全 文 ：在一次色谱分析过程中 , 浓度小的盐酸利多卡因和
地塞米松选用 0.02 AUFS , 卡巴芬乙酸 (钠盐)及
保泰松钠选用 0.5AUFS。
图 1 样品 (A)与对照品 (B)色谱图
Fig 1 Chromatograms of sample(A)and chemical reference substance(B)
1.盐多利多卡因(lidocaine hydrochloride , 1.6 min) 2.地塞米松
(dexamethasone , 3.1 min) 3.卡巴芬乙酸(钠盐)[ o-carbamoylphe-
noxyacetic acid(sodium salt), 6.5 min] 4.保泰松钠(phenylbutazone
sodium , 13.4 min) 5.未知峰(unknown peak , 33.0 min)
6.2 离子对浓度的选择 浓度选用 5 mmol·L-1与
2.5 mmol·L-1 , 分离效果一样 , 但在 5 mmol·L-1
时 , 十六烷基三甲基溴化铵易从流动相中析出。当
浓度达到 8 mmol·L-1时 , 使卡巴芬乙酸 (钠盐)及
保泰松钠峰严重拖尾。当浓度降至 1.5 mmol·L-1
时 , 前面 3种物质分离度不好 。最后浓度选用 2.5
mmol·L-1 。
6.3 流动相的选择 曾选用甲醇-水 (7∶3)系统
时效果最好 , 但保泰松钠峰拖尾较严重。后改用乙
腈-水 (45∶55)系统 , 效果良好 。
6.4 检测波长的选择 在此流动相中 , 盐酸利多
卡因的最大吸收在 230 nm 附近 , 地塞米松在 240
nm , 卡巴芬乙酸 (钠盐)在 230 nm , 保泰松钠最
小吸收在 235 nm 。因盐酸利多卡因与卡巴芬乙酸
(钠盐)的吸收系数均较小 , 故选用 230 nm 作为检
测波长 。
6.5 柱温的影响 在室温条件下 , 保泰松钠的保
留时间较长 , 在不宜选用太高温度且保留时间适中
的前提下 , 选用 40 ℃的柱温。
6.6 保泰松钠稳定性的研究 在样品分析中 , 出
现 1个未知峰 , 未知物峰面积随贮存时间的长短而
变化。贮存时间越长 , 未知峰面积越大 , 且保泰松
钠的正常峰的含量偏低 。若与未知峰合并计算 , 则
含量正常。再按原厂订方法进行薄层扫描测定保泰
松钠 , 仅在溶剂前沿出现 1个斑点 。若稍改变展开
剂的比例 , 便会出现 2 ～ 3 个斑点。因此 , 估计未
知峰是保泰松钠的分解产物 。引起保泰松钠分解的
原因还待进一步研究。
参考文献
1 ZHANG Xin-zhong (张新中).The High Performance Liquid Chro-
matography Analysis (高效液相色谱分析).Beijing Academic Jour-
nal Publi shing House (北京学术刊物出版社), 1989.129 (in
Chinese)
(本文于 2000年 12月 5日修改回)
＊国家科技攻关有关项目
HPLC法测定白花前胡中白花前胡丙素和
紫花前胡中紫花前胡苷的含量＊
徐 勤
(桂林医学院药学系药分教研室 桂林 541004)
刘布鸣
(广西区中医药研究所仪器分析室 南宁 530022)
张正行
(中国药科大学药物分析研究室 南京 210009)
摘要 目的:建立高效液相色谱法测定白花前胡根中白花前胡丙素 (dl-praeruptorin A , Pd-Ia)和紫花前胡根中紫花前胡
苷 (nodakenin , NDK)含量的方法。方法:色谱柱Shim-Pack CLC-ODS , Pd-Ia的流动相为甲醇-水 (79∶21)和NDK 的流
·91· 21 (2), 2001
DOI :10.16155/j.0254-1793.2001.02.007
动相为乙腈-甲醇-水 (20∶5∶75), 流速为1.0 mL·min -1 , 紫外检测波长分别为 323和 334 nm。结果:Pd-Ia 及 NDK的线
性范围分别为 0.08 ～ 0.8 μg 和 0.01 ～ 0.10 μg , 相关系数均为 0.999 9 , 平均回收率分别为 98.53%～ 99.27%和 97.60%～
99.87%, RSD小于 2%。结论:方法准确 , 简便 , 快速 , 灵敏度高 , 对常用中药前胡的质量控制有较重要意义。
关键词 白花前胡 紫花前胡 白花前胡丙素 紫花前胡苷 高效液相色谱
HPLC Determination of dl-Praeruptorin A in Peucedanum praeruptorum
Maxim.and Nodakenin in Peucedanum decursivum Dunn.
