全 文 ：白花前胡水醇提取物对缺血再灌注大鼠
血清 IL-6水平的影响
刘晓阳■ ,常天辉 ,章新华 ,邢军
(中国医科大学基础医学院临床药理学教研室 ,辽宁沈阳 110001)
　　【摘要】目的:探讨白花前胡水醇提取物抗缺血再灌注损伤的机理 , 为寻找高效 、低毒及安全的防治缺血再灌
注损伤的药物提供理论基础。方法:采用放射免疫分析测定血清 IL-6水平 ,并通过常规 HE 染色比较中性粒细胞等
炎性细胞的心肌浸润情况。结果:白花前胡水醇提取物低 、中 、高剂量 IL-6 水平分别由对照组的(151.53±17.70)
pg/ml降至(113.71±12.31)pg/ml 、(112.30±4.84)pg/ ml和(107.90±8.11)pg/ml(P <0.01), 其作用强度与硝苯地
平相近(123.55±18.62)pg/ml。结论:白花前胡水醇提取物明显抑制缺血再灌注大鼠血清 IL-6 水平 , 提示白花前胡
水醇提取物可能通过抑制核转录因子-кB 途径实现再灌注性损伤的防治。
【关键词】白花前胡;再灌注损伤;白细胞介素-6;放射免疫分析
【中图分类号】R969　　　【文献标识码】A　　　【文章编号】0258-4646(2002)04-0255-02
Effect of Aqua-Ethanol Extract of Peucedanum Praeruptorum Dunn
on Rats With Ischemic Reperfusion
LIU Xiao-yang , CHANG Tian-hui , ZHANG Xin-hua , XING Jun
(Department of Clinical Pharmacology , College of Basic Medical Sciences , China Medical University , Shenyang 110001 , China)
【Abstract】　Objective:Our aim was to provide the theoretical basis for research and development of drugs of higher-effi-
cancy and lower-toxicity , which could prevent and treat ischemic reperfusion.The mechanism of Peucedanum praeruptorum Dunn
against ischemia/ reperfusion injury was investigated.Methods:Level of serum interleukin-6(IL-6)was measured by radio-immu-
nization assay , and the extent of inflammatory cell infiltration was compared by using Hematoxy lin-Eosin staining.Results:Levels
of IL-6 in groups with low , mediate , and high Peucedanum praeruptorumDunn were(113.71±12.31)pg/ml , (112.30±4.84)
pg/ml , and (107.90±8.11)pg/ml respectively , which were significantly lower than control(151.53±17.70)pg/ml(P <0.
01).The activity was similar to that of nefidipine.Conclusion:The Peucedanum praeruptorum Dunn can inhibit the level of
serum IL-6 in rats with ischemic reperfusion , which suggests that Peucedanum praeruptorum Dunn could prevent and treat is-
chemic reperfusion injury by inhibiting NF-кB pathway.
【Key words】　 Peucedanum praeruptorum Dunn;myocardial reperfusion injury;interleukin-6;radioimmunization assay
