全 文 ：第 44 卷第 12 期
2015 年 12 月
应 用 化 工
Applied Chemical Industry
Vol． 44 No． 12
Dec． 2015
收稿日期:2015-08-19 修改稿日期:2015-09-14
基金项目:国家自然科学基金(81202492)
作者简介:梁春辉(1975 －) ，女，陕西西安人，西安市儿童医院副主任药师，主要从事中药有效成分提取分离。电话:
13379267263，E － mail:1140917672@ qq． com
ＲP-HPLC测定山竹花不同部位芦丁、
木犀草素的含量
梁春辉1，张寒2，任连新3
(1．西安市儿童医院，陕西 西安 710083;2．西安医学院 药学院，陕西 西安 710021;
3．华北制药股份有限公司，河北 石家庄 051430)
摘 要:建立测定山竹花不同部位芦丁、木犀草素含量的高效液相色谱法。采用反相高效液相色谱法(ＲP-HPLC) ，
其中芦丁以甲醇:0． 1%磷酸水溶液为流动相进行等度洗脱，流速为 1． 0 mL /min，进样量 20 μL，检测波长为358 nm;
木犀草素以甲醇:0． 2%磷酸水溶液为流动相进行等度洗脱，流速为 1． 0 mL /min，进样量 20 μL，检测波长为350 nm。
结果表明，芦丁的进样量在 0． 007 8 ～ 0． 124 8 mg范围内，其峰面积与浓度呈良好的线性关系(r = 0． 999 7) ，样品平
均回收率为 97． 51%。木犀草素的进样量在 0． 003 4 ～ 0． 054 4 mg范围内，其峰面积与浓度呈良好的线性关系(r =
0． 999 1) ，样品平均回收率为 96． 03%。实验方法准确度较高，切实可行。最终测得山竹花不同部位芦丁的含量分
别为:叶 0． 6 mg /g，茎 0． 53 mg /g，根 0． 11 mg /g;木犀草素的含量分别为:叶 0． 52 10 －2mg /g，茎 0． 18 10 －2 mg /g，根
未检出。
关键词:山竹花;芦丁;木犀草素;高效液相色谱法;紫外检测器
中图分类号:TQ 464． 2 文献标识码:A 文章编号:1671 － 3206(2015)12 － 2336 － 03
Determination of Ｒutin and Luteolin by ＲP-HPLC
LIANG Chun-hui1，ZHANG Han 2，ＲEN Lian-xin3
(1． Children’s Hospital of Xi’an，Xi’an 710083，China;
2． School of Pharmaceutical Sciences of Xi’an Medical University，Xi’an 710021，China;
3． North China Pharmacecutical Co．，Ltd．，Shijiazhuang 051430，China)
Abstract:To establish the appropriate methods for determination of Ｒutin and Luteoin in different parts of
Disporam cantoniense(Lour．)Merr． Using ＲP-HPLC，the methanol of Ｒutin:0． 1% phosphoric acid as
the mobile phase gradient elution，flow rate 1． 0 mL /min，the injection volume was 20 μL，detection
wavelength was 358 nm，and the methanol of Luteolin:0． 2% phosphoric acid as the mobile phase gradi-
ent elution，flow rate 1． 0 mL /min，the injection volume was 20 μL，detection wavelength was 350 nm． Ｒe-
sults showed that in the range of 0． 007 8 ～ 0． 124 8 mg for Ｒutin showed a good linear relationship (r =
0． 999 7) ，the samples the average recovery was 97． 51% ． In the range of 0． 003 4 ～ 0． 054 4 mg for Lute-