XU Qin
(Department of Pharmaceutical Analysis , Guilin Medical College , Guilin 541004)
LIU Bu-ming
(Guangxi Institute of Traditional Chinese Medicine , Nanning 530022)
ZHANG Zheng-xing
(Department of Pharmaceutical Analysis , China Pharmaceutical University , Nanjing 210009)
Abstract Objective:To establish a method for determination of the contents of dl-praeruptorin A (Pd-Ia)in roots
of Peucedanum praeruptorum Maxim.and nodakenin (NDK)in roots of Peucedanum decursivum Dunn.by HPLC.
Methods:The chromatographic condition:Shim-Pack CLC-ODS column (6.0 mm×150 mm , 10 μm), CH3OH
-H2O (79∶21)for Pd-Ia and H2O-CH3OH-CH3CN (75∶5∶20)for NDK as mobile phase , the flow rate was 1.0
mL·min-1 , the column temperature was 40 ℃, the detection wavelength was 323 nm , 334 nm for Pd-Ia and for
NDK.The calibration curves showed good linearity in the range of 0.08 ～ 0.8μg and 0.01 ～ 0.1μg , r=0.999 9 and
0.999 9 respectively.The average recoveries were 98.53%～ 99.27% and 97.60%～ 99.87%, RSD was less than
2% respectively.Conclusion:The method is simple , sensitive , rapid and accurate , and can be used for the quality
control of Chinese medicine Qianhu.
Key words Peucedanum praeruptorum Dunn , Peucedanum decursivum Maxim , dl -praeruptorin A (Pd -Ia),
nodakenin (NDK), HPLC
前胡属植物全世界约有 130种 , 中国产 30 余
种 , 多为野生 , 南北均产 。但其作药用的大约有 8
种。前胡为历代本草收载的正品前胡 , 也是市场商
品的主要来源。分布于我国南部各省区 , 以四川和
浙江资源最丰富 , 常生于 250 ～ 2 000 m 的山坡林
缘[ 1] 。中国药典规定 , 中药前胡为伞形科前胡属植
物白花前胡 (Peucedanum praeruptorum Dunn.)和紫
花前胡 (Peucedanum decursivum Maxim.)的干燥根 ,
是我国的传统中药 , 具有疏风清热 , 止咳祛痰的功
效 , 为常用中药之一 。现时广泛用于风热感冒 、 胸
肋不畅 、喘满及咳嗽等症[ 2] 。中国药典 (1995 年
版)对前胡的质控只采用简单的荧光 、 显色等定性
方法[ 2] , 这些实验无法检测代表前胡药效的有效成
分的含量 , 难以控制药材的真伪和优劣 。前胡质量
控制的文献报道不多 , 有用脉冲极谱法[ 3] 和紫外
法[ 4] 测定前胡香豆素类化合物的含量 , 亦有采用
HPLC法测定前胡有效成分的含量[ 5 ～ 8] , 以上各种
方法各有其特点 , 为本文研究前胡的质量控制提供
一定的依据。
前胡中的主要化学成分为香豆素类化合物 , 其
