全 文 ：西北农业学报　２０１４，２３（１）：２３－２９
Ａｃｔａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ　Ｂｏｒｅａｌｉ－ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ　Ｓｉｎｉｃａ　 ｄｏｉ：１０．７６０６／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－１３８９．２０１４．０１．００５
网络出版时间：２０１４－０１－２１
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｏｉ／１０．７６０６／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－１３８９．２０１４．０１．００５．ｈｔｍｌ
家兔苦马豆素多克隆抗体的制备及其
对小花棘豆中毒的治疗效果
收稿日期：２０１３－０７－０６　　修回日期：２０１３－０９－０１
基金项目：新疆生产建设兵团博士资金专项（２００８ＪＣ０７）；新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室开放课题（ＨＳ２０１２０７）。
第一作者：陈根元，男，硕士，助理研究员，从事动物基因工程方面的研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｇｙｇｏｏｄ２０７＠１６３．ｃｏｍ
通信作者：王 　帅，男，硕士，实验师，从事牧草资源开发利用方面的研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｓｈｕａｉｄｋｙ＠１２６．ｃｏｍ
陈根元１，贾琦珍１，２，潘伊微１，２，贾山岭１，２，王　帅１，３
（１．新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室，新疆阿拉尔　８４３３００；２．塔里木大学 生命科学学院，
新疆阿拉尔　８４３３００；３．塔里木大学 动物科学学院，新疆阿拉尔　８４３３００）
摘　要　采用合成的苦马豆素（ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ，ＳＷ）人工抗原免疫接种家兔，获得高效价的ＳＷ 抗血清，分离纯
化得到的家兔ＳＷ多克隆抗体，复制家兔小花棘豆中毒模型，用ＳＷ多克隆抗体治疗小花棘豆中毒家兔，通过
检测血清生化指标和免疫学指标，评价ＳＷ多克隆抗体治疗家兔小花棘豆中毒的效果。将１８只家兔随机分
为对照组（６只）、攻毒组（６只）和攻毒治疗组（６只），攻毒组和攻毒治疗组按照１０ｇ／（ｋｇ·ｄ）的剂量饲喂小花
棘豆，攻毒组试验兔出现死亡时（第７０天）停止攻毒。攻毒第２１天，攻毒治疗组试验兔注射ＳＷ多克隆抗体，
每只兔每天１ｍＬ，连续注射４ｄ。以攻毒试验开始为第０天进行首次采血，试验开始后每７ｄ采血１次，进行
血清免疫和生化指标测定。结果显示，攻毒第７天时攻毒家兔血清 ＡＫＰ活性和ＳＷ 质量浓度显著高于对照
家兔（Ｐ＜０．０５）；第１４天时攻毒家兔血清ＡＳＴ和ＬＤＨ活性显著高于对照家兔（Ｐ＜０．０５），血清 ＡＭＡ活性
和Ｅ－玫瑰花环率均显著低于对照家兔（Ｐ＜０．０５）；第２１天时攻毒家兔血清ＢＵＮ、ＣＲＥ和ＧＬＵ浓度显著高于
对照组家兔（Ｐ＜０．０５）。攻毒治疗组家兔注射ＳＷ 抗血清后血清 ＡＫＰ、ＬＤＨ、ＡＳＴ、ＡＬＴ活性，ＢＵＮ、ＣＲＥ、
ＧＬＵ浓度和ＳＷ质量浓度较攻毒家兔显著下降，ＡＭＡ活性和Ｅ－玫瑰花环率显著上升。说明，ＳＷ 多克隆抗
体可有效治疗家兔小花棘豆中毒。
关键词　小花棘豆；苦马豆素；多克隆抗体；治疗；家兔
中图分类号　Ｓ８５２．４　　　文献标志码　Ａ　　　　　文章编号　１００４－１３８９（２０１４）０１－００２３－０７
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒａｂｂｉｔ　Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ
ａｎｄ　Ｉｔｓ　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　Ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｂｙ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｇｌａｂｒａ　ＤＣ
ＣＨＥＮ　Ｇｅｎｙｕａｎ１，ＪＩＡ　Ｑｉｚｈｅｎ１，２，ＰＡＮ　Ｙｉｗｅｉ　１，２，ＪＩＡ　Ｓｈａｎｌｉｎｇ１，２　ａｎｄ　ＷＡＮＧ　Ｓｈｕａｉ　１，３
（１．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｔａｒｉｍ　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　＆Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ
