式提取器等 。质量分数 95%乙醇 、无水乙醇 、香草醛 、
高氯酸 、冰醋酸等均为国产分析纯;熊果酸对照品购自上海
顺勃生物工程有限公司(纯度大于 98.0%)。
1.3　对照品溶液制备 [ 7-10] 　准确称取 105℃干燥至恒重的
熊果酸对照品 20.0 mg,置于 50ml容量瓶中 ,加无水乙醇溶
解并稀释至刻度 ,摇匀 ,得浓度为 0.400 g/L溶液 ,精确移取
溶液 2.5 ml,定容至 100 ml,得浓度为 0.01 g/L的对照品
溶液 。
1.4　供试品溶液制备 [ 7-10] 　将粉碎过的海南木莲叶和枝置
于 50 ℃烘箱干燥 24 h,各准确称取 2.0g,用无水乙醇浸泡 2
h后 ,用索式提取器提取 8 h,提取液用 TLC测定 ,至渣液与
浓 H2 SO4反应不显紫色为止 ,回收乙醇后 ,提取液冷却至室
温 ,用无水乙醇定容至 100 ml,摇匀。分别准确吸取叶和枝
提取液 2.5和 5.0 ml于 100 ml容量瓶中 ,再用无水乙醇定
容 ,摇匀 ,制得供试品溶液。
2　结果与分析
2.1　测定波长的选择　精确量取对照品溶液 5.0 ml,加入
5%香草醛 -冰醋酸溶液 0.2 ml和高氯酸溶液 0.8ml显色
后 ,进行全波长扫描 ,随行空白对照。结果表明 ,对照品溶液
在 546 nm处有最大吸收峰(图 1),故选择 546 nm作为样品
测定波长。
图 1　对照品紫外吸收曲线
Fig.1　UVabsorptionspectrumofreferencesubstation
2.2　标准曲线的绘制　准确吸取对照品溶液 0.2、0.4、0.6、
0.8、1.0、1.2、1.6ml,分别置于 10 ml容量瓶中 ,沸水浴去除
无水乙醇 ,冷却后 ,加入 5%香草醛 -冰醋酸溶液 0.2 ml和
高氯酸溶液 0.8 ml,放人 70 ℃水浴中加热 15 min,冷却至室
温 ,用冰醋酸定容至刻度 ,摇匀 。在 546 nm波长处测定吸光
度值 ,随行空白对照液。以熊果酸含量(μg/ml)为横坐标 ,吸
光度值为纵坐标 ,标准曲线见图 2,标准曲线方程为:A=
0.154 8C+0.028 6, r=0.999 3,线性范围为 0.2 ～1.6 μg/ml。
2.3　稳定性试验　取对照品和样品溶液各 5.0 ml,按照
“ 1.4”方法进行 ,每隔 15min测定 1次 ,结果见表 1。由表 1
责任编辑　李占东　责任校对　李岩安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(23):12460-12461, 12466
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.23.260
图 2　标准曲线
Fig.2　Standardcurve
可知 , RSD=2.46%～ 3.20%,表明该法在 1.5h内基本稳定。
2.4　精密度试验　取同一批样品液 ,进行 5次平行试验 ,测
定含量 ,结果见表 2。由表 2可知 ,叶的 RSD=1.09%,枝的
RSD=3.51%,表明精密度良好。
2.5　加样回收试验　准确量取 5份已知含量的海南木莲叶
和枝提取液各 5.0 ml,加入一定量的的熊果酸对照品 ,按
“2.2”方法操作 ,结果见表 3。由表 3可知 ,叶提取物平均回
收率 97.74%, RSD =2.88%,枝提取物平均回收率 100.
