全 文 ：大叶蛇葡萄不同提取物总黄酮含量测定*
何枭宇1，杨若婧1，朱志凯1，江灿1，张秀桥1，2，刘焱文2
(1．湖北中医药大学药学院，武汉 430065;2．湖北中医药大学中药资源与中药化学重点实验室，武汉 430061)
摘 要 目的 比较不同提取方法所得大叶蛇葡萄提取物的总黄酮含量。方法 分别用乙醇加热回流法和渗漉法
提取大叶蛇葡萄总黄酮，以蛇葡萄素为对照品，采用紫外分光光度法，在 311 nm波长处测定。结果 平均加样回收率为
99． 36%，RSD为 1． 59%，回流法所得提取物总黄酮的含量为 640． 74 mg·g－1;渗漉法所得提取物总黄酮含量为 672． 38
mg·g－1。结论 该测定方法操作简单，准确可靠，可作为大叶蛇葡萄提取物总黄酮的含量测定方法。渗漉法所得提取
物中总黄酮含量略高于回流法。
关键词 大叶蛇葡萄提取物;总黄酮;分光光度法，紫外;含量测定
中图分类号 R286;R927． 1 文献标识码 A 文章编号 1004－0781(2012)02－0211－02
Content Determination of Total Flavonoid in the Extracts of Ampelopsis megalophylla
HE Xiao-yu1，YANG Ruo-jing1，ZHU Zhi-kai1，JIANG Can1，ZHANG Xiu-qiao1，2，LIU Yan-wen2(1． School of
Pharmacy，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China;2． Key Laboratory of Chinese Medicine
Resources and Chinese Herbal Compound，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430061，China)
ABSTRACT Objective To determine and compare total flavonoid in different extracts of Ampelopsis megalophylla．
Methods The extracts were produced by heating reflux with ethanol and percolation method，respectively． Ampelopsin was used
as reference substance，and the content was detected at 311 nm． Results The average recovery rate was 99． 36%，RSD was
1． 59% ． The content of total flavonoid in the extracts by refluxation was 640． 74 mg· g－1，which was 672． 38 mg· g－1 by
percolation． Conclusion This method is simple and reliable，which is useful for content determination of total flavonoid in the
extracts of Ampelopsis megalophylla． The extracts by percolation is purer than those isolated through refluxation．
KEY WORDS Ampelopsis megalophylla extract;Total flavonoid;Spectrophotometry，UV;Content determination
大叶蛇葡萄中蛇葡萄素、杨梅素、杨梅苷等黄酮类
成分具有降血压等活性［1-3］。为进一步开发利用大叶
蛇葡萄资源，笔者采用乙醇加热回流法和渗漉法制备
大叶蛇葡萄提取物，并对其不同提取物中总黄酮含量
进行比较研究。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 SHIMADZU UV-1800 分光光度计(日本
岛津公司) ，RE-3000 旋转蒸发仪(上海亚荣公司) ，分
析天平(瑞士 Metiler Toledo 公司) ，HH-4 数显恒温水
浴锅(国华电器有限公司)。
1． 2 试药 蛇葡萄素对照品(本实验室自制，高效液
相色谱归一法确定其纯度为 98%) ，三氯化铝，95%乙
醇等试剂均为分析纯。大叶蛇葡萄(采于湖北省来凤
收稿日期 2011－07－14 修回日期 2011－09－13
基金项目 * 国家自然科学基金资助项目(31170335) ;武
汉市科技攻关计划资助项目(201160823265)
作者简介 何枭宇(1987－) ，男，湖北枝江人，在读硕士，主
要从事中药品种、质量及资源开发研究。E-mail:xiaoyuhe8786
@ qq． com。
通讯作者 张秀桥(1965－) ，女，河北新乐人，副教授，硕士
生导师，博士，主要从事中药品种、质量及资源开发研究。电
话:027－68890106，E-mail:qiaoxzh2000@ yahoo． com． cn。
县，经湖北中医药大学药学院张秀桥鉴定为 Ampelopsis
megalophylla Diels et． Gilg)在阴凉处干燥，粉碎后置干
燥处备用。
2 方法与结果
2． 1 不同提取物的制备 称取大叶蛇葡萄药材
100 g，置圆底烧瓶，以 70%乙醇回流提取两次(分别 1
和 0． 5 h) ，合并两次提取液，滤过、减压回收乙醇，水
浴挥去残余水分后干燥即得。称取大叶蛇葡萄药材
100 g，置渗漉提取器中，用 70%乙醇浸泡 24 h 后，以
2 mL·min－1速率开始渗漉，收集渗漉液，滤过、减压回
收乙醇，水浴挥去残余水分后干燥即得。
2． 2 对照品与供试品溶液的制备
2． 2． 1 对照品溶液的制备 精密称取 60 ℃干燥至恒
重的蛇葡萄素对照品，加 95% 乙醇，制成每毫升含
0． 101 mg的溶液，作为蛇葡萄素对照品溶液。
2． 2． 2 样品溶液的制备 精密称取大叶蛇葡萄回流
法提取物 40． 00 mg，置 50 mL 量瓶，以 95%乙醇溶解