Ｃｏｒｐｓ，Ａｌａｒ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　８４３３００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔａｒｉｍ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｌａｒ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　８４３３００，Ｃｈｉｎａ；
３．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔａｒｉｍ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｌａｒ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　８４３３００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ａｉｍ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｉｓ　ｔｏ　ｄｅｓｉｇｎ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｉｍｍｕｎｅ　ｐｒｏｇｒａｍ，ｇａｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｇａｉｎｓｔ
ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ（ＳＷ）ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｔｉｔｅｒ，ｔｈｅｎ　ｐｒｅｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　ＳＷ　ａｎｄ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ
ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ　ｂｙ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｇｌａｂｒａ　ＤＣ，ｃｕｒｅ　ｔｈｅ　ｌｏｃｏｄｉｓｅａｓｅ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔｓ，ｅｖａｌｕａｔｅ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｔｈｅ　ｓｅ－
ｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｎｄｅｘｅｓ，ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　ＳＷ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｏｎ
ｒａｂｂｉｔｓｓ　ｐｏｉｓｏｎｅｄ　ｂｙ　Ｏ．ｇｌａｂｒａ　ＤＣ．１８ｒａｂｂｉｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（６ｒａｂ－
ｂｉｔｓ），ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ（６ｒａｂｂｉｔｓ）ａｎｄ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｕｒｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ（６ｒａｂｂｉｔｓ）．Ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｗｅｒｅ
ｆｅｄ　１０ｇ／（ｋｇ·ｄ）ｐｏｗｅｒ　ｏｆ　Ｏ．ｇｌａｂｒａ　ＤＣ　ｅｖｅｒｙ　ｍｏｒｎｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｄａｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｕｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｉｓｏｎ－
ｉｎｇ　ｗａｓ　７０ｄａｙｓ　ｗｈｅｎ　ｒａｂｂｉｔ　ｉｎ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｄｅａｄ．Ａｆｔｅｒ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｆｏｒ　２１ｄａｙｓ，ｒａｂｂｉｔｓ　ｉｎ　ｐｏｉ－
ｓｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｕｒｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　１ｍＬ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　ＳＷ，ａｎｄ　ｃｏｎ－
