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HPLC法测定维药刺山柑种子中没食子酸和芦丁的含量



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们采用了适用于本品的 HPLC法对蛇床子素的含量
进行了研究[6-8]。曾选择不同色谱条件进行实验,结
果表明,流动相为乙腈-水(65∶35)、流速为1.0mL
时,蛇床子素与其他组分得到较好地分离,且峰形对
称,能准确测得其含量。在实验中,采用甲醇、乙醇2
种不同的溶剂以及不同的溶剂量,选择超声波提取和
回流提取的方法制备供试品溶液。结果表明,甲醇
50mL回流提取的含量明显较高,故选择甲醇回流提
取;对回流提取时间的考察:分别选择提取15,30,40
和60min,结果提取30min时所测得蛇床子素的含
量明显高于15min,提取40min时所测得蛇床子素
的含量则高于30min时的含量,而提取40min与提
取60min时的含量没有明显差别,故选择40min为
最佳提取时间。经过方法学研究,该方法样品处理简
单,测得的结果回收率高,精密度好,可以有效控制制
剂的质量。
参考文献:
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(收稿日期:2013-09-08)
HPLC法测定维药刺山柑种子中没食子酸和芦丁的含量
周 静,美丽万·阿不都热依木*(新疆医科大学药学院,乌鲁木齐 830054)
摘要:目的 建立刺山柑种子中没食子酸和芦丁的含量测定方法。方法 采用Phnomenex色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以
乙腈-2mL·L-1磷酸溶液为流动相,流速为1.0mL·min-1,检测波长为254nm,梯度洗脱。结果 没食子酸在1.4~14.0μg、
芦丁在1.4~28.0μg范围内呈良好的线性关系,没食子酸平均回收率为99.9%,RSD为2.0%;芦丁平均回收率为100.6%,
RSD为1.3%。 结论 HPLC法测定没食子酸和芦丁的含量,方法简便可行,重复性和分离效果好,可为刺山柑的进一步开发
利用及质量控制提供依据。
关键词:刺山柑;芦丁;没食子酸;高效液相色谱法
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2014.02.003
中图分类号:R282   文献标志码:A   文章编号:1004-2407(2014)02-0117-03
Determination of the contents of galic acid and rutin in Capparis spinosa L.seeds
by HPLC
ZHOU Jing,Meiliwan ABDRYM*(Colege of Pharmacy,Xinjiang Medical University,Urumqi 830054,China)
Abstract:Objective To determine of the contents of galic acid and rutin in Capparis spinosa L.seeds.Methods The separation
was performed on a Phnomennex ODS(250mm×4.6mm,5μm)chromatographic column,with acetonitrile-2mL·L
-1 phosph-
pric acid solution as the mobile phase.The flow rate was 1.0mL·min-1,the detection wavelength was 254nm,and the column
temperature was 30℃.Results The linear ranges of galic acid and rutin were 1.4-14.0μg,1.4-28.0μg with the correlation coef-
ficient 0.999 5(n=6),0.999 7(n=7),and the average recoveries were 99.9%(RSD=2.0%),100.6%(RSD=1.3%),respective-
ly.Conclusion The method is simple and reproducible,and could be used for C.spinosa L.further development,utilization and
quality control.
