全 文 ：复方刺山柑胶囊提取工艺的优化
焦胜春1， 杨 飞2， 杨伟俊3* ， 智勇刚1， 地力努尔3， 满尔哈巴3， 杨 丽3
(1．石河子大学第一附属医院，新疆 石河子 832003;2． 石河子大学校医院，新疆 石河子 832003;3．新疆维
吾尔药重点实验室，新疆 乌鲁木齐 830004)
收稿日期:2011-04-16
基金项目:新疆维吾尔自治区科技支持计划项目(200933123)
作者简介:焦胜春(1974—) ，男，主管药师，从事医院药学研究。Tel:(0993)2850531，E-mail:jschwb@ sina． com
* 通信作者:杨伟俊，男，副研究员，博士，从事中药资源及中药新药研究。Tel:(0991)2320292，E-mail:wifred3106@ 163． com
摘要:目的 优化复方刺山柑胶囊的最佳乙醇提取工艺。方法 以总蒽醌提取率、浸膏得率、正丁醇萃取物得率和三氯
甲烷萃取物得率为综合评价指标，以乙醇浓度、提取时间和乙醇用量为考察因素，采用 L9(3
4)正交试验设计法优化复方
刺山柑胶囊的最佳乙醇提取工艺。结果 最佳乙醇提取工艺为加入 8 倍药材量的 80%乙醇，提取 2 次，每次 1． 5 h。结
论 优选的工艺合理可行。
关键词:复方刺山柑胶囊;提取工艺;正交试验;蒽醌
中图分类号:R284． 2 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2011)12-2169-03
复方刺山柑胶囊由刺山柑、川西獐牙菜、波棱瓜子、大
黄、苦荬菜、木香、兔耳草、唐古特乌头、角茴香等多味药材组
成的胶囊剂，具有清热解毒、疏肝利胆、利湿退黄之功能，用
于急性黄疸型肝炎、急性胆囊炎属肝胆温热证者，症见身黄、
目黄、小便黄，发热，恶心欲呕，腹胀纳呆，舌红苔黄腻，脉弦
数。为减少服用剂量，提高疗效，根据处方各药味理化性质
结合本方功效，本试验以总蒽醌提取率、浸膏得率，结合三氯
甲烷的萃取物得率及正丁醇萃取物得率为综合评价指标，采
用正交试验设计对乙醇提取工艺进行优化，为该制剂的制备
提供试验依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 SPD-10AVP型高效液相色谱仪(日本岛津制造
所) ，包括 LC-10ATVP二元高压泵，SPD-10AVP紫外检测器，
CTO-10ASVP柱温箱，SCL-10AVP 系统控制器;LibrorAEG-
200 电子天平(日本岛津制造所) ;BS124S电子天平(塞多利
斯) ;Millipore simplicity-185 超纯水器(美国密理博公司) ;
KQ-100DE型超声波发生器(上海昆山超声仪器有限公司)。
1． 2 试药 大黄素、大黄酚对照品(均由中国药品生物制品
检定所提供，批号依次为:0756-200110、0796-200208) ;刺山
柑等药材购自安徽亳州中药材公司，经检验符合相应的药材
质量标准。高效液相用甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析
纯。
2 方法与结果
2． 1 评价指标与测定方法
2． 1． 1 总蒽醌提取率 色谱条件:Diamonsil 柱(250 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ;甲醇 － 0． 1%磷酸溶液(85 ∶ 15)为流动相;
柱温:30 ℃;检测波长为 254 nm［1］。在上述条件下，蒽醌类
成分与供试品溶液中其他色谱峰达到了基线分离，阴性试验
结果表明无干扰，色谱图见图 1。
对照品溶液的制备:精密称取大黄素、大黄酚对照品各
5 mg，分别置 50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇
匀;分别精密吸取大黄素溶液 1 mL、大黄酚溶液 2 mL，分别
置 50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(大黄素每 1 mL
中含 2 μg，大黄酚每 1 mL中含 4 μg)。
线性关系考察:分别精密吸取大黄素对照品溶液(含大
黄素 3． 84 μg /mL)1、2、3、4、5 mL置 5 mL量瓶中，加甲醇溶
解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取 10 μL，注入液相色
谱仪，记录峰面积。得进样质量浓度 C(μg /mL)与峰面积 A
的线性方程:A = 33 319 C + 1 536． 1，r = 0． 999 6(n =
5)。结果表明在大黄素 0． 768 ～ 3． 84 μg /mL 范围内与峰
面积成良好的线性关系。