ｔｉｎｕｏｕｓｌｙ　ｆｏｒ　ｆｏｕｒ　ｄａｙｓ．Ｂｌｏｏｄ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｂｅｆｏｒｅ　ｔｈｅ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｏｎｃｅ　ｅｖｅｒｙ　７ｄａｙｓ
ｆｏｒ　ｓｅｒｕｍ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ｏｆ　ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ
ｓｅｒｕｍ　ＡＫＰ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＳＷ　ｉｎ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ
ｏｎ　ｔｈｅ　ｄａｙ　７（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ＬＤＨ　ａｎｄ　ＡＳＴ　ｉｎ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄａｙ　１４（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ＡＭＡ　ａｎｄ
Ｅ－ｒｏｓｅｔｔｅ　ｉｎ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄａｙ　１４（Ｐ＜
０．０５），ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ＢＵＮ，ＣＲＥ　ａｎｄ　ＧＬＵ　ｉｎ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ
ｔｈａｔ　ｉｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄａｙ　２１（Ｐ＜０．０５）．Ｂｙ　ｉｎｊｅｃｔｉｎｇ　ｓｅｒｕｍ　ａｇａｉｎｓｔ　ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ，ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ
ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ＡＫＰ，ＬＤＨ，ＡＳＴ，ＡＬＴ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＢＵＮ，ＣＲＥ，ＧＬＵ，ＳＷ　ｉｎ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｕｒｉｎｇ
ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ＡＭＡ　ａｎｄ　Ｅ－ｒｏｓｅｔｔｅ　ｉｎ　ｐｏｉ－
ｓｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｕｒｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｓｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎ　ｔｈｉｓ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　ＳＷ　ｈａｄ　ｇｏｏｄ　ｖａｌｕｅ　ｆｏｒ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ
ｆｒｏｍ　Ｏ．ｇｌａｂｒａ　ＤＣ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｇｌａｂｒａ　ＤＣ；Ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ；Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ；Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；Ｒａｂｂｉｔ
　　苦马豆素（Ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ，ＳＷ）是疯草（Ｌｏｃｏ－
ｗｅｅｄ）的主要有毒成分［１］，小花棘豆（Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ
ｇｌａｂｒａ　ＤＣ）是新疆地区广泛分布、危害严重的一
种疯草，据调查，阿克苏地区现有２７１．９７万ｈｍ２
天然草场，其中３３．３３万ｈｍ２ 广泛丛生小花棘
豆，平均盖度６０％，最高可达９５％［２］。在牧草缺
乏的冬季和初春，当家畜大量采食，可引起家畜中
毒、孕畜流产和公畜不育等，严重时导致死亡，每
年中毒死亡的家畜约占放牧家畜总数的５％～
１０％［３］，对该地区畜牧业的发展危害很大。
小花棘豆除含有小花棘豆毒素外，还含有丰
富的营养，经分析测定，小花棘豆常规营养成分及
氨基酸组成接近苜蓿草粉［４］；而且小花棘豆具有
