全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2014，29(1)∶051 ～ 053
基金项目::四川省科研院所科技成果转化资金资助项目(No． 11010120)
作者简介:陈晓亮(1986—) ，男，正攻读药剂学专业的硕士学位。Email:1049929916@ qq． com
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:chaoqun_xu@ sina． com
芷归片中决明子和白芷的纯化工艺研究
陈晓亮1，2，阮 佳2，徐超群2* ，袁志翔2，王立珍1，2，边俊杰1，2
(1．成都中医药大学药学院，四川 成都 610075;2．四川省中医药科学院，四川 成都 610041)
摘要:目的 研究芷归片中决明子与白芷的纯化工艺。方法 以总蒽醌和欧前胡素的转移率以及浸膏收率为考察指标，比
较醇提水沉法、壳聚糖沉淀法、大孔树脂吸附法、酸碱法等纯化方法，优选纯化工艺参数。结果 通过几种纯化方法的比较，
采用酸碱法的纯化工艺最佳，其优选参数为:用 20%石灰乳调 pH6，静置 2 h，过滤，减压回收溶剂后干燥。结论 运用酸碱法
纯化后蒽醌类成分和欧前胡素的损失均较小，浸膏收率能满足制剂要求，工艺简单可行。
关键词:蒽醌类成分;欧前胡素;酸碱法;纯化
中图分类号:Ｒ914 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2014)01 － 0051 － 03
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2014． 01． 018
Study on the purification procedure of Cassiae semen and Angelica dahuricae in Zhigui tablets
CHEN Xiao － liang1，2，ＲUAN Jia2，XU Chao － qun2* ，YUAN Zhi － xiang2，WANG Li － zhen1，2，BIAN Jun － jie1，2
(1． College of Pharmacy，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu，Sichuan，610075 P． Ｒ． China;2． Sichuan
Academy of Chinese Medicine Sciences，Chengdu，Sichuan，610041 P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To study the purification process of Cassiae semen and Angelica dahuricae in Zhigui tablets．METHODS
The extract rate of anthraquinone and imperatorin the yield rate of extract content were adopted． Compared with the ethanol，water
precipitation，chitosan precipitation and adsorption method by macroporous resin． ＲESULT Compared with several purification meth-
ods，the acid － alkali method was selected for purification． The final purification process was as follows:adjust to pH6 with 20% lime
milk，standing for 2 h，then filtered and dried under reduced pressure． CONCLUSION The acid － alkali method can meet formulation
requirements for purification of anthraquinones component and imperatorin． The optimization process is simple and feasible，which
provides technical basis for the study of the Zhigui tablets．
