全 文 ：北方园艺 2007(3):113 ～ 115 园林花卉
第一作者简介:刘世旺, 男, 1965年生 ,医学硕士, 副教授, 现从事
生物化学和植物资源学方面的教学与科研工作 , E - mail:swlsw
@hgnc, net。
基金项目:湖北省教育厅重点科研项目 ,编号:2000A47003;黄冈
师范学院自然科学重点项目,编号:06CA23。
收稿日期:2006- 10 - 11
酢浆草乙醇提取物对细菌生长曲线的影响
刘 世旺 , 徐艳 霞 , 石 宏武
(黄冈师范学院生命科学与工程学院 ,湖北黄州 438000)
　　摘　要:研究酢浆草乙醇提取物的抑菌活性。以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为实验菌株 ,通
过比较和分析不同酢浆草提取物浓度下细菌生长曲线的变化来研究酢浆草的抑菌作用特点。结
果表明 ,0. 01g /mL的提取物对摇床培养的金黄色葡萄球菌生长具有明显的抑制作用;但各种浓
度的提取物对摇床培养的大肠杆菌生长均无抑制作用。得到结论 ,酢浆草乙醇提取物具有选择
性抑菌作用。
关键词:酢浆草;乙醇提取物;生长曲线;抑菌作用
中图分类号:Q 949. 72　文献标识码:A　文章编号:1001 -009(2007)03 -0113 - 03
　　酢浆草(Oxalis corniculata L.),又名三叶草 、幸运
草 ,按植物学分类 ,它属于酢浆草科酢浆草属多年生宿
根草本植物。酢浆草广布于世界各地 ,因其具有植株低
矮、整齐 ,花多叶繁 ,花期长 ,花色艳 ,覆盖地面迅速 ,又能
抑制杂草生长等诸多优点 ,所以很适合在花坛 、花径 、疏
林地及林缘大片种植 ,是一种极好的地被和盆栽植物。
同时 ,酢浆草全草均可入药 ,有清热解毒 、利尿消肿 、散
瘀止痛作用 ,主治尿路感染 、肝炎 、跌打损伤 、疮节肿痛
诸症[ 1] 。《本草纲目》说它“主小便诸淋 ,赤白带下。”但目
前 ,酢浆草药理方面的相关研究报道很少[ 2 - 4] ,开展酢浆
草乙醇提取物影响细菌生长曲线的研究 ,对于进一步了
解药用机理和综合开发利用具有重要意义。
1　试验条件
1. 1　试验材料
酢浆草采自湖北省黄冈师范学院生命科学与工程
学院植物园。金黄色葡萄球菌(S. aureus)和大肠杆菌
(E. coli)菌种由黄冈师范学院省级生物实验教学示范
中心提供。
1. 2　试验仪器
分光光度计(752紫外可见分光光度计)、超净工作
台、高压灭菌锅 、恒温培养箱 、恒温水浴培养摇床 、旋转
蒸发仪 、真空泵(SHZ—Ⅲ型循环水真空泵)、电子天平 、
移液枪等。
1. 3　培养基配方
牛肉膏固体培养基:牛肉膏 3 g ,蛋白胨 5 g , NaCl
5 g ,蒸馏水1 000 mL ,琼脂 15 ～ 20 g ,pH 7. 4;察氏液体
培养基:NaNO3 2 g , K2HPO 41 g ,KCl 0. 5 g , MgSO40. 5
g ,FeSO40. 01 g ,蔗糖30 g ,蒸馏水 1 000 mL ,pH 自然。
2　试验方法
2. 1　酢浆草水分含量测定及酢浆草乙醇提取物制备
将鲜采的植物全株洗净 、晾干 、剪碎 ,称取 20. 00 g ,
置于 75℃恒温烘箱中烘 15 h左右 ,使其达到恒重 ,再次
称重得 3. 91g ,所以试验所用的酢浆草材料的含水量为
80. 45%。另取 10 kg酢浆草(折算后干重为 1 955 g)置
入 95%酒精中浸泡30 d ,期间经常搅拌。然后用棉花阻
隔过滤 ,滤液用旋转蒸发仪蒸发浓缩 ,得膏状物4 147 g。
通过烘干和称重得知被乙醇浸泡提取后的酢浆草残渣
干重为 1 700 g ,可见酢浆草原材料中有255 g 成分被提
取进入膏状物中 ,膏状物的含水量约为 93. 8%,1 g膏状
物相当于 0. 47g 干燥酢浆草。膏状物冷藏备用[ 5] 。
2. 2　培养基及试验用品灭菌
配制察氏液体培养基 360 mL ,平均分装于 36支试
管中;配制牛肉膏固体培养基 500 mL;将以上两种培养
基和若干包扎好的试管 、小烧杯、移液枪枪头等置于高
压灭菌锅内 ,121℃湿热灭菌 20 min;然后于超净工作台