很强的抗逆性，特别适应在新疆生长［５］，如能将其
合理利用，将为新疆草原畜牧业增加新的饲草
资源。
国内外学者对家畜小花棘豆中毒进行大量研
究，主要集中在毒性成分分析、预防措施和中毒动
物机体毒理性变化方面，对中毒动物的治疗研究
较少。目前仅见杨合生等［６］利用家兔抗ＳＷ 血清
治疗山羊疯草中毒，但抗血清不易储运，故本试验
将血清中的多克隆抗体分离出来，利用得到的
ＳＷ 多克隆抗体治疗家兔小花棘豆中毒，通过检
测试验家兔血清免疫和生化指标，评价ＳＷ 多克
隆抗体的治疗效果，为治疗家畜小花棘豆中毒奠
定基础。
１　材料与方法
１．１　材 料
小花棘豆２０１２年８月采集于新疆和田地区
策勒县，由塔里木大学动物科学学院草业科学学
科组鉴定。取植株的地上部分，阴干粉碎后过２０
目筛，备用。
ＳＷ 人工抗原ＳＷ－ＢＳＡ和ＳＷ－ＯＶＡ均由兵
团塔里木畜牧科技重点实验室提供，弗氏完全佐
剂（ＦＡＣ）、弗氏不完全佐剂（ＦＡＩ）为Ｓｉｇｍａ公司
产品，甲基－α－Ｄ－吡喃甘露糖苷为美国ＳＵＰＥＬＣＯ
公司产品，谷草转氨酶 （ＡＳＴ）、谷丙转氨酶
（ＡＬＴ）、碱性磷酸酶（ＡＫＰ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、
α－甘露糖苷酶 （ＡＭＡ）、尿素氮 （ＢＵＮ）、肌酐
（ＣＲＥ）、血糖（ＧＬＵ）检测试剂盒购自南京建成生
物技术有限公司，辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记羊
抗兔ＩｇＧ购自博奥森，其余试剂均为国产分析
纯，实验室用水为超纯水。
ＰｏｗｅｒＷａｖｅ　ＸＳ型全波长酶标仪，美国Ｂｉｏ－
Ｔｅｋ公司；Ｃａｒｒｙ　１００型紫外－可见分光光度计，美
国瓦里安；ＧＣ－Ｃ１４气相色谱仪，日本岛津；威玛
龙色谱数据工作站 ＷＭＬ－２０１０，北京北方威玛龙
科技有限公司；ＤＹＹⅢ－２型稳压稳流电泳仪，北
京六一仪器制造厂；ＣＥＬＤＯＣ２０００型凝胶成像分
析系统，日本ＢＩＯ－ＲＡＤ公司；Ｄｉｒｅｃｔ－Ｑ３型超纯
水系统，美国 Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公司；ＭＲ２３１型高速冷冻
离心机，法国Ｊｏｕａｎ公司。
·４２· 西　北　农　业　学　报 ２３卷
１．２　试验动物
家兔２４只，雌雄各半，体质量（２．０±０．１）
ｋｇ，购自塔里木大学动物科学学院实验站。试验
家兔进入兔舍前，用８４消毒液对兔舍进行消毒，
然后药浴杀灭家兔体表寄生虫；观察７ｄ后饲喂
左旋咪唑驱虫；第１４天皮下注射兔瘟疫苗（每只
２ｍＬ）。观察１０ｄ后开始正式试验。
１．３　ＳＷ抗血清的制备
参考杨合生等［６］的研究，取６只家兔进行免
疫接种，使用 ＦＡＣ进行基础免疫，首免时使用
ＦＡＣ和生理盐水的混合液（体积比１∶１）充分乳
化制备的ＳＷ－ＢＳＡ；第１次和第２次加强免疫用
ＦＡＩ和生理盐水的混合液（体积比１∶１）乳化；第
３次加强免疫使用生理盐水乳化ＳＷ－ＢＳＡ。免疫
组免疫剂量和次数见表１。对照组注射等体积的
抗原乳化液。第３次加强免疫７ｄ后，对免疫家
兔耳缘静脉采血，分离血清后间接ＥＬＩＳＡ［７］检测
抗体效价。以后每隔７ｄ检测１次，第４次和第５
次采血检测家兔血清抗体效价基本保持不变，在
第５次采血检测后，大量采血，共制备效价为２１３
的血清３０ｍＬ。
表１　免疫组的免疫时间和免疫剂量
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｄｏｓｅ　ｉｎ　ｉｍｍｕｎｅ　ｇｒｏｕｐ
免疫次数
Ｉｍｍｕｎｅ
ｎｕｍｂｅｒｓ
基础免疫
后时间／ｄ
Ｏｎ　ｄａｙ
ａｆｔｅｒ　ｂａｓｉｃ
ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ
免疫剂
量／ｍｇ
Ａｎｔｉｇｅｎ
ｄｏｓｅｓ
首免 Ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　 １０　 ３．０
第１次加强免疫
Ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ３０　 ６．０
第２次加强免疫
Ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄ　ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ４５　 １２．０
第３次加强免疫
Ｔｈｅ　ｔｈｉｒｄ　ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ６０　 １８．０
１．４　家兔ＳＷ多克隆抗体的制备与纯化
采用饱和硫酸铵沉降法制备家兔ＳＷ多克隆
抗体，再通过葡聚糖凝胶层析、ＤＥ－５２阴离子交换
层析、流水透析等步骤纯化，最后冻干透析袋，即
得到家兔抗ＳＷ多克隆抗体。对得到的抗体分别
进行理化性质检验、琼脂糖扩散检测、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
电泳及 Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析。
１．５　家兔小花棘豆攻毒试验