　　缺血性心脏病在重建血供后将在一定程度上引
起心肌缺血再灌注性损伤(ischemic reperfusion in-
jury ,IRI)。IRI 的主要介质为中性粒细胞和氧自由
基 ,白细胞介素 6(interleukin-6 , IL-6)在中性粒细胞
介导的 IRI中起着十分重要的调节和修饰作用。中
药白花前胡(Peucedanum praeruptorum Dunn)有抗急
性心肌 IRI 作用 ,推测白花前胡可能通过调节 IL-6
表达而产生有益影响 。我们采用放射免疫法检测急
性缺血再灌注大鼠血清 IL-6水平 ,旨在评价中药白
花前胡的作用。鉴于 IRI与中性粒细胞等炎性细胞
浸润有着密切关系 , 还通过HE染色法进行了形
【收稿日期】 2002-02-28
■研究生 ,现在辽宁省本钢总医院药学部
态学比较。
1　材料与方法
1.1　药品与试剂
白花前胡水醇提取物(每克提取物折合2.5 g生
药 ,下同):由本室从中药白花前胡干燥根中提取分
离;硝苯地平:北京双桥制药厂 ,批号 20000613;125 I-
IL-6放免试剂盒:北京 301放免研究中心标记;其它
药品及试剂均为国产分析纯 。
1.2　仪器
γ计数仪(KONTRON GAMMA matric II),高速冰
冻离心机(ST-21/SORVALL ,USA),多导生理记录仪
(RM-6000 ,日本光电),动物呼吸机(DH-140 ,浙江医
科大学仪器实验厂),冰冻切片机(Leica CM-1800),
·255·中国医科大学学报　J Chin Med Univ　第 31 卷　第 4期　2002 年 8月
万能显微镜(OLYMPUS BX60)等。
1.3　实验动物
雄性Wistar大鼠28只 ,体重(274±16)g ,中国医
科大学实验动物中心提供 。急性心肌缺血再灌注模
型参照文献[ 1] 方法并略加改进:将大鼠禁食过夜
后 ,用 45%乌拉坦和 5%α-氯醛糖混合溶液麻醉
(0.14 ml/100 g , ip)、固定 , 分离颈总动脉(测血压
用)、总气管(联呼吸机用)和十二指肠(给药用)并分
别插管 ,在人工呼吸下行左开胸术 ,暴露心脏 ,钝性
分离心包膜以便更好地显示心脏表面的血管分布 。
于左冠状动脉前降支上 1/3处穿线 , 供诱发左室心
肌急性缺血和连续再灌注用。
1.4　实验分组
将大鼠按体重均衡性原则随机分成 6组:(1)
伪手术组(n =5):仅穿线而未结扎 , 以蒸馏水 10
ml/kg 经 12指肠灌注;(2)手术对照组(n =5):于
结扎前 30 min经十二指肠给予蒸馏水 10 ml/kg ,结
扎左冠状动脉 , 30 min 后松开结扎线 ,并连续灌注
120 min;(3)白花前胡水醇提取物低剂量组(n =
5):经十二指肠给予白花前胡水醇提取物 0.5 g/kg
30 min后结扎左冠状动脉前降支 ,其余同(2);(4)白
花前胡水醇提取物中剂量组(n =4):1.0 g/kg ,其
余同(3);(5)白花前胡水醇提取物高剂量组(n =
4):1.5 g/kg ,其余同(3);(6)硝苯地平组(n =5):
硝苯地平 5 mg/kg ,其余同(3)。
1.5　标本采集与制备
再灌注后 120 min ,立即经右心室穿刺取血(2
ml),静置分离血清并置-20℃下保存 ,以备 IL-6的
检测。然后迅速处死大鼠并取心肌 ,用冰冷生理盐
水冲洗残血 ,经液氮速冻后置-70℃下保存 ,供制备
心肌冰冻切片用 。
1.6　心肌冰冻切片的制备及染色
将冰冻心肌组织用 OCT 包埋 ,沿左心室轴线利
用冰冻切片机每隔 1mm 连续切取数张7μm 厚的切
片 ,行常规 HE染色。
1.7　血清 IL-6的测定
室温下将血清复融 ,混匀后离心(4℃,3 000 r/
min ,5 min)。按 IL-6 试剂盒说明的程序加液及处
理 ,并在γ计数仪上测定各标准品及样本的每分钟
计数(cpm),并按自动γ计数仪预先编制的程序直
接测出样品浓度 。
1.8　统计学处理
所有数据以均值 ±标准差表示 ,利用 Statistical
analysis system(SAS)软件包进行统计学分析 , 多组
间比较用单因素方差分析 ,两组间比较采用 Student
t 检验 。
2　结果
2.1　白花前胡水醇提取物对缺血再灌注大鼠血清
IL-6水平的影响
放射免疫分析表明 ,预先给予白花前胡水醇提
取物各组 IL-6 水平均有不同程度降低 ,低 、中 、高 3
