全 文 ：　　收稿日期:2005 -08 - 20
　　作者简介:毕和平(1955 -), 男 ,山西新绛人 , 教授 ,主要从事天然药物化学研究.
第 18卷第 4期
2005年 12月
海南师范学院学报(自然科学版)
Journa l of HainanNo rmal Unive rsity(N atural Science) Vo.l 18 N o. 4Dec. 2005
海南木莲总黄酮含量的测定
毕和平 ,韩长日 ,张连华 ,钟琼芯
(海南师范学院 化学系 ,海南 海口 571158)
摘　要:利用分光光度法测定了海南木莲中的总黄酮含量 ,结果表明:海南木莲叶中总黄
酮的质量分数为 5. 78 %, RSD=2. 62 %(n =6);枝中为 3. 05 %, RSD =2. 16 %(n =6). 回归
方程 A =7. 901 4 c +0. 002 8, 相关系数 r =0. 999 9.本法操作简便 ,测定结果稳定 、准确 ,
为开发利用海南木莲药用提供了科学依据.
关键词:海南木莲;总黄酮;分光光度法;含量测定
中图分类号:R 927. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1671 -8747(2005)04 - 0347 - 04
黄酮类化合物是一类重要的天然有机化合物 ,广泛存在于植物中 ,具有抗炎 、抗菌 、抗病毒 、抗氧化 、抗肝
脏毒等多种生理活性 ,一直受到国内外的广泛重视 ,研究进展很快 [ 1-4] .海南木莲 (Manglietia hainanensisDan-
dy)为木兰科木莲属植物 ,海南当地称为龙楠树 、绿楠 、绿兰等 ,主要分布于海南定安 、保亭 、乐东 、琼中 、陵
水 、三亚 、东方等市县 ,生于海拔 300 ～ 1 200 m的溪边 、密林中 ,是海南特产植物 [ 5] ,属国家三级植物保护种;
文献 [ 6]曾报道过对海南木莲的 TLC鉴定研究.木莲属植物民间药用较多 ,为进一步拓展本属药用植物种
类 ,我们对海南木莲枝和叶中的总黄酮含量进行了测定.
1　实验部分
1. 1　仪器 、试剂与材料
UV /V IS - 916型紫外 -可见分光光度仪 (澳大利亚 GBC公司);721型分光光度计 (上海精密科学仪器
有限公司);电子天平 (上海精科天平厂 );RE - 52A型旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂);索氏提取器;亚
硝酸钠 、氢氧化钠 、硝酸铝 、甲醇 、石油醚等试剂均为国产分析纯;对照品芦丁 (质量分数为 99. 9%,来自中国
药品生物制品检定所 ).
海南木莲 ,于 2003年 10月采集于海南省尖峰岭 ,经海南师范学院生物系植物分类学高级实验师钟琼芯
鉴定为Mang lietia ha inanen sisDandy,枝和叶自然晾干 ,粉碎过 20目筛 ,待用.
1. 2　海南木莲中总黄酮的定性鉴别
海南木莲中黄酮类化合物的定性鉴别 ,采用盐酸 -镁粉法和浓氨水溶液法 [ 7] ,试验结果证明 ,海南木莲
枝和叶中均含有黄酮类化合物.
1. 3　标准曲线的绘制
黄酮类化合物主要包括黄酮苷和黄酮苷元两大部分.在黄酮类化合物溶液中加入铝离子试剂后 ,黄酮类
化合物中的酚羟基与 A l3 +生成络合物 ,控制适宜的 pH值 ,所生成的络合物在可见区能获得特征吸收峰 ,其
浓度与吸光度符合比耳定律 ,其颜色的深浅与黄酮类化合物的含量成一定的比例关系 ,可以定量测定 [ 8] .