Key words:Capparis spinosa L.;rutin;galic acid;HPLC
基金项目:国家自然科学基金资助项目(编号:30561090)
作者简介:周静,男,在读硕士研究生
*通信作者:美丽万·阿不都热依木,女,教授,硕士生导师
  刺山柑Capparis spinosa L.种子为白花菜科山
柑属植物刺山柑果实中的种子[1],又名野西瓜、槌果
藤、老鼠瓜、抗旱草等[1]。其味辛苦,性温,具有祛风、
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散寒、除湿、止痛、调经、消肿的作用,维吾尔医将其用
于治疗风湿性关节炎和痛风。刺山柑种子中有黄酮
类、生物碱类、脂质和多酚类等化合物。黄酮类以芦
丁和槲皮素为主,多酚类以没食子酸为主。目前,尚
未见关于维药刺山柑中芦丁和没食子酸用 HPLC法
进行含量测定的研究,为了进一步开发和利用其价
值,在原有相关文献报道的基础上[2-6],本实验建立高
效液相色谱法测定刺山柑中没食子酸和芦丁含量的
方法,目的是为了更好地控制刺山柑的质量,以期为
评价其药用价值提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 岛津LC-20AB高效液相色谱仪;Solu-
tion色谱工作站;JA4003型电子天平(上海青海仪器
有限公司);DK-S22型电热恒温水浴锅(上海精密实
验设备有限公司);SK8210型超声清洗仪器(上海科
导超声仪器有限公司)。
1.2 试药 没食子酸对照品(中国药品生物制品检
定所,批号110831-200803);芦丁对照品(中国药品
生物制品检定所,批号100080-200707);乙腈为色谱
纯;其他试剂均为分析纯;水为屈臣氏蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Phnomennex ODS(250
mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-2mL·L
-1磷酸
溶液(梯度见表1);流速:1.0mL·min-1;检测波长:
254nm;柱温:30℃;进样量:20μL。见图1。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸和芦丁
对照品各14mg,置于10mL量瓶中,加甲醇溶解并
定容,摇匀,作为对照品溶液(每1mL含没食子酸
1.4mg,每1mL含芦丁1.4mg)。
表1 洗脱梯度
Tab.1The gradient elution program
时间/min
乙腈体积
分数/%
2mL·L-1磷酸
体积分数/%
0  5  95
5  10  90
11  18  82
15.25  23  77
20  27  73
23  40  60
30  45  55
图1 高效液相色谱图
A.没食子酸;B.芦丁;C.样品;1.没食子酸;2.芦丁
Fig.1HPLC chromatograms
A.galic acid;B.rutin;C.sample;1.galic acid;2.rutin
2.3 供试品溶液的制备 精密称取脱脂刺山柑种子
药材粉末(60目筛)4.0g,置于100mL锥形瓶中,加
入甲醇40mL,水浴回流1h,过滤,将滤液蒸至无醇
味,用甲醇溶解,定容至25mL量瓶中,摇匀,作为供
试品溶液。
2.4 线性关系考察 分别将没食子酸和芦丁对照品
溶液用0.45μm微孔滤膜过滤,按照上述色谱条件
分别进样1,2,4,6,8,10和20μL,测定没食子酸、芦
丁吸收峰面积。以对照品进样量X(μg)为横坐标、
信号强度Y 为纵坐标,得没食子酸回归方程:Y=
345 808 X-218 537,r=0.999 5(n=6),线性范围
1.4~14.0μg;得芦丁回归方程Y=8 453.6 X+
1 151.1,r=0.999 7(n=7),线性范围1.4~28.0
μg。
2.5 精密度实验 取各自对照品溶液,分别连续进
样6次,按上述色谱条件测定峰面积。结果没食子酸
峰面积RSD为1.94%,芦丁峰面积RSD为1.78%。
结果表明,该仪器精密度良好。
2.6 重复性实验 精密称取哈密地区刺山柑种子粉
末6份,按2.3项下方法制备供试品溶液,分别进样
20μL,按上述色谱条件测定峰面积,计算含量。结果
没食子酸含量RSD为1.37%,芦丁峰面积含量RSD
为1.99%。结果表明,该方法重复性良好。
2.7 稳定性实验 精密称取吐鲁番地区的刺山柑种
子粉末,按照2.1.3供试品溶液制备项下制备供试品
溶液,分别在0,4,8,12和24h精密量取20μL进
样,按上述色谱条件测定峰面积。结果没食子酸峰面
积RSD为2.02%,芦丁峰面积RSD为1.74%。结
果表明,供试品溶液在24h内基本稳定。