上趁热将部分固体培养基分装于 4支已灭菌的大试管
中制成斜面。将所有分装好的培养基及斜面置于 37℃
恒温培养箱中做无菌检测试验 ,无污染的斜面用于活化
菌种 、液体培养基用于后述分组试验。
2. 3　液体培养基分组
将准备好的装有察氏液体培养基的36支试管分为
2组:A组即金黄色葡萄球菌组 ,B组即大肠杆菌组。每
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组设计 0. 50 g /mL 、0. 25 g /mL、0. 10 g /mL 、0. 05 g /mL 、
0. 01 g /mL、0 g /mL(空白对照)等 6个酢浆草提取物浓
度梯度 ,并按照梯度要求分别称取冷藏备用的酢浆草乙
醇提取物 5. 0g 、2. 5g 、1. 0g 、0. 5g 、0. 1g 等分别煮沸并加
入到对应试管中。由于每支试管中已有察氏液体培养
基10 mL ,所以提取物加毕即符合上述设计的浓度梯度
要求。然后再向每支试管中接入已活化的对应菌液
0. 1 ml ,适当振荡混匀。每组重复3次。贴上标签 ,准备
进行 OD420测定和摇床培养。
2. 4　OD420值的测定和微生物培养
制成上述混合培养液后即进行第一次 OD420值的测
定 ,测定后将试管置于 37℃恒温培养摇床中培养。之后
每间隔 2. 5 h测定并记录 OD420值一次 ,OD420值测定时
以未接种且未加入酢浆草提取物的察氏液体培养基作
空白。在测定过程中应尽量减少培养液在空气中的暴
露时间 ,所用枪头和移液管应在每次吸取液体后进行更
换 ,试管中的液体在吸取前应适当振荡。每次测定完毕
后 ,须用液体培养基涮洗比色杯 3 次。每次读出的
OD420值最好不超过 0. 40 ,超出时 ,应进行适当稀释并重
新测定 ,测定的 OD值乘以稀释倍数后即为实际的 OD
值[ 6] 。
2. 5　绘制细菌生长曲线
根据3次重复测定所得的数据求出OD420平均值 ,然
后以OD420为纵坐标 、时间为横坐标分别绘出生长曲线。
3　结果与讨论
3. 1试验测得的生长曲线
试验测得 A组的生长曲线见图1 ,测得B组的生长
曲线见图 2。
3. 2　结果分析
由于酢浆草提取物本身对 OD值会产生影响 ,而每
支试管中加入的提取物的量又各不相同 ,所以使得图 1
和图 2中各条曲线的起点高低不同。这样的曲线虽然
可以清晰地显示每支试管中培养液 OD值的变化情况 ,
但是难以比较不同提取物浓度组的细菌生长曲线。设
法剔除提取物对OD值的影响 ,并使各条曲线处于同一
起点上 ,将有利于生长曲线的比较和分析。我们发现 ,
图1和图2中0 g /mL浓度组0 h时的OD值(图中曲线
加粗显示)是培养基和起始菌液二者吸光度的总和 ,而
其余各浓度组 0 h时的 OD值则是培养基、起始菌液和
酢浆草提取物三者吸光度的总和。上述两个总和的差
值即可近似地认为是酢浆草提取物的吸光度。将含酢
浆草提取物的各浓度组的数据均减去酢浆草提取物本
身的 OD值(即上述差值),即可近似的反映出不同时间
培养液中菌体的实际浓度 ,由此作出的生长曲线将具有
相同的起点。按照这一处理方法 ,分别得出 A组 、B组
的生长曲线比较图如图 3和图 4。
从图 3中可以看到:酢浆草提取物 0. 01g /mL 组生
长曲线的对数期和稳定期区段均位于对照组之下 ,表明
此时葡萄球菌生长受到明显抑制;但其余 4个高浓度组
则相反 ,生长曲线的稳定期区段均位于对照组之上 ,表
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明此时葡萄球菌生长不但未受到抑制 ,反而还受到促
进 ,其中以0. 10 g /mL组的促进作用最强;同时 , 4个高
浓度组的生长曲线对数期均比对照组提前 ,表明各试管
中葡萄球菌均只需较短的时间就能达到稳定期。
从图 4中可以看到:酢浆草提取物各浓度组的生长
曲线均位于对照组之上 ,表明各试验浓度组中的酢浆草
提取物不仅对大肠杆菌生长无抑制作用 ,反而还有促进
生长的作用 ,其中尤以 0. 10g /mL组的促进作用最强 ,其
他实验组的浓度值越偏离 0. 10 g /mL ,则其促进作用
越弱。
3. 3 　讨论
