全 文 ：收稿日期:2007-04-28;　修订日期:2007-08-18　
基金项目:内蒙古医学院蒙药现代化研究项目(No.MX2005ZB024)
作者简介:杜瑞芳(1973-),女(汉族),内蒙古乌海人, 现任内蒙古自治区
医药工业研究所工程师 ,学士学位 ,主要从事新药研发工作.
＊通讯作者简介:王雨梅(1967-), 女(汉族),天津人 ,现任内蒙古自治区
医药工业研究所副主任药师 ,在读博士 ,主要从事新药开发工作.
高效液相色谱法
同时测定沙枣中槲皮素和异鼠李素的含量
杜瑞芳 , 王雨梅＊ , 刘卫东 , 马　丽
(内蒙古自治区医药工业研究所 ,内蒙古 呼和浩特　010010)
摘要:目的 建立沙枣中槲皮素(Quercetin)和异鼠李素(Isorhamnetin)的高效液相色谱测定方法。方法 采用 ODS柱 , 甲
醇-0.1%磷酸溶液(58∶42), 检测波长 370 nm。结果 槲皮素在 0.042 ～ 0.84 μg范围内线性关系良好 , 异鼠李素在
0.041 2 ～ 0.824 μg范围内线性关系良好;该法回收率槲皮素为 98.98%,异鼠李素为 99.27%;RSD槲皮素为 1.56%, 异
鼠李素为 0.86%(n=6)结论 该方法为沙枣的含量测定提供了一种快速和准确的方法 ,为蒙药植物资源的进一步开发提
供了可靠的依据。
关键词:沙枣;　槲皮素;　异鼠李素;　含量测定;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)04-0831-01
DeterminationofQuercetinandIsorhamnetininFructusElaeagni.byHPLC
DURui-fang, WANGYu-mei＊ , LIUWei-dong, MALi
(InnerMongolianAutonamyInstituteofMedicineandIndustry, Huhhot010010, China)Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminationofquercetinandisorhamnetininFructusElaeagni.Meth-
odsTheseparationwasperformedonKromasilC18 Column(250 mm×4.6mm, 5μm)andthemobilephasewasmethanol-
0.1%phosphoricacid(58∶ 42).Quercetinandisorhamnetinwasdetectedat370nm.ResultsThestandardcurvewaslinear
withintheconcentrationrangeof0.042 ～ 0.84 μgforquercetinand0.0412 ～ 0.84 μgforisorhamnetin, respectively.There-
coverywas98.98% forquercetinand99.27% forisorhamnetin, respectively.ConclusionThismethodisrapidandaccuratefor
determinationofquercetinandisorhamnetin.ItcouldbeusedforfurtherexploitationofMongoliaherbalresources.
Keywords:FructusElaeagni;　Quercetin;　Isorhamnetin;　Assay;　HPLC
　　沙枣 , 为胡颓子科植物沙枣 ElaeagnusangustifoliaL.的干燥
成熟果实 , 具有补虚 , 安神 , 健脾 , 止泻等功效 , 用于治疗身体虚
弱 , 神志不清 ,消化不良 ,腹泻 [ 1] 。在西部地区 , 沙枣被称为 “百
树宝” ,果实营养丰富 , 含糖量较高 , 干品为 62% ～ 70%, 主要为
果糖 , 蛋白质 、维生素 C也比较丰富。 另外 , 果实中还含有鞣质 、
黄酮类和黏液质 [ 2] 。人们对其枝 、叶及花进行研究 , 发现各部分
都含有黄酮类化合物 [ 3, 4] , 果实中所含黄酮类化合物的测定未见
报道。本研究首次采用 HPLC法测定沙枣果实中槲皮素和异鼠
李素含量 ,操作简便 , 测定灵敏度 、准确度均较好 ,对更好地开发
沙枣药用植物资源具有一定的意义。
1　器材
1.1　仪器 Agilent1100液相色谱仪 , Agilent1100紫外检测器 ,
AS3120超声波清洗机 , AG135电子分析天平。
1.2　试药 槲皮素对照品和异鼠李素对照品均由中国药品生物
制品检定所购入;水为双蒸水 , 甲醇为色谱纯 , 其它试剂均为分
析纯。
1.3　药材 沙枣采自内蒙古巴彦淖尔 、乌海 , 由内蒙古大学生命
科学学院赵立清博士鉴定为沙枣 ElaeagnusangustifoliaL.的
果实。
2　方法和结果
2.1　色谱条件 KromasilC18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm,
100A);流动相:甲醇- 0.1%磷酸溶液(58∶42);检测波长 370