Key words:Anthraquinones;Imperatorin;Acid － alkali method;Purification
CLC number:Ｒ914 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2014)01 － 0051 － 03
决明子 Cassiae semen为豆科植物决明或小决明
的成熟种子，具有清热明目、润肠通便、降压保肝、增
强机体免疫、抗衰老等活性［1］。白芷 Angelica dahu-
ricae为伞形科植物白芷或杭白芷的干燥根，具有除
风散湿、通窍止痛、消肿排脓等功效。芷归片中的药
材均属国家公布的药食同源或可用于保健食品的中
药材，不良反应小。配方的独特性和制剂的先进性，
确保了其安全性，便秘患者可长期服用。为了减少
服用量，增加患者的顺应性，有必要对芷归片中的提
取物进行纯化。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
1100 高效液相色谱仪(美国安捷伦) ;UV759S
紫外可见分光光度仪(日本岛津)。决明子(批号:
111001)、白芷(批号:120601)药材(四川利民中药
饮片有限责任公司) ;1，8 － 二羟基蒽醌(批号:
0829 － 9702)、欧前胡素(批号:110826 － 201214)对
照品(中国药品生物制品检定所) ;甲醇、乙腈为色
谱纯;其余试剂为分析纯。
1． 2 蒽醌类的含量测定
1． 2． 1 溶液的制备 分别称取决明子和白芷适量，
置 1 L 圆底烧瓶中，用 10 倍量 80%乙醇回流提取
(1 h × 2) ，过滤，合并滤液，润洗残渣，放冷至室温，
用 80%乙醇定容至一定体积，得提取液。精密量取
提取液 10 mL，蒸干，加 1 mol·L －1盐酸 40 mL，置水
浴中加热水解 1 h，立即冷却，用三氯甲烷振摇萃取
(30 mL ×4) ，合并有机相，回收溶剂至干，残渣用无
水乙醇 －乙酸乙酯(2∶1)溶解，转移至 25 mL 量瓶
中，定容，过滤，精密量取续滤液 1 mL，于水浴中挥
去溶剂，残渣中加入 0． 5%乙酸镁无水乙醇溶液溶
解并定容，得供试品溶液。取 1，8 －二羟基蒽醌对
照品适量，精密称定，加甲醇制成 132 μg·mL －1
1，8 －二羟基蒽醌对照品溶液。
1． 2． 2 波长的选择 精密量取 l，8 －二羟基蒽醌对
照品溶液适量，于水浴中蒸干，残渣中加 0． 5%乙酸
镁无水乙醇溶液溶解并定容，在 400 ～ 800 nm 进行
紫外扫描［2］。在 510 nm处有最大吸收，故选择 510
nm作为测定波长。
1． 2． 3 标准曲线的绘制 精密吸取 1，8 －二羟基
蒽醌对照品溶液适量，加甲醇制成 2． 64、5． 28、
10. 56、13． 20、19． 80、26． 40 μg·mL －1系列浓度溶液，
于水浴中蒸干，残渣中加 0． 5%乙酸镁无水乙醇溶
液溶解并定容。以 0． 5%乙酸镁无水乙醇溶液为空
白，于 510 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓
度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为:Y =
0. 0439X + 0． 0241(r2 = 0． 9993) ，1，8 －二羟基蒽醌
2. 64 ～ 26． 40 μg·mL －1与吸光度的线性关系良好。
1． 2． 4 精密度及稳定性试验 取 l，8 －二羟基蒽醌
对照品溶液，显色后重复测定吸光度 6 次，带入回归
方程计算得含量的 ＲSD = 0． 26%(n = 6) ，表明方法
的精密度良好。取“1． 2． 1”项下供试品溶液，室温
下放置，显色后分别于 0、20、40、60、90 min 测定吸
光度，计算含量的 ＲSD = 1． 73%，表明供试品溶液在
显色完成后 90 min内稳定。
1． 2． 5 重复性试验 取同一样品 6 份，按“1． 2． 1”
项下方法制备供试品溶液 1，以 0． 5%乙酸镁无水乙
醇溶液为空白，于 510 nm 处测定吸光度，计算平均
含量为 0． 34%，ＲSD = 1． 41%(n = 6) ，表明供试品
的重复性良好。
1． 2． 6 加样回收率试验 取“1． 2． 1”项下制备的
提取液 5 mL，加入 l，8 － 二羟基蒽醌对照品溶液
5 mL，再按“1． 2． 1”项方法制备供试品溶液，于 510