并定容至刻度，即得大叶蛇葡萄回流法提取物样品溶
液。另精密称取大叶蛇葡萄渗漉法提取物 40． 00 mg，
置 50 mL 量瓶，以 95%乙醇溶解并定容至刻度，即得
大叶蛇葡萄渗漉法提取物样品溶液。
2． 3 测定波长的选择 精密吸取对照品溶液3 mL、
·112·医药导报 2012 年 2 月第 31 卷第 2 期
回流法提取物样品溶液 5 mL，分别置于 10 mL 量瓶，
加 5%三氯化铝溶液 3 mL，再加 95%乙醇定容至刻
度，摇匀，放置 40 min，以相应试剂作空白，进行全波长
扫描，选择最大吸收波长 311 nm为测定波长。
2． 4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液 0． 4，0． 6，
0． 8，1． 0，1． 2 mL 分别置于 10 mL 量瓶，加入 5%三氯
化铝溶液 3 mL，加 95% 乙醇至刻度，摇匀，放置
40 min，以相应试剂作对照，在 311 nm 波长处测定吸
光度。以吸光度为纵坐标(Y)、浓度为横坐标(X)绘
制标准曲线，得回归方程为:Y = 59． 142X+0． 023 4，r =
0． 999 8(n = 5)。结果表明蛇葡萄素在 0． 004 ～
0． 012 mg·mL－1范围内与吸光度呈良好的线性关系。
2． 5 精密度实验 精密吸取同一对照品溶液
0． 8 mL，按“2． 4”项方法测定吸光度 6 次。结果 RSD
为1． 37%，表明仪器精密度良好。
2． 6 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液，按
“2． 4”项方法，分别在 0，0． 5，1，2，3，4 h 测定吸光度。
考察其在 4 h内的稳定性。结果 RSD为 1． 54%，表明
供试品溶液在 4 h内稳定。
2． 7 重复性实验 精密称取同一批大叶蛇葡萄回流
法提取物 6 份，按“2． 2． 2”项方法平行制备，按“2． 4”
项方法，分别测定吸光度。结果 RSD 为 1． 39%，表明
方法重复性良好。
2． 8 加样回收率实验 精密称取 6 份已知含量的大
叶蛇葡萄回流法提取物各 20． 00 mg，分别置于 50 mL
量瓶，分别向其中加入一定量的蛇葡萄素对照品，按
“2． 4”项方法，分别测定吸光度，并计算平均回收率。
结果见表 1。平均加样回收率 99． 36%，RSD=1． 59%。
表 1 总黄酮加样回收率实验结果
Tab． 1 Result of recovery of total flavonoid
序号
供试品总黄
酮含量 /%
原有量 加入量 测得量
mg
回收
率 /%
1 64． 46 12． 89 9． 00 21． 75 98． 44
2 64． 46 12． 89 9． 00 21． 84 99． 44
3 64． 46 12． 89 12． 00 24． 75 98． 83
4 64． 46 12． 89 12． 00 25． 01 101． 00
5 64． 46 12． 89 15． 00 27． 46 97． 13
6 64． 46 12． 89 15． 00 28． 09 101． 33
2． 9 大叶蛇葡萄回流法和渗漉法提取物总黄酮含量
测定 分别精密称取大叶蛇葡萄回流法和渗漉法提取
物适量各 4 份，置 50 mL 量瓶，以 95%乙醇溶解并定
容至刻度，按照“2． 4”项方法测定吸光度，并计算总黄
酮含量。结果见表 2，3。回流法和渗漉法提取物总黄
酮平均含量分别为 640． 74%和 672． 38 mg·g－1。
表 2 大叶蛇葡萄回流法提取物总黄酮含量测定结果
Tab． 2 Determination of tolal flavonoid in the extracts of
Ampelopsis megalophyua by reflux method
序号
提取物量 /
mg
吸光度
总黄酮量 /
(mg·g－1)
1 40． 01 0． 631 641． 94
2 39． 98 0． 638 649． 82
3 39． 96 0． 621 632． 16
4 40． 04 0． 629 639． 03
表 3 大叶蛇葡萄渗漉法提取物总黄酮含量测定结果
Tab． 3 Result of determination of total flavonoid in the
extracts of Ampelopsis megalophyua by percoteation method
序号
提取物量 /
mg
吸光度 /
Abs
总黄酮量 /
(mg·g－1)
1 41． 4 0． 690 680． 63
2 41． 5 0． 694 683． 06
3 41． 6 0． 678 665． 16
4 41． 5 0． 672 660． 65
3 讨论
本实验采用紫外分光光度法［4-6］，测定大叶蛇葡萄
提取物中总黄酮含量，精密度、稳定性、重复性均符合
要求，此方法准确可靠，可用于该药用植物提取物总黄
酮的测定方法。实验结果表明，以蛇葡萄素计，渗漉法
提取物中总黄酮的含量略高于回流法。本实验为进一
步研究制备大叶蛇葡萄标准提取物和建立其质量评价
体系提供了科学依据。
参考文献
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［2］ 张秀桥，沈伟，陈树和，等．大叶蛇葡萄提取物对肾性高血
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2008，28(24) :2095－2096．
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压大鼠降压作用的实验研究［J］．中西医结合研究，2009，
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［5］ 向东山，刘晓鹏，翟琨，等．不同采收时期及不同部位绿风
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DOI 10． 3870 /yydb． 2012． 02． 031
·212· Herald of Medicine Vol. 31 No. 2 February 2012