nm;体积流量:1.0ml/min;柱温:室温;进样量:20 μl。在此条件
下供试品中槲皮素成分 、异鼠李素成分能与其它成分达到较好分
离。见图 1。
a-对照品　b-样品　　　 1.槲皮素　2.异鼠李素
图 1　混合的 HPLC色谱图
2.2　对照品溶液制备 精密称取槲皮素对照品和异鼠李素对照
品适量 ,加 80%甲醇分别制成每毫升含槲皮素和异鼠李素 200
μg的溶液。精密量取上述对照品溶液各 0.5 ml, 置 10 ml量瓶
中 , 加 80%甲醇制成每毫升含槲皮素和异鼠李素 10μg的混合对
照品溶液。
2.3　供试品溶液制备 取本品粗粉约 1 g, 精密称定 ,置具塞锥形
瓶中 , 精密加 80%甲醇 50 ml,称定重量 , 加热回流 30 min, 放冷 ,
再称定重量 ,用 80%甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过。 精密量
取续滤液 25 ml, 置具塞锥形瓶中 ,加 25%盐酸溶液 10ml, 摇匀 ,
置水浴加热回流 30 min,立即冷却 , 转移至 50 ml量瓶中 ,用适量
80%甲醇洗涤容器 , 洗液并入同一量瓶中 , 加 80%甲醇至刻度 ,
摇匀 , 滤过 ,取续滤液 ,即得。
2.4　标准曲线制备 取槲皮素对照品和异鼠李素对照品各约 10
mg,精密称定 , 分别置不同的 50ml量瓶中 , 用 80%甲醇溶解并稀
释至刻度 ,摇匀。各精密量取 10.0ml置 25ml量瓶中 ,加 80%甲
醇至刻度 ,摇匀 , 即得对照品混合溶液。精密量取对照品混合溶
液 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 ml置于 10 ml量瓶中 , 80%甲醇稀释
至刻度 , 摇匀 , 分别进样 20 μl测定峰面积。以对照品峰面积 Y
为纵坐标 ,相应对照品的量 X(μg)为横坐标得槲皮素回归方程
为:Y=1E+07X-79 055, r=0.999 9,线性范围 0.042 ～ 0.84μg;
异鼠李素回归方程为 Y=7E+06X-49 467, r=0.999 9, 线性范
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.4 时珍国医国药 2008年第 19卷第 4期
围 0.041 2 ～ 0.824 μg。
2.5　精密度实验 对照品混合溶液, 重复进样 5次 ,测定峰面积。
结果槲皮素峰面积 RSD为 2.06%,异鼠李素峰面积 RSD为 2.50%。
2.6　稳定性实验 取同一供试品溶液 , 间隔一定时间进样 , 依法
测定峰面积。结果异鼠李素峰面积 RSD为 2.61%(n=5);槲皮
素峰面积 RSD为 2.20%(n=5)。供试品溶液在 8 h内稳定。
2.7　重复性实验 取同一批药材 5份 , 按供试品溶液制备方法 ,
分别测定槲皮素 、异鼠李素峰面积。结果槲皮素峰面积 RSD为
2.36%,异鼠李素峰面积 RSD为 2.95%。
2.8　加样回收实验 精密称取已知含量的样品 0.5 g,分别精密
加入一定量的槲皮素及异鼠李素对照品 , 按 “供试品溶液制备”
方法进行测定并计算回收率 , 结果槲皮素平均回收率为 98.98%,
RSD为 1.56%(n=6), 异鼠李素平均回收率为 99.27%, RSD为
0.86%(n=6)。
2.9　样品测定 取不同批次的沙枣药材粉末 ,按 “ 2.3”项下方法
处理 , 进样测定。结果见表 1。
表 1　沙枣中槲皮素和异鼠李素测定
药材
批次
槲皮素
质量分数C/mg· g-1 RSD(%)
异鼠李素
质量分数 C/mg· g-1 RSD(%)
1 0.182 1.22 0.068 1.47
2 0.015 1.79 0.042 1.96
3 0.052 1.88 0.100 1.60
4 0.073 1.96 0.132 1.53
5 0.053 1.89 0.080 1.90
6 0.041 1.88 0.097 1.96
　　n=3
3　讨论
我们针对异鼠李素 、槲皮素进行紫外光谱扫描 , 发现异鼠李
素在(370±2)nm处有最大吸收;槲皮素在(372±2)nm处有最
大吸收。因此将 370nm作为检测波长 , 在同一色谱条件下 , 异鼠
李素和槲皮素分离较好。
提取药材时 ,以 80%甲醇为提取溶媒 , 分别尝试超声提取 60
min,回流提取 60 min,从色谱图来看 , 两种提取方法测定所得供
试液的色谱峰基本一致 ,但测定结果回流提取异鼠李素含量明显
大于超声提取。同时还考察了超声提取时间 , 加酸水解时间 , 结
果以 30min提取 , 30min水解为最佳提取条件。
在上述波长条件下 ,由于提取过程中盐酸的加入 ,以一定比
例的磷酸溶液作为流动相 ,结果以甲醇-0.1%磷酸溶液(58∶42)
分离较好。
沙枣作为蒙古族习用药材 ,在本实验中建立了含量测定的方
法 , 作为分离测定研究尚属首次。 从实验结果可以看出 , 不同批
次的药材两种黄酮类成分的含量高低有一定的相关性。因此 , 本
实验的方法可以作为今后质量控制及其他方面研究的基础 , 以便
更好地开发利用这一蒙药资源。
参考文献:
[ 1 ] 　朱亚民.内蒙古植物药志 [ M] .呼和浩特:内蒙古人民出版社 ,
1989:227.