olin showed a good linear relationship (r = 0． 999 1) ，the samples the average recovery was 96． 03% ． The
method is specific，accurate and reliable，and that can be applied to detect the content． The final measured
Disporam cantoniense(Lour．)Merr． of Ｒutin in different parts (mg /g)are 0． 6:leaf，stem and root of
0． 53，0． 11． And Luteolin in different parts (mg /g)are 0． 52 10 －2:leaf，stem of 0． 18 10 －2，and there
is no Luteolin in the root．
Key words:Disporum cantoniense(Lour．)Merr;Ｒutin;Luteolin;ＲP-HPLC;UV detector
山竹花(Disporam cantoniense (Lour．)Merr．)别
名万寿竹、豪猪七、白毛七、竹叶参等，产于秦岭北坡
甘肃天水的小陇山、陕西太白山及南坡之略阳、佛
坪、宁陕和甘肃、成诸县等。山竹花生长海拔高度
700 ～ 3 000 m，多见山坡灌丛中或林下草地，喜肥沃
而湿润的腐殖土。其以根及根茎入药，性寒味甘，具
有清热解毒、舒筋活血之功效，民间常将其用于治疗
痛经、跌打损伤、风湿关节痛、骨折等症［1-2］。
DOI:10.16581/j.cnki.issn1671-3206.2015.12.045
第 12 期 梁春辉等:ＲP-HPLC测定山竹花不同部位芦丁、木犀草素的含量
目前，国内相关文献报道山竹花中含有芦丁、木
犀草素、芹菜素、木犀草素-7-O-β-D-葡萄吡喃糖苷
等黄酮类成分［3］。目前国内外尚未见山竹花中黄
酮类含量测定的相关记载，本文在参考了大量有关
山竹花和黄酮类化合物提取分离及含量测定的文献
资料后，分别以芦丁和木犀草素为对照品对山竹花
进行了不同部位(叶、茎、根)中芦丁和木犀草素的
含量测定。另外，由于山竹花中含有木犀草素-7-O-
β-D-葡萄吡喃糖苷等苷类成分，而苷类在酸性条件
下易发生水解，本文在实验过程中将用于测定木犀
草素的样品溶液进行酸处理，再次测定该样品中木
犀草素的含量，并与未经酸处理的样品测得的结果
进行了比较。
1 实验部分
1． 1 材料与仪器
芦丁对照品(HPLC检测用，纯度≥98%);木犀
草素对照品(HPLC 检测用，纯度≥98%) ;甲醇，色
谱纯;其它试剂均为分析纯;山竹花采自秦岭太白
山，经西安医学院生药教研室汪兴军老师鉴定为百
合科山竹花。
Agilent 1260 高效液相色谱仪;Thermo C18柱色
谱柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;KQ-300B 型超声波
清洗器;GＲ-202 型分析天平。
1． 2 实验方法
1． 2． 1 色谱条件与系统适用性
1． 2． 1． 1 芦丁 色谱柱:Thermo C18柱(250 mm ×
4． 6 mm，5 μm)，柱温 30 ℃，进样量20 μL，流动相:
甲醇-0． 1%磷酸水溶液(38∶ 62) ;流速 1． 0 mL /min;
检测波长 358 nm。在此色谱条件下，芦丁分离度较
好［4-8］，见图 1。
图 1 芦丁对照液色谱图
Fig． 1 Ｒutin control the liquid chromatogram
1． 2． 1． 2 木犀草素 色谱柱:Thermo C18 柱
(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)，柱温 30 ℃;进样量
20 μL;流动相:甲醇-0. 2%磷酸水溶液(55 ∶ 45) ，流
速1． 0 mL /min，检测波长 350 nm。在此色谱条件
下，木犀草素分离度较好［9-10］，见图 2。
图 2 木犀草素对照液色谱图
Fig． 2 Luteolin control liquid chromatogram
1． 2． 2 对照品溶液的配制
1． 2． 2． 1 芦丁对照品溶液的配制 精密称定芦丁
对照品 3． 9 mg，以 60%乙醇并转移至 10 mL容量瓶
中，定容，即得每 1 mL 含芦丁 0． 39 mg 的对照品
