全 文 ：总灰分测定时发现，猪皮在灰化过程中释放出大量烧焦蛋白
的刺激性气体，故在初步灰化时可将猪皮置通风橱中用电炉慢慢
加热，初步灰化后再移入马弗炉中慢慢升温灰化完全。
猪皮中含有大量的胶原蛋白，胶原蛋白构成的胶原是由 3 条
多肽链(α链)组成的蛋白质，每一条链都有 1 个典型的氨基酸序
列(－ Gly － X － Y －)n，X、Y均表示任意的氨基酸，X通常是脯氨
酸(Pro) ，Y通常指羟脯氨酸(Hyp)［4］，即每个氨基酸序列中含有
一个甘氨酸(Gly) ，故在定性鉴别时选取甘氨酸作为定性鉴别的
目标成分。
胶原蛋白可以促进成纤维细胞、血管内皮细胞的分化并形成
基质，激活巨噬细胞的吞噬功能，提高机体的免疫活性，降低创面
被感染的机会。同时胶原蛋白可促进肉芽组织生长，其降解产物
为机体修复细胞所必须的氨基酸———羟脯氨酸，为创面的修复提
供丰富的营养物质［5］。本实验所属课题的一个重要目标就是提
取猪皮中的胶原蛋白应用于破损皮肤的修复，故选取特征性的羟
脯氨酸作为含量测定的指标成分。
柱前衍生化测定氨基酸常见的衍生化试剂有异硫氰酸苯酯、
芴甲氧羰酰氯(FMOC － Cl)和 2，4 －二硝基氯苯(DNCB) ，实验中
对 3 种衍生化试剂测定氨基酸的方法做了比较，结果表明，芴甲
氧羰酰氯法和 2，4 －二硝基氯苯法样品制备过程中的影响因素
过多，导致实验的稳定性不好，异硫氰酸苯酯法相对前两种方法
操作较简单，方法稳定，故选用异硫氰酸苯酯作为衍生化试剂测
定羟脯氨酸的含量。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会． 中国药典，Ⅰ部［S］． 北京:化学工业出版社，
2005:附录 48．
［2］ 薛翠英，程凤兰，马 琳．浅谈脂肪的测定方法［J］． 技术监督纵横，
2000，2:8．
［3］ 杨 菁，孙黎光，白秀珍，等． 异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液
相色谱法同时测定 18 种氨基酸［J］．色谱，2002，20(4) :369．
［4］ 顾其胜．胶原蛋白的临床应用［J］．中国修复重建外科杂志，2006，
20(10) :1052．
［5］ 王晓芹，王贵波，李晓辉． 创面敷料及其对愈合的影响研究进展
［J］．中国临床康复，2002，6(4) :574．
收稿日期:2010-04-02; 修订日期:2010-10-29
基金项目:国家科技支撑计划(No． 2007BAI38B05)
作者简介:王海生(1980-) ，男(汉族) ，吉林大安人，现任吉林省中医药科
学院助理研究员，学士学位，主要从事中药新药研究工作．
* 通讯作者简介:刘永宏(1972-) ，男(汉族) ，吉林长春人，现任中国科学
院南海海洋研究所研究员，博士学位，主要从事天然药物中活性成分的分
离研究工作．
酢浆草提取物中总黄酮含量的分光光度法测定
王海生1，王隶书1，范艳君2，刘永宏3*
(1．吉林省中医药科学院，吉林 长春 130012; 2．长春中医药大学，吉林 长春 130117;
3．中国科学院南海海洋研究所，广东 广州 510301)
摘要:目的 测定酢浆草不同提取物中总黄酮的含量。方法 以异荭草素为标准品，采用分光光度法测定酢浆草提取物中
总黄酮的含量。结果 异荭草素在 10． 096 ～ 80． 768μg /ml范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n = 6)为 98． 7%，RSD
为 1． 70%。结论 方法灵敏度高、稳定性好，可用于酢浆草提取物的质量控制。
关键词:酢浆草提取物; 总黄酮; 异荭草素
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 03． 025
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)03-0578-02
Determination of Total Flavonoid in Extract of Oxalidis Corniculatae by Spectrophotome-
try
WANG Hai-sheng1，WANG Li-shu1，FAN Yan-jun2，LIU Yong-hong3*
(1． Jilin Provincial Academy of Chinese Medicine，Changchun，130012，China;2． Changchun University of Tra-
ditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China;3． South China Sea Institute of Oceanology，Chinese A-
cademy of Traditional Sciences，Guangzhou，510301，China)
