全 文 ：浙江大学学报（农业与生命科学版）　３８（３）：２８８～２９２，２０１２
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．）
文章编号：１００８－９２０９（２０１２）０３－０２８８－０５　 ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－９２０９．２０１２．０３．００８
　　收稿日期：２０１１－０５－０５
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３１０７０１８８）；浙江省科技计划资助项目（２００９Ｃ３２０６６）；浙江农林大学研究生科研创新
基金资助项目（２１１２００９０１９）。
作者简介：张楠（１９８７—），女，山东德州人，硕士，从事园林植物应用研究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｎｒｕｎ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ．
通信作者：季梦成，男，教授，从事苔藓植物分类及园林植物应用研究．Ｔｅｌ：０５７１－６３７４２２５０；Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｃｈｊｉ＠ｚａｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．
细叶小羽藓（Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ　ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ）
配子体组织培养的消毒方法及蔗糖浓度筛选
张楠１，２，杜宝明２，季梦成２
（１．杭州绿风园林建设集团有限公司，浙江 杭州３１００２０；２．浙江农林大学 园林学院，浙江 临安３１１３００）
摘要　以细叶小羽藓（Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ　ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ）的茎叶体为外植体，通过正交设计试验，研究消毒
剂以及取材部位对配子体灭菌效果的影响；并通过芽体长度、芽体个数、原丝体直径、增殖系数等指标探
讨不同蔗糖浓度对细叶小羽藓生长的影响。结果表明：细叶小羽藓配子体的最佳消毒方法为２．５％
ＮａＣｌＯ处理老枝与分枝交叉处６０ｓ；在初代培养基中加入蔗糖能促进细叶小羽藓的生长，并随蔗糖浓度
的升高其促进作用增强，当蔗糖质量浓度达到３０ｇ·Ｌ－１时，芽体长度可达２．４９ｃｍ，芽体个数为１．８７，
原丝体直径为１．１４ｃｍ，增殖系数高达９．２５；当蔗糖质量浓度超过３０ｇ·Ｌ－１对细叶小羽藓芽体长度及
芽体数生长的促进作用开始降低，原丝体生长受到抑制，增殖系数显著低于蔗糖质量浓度为３０ｇ·Ｌ－１
时细叶小羽藓配子体的增殖系数。
关键词　细叶小羽藓；配子体；消毒方法；蔗糖浓度
中图分类号　Ｑ　９４３．１　　　文献标志码　Ａ
ＺＨＡＮＧ　Ｎａｎ１，２，ＤＵ　Ｂａｏ－ｍｉｎｇ２，ＪＩ　Ｍｅｎｇ－ｃｈｅｎｇ２（１．Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｌüｆｅｎｇ　Ｇａｒｄｅｎ　Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　Ｇｒｏｕｐ
Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００２０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ　Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ａ　＆ Ｆ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｉｎ′ａｎ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　３１１３００，Ｃｈｉｎａ）
Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｓｕｃｒｏｓｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ　ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ
ｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ．），２０１２，３８（３）：２８８－２９２