将１８只家兔平均分为对照组、攻毒组和攻毒
治疗组，每组６只，分笼饲养。对照组饲喂青干
草和少 量 精 料，攻 毒 组 和 攻 毒 治 疗 组 按 照
１０ｇ／（ｋｇ·ｄ）的剂量饲喂小花棘豆，待采食完毕
后，再添加青干草和精料，自由饮水。
１．６　ＳＷ多克隆抗体治疗小花棘豆攻毒家兔
将ＳＷ 多克隆抗体制备为１０ｇ／Ｌ生理盐水
溶液，在攻毒第２１天采血后，攻毒治疗组家兔按
每只１ｍＬ的剂量在饲喂前耳缘静脉注射ＳＷ 抗
体溶液，每天１次，连续４ｄ。
１．７　试验家兔血清生化指标的测定
攻毒试验开始前空腹采集１份肝素抗凝和１
份分离血清，以后每７ｄ采血１次，直到第７０天
时攻毒组家兔出现死亡为止，共采血１１次。血清
生化检测指标包括谷草转氨酶（ＡＳＴ）、谷丙转氨
酶（ＡＬＴ）、乳酸脱氢酶 （ＬＤＨ）、碱性磷酸酶
（ＡＫＰ）、α－甘露糖苷酶（ＡＭＡ）、尿素氮（ＢＵＮ）、
肌酐（ＣＲＥ）和血糖（ＧＬＵ）。
１．８　攻毒家兔血清ＳＷ质量浓度的测定
攻毒家兔血清ＳＷ 质量浓度的测定采用气相
色谱法，具体条件参考宋毓民等［８］的研究。
１．９　Ｅ－玫瑰花环试验
参考杨合生等［６］的研究，计数２００个淋巴细
胞，１个淋巴细胞结合３个红细胞或以上者为１
个玫瑰花环阳性细胞，计算玫瑰花环形成率。
１．１０　数据分析
采用ＳＰＳＳ　１６．０中Ｏｎｅ－Ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ进行
单因素方差分析及Ｄｕｎｃａｎ’ｓ多重比较。
２　结果与分析
２．１　家兔ＳＷ多克隆抗体的制备
家兔ＳＷ 多克隆抗体为白色片状结晶，其茚
三酮反应和双缩脲反应均为阳性；琼脂糖扩散试
验表明，抗体稀释到８　１９２倍时仍然可以看到沉
淀线（图１）；经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析，可见２条
清晰的条带，其分子质量约为５０ｋｕ和２５ｋｕ（图
２）；将纯化的家兔抗ＳＷ 抗体ＩｇＧ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
后，转移至纤维素ＮＣ膜，以ＳＷ－ＯＶＡ为抗原，以
辣根过氧化物酶偶联羊抗兔的ＩｇＧ为二抗，联苯
胺为底物，进行蛋白质印迹分析，家兔抗ＳＷ 抗体
可与苦马豆素人工抗原发生反应，说明家兔抗
ＳＷ 多克隆抗体具有较好的特异性（图３）。
２．２　试验家兔血清ＡＳＴ和ＡＬＴ测定结果
整个试验期内，对照组家兔血清 ＡＳＴ 和
ＡＬＴ活性均无明显变化，攻毒组家兔血清 ＡＳＴ
和ＡＬＴ活性呈上升趋势。第１４天时攻毒组和
攻毒治疗组家兔 ＡＳＴ活性均显著高于对照组
（Ｐ＜０．０５），第２１天时攻毒家兔ＡＳＴ活性极显
·５２·１期 陈根元等：家兔苦马豆素多克隆抗体的制备及其对小花棘豆中毒的治疗效果
　　１．阴性对照　Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ；２．８　１９２倍稀释的抗体　
８　１９２－Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ；３．４　０９６倍稀释的抗血清　４　０９６－
Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ；４．２　０４８倍稀释的抗血清　２　０４８－Ｆｏｌｄ　ｄｉ－
ｌｕｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ；５．１　０２４倍稀释的抗血清　１　０２４－Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ａｎ－
ｔｉｂｏｄｙ；６．５１２倍稀释的抗血清　５１２－Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ；７．检
测抗原ＳＷ－ＯＶＡ　ＳＷ－ＯＶＡ
图１　家兔抗ＳＷ多克隆抗体效价
Ｆｉｇ．１　Ｔｉｔｅｒ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ　ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　ＳＷ
　　Ｍ．低分子量蛋白 Ｍａｒｋｅｒ　Ｌｏｗ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ
ｍａｒｋｅｒ；１－４．依次为原倍、对倍、４倍、８倍稀释抗体　１－Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕ－
ｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ，２－Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ，４－Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ，８－
Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ
图２　家兔抗ＳＷ多克隆抗体ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测结果