[ 2 ] 　黄俊华 ,买买提江 ,杨昌友 ,等.沙枣研究现状与展望 [ J] .中国野生
植物资源 , 2005, 24(3):26.
[ 3 ] 　石玉平 ,王永宁 ,郭　珍.沙枣花中黄酮类化合物的提取 [ J] .南京
林业大学学报·自然科学版 , 2005, 29(2):106.
[ 4 ] 　阎　娥 ,王永宁 ,张　弢.沙枣枝中总黄酮提取条件的研究 [ J] .中
国中医药信息杂志 , 2005, 12(11):42.
收稿日期:2007-08-08;　修订日期:2007-09-08
基金项目:内蒙古政府蒙药现代化重大研究专项蒙药质量标准化资助项
目(No.MX2005ZB012)
作者简介:李占军(1983-),男(汉族),内蒙古锡林郭勒盟人 ,现为内蒙古
医学院药学院 2006级硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事中蒙药药效物质
基础研究工作.
＊通讯作者简介:薛培凤(1969-), 女(汉族),内蒙古呼和浩特人 , 现任内
蒙古医学院药学院天然药物化学教研室教授 ,博士学位 , 主要从事中蒙药
药效物质基础研究工作.
欧洲葡萄的质量标准研究
李占军 , 布　仁 , 张金花 , 薛培凤＊
(内蒙古医学院药学院 ,内蒙古 呼和浩特　010059)
摘要:目的 建立欧洲葡萄中齐墩果酸的薄层色谱鉴别方法和含量测定方法。 并测定不同产地的欧洲葡萄中齐墩果酸
的含量。方法 采用薄层色谱法(TLC)鉴别 ,并采用高效液相色谱(HPLC)法测定其含量。结果 测得欧洲葡萄中齐墩果
酸含量为 0.36%以上 , 平均回收率为 98.33% ,相对标准偏差 RSD为 1.59%。结论 该方法操作简便 , 结论可靠 ,可用于
欧洲葡萄的质量控制。
关键词:欧洲葡萄;　齐墩果酸;　薄层色谱;　高效液相色谱
中图分类号:R291.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)04-0832-02
StudiesontheQualityStandardofVitisviniferaL.
LIZhan-jun, BURen, ZHANGJin-hua, XUEPei-feng＊
(DepartmentofPharmaceuticalScience, InnerMongolianMedicalColege, Hohhot, 010059, China)
Abstract:ObjectiveToestablishaTLCmethodforidentificationandanHPLCmethodforcontentdeterminationofoleanolic
acidfromVitisviniferaL.MethodsTLCwasusedtoidentifyandHPLCwasemployedtodeterminethecontent.ResultsContent
ofoleanolicacidinVitisviniferaL.wasabove0.36%, theaveragerecoverywas98.33% withRSD1.59% (n=5).Conclu-
sionThemethodissimple, convenientandaccurateandcanbeusedforthequalitycontrolofVitisviniferaL.
Keywords:VitisviniferaL;　Oleanolicacid;　 TLC;　HPLC
　　“欧洲葡萄”名称源于其植物名 , 蒙药名 “乌珠木” [ 1] ,为欧洲
葡萄 VitisviniferaL.的干燥果实。欧洲葡萄以蒙药 “贡布如木”
载于《认药白晶鉴 》, 《无误蒙药鉴》称其 “茎长 , 状如铁线莲 , 缠
绕 , 叶圆且大 ,花红色很小 , 故难碰见 ,果实红紫色 , 果皮极薄 , 每
串果实近百粒……大小如黄豆 , 黄色 ,无核者为佳 ”。 《中华本草
·蒙药卷》以 “葡萄干”(蒙药名 “乌珠木”)收载本品 [ 1] 。 《内蒙
古植物药志》《内蒙古植物志》亦收载本品 [ 2～ 3] 。据《中华本草 ·
蒙药卷 》记载 ,本品可清肺热 ,止咳平喘 , 滋补强身。主治肺热咳
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.4