全 文 ：第 28卷第 3期
2008年 6月
林　产　化　学　与　工　业
ChemistryandIndustryofForestProducts
Vol.28 No.3
June2008
兴安白芷种子欧前胡素含量的 HPLC分析及
不同产地的含量测定
　　收稿日期:2007-09-18
　　基金项目:黑龙江省博士后基金项目(LBH-Z04)
　　作者简介:姜 雪(1982-),女,吉林梅河口人 ,硕士生 ,研究方向为植物次生代谢
　＊通讯作者:阎秀峰(1965-),男 ,黑龙江肇东人 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事植物生理生态学研究。
JIANGXue　　
姜 雪 , 王 萍 , 王 洋 , 阎秀峰＊
(东北林业大学生命科学学院 , 黑龙江 哈尔滨 150040)
摘　要:　用高效液相色谱法测定兴安白芷种子中欧前胡素含量。利用均匀设计试验筛选了分析样品
的制备方法 , 确定的最佳提取条件为:以 78%乙醇为溶剂在 20℃下超声波辅助提取 22min,欧前胡素
得率 0.698%。测定了不同产地兴安白芷种子中欧前胡素的含量 , 绥阳地区兴安白芷种子中的欧前胡
素质量分数最高 , 达到 1.722% ;其次为虎林和海林所产 , 分别为 1.519%和 1.031%, 大兴安岭地区
质量分数最低 , 为 0.698%。
关键词:　兴安白芷;欧前胡素;高效液相色谱法;均匀设计
中图分类号:TQ91;Q946.8　　　　　　文献标识码:A　　　　　　文章编号:0253-2417(2008)03-0101-03
ContentDeterminationofImperatorininAngelicadahurica(Fisch.)
Bench.etHook.SeedsfromDiferentHabitatsbyHPLC
JIANGXue, WANGPing, WANGYang, YANXiu-Feng
(ColegeofLifeSciences, NortheastForestryUniversity, Harbin150040, China)
Abstract:AmethodforcontentdeterminationofimperatorininAngelicadahurica(Fisch.)Bench.etHook.byHPLCwas
established.TheHPLCseparationwasperformedonahypersilODS2 column(250mm×4.6mm, 5μm), atflowrate1 mL/
min, withmobilephaseofmethanol-water(65∶35, volumeratio)anddetectedatwavelength254nm.Usinguniformdesign,
theoptimalconditionsforimperatorinextractionwereexploredtobeultrasonicalyextractedby 78% ethanolat20℃ for
22min.ImperatorincontentsinA.dahuricaseedsfromdiferentareasweredetermined.Thehighestimperatorincontentwas
1.722%, fromSuiyang, thenfromHulinandHailinwhichwere1.519% and 1.031% respectively, andthelowestwas
0.698%, fromDaxing′anling.
Keywords:Angelicadahurica(Fisch.)Bench.etHook.;imperatorin;HPLC;uniformdesign
白芷(Angelicadahurica(Fisch.)Bench.etHook.)为伞形科当归属多年生草本植物 ,始载于 《神农
本草经 》[ 1] 。按国内用药历史和习惯 ,白芷分为祁(禹)白芷和杭(川)白芷两大类 ,祁白芷与分布于东北
的兴安白芷(大活)为同种植物 ,而杭白芷则分别作为独立种或共同作为白芷的变种 [ 2-3] 。现代药理实
验表明 ,白芷具有抗菌消炎 、消肿止痛 、退热 、保肝 、抗氧化 、抗癌等作用 ,欧前胡素是白芷中主要的香豆
素类生物活性物质 ,相关研究表明欧前胡素有抗痉挛 、抗炎镇痛 、抗癌 、抗 HIV、增强免疫等作用 [ 4-7] 。
已有文献涉及不同产地及不同部位其他白芷体内香豆素含量的分析 [ 8-11] ,但对不同产地兴安白芷的香
豆素类的分析目前尚未见报道 。
1　材料与方法
1.1　材料与仪器
材料:兴安白芷种子于 2006年 9月分别采自黑龙江海林 、大兴安岭 、虎林 、绥阳等地 。仪器:高效液
102　 林　产　化　学　与　工　业 第 28卷
相色谱仪 ,美国 Waters;AS20500A型超声波清洗器 ,天津 Autoscience。试剂:甲醇为色谱纯 ,水为超纯
水 ,其他试剂均为分析纯。欧前胡素标准品购于中国药品生物制品检定所。
1.2　色谱条件
色谱柱:大连依利特 hypersilODS2色谱柱(250mm×4.6mm, 5μm);流动相:甲醇-水 (体积比
65∶35);流速:1mL/min;检测波长:254nm;进样量:20μL;柱温:室温。
1.3　标准溶液的配制及标准曲线的绘制
精密称取欧前胡素标准品 5.00mg,置于 25mL容量瓶中 ,用乙醇溶解并定容。