利用生长曲线的变化揭示药物的抑菌效果 ,不同于
以往直接求 MIC(最小抑菌浓度)的方法。MIC 只能定
性的判断药物对细菌有无作用 ,却无法揭示药物对细菌
群体整个生长增殖周期的影响情况。相反 ,生长曲线法
则可通过生长曲线反映微生物的群体生长规律 ,并从中
探知微生物对环境的适应快慢程度 、微生物对培养基成
分的利用情况 、药物中不同成分对微生物产生的不同作
用以及药效最强和最弱的时间等多种有意义的信息。
例如从图 3中我们可以看出 0. 01 g /mL 的酢浆草提取
物对葡萄球菌具有很明显的抑制作用 ,但这种抑制作用
必须要等到菌体进入对数生长期后才能显现出来。
加入酢浆草提取物后菌体的生长曲线都发生了变
化 ,其中比较普遍的现象是对数生长期提前 ,尤其是
0. 10g /mL浓度组的曲线 ,迟缓期几乎为零 ,菌体生长几
乎直接进入对数期。生长曲线迟缓期的长短一般可因
菌种 、接种菌量 、菌龄以及营养物质等不同而异 ,试验中
迟缓期缩短甚至消失的原因可能是酢浆草提取物中的
某些成分直接刺激了菌体 ,诱发菌体提前进入对数生长
状态。
提取物抑制或促进细菌生长的活性与其浓度之间
并不呈正比关系 ,而是表现成一种最适的峰值浓度 ,如
0. 10g /mL浓度的提取物不管是对葡萄球菌还是对大肠
杆菌都表现出最强的促进生长作用 ,高于或低于这一浓
度时 ,其促进作用明显减弱。
综合研究药用植物成分对菌体生长的不同作用是
一个新的研究方向。例如 ,提取物中有些成分可能会作
为菌体生长的“营养物质”被其利用或刺激菌体发生应
激反应 ,从而促进细菌生长繁殖;相反 ,另一些成分可能
作为菌体生长的抑制成分而作用于细菌 ,影响菌体正常
的生长和增殖;还有 ,所用菌种在某些成分作用下都会
产生钝化酶 、菌膜等进而出现耐药性[ 7] 。那么 ,以上三
种因素的综合作用 ,此消彼长 ,将使药物作用过程和机
理更加复杂 ,但同时也给我们提供了广阔的研究思路和
研究方向 ,生长曲线研究法的引入 ,必将吸引更多的学
者开展这方面的研究和探讨。
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Effect of the Ethanol Extract of Oxalis corniculata L
on the Growth Curve of Bacterium
LIU Shi-w ang , XU Yan-xia ,SHI Hong-wu
(Life Science and Engineering College, Huanggang Normal University , Huangzhou 438000)
Abstract:Investigated the antimicrobial effect of Oxaliscorniculata L. . Drew the growth curve of Staphylocococus aureus
and Escherickia coli by determining OD420 , and studied the affect according to the change of the grow th curve. Results
showed that 0. 01g /mL extract ofOxalis corniculata L. had obvious antimicrobial effect on S. aureus , but all extract of
Oxalis corniculata L. has not any antimicrobial effect on E. coli. The ethanol Extract of Oxalis corniculata L. had selec-
tive antimicrobial effect.
Keywords:Oxalis corniculata L. ;Ethanol ext ract;Grow th curve of bacterium;Antimicrobial effect
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