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ　ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　ＳＷ
著高于对照组（Ｐ＜０．０１）；第２８天时攻毒组家兔
血清ＡＬＴ活性显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。当
攻毒治疗组注射ＳＷ 抗体后 ＡＳＴ和 ＡＬＴ活性
均有一定程度地下降，第３５天时攻毒治疗组家兔
血清ＡＳＴ活性显著低于攻毒组（Ｐ＜０．０５），第４２
天时攻毒治疗组家兔血清ＡＬＴ活性显著低于攻
毒组（Ｐ＜０．０５）。其他试验期内攻毒治疗组家兔
血清 ＡＳＴ 和 ＡＬＴ 活性均保持在较低水平
（图４）。
２．３　试验家兔血清ＡＫＰ和ＬＤＨ测定结果
从第７天开始攻毒组和攻毒治疗组家兔血清
ＡＫＰ活性显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）；第１４天
时攻毒组和攻毒治疗组家兔血清ＡＫＰ活性极显
著高于对照组（Ｐ＜０．０１），ＬＤＨ活性显著高于对
照组（Ｐ＜０．０５）。第２８天时攻毒治疗组家兔血
清ＡＫＰ值显著下降，并在第３５天时极显著低于
攻毒组（Ｐ＜０．０１）；攻毒治疗组家兔血清ＬＤＨ活
性在第２８天和第３５天时仍呈现上升趋势，但在
第４２天时显著低于攻毒组（Ｐ＜０．０５），在第７０
天时又略有上升（图５）。
２．４　试验家兔血清ＡＭＡ和ＧＬＵ测定结果
第１４天时攻毒组和攻毒治疗组家兔血清
ＡＭＡ活性显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）；第２１天
时攻毒组和攻毒治疗组家兔血清ＧＬＵ浓度显著
高于对照组（Ｐ＜０．０５）。第３５天时攻毒治疗组
家兔血清ＡＭＡ活性开始升高，并在第４２天时显
著高于攻毒组（Ｐ＜０．０５）；而攻毒治疗组家兔血
清ＧＬＵ值在第２８天时即开始降低，并在第３５
天时显著低于攻毒组（Ｐ＜０．０５），这种情况一直
持续到第７０天（图６）。
２．５　试验家兔血清ＢＵＮ和ＣＲＥ测定结果
整个试验期内，对照组家兔血清 ＢＵＮ 和
ＣＲＥ浓度均无明显变化，攻毒组家兔血清ＢＵＮ
和ＣＲＥ浓度呈上升趋势。第２１天时攻毒组和攻
毒治疗组家兔ＢＵＮ和ＣＲＥ浓度均显著高于对
照组（Ｐ＜０．０５）。当攻毒治疗组注射抗ＳＷ 血清
后ＢＵＮ和ＣＲＥ浓度均开始下降，第３　５天时攻
　　Ｍ．低分子量蛋白 Ｍａｒｋｅｒ　Ｌｏｗ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ
ｍａｒｋｅｒ；１－４．依次为抗体１倍稀释、抗体２倍稀释、抗体４倍稀
释、抗体８倍稀释　１－Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ，２－Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ａｎｔｉ－
ｂｏｄｙ，４－Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ，８－Ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｒｅｓｐｅｃ－
ｔｉｖｅｌｙ
图３　家兔抗ＳＷ多克隆抗体的 Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定
Ｆｉｇ．３　 Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ　ａｓｓａｙ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ
ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ａｇａｉｎｓｔ　ＳＷ
·６２· 西　北　农　业　学　报 ２３卷
图４　家兔试验期内ＡＳＴ和ＡＬＴ活性的变化
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ＡＳＴ　ａｎｄ　ＡＬＴ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｉａｌ　ｐｅｒｉｏｄ
图５　家兔试验期内ＡＫＰ和ＬＤＨ活性的变化
Ｆｉｇ．５　Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ＡＫＰ　ａｎｄ　ＬＤＨ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｉａｌ　ｐｅｒｉｏｄ
图６　家兔试验期内ＡＭＡ活性和ＧＬＵ浓度的变化
Ｆｉｇ．６　Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ＡＭＡ　ａｎｄ　ＧＬＵ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｉａｌ　ｐｅｒｉｏｄ
毒治疗组家兔血清 ＣＲＥ浓度显著低于攻毒组
（Ｐ＜０．０５），第 ４２ 天时攻毒治疗组家兔血清