中白花前胡以角形吡喃香豆素为主 , 紫花前胡以线
形吡喃和线形呋喃香豆素为主。白花前胡丙素 (dl
-praeruptorin A , Pd-Ia)、 紫花前胡苷 (nodaken-
in , NDK)为前胡的有效成分[ 9] , 前者主要存在于
白花前胡中 , 后者主要存在于紫花前胡中 。现代药
理实验证明 , Pd-Ia能显著增加冠状动脉血流量的
作用 , 其在治疗心血管疾病方面存在广阔前景;而
NDK具有明显的抗血小板聚集作用 , 这对开发抗
血小板聚集作用新药有重大意义 。前胡有效成分的
生理活性引起国内外学者的广泛关注 , 一些以前胡
为主要成分的中药方剂和中成药已投入市场 , 为保
证用药安全 、有效 , 必须建立含量测定方法 , 制定
药材规格 。为此 , 我们对前胡的质量控制进行研
究 , 提出以白花前胡中的 Pd -Ia 和紫花前胡中
NDK作为前胡质量控制的指标 , 选用 HPLC法 , 实
现对其质量的有效质控 。本文应用该法测定了不同
产地 、不同商品来源的 20个前胡样品 , 为中药前
胡标准化的研究 , 建立符合国情 , 控制前胡品种质
·92· 药物分析杂志
量的方法提供了有意义的参考 。
1 仪器 、试剂和药品
岛津 LC-6A液相色谱仪 , SPD-6AV 紫外检
测器。C-R4A色谱数据处理仪 。Pd-Ia和 NDK对
照品由广西区中医药研究所植化室黄平提供 , 并经
各种理化常数和波谱数据鉴定 。实验所用甲醇 、 乙
腈为色谱纯 , 其它溶剂为分析纯。水为重蒸馏水 。
自各地采集收购的样品 , 经广西区中医药研究所中
药室赖茂祥鉴定 , 均为伞形科植物正品前胡的干燥
根 , 其根洗净 , 晾干 , 粉碎过 40目筛 , 于 50 ℃干
燥6 h后 , 置干燥器备用。样品材料及来源见表 1
和2。定量分析方法学考察采用浙江开化县采集的
白花前胡和河南省信阳市狮港乡采集的紫花前胡样
品。
标准储备液的配制:精密称取 105 ℃干燥至恒
重的对照品 Pd-Ia 10 mg 和 NDK 25 mg , 分别置于
100 mL 和 500 mL容量瓶中 , 加甲醇使溶解并稀释
至刻度 , 摇匀 , 即得 0.1 mg·mL-1和 0.05 mg·mL-1
的标准储备液。
白花前胡根供试品溶液的制备:精密称取干燥
粉碎后的白花前胡根粉末适量 , 置 60 mL 索氏提取
器中 , 加入氯仿为提取溶剂 , 提取约 6 h , 回收氯
仿 , 残渣以甲醇溶解并定容至 5 mL , 制成供试品
溶液 。
紫花前胡根供试品溶液的制备:精密称取干燥
粉碎后的紫花前胡根粉末适量 , 置具塞三角瓶中 ,
精密加入甲醇 25 mL , 精密称重 , 浸泡过夜并超声
30 min , 补足溶剂至原重量 , 过滤 , 取续滤液分
析。
2 实验方法
2.1 检测波长的选择 分别用流动相将 Pd-Ia 及
NDK配制成对照品溶液 , 浓度均为 10 μg·mL-1 ,
用PE-lamder 12紫外分光光度计在200 ～ 400 nm 范
围内进行扫描 , 测定吸收波长 , Pd-Ia 及 NDK 分
别在 323 nm 和 334 nm处有最大吸收 , 故确定 323
nm 、 334 nm为检测波长。
2.2 色谱条件 Shim-Pack CLC -ODS (6.0 mm
×150mm , 10μm)柱 , 甲醇-水 (79∶21)为Pd-
Ia的流动相 , 乙腈-甲醇-水 (20∶5∶75)为 NDK
的流动相 , 紫外检测 (λPd-Ia =323 nm , λNDK =334
nm)。柱温为 40 ℃, 流速 1.0 mL·min-1 , 进样量为
10 μL。以 Pd-Ia 色谱峰计算柱效为 9.38×103 。图
1和图 2说明在上述色谱条件下测定白花前胡样品
中Pd-Ia和紫花前胡样品中 NDK , 其它组分无干
扰 。白花前胡样品中 NDK含量甚微 , 而在紫花前
胡样品中几乎不含 Pd-Ia。
图 1 色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms
A.对照品 (chemical reference substance)
B.白花前胡根供试品 (sample of Peucedanum praeruptorum)