13%, RSD=1.84%。
2.6　样品含量测定　准确量取 3份海南木莲叶和枝的样品
溶液 5.0ml于 50.0ml容量瓶中 ,沸水浴去除无水乙醇 ,冷
表 1　稳定性试验
Table1　Stabilitytest
溶液种类
Solutiontype
吸光度(A)Absorbance
0min 15min 30min 45min 60min 75min 90min 平均值Average
RSD
%
对照品Referencesubstance 0.218 1 0.211 3 0.213 4 0.213 8 0.225 4 0.220 4 0.225 6 0.218 3 2.46
叶提取物Extractofleaves 0.231 3 0.233 0 0.239 7 0.241 2 0.245 5 0.244 1 0.249 1 0.240 6 2.51
枝提取物Extractofstems 0.168 5 0.162 5 0.176 7 0.178 6 0.172 1 0.179 1 0.172 1 0.172 8 3.20
表 2　精密度试验
Table2　Precisiontest
提取物
Extracts 吸光度(A)Absorbance
平均值
Average
RSD
%
叶提取物Extractofleaves 0.229 0 0.229 5 0.234 4 0.228 7 0.233 9 0.231 1 1.09
枝提取物Extractofstems 0.176 6 0.179 4 0.162 0.169 9 0.171 1 0.171 8 3.51
表 3　加样回收试验
Table3　Recoverytest
提取物
Extracts
三萜酸含量∥μg
Thetritepenoidicacidcontentofthesample
加入对照品量∥μg
Addreferencesubstance
测定量∥μg
Measuringvalue
回收率∥%
Recoveryrate
平均回收率∥%
Averagerecoveryrate
RSD
%
叶 Leaves 1 929.5 1 000 2 829.5 96.59 97.74 2.878
1 987.3 1 000 3 003.3 100.54
1 995.4 1 000 2 911.4 97.2
1 998.2 1 000 3 029.6 101.05
1 988.1 1 000 2 789.6 93.4
枝 Stems 454.1 500 996.3 104.4 1 003.13 1.838
463.2 500 987.2 102.5
461.3 500 1 000.3 104.06
459.2 500 956.4 99.71
446.9 500 993.8 104.95
却后加入 5%香草醛 -冰醋酸溶液 1.0 ml,高氯酸 4.0 ml,放
入 70 ℃水浴中加热 15 min,冷却至室温 ,用冰醋酸定容 ,摇
匀 ,按 “2.2”方法操作 ,结果见表 4。由表 4可知 ,海南木莲叶
中总三萜酸含量为 1.95%, RSD=0.81%,枝中总三萜含量
为 0.47%, RSD=1.96%。
表 4　样品含量
Table4　Determinationresultsofsamples
样品
Samples
吸光度(A)
Absorbancemeasurements
平均值
Average
RSD
%
总三萜含量∥%
Thetotaltritepenoidicacidcontent
平均值∥%
Average
叶 Leaves 0.177 5 0.180 6 0.181 1 0.179 7 0.81 1.952 1.945
0.179 8 0.175 5 0.180 1 0.178 5 1.936
0.179 9 0.178 5 0.179 4 0.179 3 1.947
枝 Stems 0.098 9 0.103 0 0.099 7 0.100 5 1.96 0.464 0.467
0.102 0 0.099 5 0.098 8 0.100 1 0.462
0.106 0 0.099 9 0.100 2 0.102 0 0.474
(下转第 12466页)
1246138卷 23期　　　　　　　　　　　　　鲍长余等　紫外分光光度法测定海南木莲叶·枝中总三萜酸的含量
地扩展 、蔓延 ,所以一些属的种类资源蕴藏量很大 ,分布也很
广泛 ,例如蒿属(Artemisia)、旋覆花属(Inula)、牛蒡属(Arcti-
