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第 38卷第 4期
2013年 12月

广 州 化 学
Guangzhou Chemistry

Vol. 38 No. 4
Dec. 2013

文章编号：1009-220X(2013)04-0007-05

明日叶黄酮类化合物清除羟基自由基活性研究
郭晓青 1， 张晓春 1， 陈晓靓 1， 吴金鸿 2*
（1. 贵阳护理职业学院,，贵州贵阳 550081；
2. 上海交通大学 农业与生物学院 陆伯勋食品安全研究中心，上海 200240）

摘 要：为了研究明日叶黄酮类化合物对羟基自由基的清除作用，以明日叶（主要取叶
片）为原料，用体积分数为 65%乙醇提取明日叶总黄酮，测定其总黄酮含量。通过 Fenton
反应体系产生羟基自由基，利用明日叶提取液中的功能成分黄酮类化合物对羟基自由基
的清除作用进行研究。结果表明：明日叶提取物总黄酮质量分数为 10.18%，且黄酮类
化合物对羟基自由基有较强清除效力，当提取物总黄酮浓度在 0.1～1.0 mg/mL范围内，
其与清除率呈正相关。明日叶中黄酮类化合物对羟基自由基有较强清除效力，作为天然
抗氧化产品开发具有一定价值。
关键词：明日叶；总黄酮；羟基自由基；清除率
中图分类号：O629.9 文献标识码：A

明日叶（Angelica keiskei Koidzumi）原产于日本八丈岛，又名八丈草。明日叶具有强韧
的生命力，今日摘明日又长出牙，因而由产地及生长特征而得名[1-2]。明日叶富含黄酮类物
质，具有增强免疫力、防癌抗癌、降血脂、治疗糖尿病、抗炎消炎等功效[3-6]。在生命活动
的氧化代谢产物中会不断产生各种含氧自由基，而自由基被认为是引起人体衰老和某些慢性
疾病发生的原因之一，其中羟基自由基作用最强。黄酮类物质具有良好的抗氧化性，对羟基
自由基具有明显的清除作用[7-8]。本实验研究明日叶总黄酮对羟基自由基的清除能力。
1 实验
1.1 材料与试剂
明日叶，产自上海交通大学农业与生物学院种植实验基地；芦丁标准品，纯度＞98%，上
海融禾医药科技有限公司产品；无水乙醇，硝酸铝，亚硝酸钠，氢氧化钠，硫酸亚铁等，均
为分析纯。

收稿日期：2013-06-25
基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（31000814；31000800）；国家自然科学基金面上项目
（31171642）；上海市科学技术委员会项目（10DZ0504000；1052NM06700）。
作者简介：郭晓青（1964~），女，副教授；研究方向：食品化学。
* 通讯作者：吴金鸿（1978~），女，汉族，副研究员，博士；研究方向：功能食品和食品加工。
wujinhong@sjtu.edu.cn

DOI:10.16560/j.cnki.gzhx.2013.04.014






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1.2 仪器与设备
RT-25粉碎机（北京兴时利和科技发展有限公司）；DK-S26电热恒温水浴锅（上海精宏
实验设备有限公司）；EPPENDOF 5810R离心机（上海肯强仪器有限公司）；DU 800 UV/Vis
分光光度计（美国 Beckman Coulter公司）；旋转蒸发器（上海青浦沪西仪器厂）；FD-1A-50
冷冻干燥机（北京博医康实验仪器公司）。
1.3 实验方法
1.3.1 明日叶总黄酮浸提物的制备
明日叶用水洗净，置于－20℃冷冻 24 h，然后冷冻干燥 22 h，得到脱水明日叶。采用超
低温液氮粉碎的方法将明日叶粉碎，并过 100目筛，得到干燥粉末。按质量体积比为 1∶10
的比例将干燥粉与体积分数为 65%的乙醇溶液混合，在 45℃水浴加热 15 min浸提，浸提液
在 4℃、8 000 r/min条件下离心 20 min，取上清液置于圆底烧瓶中，在 42℃、0.1 MPa条件
下进行旋转蒸馏去除乙醇，将剩余浸提液冷冻干燥，得到明日叶总黄酮浸提物粉末作为样品。
1.3.2 明日叶总黄酮含量的测定
明日叶浸提物总黄酮含量测定采用硝酸铝―亚硝酸钠比色法[9-10]，具体操作方法主要是
参考文献 10，得到芦丁吸光度与质量浓度的标准曲线回归方程 y＝0.006 8x－0.003 5，R2＝
0.994 2。芦丁质量浓度在 0～25 μg /mL范围内呈现良好的线性关系。
明日叶浸提物总黄酮含量测定：取 0.01 g样品, 用体积分数 65%乙醇溶解，定量转移至
10 mL容量瓶，配成 1 mg/mL待测液备用。取 1 mL待测液液，按标准曲线建立的方法测定
吸光度，根据（1）式求出样品液总黄酮质量分数。
a b
6
(
% 100
10
/1.00)/ V V
m
r´ ´
= ´
´
总黄酮质量分数 （1）
式中r为标准曲线回归方程计算出的总黄酮质量浓度（μg/mL），Va 为显色反应总体积
（mL），Vb为样品待测液体积（mL），1.00为显色反应加入样品溶液的体积（mL），m为样
品质量（g）。
1.3.3 明日叶总黄酮对羟基自由基的清除能力的测定[11-1 2]
采用 Fenton反应产生羟基自由基：H2O2＋Fe2+ → OH
－
＋·OH＋Fe3+，水杨酸能有效捕捉
羟基自由基且反应生成有色产物，其有色产物在 510 nm处有较强吸收峰。当在体系中加入
黄酮类物质，由于黄酮具有清除羟基自由基能力，体系颜色发生变化，因此可用分光光度法
测定黄酮类物质对羟基自由基的清除率。由于黄酮在 510 nm处有较强吸收峰，Fe2+可以与
水杨酸形成有一定颜色的络合物，从而对测定水杨酸与羟基自由基反应生成的有色产物产生
影响。因此以硫酸亚铁、水杨酸以及不同浓度的样液混合物为本底吸收，测定本底吸光度，
在计算中扣除。
i j
c
( OH)/ % 1 A AE
A
-
× = - ´100 （2）
E为羟基自由基的清除率；Ai为加抗氧剂时溶液的吸光度；Aj为本底吸光度；Ac为未加
抗氧剂时溶液的吸光度。