Ａｂｓｔｒａｃｔ　 Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ　ａｎｄ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ
Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ　ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｕｃｒｏｓｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｈ．ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｓｕｒｉｎｇ　ａｎｄ
ｃａｌｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｂｕｄ　ｌｅｎｇｔｈ，ｂｕｄ　ｎｕｍｂｅｒ，ｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ａｎｄ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ．Ｔｈｅ
ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｗａｙ　ｏｆ　Ｈ．ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｅｘｐｌａｎｔｓ
ｇｏｔｔｅｎ　ｆｒｏｍ　ｉｎｔｅｒｓｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈ　ｗｅｒｅ　ｗａｓｈｅｄ　ｉｎ　２．５％ ＮａＣｌＯ　ｆｏｒ　６０ｓ．Ｗｈｅｎ　０－３０ｇ·Ｌ－１　ｓｕｃｒｏｓｅ　ｗａｓ
ａｄｄｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ，ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｈ．ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅ，ａｎｄ
ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｓｕｃｒｏｓｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．Ｗｈｅｎ　３０ｇ·Ｌ－１　ｓｕｃｒｏｓｅ　ｗａｓ　ａｄｄｅｄ　ｉｎ
ｔｈｅ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ，ｔｈｅ　ｂｕｄ　ｌｅｎｇｔｈ，ｂｕｄ　ｎｕｍｂｅｒ，ｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ａｎｄ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｗｅｒｅ　２．４９ｃｍ，１．８７，１．１４ｃｍ　ａｎｄ　９．２５，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｂｕｔ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　３０ｇ·Ｌ－１　ｓｕｃｒｏｓｅ　ｗａｓ
ａｄｄｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ，ｔｈｅ　ｂｒａｎｃｈ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｏｎｅｍａ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｈ．ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｗｅｒｅ
ｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　３０ｇ·Ｌ－１
ｓｕｃｒｏｓｅ．
张楠，等：细叶小羽藓（Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ　ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ）配子体组织培养的消毒方法及蔗糖浓度筛选