Abstract:Objective To determine the content of total flavonoids in extract of Oxalidis corniculatae．Methods The content of to-
tal flavonoids in the extract of Herba Oxalidis corniculatae was determined by spectrophotometry with isoorientin as standard sub-
stance． Results The linear range of isoorientin were within the range of 10． 096 ～ 80． 768μg /ml． The average recovery was 98． 7%
(RSD = 1． 70%，n = 6)． Conclusion The method is of high sensitivity and good stability，and it is applicable for the quality con-
trol of extract of Oxalidis Corniculatae．
Key words:Extract of Oxalidis corniculatae; Total flavonoids; Isoorientin
酢浆草为酢浆草科植物酢浆草 Oxalis corniculata L． 的干燥 全草，其性味功效为酸、凉，具有清热解毒、利湿消肿的功效，民间
常用它治湿热泄泻、痢疾、黄疸等。全草主要含黄酮类物质、有机
酸及酯类物质等［1］。
黄酮类化合物广泛存在于自然界的许多植物中，是一类重要
的天然的有机化合物，其生理活性多种多样，主要表现在对心血
管系统的调节作用、抗炎作用、抗菌及抗毒素作用等［2］，这与酢
浆草清热解毒的功效相吻合，因此测定酢浆草药材及其提取物中
总黄酮含量意义就十分重大，而有关这方面的研究却报道较少。
为此，本课题组在国家科技部的支持下，对酢浆草进行了系统深
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 3 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 3
入研究，在国内首次采用异荭草素为标准品，利用分光光度法测
定了酢浆草提取物中总黄酮的含量，以期为酢浆草的进一步研发
提供相应的实验依据。
1 仪器与试药
UV －1600 型紫外可见分光光度计(日本岛津) ;722 型紫外
分光光度计(上海第三分析仪器厂) ;KQ － 3200 型超声波清洗器
(昆山市超声仪器有限公司) ;AUW120D 电子分析天平(日本岛
津)。异荭草素对照品由本课题组自制(纯度 ＞ 98%) ;酢浆草药
材购自吉林省宏检药材公司，各种提取物均由本课题组自制;所
用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 提取物的制备方法
2． 1． 1 提取物 1 ～ 3 取酢浆草药材，用 80%乙醇回流提取 2 次，
1． 5h /次，每次加醇量为药材量的 8 倍，合并提取液，回收乙醇并
浓缩至稠膏(取少许，减压干燥得提取物 1)。取 1 /3 量加水稀
释，依次用石油醚(60 ～ 80℃)、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油
醚提取物、醋酸乙酯提取物(提取物 2)、正丁醇提取物(提取物
3)。
2． 1． 2 提取物 4 ～ 5 取酢浆草醇提稠膏 1 /3 量，加水适量溶解，
上于 D101大孔吸附树脂柱上，依次以水、30%乙醇、70%乙醇提取
物，得到水提取物、30%乙醇提取物(提取物 4)、70%乙醇提取物
(提取物 5)。
2． 1． 3 提取物 6 ～ 7 取酢浆草药材，加水煎煮 2 次，1． 5h /次，每
次加水量为药材量的 8 倍，滤过，合并滤液，浓缩至稠膏(取少许，
减压干燥得提取物 6)。取 1 /3 量加 2 倍量乙醇沉淀，滤过，将上
清液浓缩至稠膏并减压干燥，得到沉淀物、上清提取物(提取物
7)。
2． 2 溶液的制备
2． 2． 1 对照品溶液的制备 精密称取异荭草素对照品 12． 62 mg，
置 25 ml容量瓶中，加 70%乙醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即
得异荭草素对照品。
2． 2． 2 供试品溶液的制备 分别取酢浆草各种提取物约 15 mg，
精密称定，置锥形瓶中，加 40 ml 70%甲醇溶液超声处理 30 min
(功率 120 W，频率 40 kHz) ，滤过，洗涤滤渣，合并洗液与滤液，水
浴蒸干，残渣加 70%乙醇溶液适量使溶解并定量转移至 10ml 容