溶液。
1． 2． 2． 2 木犀草素对照品溶液的配制 精密称定
木犀草素对照品 3． 4 mg，以 100%甲醇溶解并转移
至 10 mL容量瓶中，定容，即得每 1 mL 含木犀草素
0． 34 mg的对照品溶液。
1． 2． 3 供试品溶液的配制
1． 2． 3． 1 芦丁供试品溶液的配制 分别精密称取
山竹花根、茎、叶粉末 5 g(各 3 份，编号 a、b、c、d、e、
f)，置于 500 mL圆底烧瓶中，加入 200 mL 蒸馏水，
沸水煎煮 1 h，过滤，所余药渣加 100 mL蒸馏水继续
煎煮 45 min，合并两次煎液，用四层纱布过滤，抽滤，
将所得滤液水浴蒸干，以 60%乙醇溶解，并转移至
50 mL容量瓶，定容即得芦丁供试品溶液。
1． 2． 3． 2 木犀草素供试品溶液(Ⅰ)的配制 分别
精密称取山竹花根、茎、叶粉末 5 g(各 3 份，编号 a、
b、c、d、e、f)，将其置于 500 mL 索氏提取器中，向内
加入 200 mL石油醚，浸泡 12 h后，70 ℃水浴加热提
取至无色，放置至室温，旋转蒸干石油醚，加甲醇
100 mL，超声提取 30 min，将甲醇水浴蒸干，以
100%甲醇溶解，并转移至 10 mL 容量瓶中，定容即
得木犀草素供试品溶液(Ⅰ)。
1． 2． 3． 3 木犀草素供试品溶液(Ⅱ)的配制 分别
精密量取木犀草素供试品溶液(Ⅰ)中 9 份溶液
200 μL，向其中各加入 1 滴稀硫酸溶液，摇匀后静置
10 min，即得木犀草素供试品溶液(Ⅱ)。
1． 2． 4 测定方法 分别精密吸取 1． 2． 2、1． 2． 3 节
配制所得的对照品溶液、供试品溶液各 20 μL，注入
高效液相色谱仪，按 1． 2． 1 节色谱条件测定。
2 结果与讨论
2． 1 专属性实验
2． 1． 1 芦丁 分别吸取芦丁对照品溶液、供试品溶
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应用化工 第 44 卷
液各 20 μL注入高效液相色谱仪，按照 1． 2． 1． 1 节
色谱条件测定，结果在供试品中芦丁与对照品色谱
峰保留时间一致，并且能达到基线分离，见图 3。
图 3 山竹花样品色谱图
Fig． 3 Sample chromatogram
2． 1． 2 木犀草素 分别吸取木犀草素对照品溶液、
供试品溶液(Ⅰ)(Ⅱ)20 μL，注入高效液相色谱仪，
按照 1． 2． 1． 2 节色谱条件进行测定，结果在供试品
中木犀草素与对照品色谱峰保留时间一致，并且能
达到基线分离，见图 4。
图 4 山竹花样品色谱图
Fig． 4 Sample chromatogram
2． 2 线性关系的考察
2． 2． 1 芦丁 精密量取 1． 2． 2 节芦丁对照品溶液
0． 1，0． 2，0． 4，0． 8，1． 6 mL 至 5 mL 容量瓶中，加入
60%乙醇溶液定容至刻度，摇匀，即得。按上述色谱
条件，分别进样 20 μL，测定。以对照品进样浓度为
横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)分别绘制
标准曲线，得芦丁线性回归方程为 Y = 16 232X +
47． 054，r = 0． 999 7(n = 5)。结果表明，芦丁进样量
在 0． 007 8 ～ 0． 124 8 mg /mL范围内线性关系良好。
2． 2． 2 木犀草素 精密量取 1． 2． 2 节木犀草素对
照品溶液 0． 05，0． 1，0． 2，0． 4，0． 8 mL 至 5 mL 容量
瓶中，用 100%甲醇定容至刻度，摇匀，即得。按上
述色谱条件，分别进样 20 μL，测定。以对照品进样
浓度为横坐标(X) ，峰面积积分值为纵坐标(Y)分
别绘制标准曲线，得木犀草素回归方程为 Y =
12 040X + 11． 358，r = 0． 999 1(n = 5)。结果表明，
木犀草素进样量在 0． 003 4 ～ 0． 054 4 mg /mL 范围
之内线性关系良好。
2． 3 重复性实验
精密量取 1． 2． 2 节芦丁、木犀草素对照品溶液
各 6 份(20 μL) ，分别进样，测定峰面积。结果芦丁
ＲSD为 0． 003 5%，木犀草素 ＲSD 为 0． 034 9%，表
明二者重复性良好。
2． 4 稳定性实验
精密量取芦丁、木犀草素对照品溶液，分别在
0，2，4，8，12，24 h 各进样 20 μL，分别测定两者的峰
面积。结果芦丁 ＲSD 为 0． 002 5%，木犀草素 ＲSD
为 1． 48%，表明二者均在 24 h内稳定。