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ　ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ；ｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅ；ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ；ｓｕｃｒｏｓｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
　　细叶小羽藓（Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ　ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ）
隶属于羽藓科（Ｔｈｕｉｄｉａｃｅａｅ）、小羽藓属，在中国
大部分地区、锡金、印度、朝鲜、日本、俄罗斯、欧
洲及北美洲都有分布［１］，其生境为低海拔林地
土面、墙基至１　０００ｍ 林缘背阴湿润的具土岩
面、腐木及树木基部［２］。细叶小羽藓色泽鲜绿，
质感细致，密集交织生长，在森林等生态系统中
发挥着ＣＯ２ 固定、水土保持、涵养水源、营养物
质的循环与贮存和森林更新等生态功能［３］，由
于对Ｃｕ、Ｐｂ、Ｚｎ、Ｃｒ、Ｃｄ　５种重金属有很强的富
集能力［４］，它也是良好的大气环境指示植物。
该种为交织生长型，生长速度快，植株低矮，越
冬能力强，易于栽培，不易受病虫害侵扰［５］，在
园林上可作为地被植物，以及山水、树桩盆景的
辅助材料等使用。此外，细叶小羽藓还有清热解
毒之功效，可用于治疗扁桃体炎、肺炎、中耳炎
等，用本品制成的青苔素针剂功效与青霉素相
似［６］。通过对细叶小羽藓的组织培养，建立其扩
繁体系，并通过常规栽培与组织培养相结合，获
取细叶小羽藓的大量植株，可为其在园林绿化、化
学、生物分子学、环境科学等领域的应用提供基础
材料。本文对细叶小羽藓配子体的消毒方法及蔗
糖浓度对其生长的影响进行了研究，以期为细叶
小羽藓再生体系的建立及遗传转化提供参考。
１　材料与方法
１．１　试验材料
　　选取浙江农林大学园林学院温室苔藓苗圃
中生长势良好的细叶小羽藓植株（配子体），去除
泥土等杂物，剪掉残老茎叶，置于培养皿中待用。
１．２　试验方法
１．２．１　材料预处理　　流水冲去细叶小羽藓
配子体表面污物后，用洗涤精浸泡，搅动２～３
ｍｉｎ，用流水冲洗１０ｍｉｎ，将洗涤精冲洗干净，
放在超净工作台上待用。在超净工作台上用无
菌水冲洗３次，每次１ｍｉｎ，用无菌镊子夹入
７０％的酒精中表面消毒５ｓ，迅速放入无菌水中
冲洗，将酒精冲洗掉后，放入不同浓度的
ＮａＣｌＯ溶液中消毒６０ｓ，用无菌水清洗３次，将
外植体上的ＮａＣｌＯ溶液冲洗干净，放入不同浓
度的 ＨｇＣｌ２ 中消毒５ｓ，用无菌水清洗干净，在
灭过菌的滤纸上吸干试验材料表面的水分，剪
成０．５ｃｍ左右的小段接种在培养基上。
１．２．２　消毒剂及取材部位的筛选　　消毒剂
及取材部位的筛选采用Ｌ９（３３）的３水平３因
素９个处理的正交设计（表１）。
表１　细叶小羽藓配子体消毒方法筛选的正交试验设计
Ｔａｂｌｅ　１　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｄｅｓｉｇｎ　ｆｏｒ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　Ｈ．ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅ
编号 ｗ（ＮａＣｌＯ）／％ ｗ（ＨｇＣｌ２）／％ 取材部位
Ａ　 ５．０　 ０．０００ 新生羽状分枝先端
Ｂ　 ５．０　 ０．００２ 老枝与分枝交叉处
Ｃ　 ５．０　 ０．０１０ 老枝绿色中段
Ｄ　 ２．５　 ０．０００ 老枝与分枝交叉处
Ｅ　 ２．５　 ０．００２ 老枝绿色中段
Ｆ　 ２．５　 ０．０１０ 新生羽状分枝先端
Ｇ　 ０．０　 ０．０００ 老枝绿色中段
Ｈ　 ０．０　 ０．００２ 新生羽状分枝先端
Ｉ　 ０．０　 ０．０１０ 老枝与分枝交叉处
１．２．３　蔗糖浓度的筛选　　筛选出最佳消毒
方法后，将存活的外植体转接数次，选取生长健
壮的植株剪成０．５ｃｍ左右的小段接种在 ＭＳ
培养基上，琼脂质量浓度为６．７ｇ·Ｌ－１，ｐＨ
为７．０［７］，添加的蔗糖质量浓度分别为４０、３０、
２０、１０和０ｇ·Ｌ－１。
１．３　培养条件和结果统计方法
　　消毒方法筛选的培养基为 ＭＳ培养基＋
６．７ｇ·Ｌ－１琼脂＋３０ｇ·Ｌ－１蔗糖，ｐＨ　７．０［７］。
所有培养基均放入ＲＸＺ－３００Ｂ型光照培养箱中
培养，培养温度为（２５±１）℃，空气相对湿度为
８０％～９０％，光照时间为１２ｈ·ｄ－１，光照强度
为２　０００～３　０００ｌｘ。每种处理１５个外植体，重
复４次，培养７ｄ后统计细叶小羽藓配子体的
污染率、死亡率和存活率；用不同蔗糖浓度培养
基培养３０ｄ后统计细叶小羽藓的芽体长度、芽
体个数、原丝体直径、增殖系数。采用 ＳＰＳＳ