标准曲线的绘制参照文献 [ 9, 10]的方法并作改进. 精确称取芦丁对照品 20 mg, 置 100mL容量瓶中 ,
加入甲醇 70mL,置水浴中微热使其溶解 ,放冷 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,得质量浓度为 0. 2 g /L的标准溶液. 精
确吸取芦丁标准液 0. 0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0mL,分置于 10mL容量瓶中 ,各加甲醇至 5mL,再分别加入质
量分数为 5%的 NaNO2溶液 0. 5 mL,摇匀 ,室温放置 6 m in,再加质量分数为 10 %的 A l(NO 3)3溶液 0. 5
mL,摇匀 ,室温放置 6m in,再加质量分数为 4%的 N aOH溶液 4. 0 mL,摇匀 ,室温放置 10 ～ 15m in ,用 721型
分光光度计 ,在 510 nm波长下测定吸光度 ,同时以试剂空白作参比. 以吸光度 A为纵坐标 ,浓度 c为横坐标 ,
绘制标准曲线.
1. 4　样品中黄酮类化合物的提取与测定
分别准确称取已粉碎的海南木莲枝和叶各 1份 ,每份 1. 0 g,置索氏提取器中 ,加入石油醚 ,加热回流至
提取液无色 ,放冷 ,弃去石油醚液.将药渣中石油醚挥干 ,继续用甲醇提至无色 ,提取液移置 100 mL容量瓶
中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀.为使测定稳定 ,从 100mL叶的提取液中精确吸取 25. 0 mL,置于 100 mL容量瓶中 ,
用甲醇定容至刻度 ,备用.
分别精确吸取海南木莲枝和叶提取液 1. 0mL,分置于 10 mL容量瓶中 ,各加甲醇至 5 mL, 余下部分按
1. 3节标准曲线绘制项所述的方法操作得样品供试液 ,在 510 nm波长下测定吸光度.同时 ,精确吸取海南木
莲相应部位的提取液 1. 0 mL,置于 10mL容量瓶中 ,各加甲醇至 5mL,再加蒸馏水 1. 0mL和质量分数为 4 %
的 NaOH 4. 0mL溶液作为参比 [ 11] .按下式计算海南木莲各部位中总黄酮的质量分数(w /%).
w=100 c×V ×f
m ×100 ×100%,
式中:c为由回归方程计算出的海南木莲中的总黄酮浓度 ,这里为质量浓度 /(g L - 1);V为样品供试液体
积 (mL);f为稀释倍数;m 为海南木莲样品质量 (g).
2　结果与讨论
　　　　图 1　芦丁标准液显色后的扫描曲线
　　图 2　标准曲线
2. 1　最佳波长的选择
精确吸取芦丁标准液 2. 0 mL,置于 10mL容量瓶中 ,
加入甲醇至 5 mL,余下部分按本文 1. 3节所述的方法操
作 .在紫外 -可见分光光度计上进行波长扫描 ,同时以
试剂空白作参比 ,测定数据见表 1,扫描曲线见图 1.确定
最大吸收波长 510 nm为测量波长.
　　　　　　　　表 1　最大波长选择试验
λ/nm A λ/nm A
460 0. 335 520 0. 387
470 0. 340 530 0. 362
480 0. 355 540 0. 330
490 0. 375 550 0. 293
500 0. 390 560 0. 250
510 0. 397 570 0. 203
2. 2　标准曲线与回归方程
按 1. 3节标准曲线绘制项所述的方法测定.标准曲线
测定数据见表 2,标准曲线见图 2.试验证明 ,芦丁标准溶液
的质量浓度在 0. 00 ～ 0. 10 g /L范围内线性关系良好.得回
归方程:A =7. 901 4c +0. 002 8,相关系数 r =0. 999 9.