分别精密吸取大黄酚对照品溶液(含大黄酚 0． 102 mg /
mL)0． 5、1、2、3、4 mL置 25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至
刻度，摇匀。分别精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，记录峰
面积。得进样质量浓度 C(μg /mL)与峰面积 A的线性方程:
A = 39 750 C + 22 239，r = 0． 999 3(n = 5)。结果表明在
大黄酚 2． 04 ～ 16． 32 μg /mL范围内与峰面积成良好的线性
关系。
供试品溶液的制备:精密量取正交试验所得各样品溶液
50 mL，置具塞锥形瓶中，挥去溶剂，加 8%盐酸溶液 20 mL，
超声处理 5 min，再加三氯甲烷 20 mL，加热回流 1 h，放冷，
置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，
分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取 2 次，每次 10 mL，
合并三氯甲烷液，以无水硫酸钠脱水，三氯甲烷液置水浴上
蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至 25 mL量瓶中，用少量甲醇
分次洗涤容器，洗涤液转移至同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇
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第 33 卷 第 12 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
December 2011
Vol． 33 No． 12
A B
C D
图 1 大黄素对照品(A)、大黄酚对照品(B)、供试品(C)和阴性样品(D)HPLC图
1．大黄素 2．大黄酚
匀，滤过(0． 45 μm微孔滤膜) ，取续滤液，即得。
总蒽醌测定方法:精密吸取对照品溶液和供试品溶液各
10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，外标法求得
大黄素和大黄酚总量，并按下式计算。总蒽醌提取率 =(大
黄素和大黄酚总量)/大黄药材质量 × 100%。
重复性考察:精密吸取同一份供试品溶液 10 μL，按上述
色谱条件重复进样 5 次，测定，计算供试品溶液中大黄素峰
面积值的 RSD为 1． 56%，大黄酚峰面积值的 RSD为1． 24%，
表明精密度良好。
精密度考察:精密吸取同一份供试品溶液 10 μL，每隔 2
h按上述色谱条件测定，共测定 5 次，计算总蒽醌提取率的
RSD为 0． 49%，表明供试品溶液在 10 h内稳定。
加样回收率试验:精密称取已知大黄素、大黄酚含量的
供试品溶液 9 份，分别按 80%、100%、120% 3 个质量分数精
密加入对照品溶液适量，按供试品溶液的制备项下方法处
理，结果显示大黄素和大黄酚的平均回收率分别为 95． 60%
(n = 9)、96． 62%(n = 9) ，RSD 值分别为 1． 18%(n = 9)、
0． 38%(n = 9)。
2． 1． 2 浸膏得率 精密量取正交试验所得各样品溶液 100
mL，置已干燥至恒质量并称质量的蒸发皿中，水浴蒸干，于
105 ℃干燥至恒质量，取出，迅速置干燥器中冷却，称质量，按
下式计算。浸膏得率 =干浸膏质量 /药材质量 × 100%。
2． 1． 3 正丁醇萃取物得率 精密量取正交试验所得各样品
溶液 200 mL，挥去乙醇，干燥物加正丁醇萃取 3 次(30、50、50
mL) ，萃取液置已干燥至恒质量并称质量的蒸发皿中，水浴
蒸干，于 105 ℃干燥至恒质量，取出，迅速置干燥器中冷却，
称质量。按下式计算。正丁醇萃取物得率 =(正丁醇浸出物
质量 /干燥的乙醇浸出物质量)× 100%
2． 1． 4 三氯甲烷萃取物得率 精密量取正交试验所得各样
品溶液 200 mL，挥去乙醇，干燥物加三氯甲烷萃取 3 次(30、
50、50 mL) ，萃取液置已干燥至恒质量并称质量的蒸发皿中，
水浴蒸干，于 105 ℃干燥至恒质量，取出，迅速置干燥器中冷
却称质量。按下式计算。三氯甲烷萃取物得率 =(三氯甲烷
浸出物质量 /干燥的乙醇浸出物质量)× 100%
2． 1． 5 综合评分计算方法 根据各指标对提取效率的贡献
大小，分别赋予一定的权重。综合评分 =(总蒽醌提取率 /最
大总蒽醌提取率) × 0． 5 + (正丁醇萃取物得率 /最大正丁
醇萃取物得率) × 0． 2 + (三氯甲烷浸出物得率 /最大三氯
