全 文 ：书第 30 卷 第 2 期
2014 年 4 月
哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报( 自然科学版)
Journal of Harbin University of Commerce ( Natural Sciences Edition)
Vol． 30 No． 2
Apr． 2014
收稿日期:2014 － 01 － 09．
基金项目:黑龙江省研究生创新科研项目(YJSCX2012 － 146HLJ)．
作者简介:吴 迪(1988 －)，男，硕士，研究方向:肿瘤药理学．
文殊兰弱碱性生物碱的抗肿瘤活性研究
吴 迪1，代岐昌1，2，季宇彬1，2，3
(1．哈尔滨商业大学 生命科学和环境科学研究中心 哈尔滨 150076;2．国家教育部天然抗癌药物工程技术研究中心，
哈尔滨 150076;3．哈尔滨商业大学 药物研究所博士后科研流动站，哈尔滨 150076)
摘 要:研究文殊兰中弱碱性生物碱对不同肿瘤细胞的抑制作用，并筛选出敏感细胞株，观察凋亡形
态; MCF － 7 细胞株、SMMC7721 细胞株、SGC7901 细胞株、HepG － 2 细胞株，MTT 溶液，DMSO，Hoechst
33258 等; 利用 MTT法检测文殊兰弱碱性生物碱对上述肿瘤细胞的抑制作用以及 Hoechst 33258 染色
法观察细胞凋亡的形态学变化; 文殊兰弱碱性生物碱对上述细胞株均有明显的抑制作用，对 HepG － 2
细胞的抑制作用更为明显，给药 72 h后测定 IC50 = 9． 374 323 μg /mL; Hoechst 33258 染色法观察细胞
出现凋亡小体，有凋亡现象发生．文殊兰弱碱性生物碱 MCF － 7 细胞株、SMMC7721 细胞株、SGC7901
细胞株、HepG － 2 细胞株具有不同程度的抑制作用，且呈现一定的剂量依赖性，对 HepG － 2 细胞的抑
制作用最强，表现出良好的抗肿瘤活性．
关键词:文殊兰;抗肿瘤; 生物碱; MTT法; Hoechst 33258 染色法
中图分类号:Ｒ285 文献标识码:A 文章编号:1672 － 0946(2014)02 － 0150 － 04
Ｒesearch on anti-tumor activity of Alkalescent alkaloids from crinum
WU Di1，DAI Qi-chang1，2，JI Yu-bin1，2，3
(1． Center of Ｒesearch on Life Science and Environmental Science，Harbin University of Commerce，Harbin 150076，China;
2． Engineering Ｒesearch Center of Natural Anticancer Drugs，Ministry of Education，Harbin University of Commerce，Harbin
150076，China;3． Postdoctoral Programme，Institute of Material Medica of Harbin University of Commerce，Harbin 150076，China)
Abstract:Ｒesearch the anti-tumor activity of Alkalescent alkaloids from Crinum． And screen
the sensitive cells then observe morphological changes of cell apoptosis;MCF － 7 cell，
SMMC7721 cell，SGC7901 cell，HepG －2 cell，MTT solution，DMSO，Hoechst 33258;ex-
periments could illustrate the use of the drug inhibition of these tumor cells by MTT assay． It
could observe morphological changes of cell apoptosis by Hoechst 33258 staining;Alkales-
cent alkaloids from crinum could inhibit these cells obviously． HepG － 2 cell was inhibited
more sensitive to alkaloids． After dosing 72 h it showed that IC50 = 9． 374323 μg /mL;it can
be seen apoptotic bodies and apoptotic phenomenon by Hoechst 33258 staining;the results
indicated that the Alkalescent alkaloids from crinum could inhibit the MCF －7，SMMC7721，
SGC7901，HepG － 2 cells significantly． The suppression was in a dose dependent manne．
The inhibition of HepG －2 was the strongest． It could show the excellent anti-tumor activity．
Key words:crinum;anti-tumor;alkaloids;MTT;Hoechst 33258
文殊兰(Crinum asiaticum var． sinicum (Ｒoxb． ex Herb．)Baker)，最早记载于《本草纲目拾遗》，
为石蒜科(Amaryllidaceae)文殊兰属(Crinum)多年
生草本植物，主要分布在我国东南沿海地区，性味
苦、辛、凉，有小毒;功在行血散瘀，消肿止痛，清火