精密吸取标准品溶液 0.25、 0.50、 1.0、 2.0和 4.0mL置于 5mL容量瓶中 ,用乙醇定容至刻度 ,
16 000r/min离心 20min,按上述色谱条件进行 HPLC分析 。以标准品质量浓度为横坐标(x),峰面积为
纵坐标绘制标准曲线(y),结果表明欧前胡素在 0.01 ～ 0.16g/L范围内有良好的线性关系 。回归方程
为:y=7 213.9x+25.883, R=0.999 0。
1.4　样品制备
影响植物中有效成分提取的因素很多 ,本研究选择了提取时间 、乙醇体积分数和提取温度进行 3因
素 10水平的均匀设计试验(见表 1),以欧前胡素的提取率为评价指标 ,探讨了超声波辅助提取兴安白
芷种子中欧前胡素的最佳条件 。
精密称取兴安白芷种子样品(产地:大兴安岭)0.1g于 10mL容量瓶 ,按照设计的实验条件 ,加入
一定体积分数的乙醇溶液在不同的时间及一定的温度条件下 ,超声波辅助(工作频率 40kHz、功率
170W)提取欧前胡素后 ,冷却至室温 ,再用相应体积分数的乙醇溶液定容至刻度 ,摇匀。吸取上清液至
离心管中 ,离心 (16 000r/min)20min,备用 。
2　结果与分析
2.1　欧前胡素超声波辅助提取实验条件的确定
以大兴安岭产的兴安白芷为原料 ,按 1.4节方法提取试验 ,均匀设计试验结果见表 1。分别以提取
时间(X1)、乙醇体积分数(X2)、提取温度(X3)为自变量 ,以欧前胡素得率(Y)为因变量 ,用均匀设计应
用软件(3.0版)对试验结果进行逐步回归分析 ,得如下回归方程:
Y=0.296 349 0-0.004 561 9X1 +0.013 191 1X2 -0.000 072 9X1 2 +0.000 049 0X1X2 +
0.000 195 3X1X3 -0.000 086 6 X2 2 -0.000 034 7X2X3 -0.000 101 4X3 2　R=1.000 0
表 1　均匀设计实验条件及分析结果
Table1　Experimentconditionsandresultsofuniformdesign
实验号
No.
提取时间 /min
extractiontime
乙醇体积分数 /%
volumefractionofEtOH
提取温度 /℃
extractiontemp.
欧前胡素得率 /%
imperatorinyield
1 10 100 30 0.608
2 20 30 45 0.445
3 30 80 55 0.576
4 40 40 25 0.564
5 50 50 20 0.572
6 60 10 65 0.224
7 70 70 40 0.644
8 80 20 50 0.265
9 90 90 35 0.560
10 100 60 60 0.568
根据回归方程计算得出选
定的实验条件范围内超声波辅
助提取欧前胡素的最佳提取条
件 ,对各试验条件进行综合分
析 ,确定了欧前胡素的最佳提
取条件为:20℃下 , 以 78%
乙醇超声波辅助提取兴安白芷
种 子 样 品 22min, 得 率 为
0.698%。
2.2　精密度试验
精密吸 取对照品溶液
20μL,在上述色谱条件下重复
进样 5次 ,测定对照品中欧前胡素峰面积积分值 ,相对标准偏差(RSD)为 1.22%。试验表明 ,仪器精密
度良好 。
2.3　回收率试验
精密称取 3份兴安白芷种子(产地:大兴安岭)粉末 ,每份 0.1g,置于 10mL容量瓶中 ,分别加入欧
第 3期 姜 雪 ,等:兴安白芷种子欧前胡素含量的 HPLC分析及不同产地的含量测定 103　
前胡素标准品溶液(0.2g/L)1mL,按样品制备及测定方法进行定量分析 ,测得欧前胡素加样回收率和
RSD分别为 96.38%和 3.64%。
图 1　标准品(a)和样品(b, 大兴安岭
地区)的色谱图
Fig.1　 Chromatogramsofstandard
(a)andsample(b, Daxing′
anling)ofA.dahurica
2.4　样品测定
采用以上方法分析了不同产地兴安白芷种子中的欧前胡素含
量 。结果表明 ,不同产地兴安白芷种子中的欧前胡素质量分数差异
明显 ,由 0.698%到 1.722%不等 。其中绥阳地区的质量分数最
高 ,可达到 1.722%;虎林地区次之 ,达 1.519%;再次为海林地区
(1.031%)和大兴安岭地区(0.698%)。张志梅等[ 11]测定河北安
国产白芷种子中欧前胡素质量分数为 0.597%,王梦月等 [ 12]和李
宏宇等[ 13] 测定遂宁川白芷种子中欧前胡素质量分数分别为
0.985%和 0.826%。由此可见 ,大部分地区兴安白芷种子中的欧
前胡素质量分数较其它种类白芷的含量高。标准品及样品色谱图
见图 1,在本试验条件下 ,欧前胡素出峰时间为 10.827min。
3　结 论
3.1　利用高效液相色谱分析方法简便 、快速测定兴安白芷中的欧
前胡素 。
3.2　运用均匀设计法考查了从兴安白芷中超声波提取欧前胡素的
试验条件 ,得到最佳提取条件为:以 78%乙醇为提取溶剂 ,兴安白
芷种子样品在 20℃下超声波辅助提取 22min,欧前胡素得率
0.698%。
3.3　兴安白芷种子中欧前胡素含量 ,产地间差异明显 ,由 0.698%
到 1.722%不等 。其中绥阳(1.722%)地区样品的含量最高 ,其次
为虎林(1.519%)和海林(1.031%)地区所产 ,大兴安岭(0.698%)地区最低。
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