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郭晓青等：明日叶黄酮类化合物清除羟基自由基活性研究

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1.3.3.1 Ac值的测定
取 2 mL双蒸水，加入 2 mL 2 mmol/L的 FeSO4溶液、2 mL 6 mmol/L H2O2，静置 10 min，
再加 2 mL 6 mmol/L的水杨酸混匀，在 37℃水浴反应 20 min，于 510 nm处测其吸光度 Ac。
1.3.3.2 Ai值的测定
分别取 2 mL不同浓度的样液，各加入 2 mL 2 mmol/L的 FeSO4溶液、2 mL 6 mmol/L
的 H2O2溶液，静置 10 min后加 2 mL 6 mmol/L的水杨酸混匀，在 37℃水浴反应 20 min，于
510 nm处测其吸光度 Ai。
1.3.3.3 Aj值的测定
分别取 2 mL不同浓度的样液，各加入 2 mL 2 mmol/L的 FeSO4溶液、2 mL 6 mmol/L
水杨酸溶液，静置 10 min后加 2 mL双蒸水混匀，在 37℃水浴反应 20 min，于 510 nm处测
其吸光度为 Aj。
2 结果与分析
2.1 明日叶总黄酮含量
表 1为明日叶总黄酮质量分数的测定结果。由表 1可知，明日叶提取物总黄酮的平均质
量分数为（10.18±0.23）%。
表 1 乙醇浸提明日叶总黄酮实验结果
实验号 总黄酮含量/ % 平均值/ % 标准差/ %
1 9.99 ― ―
2 10.44 10.18 0.23
3 10.12 ― ―
2.2 明日叶总黄酮对羟基自由基的清除能力
表 2 乙醇浸提明日叶总黄酮对羟基自由基的清除能力
总黄酮质量浓度/ (mg×mL-1) Ai Aj Ai－Aj E (·OH)/ %
0.1 0.761 0.26 0.501 32.38
0.2 0.828 0.36 0.468 36.84
0.5 0.894 0.465 0.429 42.10
0.8 0.906 0.571 0.335 54.79
1 0.912 0.63 0.282 61.94
1.2 1.022 0.742 0.28 62.2
1.4 1.134 0.965 0.169 77.19
1.6 1.245 1.034 0.211 71.5
1.8 0.761 0.26 0.501 32.3
Ac＝0.741

表 2为明日叶总黄酮对羟基自由基清除能力的测定结果。由表 2可知，提取液总黄酮质
量浓度在 0.1～1.0 mg/mL范围内时清除率与提取液浓度呈正相关；当提取液总黄酮浓度达