１８．０统计软件进行统计分析，采用Ｅｘｃｅｌ　２００３
软件制图。增殖系数＝现有所有活藓体的总长
９８２　第３期
浙江大学学报（农业与生命科学版）
度／ｃｍ／接种时茎段的总长度／ｃｍ（芽体长度小
于０．５ｃｍ的不计入总长度）［８］。消毒结果的统
计参照赖玉洁等［９］的方法：
　　污染率＝污染外植体数／接种外植体总
数×１００％；
　　死 亡 率 ＝ 死 亡 个 数／接 种 外 植 体 总
数×１００％；
　　存活率＝未污染且萌动个数／接种外植体
总数×１００％。
２　结果与分析
２．１　消毒剂及取材部位对配子体消毒效果的
影响
　　从表２中可以看出：处理Ｂ、Ｃ、Ｆ、Ｉ之间的污
染率差异不显著，且污染率均在２．００％以下；处
理Ａ、Ｄ、Ｅ之间的污染率与处理Ｂ、Ｃ、Ｆ、Ｉ之间差
异不显著，与处理Ｈ之间差异不显著，污染率在
二组之间；处理Ｇ的污染率显著高于其他处理，
高达１００．００％；处理Ｄ和处理Ｇ之间的死亡率
差异不显著，且死亡率最低，其次为处理Ｈ、Ｅ、Ｉ、
Ｆ、Ａ、Ｂ、Ｃ，其中处理Ｉ、Ｆ、Ａ、Ｂ、Ｃ之间差异不显
著，死亡率高；处理Ｂ、Ｃ、Ｇ存活率最低，均为
０．００％，其次为处理Ａ、Ｆ、Ｉ、Ｅ、Ｈ、Ｄ，其中处理Ｄ
的存活率最高，达７０．００％。由此可见，用２．５％
ＮａＣｌＯ处理细叶小羽藓老枝与分枝交叉处６０ｓ
的消毒效果最好。
表２　消毒方法对细叶小羽藓配子体消毒效果的影响
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｎ　ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ
ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｈ．ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅ
编号 总个数 污染率／％ 死亡率／％ 存活率／％
Ａ　 ６０　 １０．００ｂｃ　 ９５．００ａ ３．３３ｄｅ
Ｂ　 ６０　 １．６７ｃ ９８．３３ａ ０．００ｅ
Ｃ　 ６０　 ０．００ｃ １００．００ａ ０．００ｅ
Ｄ　 ６０　 １０．００ｂｃ　 ２３．３３ｄ ７０．００ａ
Ｅ　 ６０　 １０．００ｂｃ　 ７１．６７ｂｃ　 １８．３３ｂｃ
Ｆ　 ６０　 ０．００ｃ ９３．３３ａ ６．６７ｃｄｅ
Ｇ　 ６０　 １００．００ａ １５．００ｄ ０．００ｅ
Ｈ　 ６０　 １５．００ｂ ６１．６７ｃ ２５．００ｂ
Ｉ　 ６０　 ０．００ｃ ８６．６７ａｂ　 １３．３３ｂｃｄ
　　注：同列数据后的不同小写字母表示在Ｐ＜０．０５水平差
异有统计学意义。
　　由图１、２可知，只用７０％酒精进行表面消
毒，细叶小羽藓配子体虽然死亡率很低，但其污
染率却高达１００．００％，存活率为０％；用７０％
酒精表面消毒后，再用２．５％ ＮａＣｌＯ 和５％
ＮａＣｌＯ消毒６０ｓ，细叶小羽藓配子体的污染率
之间差异不显著，但死亡率及存活率间差异显
著，即用２．５％ ＮａＣｌＯ消毒细叶小羽藓配子体
的死亡率显著降低，存活率显著升高；用７０％
酒精表面消毒后，随 ＨｇＣｌ２ 浓度升高，细叶小
羽藓配子体的污染率显著降低，但死亡率显著
升高，存活率显著降低，说明 ＨｇＣｌ２ 不适合用
于细叶小羽藓配子体的消毒。
　　柱状图上的不同小写字母表示在Ｐ＜０．０５水平差异
有统计学意义。
图１　ＮａＣｌＯ对细叶小羽藓配子体消毒效果的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａ－
ｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｈ．ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍｇａｍｅｔｏ－
ｐｈｙｔｅ
　　柱状图上的不同小写字母表示在Ｐ＜０．０５水平差异
有统计学意义。
图２　ＨｇＣｌ２ 对细叶小羽藓配子体消毒效果的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｍｅｒｃｕｒｉｃ　ｃｈｌｏｒｉｄｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ｏｎ　ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｈ．ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅ
０９２ 第３　８卷　
张楠，等：细叶小羽藓（Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ　ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ）配子体组织培养的消毒方法及蔗糖浓度筛选