1.Pd-Ia
图 2 色谱图
Fig 2 HPLC chromatograms
A.对照品 (chemical reference substance)
B.紫花前胡根供试品 (sample of Peucedanum decursivum)
1.NDK
2.3 线性关系考察 精密吸取 Pd-Ia和 NDK标准
储备液 0.8 , 2.0 , 4.0 , 6.0 , 8.0 mL 和 NDK 标准
储备液 0.2 , 0.5 , 1.0 , 1.5 , 2.0 mL , 分别加甲醇
·93· 21 (2), 2001
定容至 10 mL , 配成不同浓度对照品溶液系列 , 各
进样 10μL (n=5)。以峰面积对进样量 (μg)作
回归计算 , 得 Pd-Ia及 NDK回归方程分别为:
Y =2.329×105X -2.903×102 r=0.999 9
Y =2.488×105X -1.948×102 r=0.999 9
线性范围分别为 0.08 ～ 0.8μg 及 0.01 ～ 0.1μg 。
2.4 进样精密度试验 分别取 2 种供试品溶液 ,
按含量测定项下操作 , 连续重复进样 5次 , 结果白
花前胡根中 Pd-Ia及紫花前胡根中 NDK平均含量
分别为 1.625%及 3.089%, RSD 分别为 1.1%及
0.53%。
2.5 灵敏度实验 按信噪比 3∶1 计 , 测得的白花
前胡根中 Pd-Ia的最低检测量为 1.0×10-3 μg (S
N≥3), 紫花前胡根中的 NDK最低检测量为 0.6×
10
-3 μg (S N≥3)。
2.6 重复性实验 精密称取同种生药材适量 5份 ,
按样品含量测定项下操作 , 结果白花前胡根中 Pd
-Ia 及紫花前胡根中 NDK 平均含量为 1.629%和
3.090%, RSD分别为 1.5%和 1.8%, n=5。
2.7 回收率试验 分别将一定量的 Pd-Ia和 NDK
标准储备液加入已测知含量的适量生药材中 , 依法
提取测定 , 计算加样回收率 , 测定结果见表 1。
表 1 Pd-Ia、 NDK加样回收率实验测定结果 (n=3)
Tab 1 Measured results of recoveries of the method
样品
(sample)
样品液中含量
(contained) mg
加入量
(added) mg
回收率
(recovery)
±RSD %
Pd-Ia in
Peucedanum praeruptorum
0.56
2.25
0.500
1.000
99.27±1.7
98.53±2.0
NDK in
Peucedanum decursivum
1.21
4.39
1.000
2.000
99.87±1.3
97.60±2.0
2.8 样品测定 取不同产地和不同商品来源的白
花前胡供试品溶液及紫花前胡供试品溶液各 1.0
mL , 以甲醇稀释至 10 mL (湖南新晃及江西萍乡的
供试品溶液不稀释), 按上述色谱条件 , 测定 Pd-
Ia及NDK的含量 。结果见表2 , 表 3。
3 讨论
3.1 流动相的选择 我们参照文献 [ 5] , 以甲醇
-水为流动相 , 以不同的配比进行实验 , 经反复实
验 , 发现甲醇-水 (79∶21)为流动相时 , 可使白
花前胡中的 Pd-Ia 和其它结构相似成分得到分离
(图 1), 而紫花前胡样品采用该流动相 , 样品不能
被完全分离 , 加入有机改良剂乙腈时 , 分离有了明
显改善 , 因此 , 我们选择甲醇-乙腈-水 (5∶20∶
表 2 不同产地前胡中 Pd-Ia及 NDK含量测定结果
(%, n=3)
Tab 2 Contents of Pd-Ia and NDK in Qianhu
from different habitats
样品 (sample) 产地 (habitats) Pd-Ia NDK
白花前胡
(P.praeruptorum)
浙江梅城
(Zhejiang Meicheng)
1.440 (1.7)
浙江开化
(Zhejiang Kaihua)
1.638 (1.7)
浙江临安
(Zhejiang Linan)
1.153 (1.9)
安徽黄山
(Anhui Huangshan)