量瓶中，加 70%乙醇溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2． 3 测定波长的选择 取对照品溶液及供试品溶液各 2 ml，分别
置 25 ml量瓶中，各加水至 6 ml，加 5%亚硝酸钠溶液 1 ml，混匀，
放置 6 min，加 10%硝酸铝溶液 1 ml，摇匀，放置 6 min，加入氢氧
化钠试液 10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置 15 min。以相应的试
剂为空白，在 370 ～ 700 nm 范围内扫描，结果异荭草素对照品及
样品均在 510nm处有最大吸收，故确定测定波长为 510 nm。
2． 4 标准曲线的绘制 精密吸取“2． 2． 1”项下对照品溶液 0． 5，
1，2，3，4 ml分别置 25 ml量瓶中，各加水至 6ml，加 5%亚硝酸钠
溶液 1 ml，混匀，放置 6 min，加 10%硝酸铝溶液 1ml，摇匀，放置 6
min，加入氢氧化钠试液 10ml，再加水至刻度，摇匀，放置 15 min。
以相应的试剂为空白，在 510nm波长处测定吸收度，以浓度为横
坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为 Y = 0． 011X －
0． 000 3，r = 0． 999 9，线性范围为 10． 096 ～ 80． 768μg /ml。
2． 5 稳定性实验 取供试品溶液(酢浆草提取物 4)2 ml，置 25 ml
量瓶中，按“2． 4”项下自“各加水至 6 ml……”起操作，对同一显
色后的供试液每隔一段时间测定 1 次吸光度，结果吸光度在 1． 5
h内无明显差异(RSD = 1． 20%，n = 6) ，表明显色后的供试液在
1． 5 h内稳定性良好。
2． 6 重复性实验 取酢浆草提取物 4 约 15mg 6 份，精密称定，按
“2． 2． 2”项下方法操作，制得 6 份供试液，按 2． 4 项下方法显色，
测定吸光度，结果总黄酮平均含量为 39． 8%，RSD 为 1． 69 %
(n = 6) ，说明本方法重复性良好。
2． 7 回收率实验 在已知含量的酢浆草提取物粉末中，加入一定
量的异荭草素对照品，按供试品溶液制备方法制备，显色，测定吸
光度，计算回收率。结果见表 1。
表 1 酢浆草提取物总黄酮回收率测定结果
样品称量
m /mg
样品含量
m /mg
加入对照品
量 m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
平均回收
率 (%)
RSD
(%)
15． 61 6． 21 6． 14 12． 42 101． 1
15． 25 6． 07 6． 63 12． 58 98． 2
15． 95 6． 35 6． 05 12． 21 96． 9 98． 7 1． 70
15． 21 6． 05 6． 88 12． 94 100． 1
15． 68 6． 24 6． 02 12． 08 97． 0
15． 47 6． 16 6． 46 12． 55 98． 9
提取物 4，n =6
由上述实验结果可知，平均回收率为 98． 7%，且 RSD值小于
2%，故认为用上述方法测定酢浆草提取物中总黄酮含量完全可
行。
2． 8 样品含量测定 分别取酢浆草各种提取物粉末约 15 mg，精
密称定，按照“2． 2． 2”项下供试品溶液制备方法操作，制得样品
溶液。取供试品溶液 2 ml，按“2． 4”项下方法显色，测定吸光度，
计算总黄酮含量。结果见表 2。
表 2 酢浆草不同提取物中总黄酮含量测定结果 %
提取物名称
含量
1 2 x
1 13． 3 12． 9 13． 1
2 32． 6 33． 1 32． 9
3 20． 0 20． 3 20． 2
4 40． 1 39． 6 39． 8
5 17． 7 17． 3 17． 5
6 10． 0 9． 8 9． 9
7 20． 3 19． 9 20． 1
3 讨论
由表 2 结果可知，酢浆草醇提物总黄酮含量明显高于水提
物，而在进一步纯化过程中，过柱 30%乙醇提取物中总黄酮含量
较醇提物明显提高。
由于酢浆草在湿热泄泻、黄疸、带下等症的显著疗效，使其应
用范围日趋广泛，但因缺乏对其化学药理的深入研究，使其仍停
留在传统的用药模式上，其药用价值无法被充分挖掘。本研究在
国内首次以异荭草素为标准品，对酢浆草提取物中总黄酮含量进
行深入研究，以期为酢浆草提取物的进一步开发应用提供相应的
实验依据。
参考文献:
［1］ 刘 明，邱德文．苗药酢浆草研究概述［C］． 全国苗医药学术研讨
会特辑，2003:219．
［2］ 吴立军．中药化学［M］．北京:中国医药科技出版社，2000:103．
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