ＢＵＮ浓度显著低于攻毒组（Ｐ＜０．０５），这种情况
一直持续到第７０天（图７）。
２．６　试验家兔血清ＳＷ质量浓度的测定结果
所有试验家兔第０天时血清中均未检测到
ＳＷ，第７天时攻毒组和攻毒治疗组家兔血清中检
测出ＳＷ，第５６天时攻毒组家兔血清ＳＷ 质量浓
度达到最高值，并一直保持在高水平；攻毒治疗组
家兔血清ＳＷ 质量浓度在第３５天开始降低，并显
著低于攻毒组（Ｐ＜０．０５），但从第６３天起攻毒治
疗组家兔血清ＳＷ 质量浓度升高，并持续到第７０
天（图８）。
２．７　Ｅ－玫瑰花环试验结果
试验期内攻毒组家兔Ｅ－玫瑰花环率呈下降
趋势，在第５６天时达到最低值。攻毒治疗组家兔
·７２·１期 陈根元等：家兔苦马豆素多克隆抗体的制备及其对小花棘豆中毒的治疗效果
Ｅ－玫瑰花环率在第３５天时开始上升，并在第４２
天时显著高于攻毒组（Ｐ＜０．０５），但从第６３天起
Ｅ－玫瑰花环率开始降低，并持续到第 ７０ 天
（图９）。
图７　 家兔试验期内ＢＵＮ和ＣＲＥ浓度的变化
Ｆｉｇ．７　Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ＢＵＮ　ａｎｄ　ＣＲＥ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｉａｌ　ｐｅｒｉｏｄ
图８　试验兔血清ＳＷ测定结果
Ｆｉｇ．８　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ｆｒｏｍ　ｒａｂｂｉｔｓ
图９　试验兔Ｅ－玫瑰花环率测定结果
Ｆｉｇ．９　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　Ｅ－ｒｏｓｅｔｔｅ　ｒａｔｅ　ｉｎ　ｔｅｓｔ　ｒａｂｂｉｔｓ
３　讨 论
３．１　ＳＷ多克隆抗体对中毒家兔血清生化指标
的影响
小花棘豆主要有毒成分为ＳＷ［２］，动物采食
小花棘豆后，毒素在１４ｄ左右引起机体的酶发生
改变［９］，这与本试验家兔血清酶测定结果一致。
ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＫＰ和ＬＤＨ等酶主要分布于肝脏、
心脏、骨骼肌等器官和组织，当脏器细胞的完整性
遭到损害时，这些酶就逸入细胞外周的组织液，继
而到达血液。因此，通过检测血液中这些酶的活
性，可以在一定程度上反映器官细胞的受损状
况［１０］；ＢＵＮ是氨基酸代谢的终产物之一，ＣＲＥ是
肌酸代谢的终产物，血液中ＢＵＮ和ＣＲＥ含量的
变化可反映肾脏排氮功能的变化，对于判定肾脏
损伤程度具有重要意义［１１］；家兔小花棘豆攻毒期
间，家兔血清 ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＫＰ、ＬＤＨ 活性和
ＢＵＮ、ＣＲＥ浓度均有不同程度的升高，说明小花
棘豆中毒可导致机体肝脏、肾脏、心脏和骨组织等
发生毒理性变化，与相关研究结果一致［１２］。家兔
血清ＧＬＵ浓度是相对恒定的，但在家兔肝脏受
损，糖代谢酶系统发生异常时，血清ＧＬＵ浓度就
会相应发生变化。另外肾功能不全也可能导致血
清ＧＬＵ 浓度升高。本试验中攻毒家兔血清
ＧＬＵ浓度变化与小花棘豆的饲喂量存在明显的
剂量和时间效应，说明小花棘豆中毒可能导致家
兔肾功能不全或肝脏中糖代谢异常，使低聚糖在
机体中蓄积，这与相关文献一致［１２］。治疗组家兔
注射抗ＳＷ 抗体后 ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＫＰ、ＬＤＨ活性
和ＢＵＮ、ＣＲＥ、ＧＬＵ浓度均显著下降，说明注射
到家兔体内的ＳＷ 抗体起到治疗作用，有效防止
毒素对肝脏等组织器官造成的损伤。ＳＷ 可强烈
和特异性地抑制 ＡＭＡ 活性［１３］，而治疗组血清
ＡＭＡ活性在第４２天时即显著高于攻毒组，说明
ＳＷ 抗体对进入动物体内的ＳＷ 有着清除与中和
的能力，可以很好地抑制由ＳＷ 引起的 ＡＭＡ活
·８２· 西　北　农　业　学　报 ２３卷
性降低，避免了ＳＷ对组织器官的进一步损伤。
３．２　ＳＷ多克隆抗体对中毒家兔Ｅ－玫瑰花环的
影响
Ｅ－玫瑰花环率可以反映动物机体免疫力的变
化［１４］，其主要受Ｔ淋巴细胞的影响。本试验攻毒
家兔的Ｅ－玫瑰花环率显著低于对照家兔，说明小
花棘豆中的ＳＷ可侵害家兔的免疫系统。治疗组
家兔注射ＳＷ 抗体后Ｅ－玫瑰花环率有一定的回
升，在试验的第４２天治疗组家兔血清Ｅ－玫瑰花
环率即显著高于攻毒组，但仍低于对照组。说明
ＳＷ 抗体可以有效的减缓Ｅ－玫瑰花环率的降低速
度，阻止进入机体的ＳＷ 侵害免疫系统。
３．３　试验家兔血清ＳＷ质量浓度的变化
在攻毒试验期内，攻毒组家兔血清ＳＷ 质量
浓度呈上升趋势，但从第５６天起，攻毒组家兔血
清ＳＷ 质量浓度趋于稳定，可能与动物机体对
ＳＷ 的代谢能力逐渐增强有关［１５］。攻毒治疗组家
兔血清ＳＷ质量浓度在注射ＳＷ抗体后呈下降趋
势，说明抗体可以有效的降低血清中ＳＷ 的质量
浓度，但从第６３天起攻毒治疗组家兔血清ＳＷ 质
量浓度又有回升，可能是因为抗体无法持续的发
挥对ＳＷ的中和作用。
４　结 论
通过小花棘豆攻毒试验，ＳＷ 多克隆抗体可
以有效降低中毒家兔血清 ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＫＰ、
