全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2012，27(4)∶458 ～ 460
* 经验交流*
基金项目:校前期资助项目(编号:20090312)
作者简介:包晓玮，女，正攻读动物营养学专业的博士学位。Email:xiaoweibao2010@ sina． com
* 通信作者，Email:qjlxjau@ yahoo． com． cn
刺山柑总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的药效学研究
包晓玮，韩海霞，张青梅，戴小华，雒秋江*
(新疆农业大学食品科学与药学学院，新疆 乌鲁木齐 830052)
摘要:目的 考察刺山柑总黄酮干预大鼠佐剂性关节炎的作用。方法 建立大鼠 Freund’s 完全佐剂性关节炎模型，以大孔
树脂分离得到的总黄酮为供试药品，灌服模型大鼠，并以生理盐水作为对照。造模后一周，采用足趾容积测量仪测定大鼠足
趾的肿胀程度;造模后 21 ～ 28 d，通过关节炎指数评分标准来评价继发性病变的严重性，并通过制备滑膜组织的切片来观察滑
膜组织细胞的变化。结果 与模型组比较，造模后 18 h及 5 d内，刺山柑黄酮组大鼠的足趾肿胀度明显降低(P ＜ 0． 01) ;其关
节炎指数评分与模型组比较均有显著降低，并能有效地保护滑膜组织，降低炎性细胞的浸润。结论 刺山柑总黄酮对佐剂性
关节炎原发病具有治疗作用，对继发病的预防作用明显。
关键词:刺山柑;总黄酮;佐剂性关节炎;大鼠
中图分类号:R96 文献标志码:B 文章编号:1006 － 0103(2012)04 － 0458 － 03
刺山柑 Capparis spinosa L． 为山柑科或白菜花
科的藤本蔓生小半灌木，广泛分布于新疆境内，有很
好的抗旱、耐寒及防风固沙作用。刺山柑含有黄酮
类、生物碱类、脂类、聚戊烯醇类、挥发油类及吲哚类
和脂肪族类芥子油苷等成分，在民间主要用于治疗
类风湿性关节炎［1］。生物黄酮类具有保护心血管
系统、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化自由基、抗炎、镇
痛、保肝等多种生物活性。类风湿关节炎是一种以
慢性进行性关节滑膜病变为特征的全身性自身免疫
性疾病［2］。大鼠佐剂性关节炎与人类风湿性关节
炎的关节病理改变较为相似，是研究治疗类风湿性
关节炎疗效最常用的动物模型。现通过动物实验，
考察维吾尔药材刺山柑总黄酮对佐剂性关节炎大鼠
足趾肿胀的缓解和继发病症的预防作用。
1 实验部分
1． 1 仪器、试药与动物
UV －2550 紫外分光光度计(日本岛津) ;PV －
200 足趾容积测量仪(成都泰盟科技有限公司)。
Freund’s完全佐剂(美国 Sigma) ;芦丁对照品(中国
药品生物制品检定所) ;阿司匹林(市售) ;其余试剂
为分析纯;刺山柑采自新疆吐鲁番的野生果实。
Wistar大鼠［新疆维吾尔自治区疾病控制中心动物
房，动物合格证号 SCXK(XJ)－ 0001］，体重 160 ±
20 g，自然饲养一周以适应环境。
1． 2 刺山柑总黄酮药液的制备
1． 2． 1 样品的制备 准确称取 200 g 刺山柑粉末，
用 3 L 70% 乙醇，于室温(25 ℃)下超声提取 40
min，抽滤后浓缩滤液，水浴中干燥至浸膏状，即得上
树脂用的刺山柑提取液。
1． 2． 2 标准曲线的制备 精密称取 3． 42 mg 芦丁
对照品，置 10 mL量瓶中，用 60%乙醇溶解并定容。
再吸取 2 mL于 10 mL量瓶中，用 60%乙醇定容，即
得 68． 4 μg·mL －1的对照品溶液。分别吸取 0． 25、
0. 5、1． 0、1． 5、2 mL 对照品溶液，置 10 mL 试管中，
加入 0． 1 mol·L －1三氯化铝溶液、1 mol·L －1醋酸钾
溶液各 1 mL，再加乙醇至 5 mL，摇匀后放置 30 min。
以试剂为空白，于 420 nm 处测定吸光度，得回归方
程为:Y = 0． 2121X － 0． 0187(r = 0． 9994)。
1． 2． 3 总黄酮的测定［3］ 称取 5 mg供试品，提取，
定容于 10 mL量瓶中，测定吸光值，通过回归方程计