2． 5 加样回收率实验
取已知含量的山竹花叶 b、e 供试品溶液各 3
份，精密量取 b 溶液 1 mL，加入芦丁对照品溶液
100 μL;量取 e 溶液 400 μL，加入木犀草素对照品
溶液 100 μL，分别混匀即得供试样品。分别量取以
上两种溶液各 20 μL 进行测定，计算各自加样回收
率。结果芦丁加样平均回收率为 97． 51%，ＲSD 为
0． 13%;木犀草素加样平均回收率为 96． 03%，ＲSD
为 0． 54%。表明该样品制备方法准确性较高，可靠
性较强。
2． 6 样品测定
精密量取 1． 2． 3 节制得的供试品溶液，进样
20 μL，计算各成分含量，测定结果见表 1。
表 1 样品测定结果
Table 1 Disporam cantoniense(Lour．)Merr．
samples for the determination of results
测定项
进样量 /
μL 样品部位
峰面积
平均值
含量 /
(mg·g － 1)
芦丁 20 根 237． 3 0． 55
茎 919． 47 2． 69
叶 1 422． 8 3． 005
木犀草素(Ⅰ) 20 根 4． 93 －
茎 22． 3 0． 9 10 －2
叶 43． 4 2． 6 10 －2
木犀草素(Ⅱ) 20 根 6． 77 －
茎 35． 03 1． 9 10 －2
叶 141． 43 10． 8 10 －2
由表 1 可知，山竹花叶中芦丁含量最高，木犀草
素叶中含量比茎中高，根中木犀草素未检出，经酸处
理过的样品溶液中木犀草素比没有处理过的含
量高。
3 结论
(1)在参考文献［4-8］中，芦丁的检测波长为
368，358，510 nm，实验中发现在 358 nm处芦丁的峰
型和峰面积均十分理想，故本实验采用 358 nm对芦
丁进行检测。
(下转第 2342 页)
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应用化工 第 44 卷
都要高于原蒸馏水的 pH 值，而当采用自来水进行
道路喷洒时，样品的 pH值都要低于原自来水的 pH
值。在同等条件下，水泥混凝土路面上收集的样品
pH值要低于沥青路面上收集的样品 pH 值。这可
能是由于自来水中含有对 pH 值增加有贡献的离子
要比路面中的离子含量高。对于电导率和 COD，无
论是蒸馏水还是自来水模拟实验，沥青路面和水泥
混凝土路面样品的值均高于本底值，但均未超过国
家标准限值，即不会对环境造成影响。而同等条件
下，水泥混凝土路面的样品值均低于沥青路面的样
品值。
表 7 样品测试结果
Table 7 Sample test results
检测项目 pH
电导率 /
(μS·cm －1)
COD /
(mg·L －1)
蒸馏水 4． 2 21． 7 0
自来水 6． 09 552 2． 072
蒸馏水 沥青路面 6． 23 167 68． 83
水泥混凝土路面 5． 99 147． 6 66． 49
自来水 沥青路面 6． 03 661 149． 4
水泥混凝土路面 5． 78 609 127． 31
3 结论
(1)对于固有污染物，水泥混凝土材料所包含
的重金属元素无论从种类和含量上都要多于沥青材
料，而沥青材料富含更多的有机物，在天然条件下，
二者都不会对环境产生负效应。
(2)水泥混凝土路面溶出的重金属元素要多于
沥青路面，但各元素的溶出量都很小，均在国家各类
标准的限值以下，不会对环境造成影响。
(3)在路面径流模拟实验中，水泥混凝土路面
径流样品的电导率、COD 值均低于沥青路面，水泥
混凝土路面径流对周边环境造成的影响相对沥青路
面而言要小很多。
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(上接第 2338 页)
(2)在参考文献［9-10］中木犀草素的检测波长
为 283，350 nm，实验中发现在 350 nm 处木犀草素
的峰型和峰面积均十分理想。故本实验采用
350 nm对木犀草素进行检测。
(3)本实验采用反相高效液相色谱法，分别建
立测定山竹花药材中芦丁、木犀草素的含量的方法，
所用方法灵敏、简单易行，专属性、重复性、回收率均
符合要求。
(4)对比木犀草素样品溶液(Ⅰ)、(Ⅱ)的结果
可以看出，经酸处理过的样品溶液中木犀草素含量
更高，说明山竹花中的黄酮苷类成分在酸性条件下
发生了水解，从而测得样品中木犀草素的含量升高。
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