1.562 (2.0)
湖南怀化
(Hunan Huaihua)
1.284 (1.5)
湖南新晃
(Hunan Xinhuang)
0.026 (1.0)
紫花前胡
(P.decursivum)
广西兴安
(Guangxi Xingan)
1.992(1.2)
江西武宁
(Jiangxi Wuning)
2.886(2.3)
河南罗山
(Henan Luoshan)
2.398(1.5)
浙江梅城
(Zhejiang Meicheng)
2.006(1.9)
江西修水
(Jiangxi Xiushui)
1.112 (0.19)
河南信阳
(Henan Xinyang)
3.090(1.8)
注:括号内为 RSD (%)值
Note:The data in the paren is RSD (%)
表 3 不同商品来源前胡中 Pd-Ia及 NDK含量测定结果
(%, n=3)
Tab 3 Contents of Pd-Ia and NDK in Qianhu
from different collected areas
样品 (sample) 收集地(collected areas) Pd-Ia NDK
白花前胡
(P.praeruptorum)
湖南长沙
(Hunan Changsha)
1.723 (1.1)
江苏南京
(Jiangsu Nanjing)
1.353 (1.4)
广西南宁
(Guangxi Nanning)
1.239 (1.6)
江西萍乡
(Jiangxi Pingxiang)
0.020 (2.3)
紫花前胡
(P.decursivum)
河南罗山
(Henan Luoshan)
1.124 (0.38)
河南信阳
(Henan Xinyang)
1.240 (0.97)
江西武宁
(Jiangxi Wuning)
2.882(1.9)
上海
(Shanghai)
1.076(1.9)
注:括号内为 RSD (%)值
Note:RSD (%)is in the paren
·94· 药物分析杂志
75)为流动相时 , 可使紫花前胡中 NDK和其它成
分得到分离 (图 2)。在以上条件下 , Pd -Ia 和
NDK的出峰时间分别为 6.98 min和 10.19 min , 达
到了快速分析的目的 。
3.2 溶剂及抽取方法的试验 本文白花前胡根中
提取Pd-Ia 的方法参考文献 [ 5] , 用氯仿提取较
好。在此对紫花前胡根中提取 NDK 的条件进行考
察。分别采用不同的提取溶剂 (甲醇 、 醋酸乙酯 、
乙醚)及提取方法 (索氏提取 、浸泡过夜并超声波
抽提)来测定 NDK 的提取效果。其中以甲醇浸泡
过夜并超声波抽提所得到的溶液中 NDK 含量为最
高 , 约比用醋酸乙酯回流 6 h高出 4倍 。另外比较
了抽提时间的影响 , 发现用超声波抽提 30 min 和
45 min基本上没有差别。所以 , 最后确定的提取方
式为用甲醇浸泡过夜 , 超声波振荡 30 min。
3.3 本文应用建立的色谱条件 , 对不同产地 、 不
同商品来源的白花前胡和紫花前胡进行考察 , 实验
证明 , 在所测的不同产地的前胡样品中 , Pd-Ia 以
浙江开化县产的含量最高;NDK 以河南省信阳市
狮港乡产的含量最高;不同商品来源前胡的 Pd-Ia
和NDK含量相差不大 , 这些数据为开发中药前胡
资源和中药前胡标准化的研究提供了依据。
致谢:周法兴教授和黄平 、 赖茂祥 、 彭维 、 钟小斌及
广西中医药研究所仪分室的其它老师和桂林医学院药学系
的领导 、 药分教研室的老师对本论文工作给予了大力的支
持和帮助 , 在此一并表示感谢。
参考文献
1 ChP (中国药典).1995.VolⅠ (一部):235
2 ZHANG Xiu-qin (张秀琴).Determination of coumarins in Qianhu
by polarography (极谱法测定前胡香豆素的含量).Bull Chin Ma-
ter Med (中药通报), 1984 , 9(2):79 (in Chinese)
3 PENG Wei (彭维), LIU Bu-ming (刘布鸣), HUANG Ping (黄