算其中总黄酮的含量。
1． 2． 4 刺山柑中总黄酮的分离与药液的配制 在
室温下，将刺山柑提取液以一定的流速通过装有约
200 mL X － 5 型大孔吸附树脂的玻璃层析柱(30 ×
400 mm)。先水洗除去多糖，直至流出液无 molish
反应后，再分别用 15%、30%、60%乙醇依次洗脱黄
酮，收集盐酸 －镁粉反应呈阳性的所有溶液。用比
色法测定吸光度，并按回归方程计算流出液中总黄
酮的浓度，计算得总黄酮的含量为 63． 98%。流出
液浓缩、结晶，得 4． 83 g咖啡色晶体状粗制黄酮，定
容于 200 mL 量瓶中，配成生药含量为 1 g·mL －1的
供试品溶液(总黄酮浓度为 15． 45 mg·mL －1)。
1． 3 大鼠佐剂性关节炎实验
1． 3． 1 模型的建立、足趾肿胀度的检测与关节炎指
数的评分［4］ 取 30 只Wistar大鼠，随机均分成正常
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2012.04.020
组、模型对照组和刺山柑黄酮组。刺山柑黄酮组的
大鼠按计量 ig给药 5 d，正常组与模型对照组的 ig
等量生理盐水，末次给药 1 h后，同时在刺山柑黄酮
组与模型组大鼠的右后足趾 sc 0． 1 mL Freund’s完
全佐剂致炎，正常组大鼠的右后足趾 sc 生理盐水。
在致炎后一周内检测刺山柑黄酮对原发病的抗炎作
用;致炎一周后开始 ig 给药，连续 5 d，停药后一周
继续用药 5 d，致炎后第 10 天开始进行继发病的药
效学指标评定。对大鼠致炎后，利用足趾容积测量
仪按时间测定大鼠右后足趾的容积，记录一周内测
定的足趾容积。通过计算足趾肿胀度和肿胀抑制率
来考察刺山柑黄酮对于大鼠佐剂性关节炎原发性病
变的影响。对大鼠致炎后 21 ～ 28 d，用评分标准来
评价继发性病变的严重性。
1． 3． 2 滑膜组织病理切片的观察 末次给药后各
组大鼠禁食 24 h，于心脏采血，脱臼处死大鼠，取下
右足小腿关节，用 10%甲醛于关节腔灌注固定 6 ～ 8
h，分离滑膜组织置 10%甲醛中固定 28 h。正常流
水冲洗 12 h 后，将滑膜组织依次放入 5%乙醇(2
h)、70%乙醇(2 h)、80%乙醇(2 h)、90%乙醇(2
h)、95%乙醇(2 h)、100%乙醇(1． 5 h)、100%乙醇
(1． 5 h)中(如需过夜，必须浸泡在 70%乙醇里)。
将脱水好的滑膜组织放在二甲苯 －乙醇(1∶1)中
浸泡 1 ～ 1． 5 h，再分别在二甲苯中浸泡两次，每次
30 ～ 60 min。将滑膜组织从二甲苯中取出，放入已
经在 58 ～ 60 ℃温箱中融化的石蜡中 3 h，取出再次
浸入新融化的石蜡中 3 h。在纸船中倒入融化的石
蜡，将材料按所需切片的方位要求放于其中，待表面
形成膜后放入冷水中使其迅速冷却。修块、切片可
按常规方法进行，贴片可以不用黏片剂，直接在温水
中稍浸一下，然后将蜡带平展在载玻片上，切片在
45 ℃温箱中烤 4 h。将烘干后的切片分别放入二甲
苯中浸泡(15 min × 2) ，然后依次放入二甲苯 －乙醇
(1∶1)、乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%
乙醇、50%乙醇、蒸馏水各 3 ～ 5 min，用苏木精染液
10 min，蒸馏水、1%氨水、蒸馏水、50%乙醇、70%乙
醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇各 3 ～ 5 min，用依
红染液 5 min，95%乙醇、乙醇、(1∶1)、二甲苯各
3 ～ 5 min后，开始镜检。
1． 3． 3 刺山柑黄酮液对大鼠足趾肿胀的影响 大
鼠佐剂性关节炎模型中，原发病主要表现为早期致
炎局部的炎症反应，致炎 18 h 后右脚的肿胀度达峰
值，持续约 3 d 后逐渐减轻，8 d 后再度肿胀。考察
了大鼠造模后 18 h及 5 d内的足趾肿胀度。造模后
18 h 内大鼠足趾肿胀实验表明:与模型组相比，刺
山柑黄酮组大鼠足趾的肿胀程度较低，在 6 h 左右
时，有显著性差异(P ＜ 0． 05) ;18 h 后达到极显著差