2.8 加样回收率实验 精密称取已知没食子酸含量
的吐鲁番地区的刺山柑种子粉末2.0g,分别精密加
入各对照品适量,按2.3项下方法制备供试品溶液,
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按上述色谱条件下测定,并计算回收率。结果没食子
酸平均回收率为99.90%,RSD为2.0%(n=6);芦
丁平均回收率为100.6%,RSD为1.3%(n=6)。
2.9 样品测定 取不同批次的脱脂刺山柑种子粉
末,分别按2.3项下方法制备供试品溶液,按上述色
谱条件测定,结果见表2。
表2 刺山柑种子中没食子酸和芦丁的含量测定结果
Tab.2Determination results of galic acid and rutin in Cappa-
ris spinosa L.seeds
样品编号 产地 没食子酸/mg·g-1 芦丁/mg·g-1
1 伊犁 1.08  8.68
2 鄯善 3.02  9.81
3 米泉 1.59  6.05
4 吐鲁番 2.41  7.43
5 哈密 6.53  5.69
3 讨论
①对芦丁和没食子酸提取溶剂进行考察,分别采
用体积分数40%,60%,80%和90%乙醇和甲醇进行
提取,然后按照上述色谱条件进行测定。结果表明,
在色谱条件下甲醇提取物的分离比在各体积分数乙
醇提取物的分离效果好,且杂质峰少。
②对提取方法进行考察:a.将种子用甲醇冷浸
48h,过滤,浓缩,用甲醇溶解定容至25mL,得供试
品溶液;b.将种子用甲醇加热回流,过滤,蒸干,用甲
醇定容至25mL,即得供试品溶液;c.将种子用甲醇
超声提取,过滤,蒸干,用甲醇定容至25mL,即得供
试品溶液。比较3种方法含量测定的结果,b比a和
c含量高。因此,选用b作为芦丁含量测定供试品溶
液的制备方法。
③考察乙腈-2mL·L-1醋酸、乙腈-2mL·L-1
磷酸、甲醇-2mL·L-1醋酸和甲醇-2mL·L-1磷酸
这些流动相系统,结果没食子酸和芦丁在以乙腈-2
mL·L-1磷酸为流动相时效果好,峰形好。但没食
子酸和芦丁的极性相差大,梯度洗脱时,流动相梯度
变化较大,常会出现基线漂移的现象,为了稳定基线,
将洗脱时间延长。
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(收稿日期:2013-09-22)
基金项目:陕西省中医药管理局课题
作者简介:刘丽萍,女,助教,硕士
*通信作者:乔蓉霞,女,主任药师,硕士
黄芩中有机氯类农药残留检测方法研究
刘丽萍1,宋 莉2,乔蓉霞2*(1.西安医学高等专科学校,西安 710309;2.陕西省食品药品检验所,西安 710061)
摘要:目的 建立黄芩中农药多残留量的新检测方法,考察陕西不同地区黄芩药材中12种农药残留情况。方法 采用DB-
17MS毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm),用气相色谱-质谱串联技术(GC-MS)进行目标成分的定量测定。结果 建立了气
相色谱-质谱串联法测定黄芩中农药多残留的方法,通过对陕西省不同地区黄芩药材中农药进行检测,发现尚无超标的农药。结
论 该方法严谨可靠,操作简便,能较准确地反映测定结果,与国家现有标准的方法相比,实验时间短,灵敏度高,减少了人为因
素的影响。
关键词:黄芩;农药残留;GC-MS
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2014.02.004
中图分类号:R282   文献标志码:A   文章编号:1004-2407(2014)02-0119-04
Study on the detection method of organochlorine pesticides in Scutellariaradix
LIU Liping1,SONG Li 2,QIAO Rongxia2
* (1.Xi′an Medical Colege,Xi′an 710309,China;2.Shaanxi Institute for Food and Drug
Control,Xi′an 710061,China)
Abstract:Objective To establish a new detection method for 12organochlorine pesticides in Scutellaria radix,and to study the sit-
uation of pesticides in Scutellariaradixs in different regions of Shaanxi province.Method GC-MS was used to quantitatively deter-
911西北药学杂志 2014年3月 第29卷 第2期