平), et al.Determination of total coumarins in Qianhu by UV (紫外
分光光度法测定前胡总香豆素的含量).J Chin Med Mater (中
药材), 1997 , 20 (1):25 (in Chinese)
4 KONG Ling-yi (孔令义), LI Yi (李意), MIN Zhi-da (闵知
大).Study on analysis of Pd-Ia in Peucedanum praeruptorum and Pd
-C-I in Peucedanum decursivum by RP-HPLC (RP-HPLC法分
析白花前胡中Pd-Ia和紫花前胡中 Pd-C-I的含量).J Chi-
na Pharm Univ (中国药科大学学报), 1996 , 27 (4):215 (in
Chinese)
5 LI Yi (李意), KONG Ling-yi (孔令义).Analysis of xanthotoxin
in roots and aerial parts of Peucedanum praeruptorum by RP-HPLC
(RP-HPLC 法分析白花前胡根和茎叶中花椒毒素的含量).
Chin Pharm J (中国药学杂志), 1995, 30 (10):622 (in Chi-
nese)
6 Gu Zheming , Zhang Dexi , Yang Xiuwei , et al.Isolation of two new
coumarin glycosides from Notopterygium forbesii and evaluation of a chi-
nese crude drug , Qiang -Huo , the underground parts of N.incisum
and N.forbesii , by high-performance liquid chromatography.Chem
Pharm Bull , 1990, 38 (9):2498
7 WANG Tian-zhi (王天志), WANG Shu (王曙), MA Peng (马
鹏).Analysis of three coumarins in chinese drug Qianghuo by HPLC
(羌活属植物中 3种香豆素类成分高效液相色谱分析).China J
Chin Mater Med (中国中药杂志), 1995 , 20 (11):683 (in Chi-
nese)
8 KONG Ling-yi (孔令义), PEI Yue-hu (裴月湖), YU Rong-
min (于荣敏), et al.Study on chemistry and pharmacology of Qian
Hu (中药前胡的化学和药理研究概况).World Notes Plant Med
(国外医药植物药分册), 1991 , 6 (6):243 (in Chinese)
9 Shibata S , Okuyama T.Chemistry and pharmacology of QianHu.Ab-
str Chin Med , 1989 , 3 (2):214
(本文于 2000年 1月 10日收到)
HPLC法快速测定 5-氟尿嘧啶血药浓度
刘传华 刘师莲 卞继峰 耿 昭 卢翌 胡海燕
(山东大学医学院分子生物学实验室 济南 250012)
摘要 目的:建立反相高效液相色谱法测定人血清中 5-氟尿嘧啶浓度。方法:血清样品用乙酸乙酯提取 , 水浴氮气吹干 ,
残留物用水溶解后进样。色谱柱为 C18柱 (250 mm×4.6 mm), 水为流动相 , 流速 1.0 mL·min -1 , 紫外检测波长 273 nm , 桂
皮酸为内标。结果:本法最低检测浓度为 0.05μg·mL-1 , 线性范围为 1.0～ 50.0μg·mL-1 , 日内 RSD为 2.7%～ 4.1%, 日间
RSD为 3.8%～ 4.7 (n=4)。结论:该法适用于 5-氟尿嘧啶的药代动力学研究及临床血药浓度检测。试验结果表明 , 该方
法经济 、 简便 、 快速 、 灵敏度高 、 重现性好。
关键词 高效液相色谱 5-氟尿嘧啶 血药浓度
·95· 21 (2), 2001