２．２　蔗糖浓度对细叶小羽藓生长的影响
　　从表３可以看出：蔗糖质量浓度为２０～４０
ｇ·Ｌ－１时对芽体长度的影响差异不显著，蔗糖
浓度为１０ｇ·Ｌ－１时芽体长度显著变短，未添
加蔗糖时，细叶小羽藓芽体长度最短；蔗糖质量
浓度为３０ｇ·Ｌ－１时，细叶小羽藓的芽体数最
多，蔗糖质量浓度为２０、４０ｇ·Ｌ－１时对细叶小
羽藓的芽体个数影响差异不显著，未添加蔗糖
时，细叶小羽藓的芽体个数最少；蔗糖质量浓度
为３０ｇ·Ｌ－１时，细叶小羽藓的原丝体直径最
大，为１．１４ｃｍ，蔗糖质量浓度为２０、３０ｇ·Ｌ－１
时细叶小羽藓的原丝体直径差异不显著，当蔗
糖质量浓度为４０、１０、０ｇ·Ｌ－１时细叶小羽藓
的原丝体直径间差异不显著；蔗糖质量浓度为
３０ｇ·Ｌ－１时细叶小羽藓增殖系数最高，为
９．２５，蔗糖质量浓度为４０、２０ｇ·Ｌ－１以及蔗糖
质量浓度为１０、０ｇ·Ｌ－１时增殖系数间无显著
差异，而未添加蔗糖的培养基细叶小羽藓的增
殖系数最低，为１．１３。
　　综上，蔗糖浓度升高促进了细叶小羽藓芽体
生长，并有利于原丝体的生长；当蔗糖质量浓度
为３０ｇ·Ｌ－１时细叶小羽藓的芽体长度、芽体个
数、原丝体直径及增殖系数均达到最大；当蔗糖
质量浓度达到４０ｇ·Ｌ－１时，细叶小羽藓芽体生
长变慢，原丝体生长受到抑制。表明细叶小羽藓
初代培养最适的蔗糖质量浓度为３０ｇ·Ｌ－１。
表３　蔗糖质量浓度对细叶小羽藓生长的影响
Ｔａｂｌｅ　３　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｕｃｒｏｓｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　Ｈ．
ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍｇｒｏｗｔｈ
ρ（蔗糖）／
（ｇ·Ｌ－１）
芽体长／
ｃｍ
芽体个数
原丝体直
径／ｃｍ
增殖系数
４０　 ２．３７ａ １．４０ａｂ　 ０．７９ｂ ６．５５ｂ
３０　 ２．４９ａ １．８７ａ １．１４ａ ９．２５ａ
２０　 ２．２２ａ １．３３ａｂ　 ０．９８ａｂ　 ５．８７ｂ
１０　 １．５８ｂ ０．８７ｂｃ　 ０．８７ｂ ２．６７ｃ
０　 ０．９７ｃ ０．６０ｃ ０．８２ｂ １．１３ｃ
　　注：同列数据后的不同小写字母表示在Ｐ＜０．０５水平差
异有统计学意义。
３　结论与讨论
　　细叶小羽藓结构简单，ＨｇＣｌ２ 和 ＮａＣｌＯ对
其伤害都比较大，当 ＨｇＣｌ２ 质量分数降为
０．００２％时，细叶小羽藓外植体死亡率仍为
６１．６７％，表明细叶小羽藓对 Ｈｇ２＋ 十分敏感，
ＨｇＣｌ２ 不适宜用作细叶小羽藓配子体的消毒剂。
Ｓａｂｏｖｌｊｅｖｉｃ等［１０］曾用１２个浓度梯度的 ＮａＣｌＯ
对角齿藓（Ｃｅｒａｔｏｄｏｎ　ｐｕｒｐｕｒｅｕｓ）配子体进行消
毒，其中９％ＮａＣｌＯ的消毒效果最好，其外植体
存活率为６７．５％；而本试验当ＮａＣｌＯ质量分数
为５％时，细叶小羽藓外植体死亡率达９５．００％，
说明消毒剂浓度的选择因苔藓种类的不同有很
大的差异。当ＮａＣｌＯ质量分数为２．５％时，虽然
细叶小羽藓外植体有部分污染及死亡，但存活率
显著高于ＨｇＣｌ２，说明ＮａＣｌＯ的消毒效果显著优
于ＨｇＣｌ２。从避免环境污染和减少对外植体毒
害角度看，选择２．５％ ＮａＣｌＯ作为消毒剂较好。
　　细叶小羽藓的新生羽状分枝先端是植物体
最幼嫩部位，携带的菌类最少，污染率低，但也
最易被消毒剂杀死，存活率也低；用 ２．５％
ＮａＣｌＯ处理后，老枝与分枝交叉处有一定的外
植体污染，外植体大部分变为黄绿色，有些甚至
变为黄色，但将未污染的外植体转接几天后，几
乎所有外植体分枝切口处均长出新的茎叶，使
外植体存活率达７０．００％，明显高于新生羽状
分枝与老枝绿色中段存活率，说明老枝与分枝
交叉处是较适宜的外植体取材部位。
　　李晓毓等［１１］的研究表明蔗糖对尖叶匍灯
藓（Ｐｌａｇｉｏｍｎｉｕｍ　ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ）生长没有明显
的促进作用，李艳红等［１２］仅就蔗糖浓度对立碗
藓（Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｉｕｍ　ｓｐｈａｅｒｉｃｕｍ）原丝体形态变
化进行了描述，而本试验详细记录了蔗糖浓度
对细叶小羽藓芽体长度、芽体个数及原丝体直
径、增殖系数的影响，并发现当蔗糖质量浓度为
０～３０ｇ·Ｌ－１时，随着蔗糖浓度的升高，细叶小
羽藓的芽体长度、芽体个数及原丝体显著增长，
促进了细叶小羽藓植株及原丝体的生长。当蔗
糖质量浓度超过３０ｇ·Ｌ－１时，蔗糖对细叶小
羽藓植株生长的促进作用不明显，并抑制原丝
体的生长，说明蔗糖对不同藓类植物生长影响