　　　　　表 2　芦丁标准溶液吸光度 -浓度试验
/(g L -1) 0. 00 0. 02 0. 04 0. 06 0. 08 0. 10
A 0. 000 0. 162 0. 318 0. 485 0. 630 0. 792
348 海南师范学院学报 (自然科学版 )　　　　　　　　　　　　2005年
2. 3　显色剂浓度的选择
按 1. 3节标准曲线绘制项所述的方法 ,进行显色剂 NaNO2 -A l(NO3)3 -N aOH体系的浓度变化对吸光
度影响的考察.在其他条件不变的情况下 ,每次只改变显色剂体系中的一种物质的质量分数 (w /%),测定吸
光度(A),试验结果见图 3、图 4和图 5. 结果证明:亚硝酸钠质量分数在 4. 0 % ～ 10. 0%,硝酸铝质量分数在
7. 5% ～ 12. 5%,氢氧化钠质量分数在 3. 0% ～ 7. 5%之间 ,吸光度没有变化.故本文选择 w =5 %的亚硝酸
钠溶液 、w =10%的硝酸铝溶液和 w =4%的氢氧化钠溶液为加入的显色剂浓度.
2. 4　稳定性试验
精确吸取芦丁标准溶液 1. 0mL,置于 10mL容量瓶中 ,加入甲醇至 5mL;余下部分按 1. 3节标准曲线绘制
项所述方法进行操作 ,测定结果见图 6.试验证明 ,在室温≤28 ℃的环境中 ,显色时间在 10 ～ 80m in范围内 ,吸
光度没有变化.因此 ,在本试验选择的测定时间内 ,黄酮类化合物与铝离子生成的络合物显色是稳定的.
2. 5　样品空白的选择
在测量海南木莲总黄酮含量时发现 ,在不加入硝酸铝和亚硝酸钠的情况下 ,单独加入氢氧化钠溶液后比
没有加入时的测量值略高.为了抵消样品供试液中某些化学成分可能与碱作用生成有色物质而引起的误
差 [ 12-15] ,本法选择在加入样品提取液 1. 0mL后 ,再加甲醇 4. 0mL,蒸馏水 1. 0mL和质量分数为 4 %的 N aOH
4. 0mL溶液作为样品空白.
2. 6　海南木莲总黄酮含量的测定
在 510 nm波长下平行测定 6次 ,测定和计算结果见表 3. 其中海南木莲叶中的总黄酮平均质量分数为
5. 78%,相对标准偏差 RSD=2. 62%(n =6);枝中的平均质量分数为 3. 05%, RSD =2. 16%(n =6).
349第 4期　　　　　　　　　　　毕和平等:海南木莲总黄酮含量的测定
表 3　海南木莲不同部位中总黄酮的质量分数
测定次
数(n)
叶
A(吸光度) w (黄酮) /%
枝
A(吸光度) w (黄酮) /%
1 0. 117 5. 780 0.250 3.130
2 0. 115 5. 680 0.245 3.070
3 0. 112 5. 530 0.239 2.990
4 0. 119 5. 880 0.236 2.950
5 0. 120 5. 930 0.245 3.070
6 0. 119 5. 880 0.246 3.080
表 4　加标回收率试验
试样中的量 /μg 加标量 /μg 回收量 /μg 回收率 /%
61. 0 100. 0 157. 2 96. 1
61. 0 100. 0 157. 9 95. 0
61. 0 100. 0 157. 8 96. 8
61. 0 100. 0 162. 4 101. 4
61. 0 100. 0 160. 2 99. 2
2. 7　精密度试验
精确吸取海南木莲叶和枝的
提取液 1. 0mL,余下部分按本文 1.
4项所述的方法操作 ,测其吸光度 ,
试验结果见表 3.其中叶的相对标
准偏差 RSD为 2. 62% (n =6),
枝的 RSD为 2. 16%(n =6).
2. 8　加标回收率试验
精确吸取已知总黄酮含量的
海南木莲枝提取液 0. 20 mL ,共
5份 ,分置于 25 mL容量瓶中 ,各
分别加入 0. 2 g /L的芦丁标准
溶液 0. 5 mL,余下部分按 1. 4节
项所述的方法测定总黄酮 ,计算
加标回收率 ,测量和计算结果见
表 4. 得加标平均回收率为 98.