um)、三七草属(Gynura)、蓟属(Cirsium)、紫菀属(Aster)、鬼
针草属(Bidens)、蒲公英属(Tavaxacum)、苦苣菜属(Sonchus)
等 ,其中蒿属种类数量最多 ,有 30种 ,占总数的 38.9%。从
表 1可以看出 ,在世界范围内广布的种类有鼠麴草 、额河千
里光 ,在全国范围内广布的种类有甜叶菊 、泽兰 、鳢肠 、腺梗
豨莶 、白莲蒿 、黄花蒿 、艾 、猪毛蒿 、牛蒡 、大丁草 、苦苣菜 、黄
瓜菜 、小苦苣菜 ,在北方广布的种类有阿尔泰狗娃花 、紫菀 、
火绒草 ,在南方广布的种类有胜红蓟。
表 2　各省菊科药用植物种数比较
Table2　NumberofwildplantresourcesofCompositaemedicinal
plantindiferentprovinces
省份
Province
属数
Genus
种数
Species
省份
Province
属数
Genus
种数
Species
山西 Shanxi 39 77 甘肃 Gansu 39 81
陕西 Shaanxi 54 100 广西 Guangxi 69 177
河北 Hebei 30 64 云南 Yunnan 61 118
河南 Henan 33 76 四川 Sichuan 63 125
青海 Qinghai 27 57 福建 Fujian 37 74
宁夏 Ningxia 35 80 贵州 Guizhou 55 91
3　小结
(1)山西地区菊科药用植物资源较丰富 ,潜在的开发价
值不可估量。在山西省 90属 230种菊科植物中 ,药用植物
占 39属 77种 。按照入药部位分为全草 、根 、叶和果实 ,其中
以全草入药为主 ,有 50种。绝大多数是常用中草药 ,有少数
是民间入药使用 。按照用途和功效大致可分为清热解毒 、活
血祛瘀 、祛风湿 、止血 、止咳 、止痛 、消肿 、健胃 、利尿 、生津止
渴等不同种类 ,其中以清热解毒 、消炎最多 ,有 39种 ,占菊科
药用植物的 50.6%;其次是止咳祛痰 ,有 16种 ,占 20.8%;第
三是止血和活血种类 ,有 6种 ,占 7.8%[ 16-17] 。
(2)菊科药用植物资源主要是分布在蒿属(Artemisia)、
旋覆花属(Inula)、牛蒡属(Arctium)、三七草属(Gynura)、蓟
属(Cirsium)、紫菀属(Aster)、鬼针草属(Bidens)、蒲公英属
(Tavaxacum)、苦苣菜属(Sonchus)等 ,其中蒿属种类数量最
多 ,有 30种 ,占总数的 38.9%。
(3)在菊科药用植物中 ,很多种类还有其他用途。除药
用价值外 ,菊科药用植物中有 24个种还有其他用途。如甜
叶菊 ,是一种有价值的天然甜味剂 ,在国外早已广泛应用于
医药 、食品及饮料 ,近年来在我国也推广应用;串叶松香草 ,
性耐寒 、耐热 、适应性强 ,且对牲畜适口性好 ,近年来被广泛
栽培利用 ,是一种具药用价值 、营养价值的优良饲草 ,作为牲
畜饲料用途的还有大籽蒿 、碱蒿 、莳萝蒿 、冷蒿 、白莲蒿 、龙蒿
和黄花蒿;艾 、野艾蒿 、五月艾 、苦苣菜 、黄瓜菜 、小苦荬菜 、蒌
蒿和牡蒿 ,嫩芽及幼苗可作蔬菜;蒙古蒿 ,另可取芳香油 ,供
化工工业用 ,全株作饲料及作纤维和造纸的原料;多花蒿 ,也
作蚕豆发芽的催芽剂;龙蒿 ,根有辣味 ,作调味品 ,又作饲料;
盐蒿 、圆头蒿固沙性能强 ,为良好的固沙植物;黑沙蒿 ,果壁
胶质物作食品工业的粘着剂;红花 ,是一种多用途的综合资
源植物 ,种子含油率较高 ,极适于食用 ,有降低人体胆固醇及
血脂的作用 ,为我国重要的油料作物之一。这些广泛的用途
有利于人们对山西省菊科药用植物进行综合开发利用。
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(上接第 12461页)
3　结论与讨论
(1)测量总三萜酸类时 ,文献报道 [ 8-10]显色系统香草醛
-冰醋酸和高氯酸溶液是不同的 ,该试验对质量分数为 5%
的香草醛 -冰醋酸溶液与高氯酸溶液的比例进行了调整 ,结
果表明 ,显色稳定 ,重复性好 。
(2)该试验结果表明 ,在显色系统香草醛 -冰醋酸和高
氯酸溶液条件下 ,用紫外光分光光度法测定海南木莲中的总
三萜酸有良好的线性关系 ,干扰少 ,方法简便 ,测定结果准确
可靠 ,是测定海南木莲总三萜酸类化合物的较佳方法 。
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