不同，在苔藓植物的组织培养中应根据苔藓植
物的不同种类选择合适的蔗糖浓度。
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ：
［１］　吴鹏程．中国苔藓植物志：第６卷［Ｍ］．北京：科学出版
１９２　第３期
浙江大学学报（农业与生命科学版）
社，２００２：２１８－２２０．
［２］　ＷＵ　Ｌｕ－ｌｕ，ＹＡＮ　Ｘｉｏｎｇ－ｌｉａｎｇ，ＪＩ　Ｍｅｎｇ－ｃｈｅｎｇ（吴璐璐，
严雄梁，季梦成）．Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｂｒｙｏｐｈｙｔｅｓ　ｉｎ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｃｏｌｅｇｅ（浙江
林学院学报），２００９，２６（１）：６８－７５．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［３］　ＷＵ　Ｙｕ－ｈｕａｎ，ＣＨＥＮＧ　Ｇｕｏ－ｄｏｎｇ，ＧＡＯ　Ｑｉａｎ（吴玉
环，程国栋，高谦）．Ｂｒｙｏｐｈｙｔｅ＇ｓ　ｅｃｏｌｏｇｙ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ
ｉｔｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｒｅｖｅｇｅｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｄｅｓｅｒｔ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ（中 国 沙 漠），２００３，２３（３）：２１５－２２０．（ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［４］　ＷＡＮＧ　Ｑｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ｇｕａｎｇ－ｎｉｎｇ，ＨＥ　Ｓｈａｎ－ａｎ（汪
庆，张 光 宁，贺 善 安）．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｓｓｅｓ　ｉｎ
ｇａｒｄｅｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｌａｎｄｓｃａｐｉｎｇ ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ
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［５］　ＹＩ　Ｙａｎ－ｊｕｎ （衣 艳 君 ）． Ｒｅｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ
ｂｒｙｏｐｈｙｔｅｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ
Ｈｅｒｂａｌ　Ｄｒｕｇｓ（中草药），２０００，３１（８）：６２４－６２７．（ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［６］　ＡＮ　Ｌｉ，ＣＡＯ　Ｔｏｎｇ，ＹＵ　Ｙｉｎｇ－ｈａｏ（安丽，曹同，俞鹰
浩）．Ｈｅａｖｙ　ｍｅｔａｌｓ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍａｎｄ　ｔｈｅｉｒ
ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ｗｉｔｈ　Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｃｉｔｙ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ［Ｊ］．
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｅｃｏｌｏｇｙ（应用生态学报），
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［７］　ＬＡＮＧ　Ｙｕ－ｚｈｕｏ，ＫＡＮ　Ｓｈｉ－ｃｈａｏ，ＬＩＵ　Ｗｅｉ－ｃａｉ，ｅｔ　ａｌ．
（郎 玉 卓，阚 世 超，刘 伟 才，等 ）．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ
ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｅａｒｌｙ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ