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到 1.0 mg/mL时，清除率达到 61.9%；当提取液总黄酮质量浓度＞1.0 mg/mL时，总体趋势
是清除率随着提取浓度增大而增大，但不呈正相关，原因是当提取液总黄酮浓度增大，混合
样液本底吸光度会受到干扰增大，规律性就会受到一定的影响。
3 结论
明日叶乙醇提取物总黄酮质量分数为 10.18%。结果说明明日叶含有较高天然植物抗氧
化活性物质。明日叶总黄酮对羟基自由基具有较强的清除能力，提取液总黄酮质量浓度在
0.1～1.0 mg/mL范围内清除率与浓度呈正相关，总黄酮质量浓度达到 1.0 mg/mL时，清除率
为 61.9%。结果表明明日叶黄酮类物质具有较强抗氧化能力，可作进一步抗氧化性研究和天
然抗氧化产品的开发。
参考文献：
[1] 韩曙, 张云选, 张宏, 等. 珍稀蔬菜: 明日叶[J]. 长江蔬菜, 2002(2): 11.
[2] 赵国平, 新关稔, 石川隆二, 等. 中日当归属药用植物 ITS序列分析[J]. 中草药, 2006, 37(7): 1072-1076.
[3] 王亦敏, 马场贵美江. 明日叶中查尔酮诱导人胃癌细胞MGC-803凋亡的研究[J]. 中医临床研究, 2011,
3(5): 67-68.
[4] Sugamoto K, Matsushita Y, Matsui T, et al. Chalcones from Angelica keiskei induce apoptosis in stomach
cancer cells[J]. Journal of Herbs, Spices & Medicinal Plants, 2008, 14(3/4): 166-174.
[5] Jing Hui, Zhou Xinglu, Dong Xiaowu, et al. Abrogation of Akt signaling by isobavachalcone contributes to
its anti-proliferative effects towards human cancer cells[J]. Cancer Letters, 2010, 294(2): 167-177.
[6] Hsu Y L , Kuo P L, Tzeng W S, et al. Chalcone inhibits the proliferation of human breast cancer cell by blocking
cell cycle progression and inducing apoptosis[J]. Food and Chemical Toxicology, 2006, 44(5): 704-713.
[7] 张培成. 黄酮化学[M]. 北京: 化学工业出版社, 2009: 364-374.
[8] 刘小莉, 周剑忠, 单成俊, 等. 蓝莓叶中总黄酮的微波提取及抗氧化活性研究[J]. 食品研究与开发,
2011, 32(3): 44-46.
[9] 刘振春, 张利宽, 于畅, 等. 响应面优化超声波辅助提取发芽糙米黄酮工艺[J]. 食品科学, 2012, 33(8):
80-84.
[10] 郭晓青, 吴金鸿, 周焱富, 等. 明日叶叶水溶性总黄酮提纯工艺[J]. 食品科学, 2012, 33(22): 28.
[11] 王卫东, 赵志鸿, 张小俊, 等. 陈皮提取物中黄酮类化合物及抗氧化的研究[J]. 食品工业科技, 2007,
28(9): 98-100.
[12] 吴琼英, 贾俊强. 柚皮黄酮的超声辅助提取及其抗氧化性研究[J]. 食品科学, 2009, 30(02): 29-33.
（下转第 27页）









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李 艳等：化妆品中二噁烷的气相色谱―质谱分析

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Analysis of Dioxane in Cosmetics
by Gas Chromatography-Mass Spectrometry
LI Yan1, TANG Yang1, LIANG Jing1, LUO Li-jun1, ZHU Zhao-jing2*
（1. Chongqing Institute for Food and Drug Control，
Chongqing Engineering Research Center for Pharmaceutical Process And Quality Control, Chongqing 401121，
China；2. Chongqing Medical and Pharmaceutical College, Chongqing 400030, China）

Abstract: A method for dioxane quantitative analysis in cosmetics was developed by gas
chromatography tandem mass spectrometry (GC-MS) with headspace sampling. The limits of
detection (LOD) are 1.3 ng/g, and the limits of quantitation (LOQ) are 4.3 ng/g. The calibration
curves are linear between 0.026～10.35 mg/L. Recoveries of dioxane in cosmetics are between
89.4% and 109.6%, and inter-relative standard deviations (n＝5) are less than 5.7% at spiked level
of 0.104～1.035 mg/L. The method is simple, sensitive and reliable, and the findings provide a
basis for the determination of dioxane in cosmetics.
Key words: gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS); dioxane; 1, 4-dioxane; cosmetics


（上接第 10页）

Activity of Flavonoids from Angelica keiskei Koidzmi
in Scavenging Hydroxyl Free Radicals
GUO Xiao-qing1, ZHANG Xiao-chun1, CHEN Xiao-jing1, WU Jin-hong2*
（1. Guiyang Nursing Vocational College, Guiyang 550081, China;
2. BorLuh FoodSafety Center, School of Agriculture and Biology, Shanghai Jiao Tong University,
Shanghai 200240, China）

Abstract: To study the flavonoids of Angelica keiskei Koidzmi scavenging effect on hydroxyl
radical, Angelica keiskei Koidzmi as materials, determination of content of total flavonoids extract
by 65% aqueous ethanol. Based on the Fenton system of producing hydroxyl radical, the analyses
of flavonoids compounds elimination hydroxyl radical has been studied based on aqueous of
hydroxyl radical. The extract of total flavonoids was 10.18% (wt) and had strong scavenging effect
on hydroxyl radicals. The total flavonoids extract concentration in the range of 0.1~1.0 mg/mL and
the clearance rate was positively correlated. Flavonoids of Angelica keiskei Koidzmi have strong
scavenging effect on hydroxyl radicals and have some value as a natural antioxidant product
development.
Key words: Angelica keiskei Koidzmi; total flavonoids; hydroxyl radicals; clearance