异(P ＜ 0． 01) ，对于 Freund’s 完全佐剂引起的初期
肿胀有明显的抑制作用(表 1)。造模后 5 d 内，每
隔 24 h测量大鼠足趾的肿胀程度，与模型组相比，
前 3 d均有极显著性差异，后两天为显著性差异(表
2)。说明刺山柑中黄酮成分有明显的抗炎作用，可
抑制 Freund’s完全佐剂导致的大鼠足趾肿胀，对佐
剂性关节炎的原发病症有良好的治疗作用。
表 1 造模后 20 h内刺山柑黄酮对大鼠足趾肿胀的影响(珔x ± s，n =10)
组别
剂量 /
mL·g － 1
Freund’s完全佐剂致炎后不同时间的足趾肿胀度 /mL
0． 5 h 1 h 2 h 4 h 6 h 8 h 18 h 20 h
正常组 0． 01 0． 02 ± 0． 01 0． 01 ± 0． 008 0． 02 ± 0． 01 0． 02 ± 0． 01 0． 02 ± 0． 01 0． 01 ± 0． 01 0． 02 ± 0． 01 0． 02 ± 0． 06
模型组 0． 01 0． 09 ± 0． 05Δ 0． 24 ± 0． 10ΔΔ 0． 04 ± 0． 14Δ 0． 91 ± 0． 21ΔΔ 1． 04 ± 0． 28ΔΔ 1． 27 ± 0． 38ΔΔ 1． 55 ± 0． 32ΔΔ 1． 52 ± 0． 34ΔΔ
刺山柑 0． 01 0． 88 ± 0． 06ΔΔ 0． 16 ± 0． 07ΔΔ 0． 37 ± 0． 05ΔΔ 0． 80 ± 0． 22 0． 92 ± 0． 25 1． 06 ± 0． 15* 1． 22 ± 0． 32* 1． 30 ± 0． 29＊＊
总黄酮组 0． 02 0． 08 ± 0． 03Δ 0． 21 ± 0． 07ΔΔ 0． 35 ± 0． 09ΔΔ 0． 73 ± 0． 27ΔΔ 0． 89 ± 0． 27* ΔΔ 0． 98 ± 0． 31* ΔΔ 1． 09 ± 0． 32＊＊ΔΔ 1． 02 ± 0． 35＊＊ΔΔ
与模型组比较:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与正常组比较:ΔP ＜ 0． 05，ΔΔP ＜ 0． 01
表 2 造模后 5 d内刺山柑黄酮对大鼠足趾肿胀的影响(珔x ± s，n =10)
组别 剂量 /mL·g － 1
Freund’s完全佐剂致炎后不同时间的足趾肿胀度 /mL
1 d 2 d 3 d 4 d 5 d
正常组 0． 01 0． 02 ± 0． 01 0． 012 ± 0． 01 0． 02 ± 0． 01 0． 02 ± 0． 01 0． 02 ± 0． 01
模型组 0． 01 1． 52 ± 0． 31Δ 1． 49 ± 0． 35Δ 1． 38 ± 0． 33Δ 1． 29 ± 0． 31Δ 1． 19 ± 0． 27Δ
刺山柑总 0． 01 1． 22 ± 0． 35* Δ 1． 26 ± 0． 26＊＊Δ 1． 21 ± 0． 25* Δ 1． 13 ± 0． 37Δ 1． 02 ± 0． 28Δ
黄酮组 0． 02 1． 10 ± 0． 35＊＊Δ 0． 97 ± 0． 32＊＊Δ 1． 02 ± 0． 25＊＊Δ 1． 01 ± 0． 28* Δ 0． 94 ± 0． 28* Δ
与模型组比较:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与正常组比较:ΔP ＜ 0． 01
1． 3． 4 关节炎指数的评分 大鼠佐剂性关节炎造
模 10 d后，激发病症表现为对侧(左后肢)和前肢脚
的肿胀，耳和尾部出现“关节炎”小结，变应性角膜
翳以及体重下降等。对多发性关节炎指数的评分结
果见表 3。刺山柑黄酮组大鼠的关节炎指数均低于
模型组的，其中大鼠的尾巴、前爪和后爪与模型组比
较有极显著性差异(P ＜ 0． 01) ，刺山柑黄酮对大鼠
佐剂性关节炎激发病症有良好的预防作用。
954第 4 期 包晓玮，等。刺山柑总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的药效学研究
表 3 关节炎指数的评分(珔x ± s，n =10)
组别 剂量 / mL·g － 1 耳 鼻 尾 前爪 后爪
正常组 0． 01 0 0 0 0 0