nm 处测定吸光度，计算平均回收率为 99． 96%，
ＲSD = 2． 62%(n = 6)。
1． 2． 7 样品的测定［3］ 取样品适量，按“1． 2． 1”项
下方法制备供试品溶液，以 0． 5%乙酸镁无水乙醇
溶液为空白溶液，于 510 nm 处测定吸光度，带入回
归方程计算样品中蒽醌类成分的含量。
1． 3 白芷中欧前胡素的测定
1． 3． 1 色谱条件［3］ 色谱柱为 Agilent － SB － C18
柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇 － 水
(55∶45) ，检测波长 300 nm，柱温 30 ℃，流速
1 mL·min －1，进样量 10 μL。
1． 3． 2 溶液的制备 取欧前胡素对照品适量，精密
称定，加甲醇制成 77． 01 μg·mL －1欧前胡素对照品
溶液。取“1． 2． 1”项下提取液适量，离心，得供试品
溶液。
1． 3． 3 标准曲线的绘制 精密吸取欧前胡素对照
品溶液适量，加甲醇制得 1. 54、3． 08、7． 70、11． 55、
15． 40、23． 10 μg·mL －1系列浓度溶液，分别进样 10
μL，按“1． 3． 1”项下色谱条件测定。以样品浓度为
横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程
为:Y = 24． 038X － 3． 1199(r = 0． 9996) ，欧前胡素
1. 54 ～ 23． 10 μg·mL －1与峰面积的线性关系良好。
1． 3． 4 精密度和稳定性试验 取“1． 3． 2”项下的
欧前胡素对照品溶液，重复进样 6 次，计算含量的
ＲSD = 1． 37%(n = 6) ，表明方法的精密度良好。取
“1. 3. 1”项下制备的供试品溶液，按“1． 3． 2”项色谱
条件，于室温下放置，分别于 0、2、4、6、8、10 h 时进
样测定，计算峰面积的 ＲSD = 1． 73%，表明供试品溶
液在 10 h内稳定。
1． 3． 5 重复性试验 取同一样品 6 份，按“1． 3． 1”
“1． 3． 2”项下方法制备供试液并进样测定，计算得
平均含量为 0． 10%，ＲSD = 1． 09%(n = 6) ，表明供
试品的重复性良好。
1． 3． 6 加样回收率试验 精密量取“1． 2． 1”项下
提取液适量，加入欧前胡素对照品溶液，按“1． 3． 1”
项方法制备供试品溶液，进样测定，计算平均回收率
为 100． 40%，ＲSD = 1． 89%(n = 6)。
1． 3． 7 样品的测定 取“1． 2． 1”项下制备的提取
液，按“1． 3． 1”项方法制备供试品溶液，吸取 10 μL，
进样测定，色谱图见图 1。
图 1 对照品(A)和供试品(B)溶液的色谱图
Figure 1 The chromatograms of the reference substances solution
(A)and sample solution(B)
1． 4 纯化工艺的筛选
1． 4． 1 醇提水沉法［4］ 取“1． 2． 1”项下制备的提
取液 100 mL，减压浓缩至无醇味，约为原体积的
1 /5，边搅拌边加入 60 mL 蒸馏水，静置 24 h 后，定
容至 100 mL。
1． 4． 2 壳聚糖沉淀法 精密量取 0． 15 mL 冰乙酸，
加水至 15 mL，摇匀后置 40 ℃ ～60 ℃水浴中，恒温后
加入精密称定的壳聚糖约 0． 1 g，边加边搅拌至壳聚
糖完全溶解，得 1%壳聚糖溶液。取“1． 2． 1”项下制
备的提取液 100 mL，浓缩为含药 0． 5 ～ 1 g·mL －1的浓
25 华 西 药 学 杂 志 第 29 卷
缩液，加热至 40 ℃ ～60 ℃，边搅拌边加入 1%壳聚糖
溶液 0． 2 mL，静置 24 h，离心，定容至 100 mL。
1． 4． 3 大孔树脂吸附法 取 HPD － 400 大孔树脂，
用乙醇浸泡 24 h后装柱。用乙醇 1 mL·min －1洗柱，
至洗脱液加去离子水不出现白色浑浊，用去离子水
洗至洗脱液无醇味。用 5 倍柱体积(BV)稀盐酸
4 BV·h －1洗柱，并浸泡 4 h，用去离子水洗至中性，
再用 5 BV的 2%NaOH溶液，4 BV·h －1洗柱，并浸泡
4 h，用去离子水洗至中性［5］。取“1． 2． 1”项下制备
的提取液 200 mL 上处理好的树脂柱［树脂 －生药
(1∶3) ］，以 1 mL·min －1流速过树脂柱。弃流出液，
水洗至洗脱液基本无色;用 80%乙醇洗脱至洗脱液