1%, RSD =2. 93( n =5).
在本文选定的条件下 ,用分光光度法测定海南木莲各部位中的总黄酮含量 ,操作简便 ,干扰少 ,测定结果
稳定 、准确 ,为开发利用海南木莲的药用提供了科学依据.
参考文献:
[ 1] 　汤　容 , 樊瑞霞. 大豆异黄酮抗癌作用的研究 [ J] .中国药学杂志 , 1999, 34(7):435.
[ 2] 　吴立军. 天然药物化学 [M ] .北京:人民卫生出版社 , 2004.
[ 3] 　 JANKUN J, SELMAN S H, SW IEREZ R, e t a.l Why drinking g reen tea cou ld preven t cancer [ J] . N a ture, 1997, 387(6) :
561.
[ 4] 　侯艳宁 , 朱秀媛 ,程桂芳 . 黄芩苷的抗炎机理 [ J] . 药学学报 , 2000, 35(3):161.
[ 5] 　中国科学院华南植物研究所. 海南植物志:第 1卷 [M ] . 北京:科学出版社 , 1964.
[ 6] 　毕和平 , 韩长日 ,严凤华 ,等. 海南木莲生药的 TLC鉴定 [ J] .海南师范学院学报:自然科学版 , 2004, 17(3):258-259.
[ 7] 　刘成梅 , 游　海. 天然产物有效成分的分离与应用 [M ] .北京:化学工业出版社 , 2003.
[ 8] 　魏永生 , 王永宁 ,石玉平 , 等. 分光光度法测定总黄酮含量的实验条件研究 [ J] . 青海大学学报:自然科学版 , 2003, 21
(3):61-63.
[ 9] 　张　桂 , 畅天狮 ,刘俊果 ,等. 从芹菜中提取黄酮类物质的研究 [ J] . 食品科学 , 2002, 23(8):121-125.
[ 10] 　张乐华 ,董陆陆 , 于敬海 ,等. 珍珠梅不同部位总黄酮含量的测定 [ J] . 光谱实验室 , 2004, 21(3):485-486.
[ 11] 　于　村 ,俞　莎 , 沈向红. 保健食品中总黄酮测定方法的研究 [ J] .中国卫生检验杂志 , 2002, 12(4):401-402.
[ 12] 　林曼斌 , 张曼虹. 紫马缨丹花色素的提取及稳定性研究 [ J] . 现代食品科技 , 2005, 21(3):70-73.
[ 13] 　蒋新龙 ,蒋益花. 蟹爪兰红色素的提取及性质研究 [ J] . 中国调味品 , 2005, 317(7):38-41.
[ 14] 　丁利君 , 赵丽琴. 红甘蔗皮红色素的提取及稳定性研究 [ J] . 食品与科技 , 21(2):29-31.
[ 15] 　郭艳华.荸荠皮色素的提取和稳定性研究 [ J] .食品科学 , 2004, 25(12):115-121.
Determ ination of total flavone content inmanglietia hainanensis dandy
B IHe-p ing, HAN Chang-ri, ZHANG L ian-hua, ZHONG Q iong-x in(Department of Chem istry, Ha inanNormalUn iversity , Haikou 571158, China)
Abstract:Spec trophotom etry was used to determ ine the flavone conten t in mang lie tia hainanensis dandy. The results werew=5.
78 %(RSD =2. 62%) in leaf andw=3. 05% ( RSD =2. 16% ) in stem of mang lie tia hainanensis dandy. The reg ression equation
w as A=7. 901 4c+0. 002 8, r=0. 999 9. The me thod has such advantages a s h igh sensitiv ity and stability.
Key words:mang lie tia hainanensis dandy;to ta l flavones;spec tropho tom etry;quantitative analysis
350 海南师范学院学报 (自然科学版 )　　　　　　　　　　　　2005年