模型组 0． 01 0． 83 ± 0． 42Δ 0． 67 ± 0． 52Δ 0． 75 ± 0． 48Δ 1． 83 ± 0． 42Δ 2． 92 ± 0． 32Δ
刺山柑总黄酮组 0． 01 0． 47 ± 0． 51* Δ 0． 44 ± 0． 50* Δ 0． 13 ± 0． 38＊＊Δ 1． 15 ± 0． 69＊＊Δ 2． 77 ± 1． 28* Δ
0． 02 0． 33 ± 0． 49* Δ 0． 42 ± 0． 52Δ 0． 08 ± 0． 30＊＊Δ 1． 08 ± 0． 79＊＊Δ 2． 59 ± 1． 52＊＊Δ
与模型组比较:* P ＜ 0． 01，＊＊P ＜ 0． 01;与正常组比较:ΔP ＜ 0． 01
1． 3． 5 大鼠滑膜组织的病理评分 大鼠滑膜的病
理评分结果见表 4，模型组大鼠的关节滑膜炎细胞
浸润、滑膜细胞和滑膜纤维组织增生，与正常组的比
较极显著增多(P ＜ 0． 01) ，刺山柑黄酮高剂量的与
低剂量的治疗作用有极显著性差异(P ＜ 0． 01)。实
验表明:通过显微镜观察大鼠滑膜组织的病理改变，
考察大鼠关节滑膜炎细胞浸润、滑膜细胞和滑膜纤
维组织增生，刺山柑对大鼠滑膜组织有显著的保护
作用，可减少炎细胞浸润，抑制滑膜细胞和滑膜纤维
组织的增生，从而治疗类风湿性关节炎。
表 4 大鼠滑膜病理的评分(珔x ± s，n =10)
组别 剂量 /mL·g － 1 炎细胞浸润 滑膜细胞增生程度 滑膜纤维组织增生程度
正常组 0． 01 0． 18 ± 0． 41 0． 02 ± 0． 44 0． 04 ± 0． 10
模型组 0． 01 3． 25 ± 0． 83Δ 2． 75 ± 0． 58Δ 2． 74 ± 0． 45Δ
刺山柑总黄酮组 0． 01 2． 80 ± 0． 29* Δ 1． 25 ± 0． 95* Δ 1． 55 ± 0． 95* Δ
0． 02 1． 72 ± 0． 78＊＊Δ 0． 84 ± 0． 88＊＊Δ 1． 12 ± 0． 84＊＊Δ
与模型组比较:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;与正常组比较:ΔP ＜ 0． 01
1． 3． 6 刺山柑总黄酮对大鼠滑膜组织的影响 正
常组大鼠的关节滑膜组织多为单层，排列规则，纤维
细胞分布均匀，滑膜组织较为疏松，无炎性细胞浸润
以及纤维组织增生。模型组大鼠的滑膜衬里细胞层
明显增多，纤维细胞分布不均匀，滑膜组织呈现断裂
并有肉芽生成;滑膜内可见淋巴细胞、浆细胞、以及
巨噬细胞、中性粒细胞等炎性细胞浸润，并趋化形成
淋巴样小结或淋巴滤泡，滑膜血管增多。刺山柑总
黄酮低剂量组大鼠的滑膜细胞有局部增生，程度较
低，无肉芽和炎性细胞浸润，但对局部滑膜组织仍有
较严重的破坏，部分纤维细胞分布不均匀。刺山柑
总黄酮高剂量组大鼠的滑膜组织比较完整，多数排
列整齐，无炎性细胞浸润，血管和纤维细胞无增生现
象(图 1)。
A B C D
图 1 正常组(A)、模型组(B)、刺山柑低剂量组(C)及高剂量组(D)大鼠的关节滑膜组织病理形态学图
1． 3． 7 数据统计 数据分析应用 SPSS 11． 0 软件
处理，采用单因素方差分析，结果以 珋x ± s表示。
2 讨论
前期研究表明:刺山柑总黄酮具有强烈的镇痛
抗炎作用和改善动物肌体免疫力的功能，但其确切
的抗炎机制尚不清楚。刺山柑总黄酮对原发型病症
即大鼠右后足趾肿胀具有良好的抑制炎症的作用，
与模型组相比有统计学意义。通过对大鼠关节滑膜
组织病理形态学的观察看出:佐剂性关节炎(RA)模
型组大鼠呈现以滑膜组织断裂并有肉芽生成以及炎
性细胞浸润的病理变化，而刺山柑总黄酮高、低剂量
组均对该病变有改善作用，尤其是高剂量组表现为
大鼠滑膜组织比较完整，多数排列整齐，无炎性细胞
浸润，血管和纤维细胞无增生现象。文中结果表明:
刺山柑提取物黄酮能有效地降低 RA 大鼠关节滑膜
增生及炎性细胞浸润，进而在早期可干预类风湿性
关节的进一步发展。
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社，2001:882 － 934．
收稿日期:2011 － 08 － 30
064 华 西 药 学 杂 志 第 27 卷