ＬＤＨ活性和ＢＵＮ、ＣＲＥ、ＧＬＵ 浓度，提高血清
ＡＭＡ活性，延缓Ｅ－玫瑰花环率的降低速度，清除
血清中ＳＷ蓄积。说明ＳＷ 多克隆抗体可以用于
治疗家兔的小花棘豆中毒。
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［１１］　ＷＡＮＧ　Ｓｈｕａｉ（王　帅），ＪＩＡＮＧ　Ｈｕｉ（蒋　慧），ＣＨＥＮ　Ｇｅ－
ｎｙｕａｎ（陈根元），ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ－
ｉｃａｌ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｆｏｒ
ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ　ｂｙ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｇｌａｂｒａ　ＤＣ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ
Ｖｅｔ（中国兽医学报），２０１３，３３（２）：２８７－２９１（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ
ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［１２］　ＬＵ　Ｈａｏ（路 浩），ＲＯＮＧ　Ｊｉｅ（荣 杰），ＺＨＡＯ　Ｂａｏｙｕ（赵宝
玉），ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ　ｏｎ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ
ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｉｎ　ＳＤ　ｒａｔ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｖｅｔ（中国兽医学报），２０１２，
３２（３）：４５１－４５６（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
［１３］　Ａｎｄｅｒｓｏｎ　Ｄ　Ｍ，Ｒａｙｓｏｎ　Ｇ　Ｄ，Ｏｂｅｉｄａｔ　Ｓ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｕｓｅ　ｏｆ
ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｙ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ａｍｏｎｇ　ｃｌｉｐｐｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ
ｇｅｎｅｒａ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ，Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ａｎｄ　Ｐｌｅｕｒａｐｈｉｓ［Ｊ］．Ｒａｎｇｅ－
ｌａｎｄ　Ｅｃｏｌ　Ｍａｎａｇｅ，２００６，５９：５５７－５６３．
［１４］　Ｃｏｏｋ　Ｄ，Ｒａｌｐｈｓ　Ｍ　Ｈ，Ｗｅｌｃｈ　Ｋ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．Ｌｏｃｏｗｅｅｄ　ｐｏｉｓｏｎ－
ｉｎｇ　ｉｎ　ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ［Ｊ］．Ｓｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ　Ｒａｎｇｅ　Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２００９
（２）：１６－２１．
［１５］　ＺＨＡＯ　Ｂａｏｙｕ（赵宝玉），ＤＯＮＧ　Ｑｉａｎｇ（董　强），ＳＨＩ
Ｚｈｉｃｈｅｎｇ（史志诚），ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｐｒｅ－
ｖｅｎｔｉｎｇ　ｌｏｃｏｗｅｅｄ　ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ　ｂｅｔｗｅｅｎ“Ｆｅｎｇｃａｏｌｉｎｇ　ｄｅｔｏｘｉ－
ｃａｔｉｏｎ　ｓｌｏｗ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｐｉｌ”ａｎｄ “Ｌｏｃｏｗｅｅｄ　ｔｏｘｉｎ　ｖａｃｃｉｎｅ”
［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉ－
ｔｉｏｎ（西北大学学报：自然科学版），２０１０，４０（６）：１０２０－
１０２５（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｅｎｇｌｉｓｈ　ａｂｓｔｒａｃｔ）．
·９２·１期 陈根元等：家兔苦马豆素多克隆抗体的制备及其对小花棘豆中毒的治疗效果