Ｔｈｕｉｄｉｕｍ　ｃｙｍｂｉｆｏｌｉｕｍｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
Ａｎｈｕｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（安徽农业科学），２００８，３６
（３４）：１４８９２－１４８９３．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［８］　ＦＵ　Ｓｕ－ｊｉｎｇ（付素静）．Ｇａｍｅｔｏｐｈｙｔｅｓ　ｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｉｓｓｕｅ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ　ｍｏｓｓｅｓ（５种观赏藓类植物的
配子体 发 生 与 组 织 培 养）［Ｄ］．Ｎａｎｊｉｎｇ：Ｎａｎｊｉｎｇ
Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００６．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［９］　ＬＡＩ　Ｙｕ－ｊｉｅ，ＬＵ　Ｂｉｎｇ－ｓｈｅ，ＣＨＥＮ　Ｓｈｕ－ｍｉｎｇ，ｅｔ　ａｌ．
（赖玉洁，路丙社，陈书明，等）．Ａ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｏｒｓ
ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ａｃｅｒ　ｄａｖｉｄｉｉ　Ｆｒａｎｃｈ．［Ｊ］．Ｈｅｂｅｉ
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｏｒｃｈａｒｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ（河北林果研
究），２００７，２２（２）：１４３－１４５，１５８．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１０］　Ｓａｂｏｖｌｊｅｖｉｃ　Ｍ，Ｂｉｊｅｌｏｖｉｃ　Ａ，Ｄｒａｇｉｃｅｖｉｃ　Ｉ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｍｏｓｓｅｓ：Ａｌｏｉｎａ　ａｌｏｉｄｅｓ （Ｋ．Ｆ．Ｓｃｈｕｌｔｚ）
Ｋｉｎｄｂ．，Ｂｒａｃｈｙｔｈｅｃｉｅｕｍ　ｖｅｌｕｔｉｎｕｍ （Ｈｅｄｗ．）Ｂ．Ｓ．＆
Ｇ．， Ｃｅｒａｔｏｄｏｎ　ｐｕｒｐｕｒｅｕｓ （Ｈｅｄｗ．） Ｂｒｉｄ．，
Ｅｕｒｈｙｎｃｈｉｕｍ　ｐｒａｅｌｏｎｇｕｍ （Ｈｅｄｗ．）Ｂ．Ｓ．＆Ｇ．ａｎｄ
Ｇｒｉｍｍｉａ　ｐｕｌｖｉｎａｔａ（Ｈｅｄｗ．）Ｓｍ［Ｊ］．Ｔｕｒｋｉｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ，２００３，２７：４４１－４４６．
［１１］　ＬＩ　Ｘｉａｏ－ｙｕ，ＷＵ　Ｃｕｉ－ｚｈｅｎ，ＸＩＯＮＧ　Ｙｕａｎ－ｘｉｎ，ｅｔ　ａｌ．
（李晓毓，吴翠珍，熊源新，等）．Ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ
ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｐｌａｇｉｏｍｎｉｕｍ　ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ
［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ（山地
农业生物学报），２００６，２５（３）：２１７－２２２．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１２］　ＬＩ　Ｙａｎ－ｈｏｎｇ，ＳＯＮＧ　Ｘｉｕ－ｚｈｅｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｂｉａｎ－ｑｉｎ（李
艳红，宋秀珍，张便勤）．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉａ　ａｎｄ
ｅｎｚｙｍｅｓ　ｏｎ　ｐｒｏｔｏｎｅｍａ　ｏｆ　Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｉｕｍ　ｓｐｈａｅｒｉ［Ｊ］．
Ｂｕｌｅｔｉｎ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ（植物研究），２００４，２４
（２）：１９２－１９６．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
２９２ 第３　８卷