基本无色，再用乙醇 － 5% NaOH(4∶1)洗脱至洗脱
液基本无色［6］，合并洗脱液。
1． 4． 4 酸碱法 取“1． 2． 1”项下制备的提取液 100
mL，加入 20%石灰乳调约 pH7，静置 2 h，继用 20%
硫酸调约 pH6，搅拌后静置 24 h，过滤，加 80%乙醇
至 50 mL，
1． 4． 5 不同纯化工艺对含量的影响 取纯化后的
样品溶液，分别按“1． 2． 1”“1． 3． 1”项下方法制备供
试品溶液，按“1． 2． 7”“1． 3． 7”项下方法测定样品中
的蒽醌类成分及欧前胡素的含量，重复 3 次。由表
1 可见:醇提水沉法、壳聚糖沉淀法的浸膏收率较
高，大孔树脂吸附法的浸膏收率最低，纯化效果明
显，但香豆素类物质损失量较大，且纯化操作复杂，
酸碱法纯化后蒽醌量和欧前胡素量损失较小，且浸
膏收率能满足制剂要求，因此，选用酸碱法。
表 1 不同纯化方法的测定结果
Table 1 The experimental results of different purification methods
Purification methods Anthraquinon /%
Imperatorin /
%
Yield of extract /
%
Ethanol extract and
water precipitation
75． 44 34． 88 13． 20
Chitosan precipitation 77． 80 54． 79 13． 12
Macroporous resin 85． 30 23． 12 8． 33
Acid － alkali 72． 17 78． 50 10． 98
1． 4． 6 酸碱法纯化工艺优选 取“1． 2． 1”项下制
备的提取液 100 mL 3 份，用 20%石灰乳调 pH6、7，
静置 2 h，再用稀硫酸调至 pH2、4、6，静置 2 h，用碳
酸钙粉末分别把编号为 1、2 和 4、5、6 溶液的调至
pH6、7，静置 24 h，抽滤，用 80% 乙醇定容至 100
mL，分别按“1． 2． 1”“1． 3． 1”项下方法制备供试品
溶液，按“1． 2． 7”“1． 3． 7”项下方法测定样品中的蒽
醌类成分及欧前胡素的含量。表 2 表明:酸碱法可
实现较好的除杂效果。因此，最佳纯化工艺为:用
20%石灰乳调 pH6，静置 2 h，过滤，减压回收溶剂至
稠膏状，干燥，即得。
表 2 酸碱法纯化工艺的测定结果
Table 2 The experimental results of purification procedure of
acid － alkali method
No． pH1 pH2
Anthraquinone /
%
Imperatorin /
%
Yield of extract /
%
1 6 2 74． 97 80． 78 8． 78
2 6 4 63． 54 86． 04 9． 40
3 6 6 78． 93 89． 56 9． 83
4 7 2 64． 16 76． 47 8． 26
5 7 4 71． 95 78． 99 8． 39
6 7 6 35． 85 64． 48 6． 48
2 讨论
同一树脂可用于纯化复方中不同有效部位，根
据蒽醌和香豆素类物质的理化性质，选取弱极性的
HPD － 400 型大孔树脂，香豆素类物质在洗脱液中
成分非常少，可能是与选取的洗脱液有关。醇提水
沉法和壳聚糖沉淀法浸膏收率较高，但欧前胡素的
损失量大，因而不适合用于复方制剂芷归片中决明
子和白芷的纯化工艺。采用大孔树脂法提取的蒽醌
类成分损失虽较小，得膏率也较低，但欧前胡素的损
失较大，且操作过程复杂耗时。而酸碱法中提取的
蒽醌类成分和欧前胡素的损失均较小，得膏率也可
满足制剂要求。游离蒽醌和结合蒽醌都含有酚羟
基，具有一定酸性，能与碱生成类盐物，在碱性溶液
中比在中性的有机溶媒中溶解度要大。香豆素类具
有内酯环，在强碱溶液中内酯环可开环生成顺邻羟
基桂皮酸盐，加酸又可重新闭环成为原来的内酯。
但长时间在碱中放置或 UV光照射则可转变为稳定
的反邻羟基桂皮酸盐，再加酸就不能环合成内酯环。
通过优选酸碱法工艺，确定最佳工艺为:用 20%石
灰乳调 pH6，静置 2 h，过滤，减压回收溶剂至稠膏
状，干燥，即得。酸碱法操作简单，成本较低，可作为
决明子和白芷的纯化工艺。
参考文献:
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收稿日期:2013 － 03 － 26
35第 1 期 陈晓亮，等。芷归片中决明子和白芷的纯化工艺研究