解毒［1］．民间主要用于治疗咽喉肿痛，跌打损伤，
痈疽疖疮，毒蛇咬伤等．
现代药理研究已初步确定，文殊兰具有消炎、
镇痛、保护心血管、诱导肿瘤细胞的凋亡以及抗拟
胆碱样作用等作用［2］． 文殊兰提取物活性成分中
石蒜碱具有抑制肿瘤细胞的活性;体外实验表明，
石蒜碱对人乳腺癌细胞、人结肠癌细胞、人离体鼻
咽癌细胞等有明显的抑制作用，其作用机制可能是
抑制 DNA和蛋白质的合成［3］．石蒜碱可以将 HL －
60 细胞阻断在 G2 /M 期，其作用机制是下调 Bcl －
2 的表达，提高 Bax /Bcl － 2 的比率;增强 caspase －
8、caspase － 9 和 caspase － 3 的活性，从而使细胞凋
亡［4］．石蒜碱诱导 KM3 细胞凋亡的机制包括将细
胞阻滞在 G0 /G1 期;提高 Bax的表达，降低 Bc － l 2
的表达;激活 caspase － 8、caspase － 9 和 caspase － 3
以及促使线粒体释放细胞色素 C［5］．石蒜碱抑制小
鼠淋巴瘤细胞 L5178 以及具有耐药性的小鼠淋巴
瘤细胞增殖的机制与 mdr － 1 基因的表达产物 p －
糖蛋白无关，而是由于和 ＲNA 形成了一种复合
物［6］．本实验通过 MTT 法对文殊兰弱碱性生物碱
的抑瘤率进行了研究测定，通过对比，筛选出了敏
感细胞株并观察凋亡形态，为今后的深入实验奠定
了基础．
1 主要材料和仪器
肿瘤细胞株:MCF －7 细胞株、SMMC7721 细胞
株、SGC7901 细胞株、HepG － 2 细胞株(哈尔滨商
业大学药物研究所);
药品:羟基喜树碱注射液(哈尔滨盛泰药业)、
胎牛血清(FCS)(杭州四季青生物工程公司)、Ho-
echst33258(碧云天试剂公司)、溴化四氮唑蓝
(MTT)(Sigma公司);
仪器:Olympus IX70 倒置显微镜、CKX － 41 －
32 荧光倒置显微镜、C － 4040Z00M 型数码相机
(Olympus公司)、WELLSCAN MK3 型酶标仪(Bio
－ Ｒad 公司)、SANYO MCO175 型 CO2 培养箱(日
本三洋公司)．
2 实验内容
2． 1 细胞培养
将实验所用肿瘤细胞用含 10%小牛血清 ＲP-
MI － 1640 培养液培养，并置于含 5% CO2 的 37 ℃
培养箱中进行传代;用 0． 25%胰酶消化，每周传代
2 次．
2． 2 MTT法筛选敏感的肿瘤细胞
取对数生长期的待测细胞，调整细胞浓度至 5
× 104 个 /mL，接种于 96 孔培养板，每孔加入 100
μL细胞悬液，于 CO2 培养箱中培养 24 h后加入药
物，使终质量浓度分别为 1、2、4、8、16、32、64、128
μg /mL，阴性对照组仅加入不含小牛血清的 ＲP-
MI1640 全培养基，阳性对照组加入羟基喜树碱(20
μg /mL)．分别给药培养 48 h(72 h)后，每孔加入
MTT溶液，37 ℃孵育 4 h，弃上清液，加 DMSO溶解
后，于 490 nm测定吸光度．
2． 3 荧光显微镜观察细胞凋亡形态
将细胞调至浓度 1 × 104 个 /mL，转移至六孔
板培养，每孔加入 1 mL 细胞悬液． 培养 24 h 后加
入药物，使终浓度分别为 5、10、20 μg /mL，阴性对
照组仅加入含 ＲPMI1640 全培养基，阳性对照组加
入羟基喜树碱 20 μg /mL．培养 48 h 后，吸出废液，
每孔加入固定液，固定 30 min，PBS洗 2 次，每次洗
3 min，加入 Hoechst 33258 染液，37 ℃避光染色 30
min，使用荧光显微镜观察并记录图像．
3 实验结果及讨论
实验通过 MTT法对文殊兰弱碱性生物碱的抑
瘤率进行了研究测定，结果如图 1，可以看出文殊
兰弱碱性生物碱对肿瘤细胞生长有明显的抑制作
用，而且呈现出剂量关系．通过计算 IC50，结果如表
1，发现文殊兰弱碱性生物碱对 HepG － 2 细胞的抑
制作用最为明显，因此，选择 HepG － 2 细胞作为敏
感细胞株进行肿瘤细胞凋亡实验． 采用 Ho-
echst33258 法观察不同质量浓度文殊兰弱碱性生
物碱对 HepG － 2 细胞凋亡形态变化的影响，在荧
光显微镜下记录的图像结果如图 2．可观察到细胞
凋亡的凋亡小体以及凋亡的出现，而且细胞数也随
着给药量增加而减少．
表 1 MTT法检测文殊兰弱碱性生物碱
对四种细胞生长的抑制作用
细胞种类
给药 48 h后计算
IC50 /(μg·mL －1)
给药 72 h后计算
IC50 /(μg·mL －1)
MCF － 7
HepG － 2
7721
7901
19． 03
41． 77
30． 53
113． 12
28． 10
9． 37
23． 20
20． 71
·151·第 2 期 吴 迪，等:文殊兰弱碱性生物碱的抗肿瘤活性研究
图 1 文殊兰弱碱性生物碱对不同肿瘤细胞抑制曲线
(A．对照组;B．阳性对照羟基喜树碱 5 μg /mL;C．文殊兰弱碱性生物碱 5 μg /mL;D．文殊兰弱碱性生物碱 10 μg /mL;
E．文殊兰弱碱性生物碱 20 μg /mL)
图 2 不同质量浓度文殊兰弱碱性生物碱对 HepG －2 细胞凋亡形态学变化的影响
·251· 哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) 第 30 卷
4 结 语
通过 MTT实验发现文殊兰中弱碱性生物碱能
够抑制 SGC7901、SMMC7721、HepG －2、MCF －7 四
种肿瘤细胞的增殖，并且通过计算 IC50得出 HepG
－2 细胞对文殊兰弱碱性生物碱最敏感(IC50 = 9．
37 μg /mL)．通过荧光显微镜观察给药 HepG －2 细
胞发现，文殊兰弱碱性生物碱能够诱导肿瘤细胞特
征性形态逐渐明显，并且有凋亡小体的出现． 说明
文殊兰弱碱性生物碱具有抗肿瘤活性，为本课题深
入研究其凋亡机制提供了数据支持．
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