个剂量组 IL-6水平由对照组的(151.53±17.70)pg/
ml降至(113.71±12.31)pg/ml 、(112.30±4.84)pg/
ml 、(107.90±8.11)pg/ml(P <0.01)。硝苯地平组
为(123.55±18.62)pg/ml;手术对照组的 IL-6浓度
(151.53±17.70)pg/ml明显高于伪手术组(122.29
±5.61)pg/ml(P <0.05)。
2.2　白花前胡水醇提取物对急性缺血再灌注大鼠
心肌炎性细胞浸润的影响
白花前胡水醇提取物各组心肌的炎性细胞浸润
均较小 ,伪手术组基本无炎性细胞浸润 ,而手术对照
组出现大量的炎性细胞浸润 。
3　讨论
急性心肌缺血再灌注能引起大鼠血清 IL-6的
高表达及大量中性粒细胞等炎性细胞浸润 ,且利用
白细胞缺失血液对缺血心肌再灌注[ 2] 及利用 IL-6
单克隆抗体治疗[ 3]可缓解 IRI 的发生 ,提示 IL-6和
中性粒细胞参与了 IRI 。近年研究表明 ,氧自由基能
激活核转录因子-кB (nuclear factor kappa B , NF-
кB),NF-кB以氧自由基为传递信使诱导 IL-6基因的
表达[ 4] , IL-6是心肌缺血区细胞间粘附分子 1的重
要诱导因子[ 5] ,细胞间粘附分子 1能促进中性粒细
胞与心肌细胞的粘附。
本实验证明 ,白花前胡水醇提取物可明显抑制
缺血再灌注大鼠血清中 IL-6 的表达及减少中性粒
细胞的浸润 ,且作用强度与硝苯地平相近 。我们以
往的研究证明 ,白花前胡水醇提取物具有钙内流阻
滞 、钾通道开放等作用。已证明[ 6 , 7] Ca2+内流阻滞
及ATP 敏感钾通道开放剂均能缓解缺血再灌注所
引起的胞浆 Ca2+超载 ,维持细胞内外钙平衡及线粒
体的稳定性 ,从而防止活性氧自由基大量生成。故
推测白花前胡水醇提取物可能通过钙拮抗或 K+通
道开放作用抑制氧自由基形成 ,进一步抑制 NF-кB
激活途径而达到降低缺血再灌注大鼠血清中 IL-6
水平及减轻中性粒细胞浸润程度 。有报道证明阻滞
Ca
2+内流可抑制缺血再灌注过程中 IL-6的表达[ 8] ,
(下转第 259页)
·256· 中　国　医　科　大　学　学　报　　　　　　　　　　　　　　第 31卷
系所占比例较大时 ,患者常有原发闭经 ,身体矮小 ,
第二性征不发育 ,性腺发育不全等临床特征。病例
7核型为 45 ,X/46 , Xr(X)女性 ,而 PCR检测仅出现
一条(ZFX)346 bp 的特异性扩增片段 ,提示该患者
的环状染色体是 X染色体的两臂各发生一处断裂 ,
有着丝粒的断片两端彼此连接而成 。
病例8 ～ 9均为46 ,XX女性 ,性别基因诊断也均
为女性 。提示此类患者为性染色体(X)与常染色体
易位所致性腺发育不全 、原发闭经 、第二性征缺如
(乳房不发育)。
人类女性的特征和卵巢正常发育 ,必须具备两
条完整的 X染色体 ,若其中一条缺失或结构异常都
会出现各种不同的异常表型。
病例 10 ～ 14例均为 46 ,XY男性 ,性别基因诊断
结果也均为男性 。提示 Y染色体可能是一种多态。
我们认为联合应用 SRY基因 、ZFX/ZFY基因以
及 DYZ1DNA 顺序进行性发育异常的基因分析 ,既
可避免由 Y染色体正常变异而出现的假阳性或假
阴性结果;也可以避免因扩增失败所致的错误诊断
(3种引物的特异片段互为内对照)。该方法不但可
以准确地检测出患者的真正性别 ,而且也可以从基
因水平揭示性发育异常的主要原因 ,为深入研究生
殖器官畸形 、性发育异常的基因结构分析和临床诊
断治疗提供新的实验依据 ,使临床对性别发育的研
究进入更新的阶段 。本研究对人类性别决定及性染
色体异常的认识 ,对性腺发育异常性疾病的遗传机
理的阐明和基因诊断有重要意义 。
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binding motif[ J] .Nature , 1990, 346:240.
(上接第 256页)
支持这一推论。本研究仅对在急性缺血再灌注损伤
中起重要作用的 IL-6血清水平进行了初步研究 ,鉴
于 IRI受多种细胞因子及基因调控和影响 ,因此尚
有一定局限性 ,今后需做进一步的探讨 。
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·259·第 4期　　　　　　　　林长坤等.应用 SRY基因 、ZFX/ZFY基因和 DYZ1顺序检测性发育异常