甲烷萃取物得率)× 0． 2 +(浸膏得率 /最大浸膏得率)× 0． 1
2． 2 乙醇提取正交试验［2］
2． 2． 1 因素水平安排 依据单因素试验结果，初步确定了
各因素各水平的大致用量范围，在此基础上，固定提取次数
为 2 次，考察提取乙醇浓度(A)、提取时间(B)、加醇量(C)
三个因素对总蒽醌提取率、三氯甲烷萃取物得率，结合正丁
醇萃取物得率及浸膏得率的影响。按 L9(3
4)正交试验表设
计试验，因素水平见表 1。
表 1 因素水平表
水 平
A B C
A 含乙醇量 /% 提取时间 /h 加醇量 /倍
1 60 1． 0 6
2 70 1． 5 8
3 80 2． 0 10
2． 2． 2 正交试验结果 结果见表 2，方差分析见表 3。
由直观分析和方差分析知，3 个因素对综合评分的影响
大小顺序为:A(含乙醇量)＞ B(提取时间)＞ C(加醇量)。
其中 A因素具显著性影响(P ﹤ 0． 05) ，B、C 的影响均无显
著性(P ﹥ 0． 05) ，从节能降耗角度考虑，以 A3B2C2 组合为
佳，即加 8 倍量 80%乙醇提取 2 次，每次 1． 5 h。
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Vol． 33 No． 12
表 2 L9(3
4)正交试验表
No． A B C D
总蒽醌提取率
/(mg /g)
正丁醇萃取
物得率 /%
三氯甲烷萃取
物得率 /%
浸膏得率
/%
综合评分
1 1 1 1 1 8． 27 2． 30 10． 89 12． 52 50． 25
2 1 2 2 2 7． 67 10． 02 16． 39 18． 07 68． 25
3 1 3 3 3 8． 60 6． 82 16． 52 18． 55 67． 80
4 2 1 2 3 9． 12 12． 21 10． 67 16． 33 68． 12
5 2 2 3 1 6． 35 14． 92 14． 59 18． 69 68． 62
6 2 3 1 2 9． 37 11． 08 10． 62 14． 66 66． 47
7 3 1 3 2 14． 44 9． 80 11． 89 15． 78 83． 64
8 3 2 1 3 15． 15 11． 01 12． 34 16． 85 88． 72
9 3 3 2 1 14． 99 10． 15 14． 39 18． 41 90． 34
K1 186． 30 202． 01 205． 44 209． 21
K2 203． 21 225． 59 226． 71 218． 36
K3 262． 70 224． 61 220． 06 224． 64
R 76． 40 33． 58 21． 27 15． 43
注:表注前空两格。
表 3 方差分析
方差来源
离差差
平方和
自由度 方差 F值 显著性
A 1 073． 552 0 2 536． 776 0 26． 764 2 *
B 118． 637 4 2 59． 318 7 2． 955 7
C 78． 931 1 2 39． 465 5 1． 966 5
D 40． 138 4 2 20． 069 2
总变异 1 311． 259 0 8
注:F0． 05(2，2)= 19． 00，* P ＜ 0． 05
2． 2． 3 验证试验 因优选工艺未包括在正交设计中，故进
行了验证，结果见表 4。
表 4 正交试验设计验证试验结果
次数
总蒽醌提取
率 /(mg /g)
正丁醇萃取
物得率 /%
三氯甲烷萃
取物得率 /%
浸膏得率
/%
1 13． 09 15． 88 7． 22 19． 78
2 17． 62 16． 32 8． 78 19． 41
3 15． 03 13． 31 9． 64 20． 11
注:表注前空两格。
3 批验证试验表明，各项指标高于正交试验的结果，表明
优化工艺稳定可行。
3 讨论
实验通过分析处方中各药材的化学成分，发现刺山柑、
波棱瓜子、唐古特乌头、角茴香中含有大量生物碱［3-8］，苦荬
菜、波棱瓜子、木香中含的三萜、甾醇、香豆素、倍半萜类成
分［7-10］，大黄中含蒽醌类衍生物，这些成分与本方功效主治
相关。所以，本实验选用乙醇作为提取溶媒，并考察了乙醇
浓度及用量、提取时间对主要指标的影响，药材中的有效成
分得到充分提取，同时降低了杂质的含量。
中药复方的成分复杂，采用几个指标成分或药效成分很
难真实反映提取工艺的优劣，本实验同时采用三氯甲烷萃取
物得率和正丁醇萃取物得率为考察指标，兼顾了脂溶性成分
和黄酮类等成分的提取率，并根据相对贡献值分配权重。通
过上述考察指标，使工艺考察紧扣处方功能主治，保证了临
床有效性。
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