全 文 ：·42· Chinese Journal of Information on TCM Sep.2009 Vol.16 No.9
·质量标准研究·
大乌泡叶中总黄酮含量测定
程 伟 1,2,秦文杰 2,陈素红 1,叶祖光 2
(1.温州医学院,浙江 温州 325035；2.中药复方新药开发国家工程研究中心,北京 100075)
摘要：目的 为大乌泡资源的合理开发和利用提供试验依据。方法 采用 60%甲醇提取大乌泡叶总黄酮,分光光
度法测定其含量；并通过稳定性、重复性、精密度和回收率试验检验了该方法的可靠性和重复性。结果 标准液和
供试液均在 510 nm 处有最大吸收。重复性、精密度、加样回收率试验的 RSD 值分别为 2.11%、0.97%、2.34%,含量
测定结果表明大乌泡叶中总黄酮含量为 3.8%。结论 以 60%甲醇提取、硝酸铝显色、510 nm 测定的分光光度法适用
于大乌泡叶中总黄酮含量的测定。
关键词：大乌泡；总黄酮；含量测定；分光光度法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2009)09-0042-02
Determination of Flavonoids in Rubus multibracteatus Levl. et Vant. CHENG Wei1,2, QIN Wen-jie2,
CHEN Su-hong1, et al (1.Wenzhou Medical College, Wenzhou 325035, China；2.State Research Center for Research and
Development of TCM Multi-ingredient Drugs, Beijing 100075, China)
Abstract：Objective To supply scientific basis for the reasonable development and utilization of
Rubus multibracteatus Levl. et Vant. resources. Method The total flavonoids was extracted from Rubus
multibracteatus Levl. et Vant. with 60% methanol and its content was determined by spectrophotometry.
The reliability and repeatability of the method were tested through stability, repeatability, accuracy and
recovery experiments. Result Both standard and tested solutions had the maximum absorbance at 510 nm.
The RSD values of repeatability, accuracy and recovery experiments were 2.11%, 0.97% and 2.4%
respectively. The results of content determination showed that the total flavonoids in Rubus multibracteatus
Levl. et Vant. was 3.8%. Conclusion Extracted with 60% methanol, colored with aluminiumnitrate and
determined by spectrophotometry at 510 nm were suitable for the determination of total flavonoids in
Rubus multibracteatus Levl.et Vant..
Key words：Rubus multibracteatus Levl.et Vant.；total flavonoids；content determination；spectrophotometry
大 乌 泡 为 蔷 薇 科 悬 钩 子 属 植 物 大 乌 泡 (Rubus
multibracteatus Levl. et Vant.),又名倒生根、黄水泡、无
刺乌泡、糖泡叶、马莓叶,以根及全株入药。全国大部分地区
均有分布,主产于四川、云南、贵州等地。其味苦、性凉,入脾、
肝二经,具清热解毒、祛风除湿、凉血、止血、接骨的功效。
大乌泡为苗药的常用药,但目前尚未见对大乌泡化学成分研究
的报道,我们通过对大乌泡叶的化学成分的系统研究,发现其
中含有许多黄酮类成分(另文报道),现就大乌泡叶中总黄酮的

射促使了羊肚菌多糖的分解,从而降低了提取率,这在以往的
报道中同样存在先例：一种具有β-1,3-D-葡萄糖结构的多糖
在经过长时间的超声处理后,分子量从 25 万降至 5万左右[8]。
同时,在对两类羊肚菌多糖的比较中发现,GIM5.69 型羊
肚菌多糖的提取率明显高于 GIM5.29 型羊肚菌,显示不同类型
的羊肚菌在多糖产量上存在明显差异,这一结果对工业应用也
有一定指导意义。
参考文献：
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(收稿日期：2009-02-16,编辑：华强)
2009 年 9 月第 16 卷第 9期 中国中医药信息杂志 ·43·
含量测定方法报道如下。
1 仪器与试药
UV-757CRT紫外分光光度计(上海UNICO),AB135-S电子分
析天平(瑞士梅特勒-托利多公司),CQ-250 超声波清洗器(上
海超声仪器厂),电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂),
索氏提取器。
芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号 10080-
200306)。本研究所用大乌泡叶于 2007 年 7 月采集于贵州省黔
西南州普安县,经秦文杰副研究员鉴定为蔷薇科悬钩子属大乌
泡(Rubus multibracteatus Levl.et Vant.),标本存放于中药
复方新药开发国家工程研究中心。甲醇为分析纯,5%亚硝酸钠、
10%硝酸铝、4%氢氧化钠等均采用分析纯自配。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备
干燥大乌泡叶粉末约 2.0 g,精密称定,置索氏提取器中,
加入 60%甲醇 100 mL,于恒温水浴锅上 90 ℃提取 6 h,过滤,
减压浓缩并定容至 50 mL 容量瓶中,得供试品溶液。
2.2 芦丁对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的芦丁对照品 4.75 mg,用少量 60%
甲醇溶解,置 50 mL 容量瓶中,用 60%甲醇定容至 50 mL,摇匀,
静置,配成浓度为 95 µg/mL 的芦丁对照品贮备液。
2.3 测定波长的选择
以芦丁为对照品测定大乌泡叶中总黄酮的含量。精密吸取
对照品液、供试品液各适量分别加入到 25 mL 容量瓶中,按
“2.4”项下方法操作,并在 400～600 nm 范围内扫描,结果均
在 510 nm 处有最大吸收波长,其他成分对测定无干扰,故选择
510 nm 为测定波长。
2.4 标准曲线的绘制
精密吸取浓度为 95 µg/mL 的芦丁对照品溶液 0、1.0、2.0、
3.0、4.0、5.0、6.0 mL,分别置于 25 mL 量瓶中,分别加入 5%
亚硝酸钠溶液1.0 mL,摇匀,放置6 min后各加入10%硝酸铝溶液
1.0 mL,摇匀后放置 6 min,分别加入 4%氢氧化钠溶液 10 mL,
用 60%甲醇稀释至刻度,摇匀,放置 10 min,在 510 nm 处测定吸
光度。回归方程为：Y＝0.001 2X＋0.001,r＝0.999 6。结果
表明,芦丁对照品溶液浓度在 95～570 µg/mL 之间呈良好的线
性关系。
2.5 方法学考察
2.5.1 精密度试验 精密吸取95 µg/mL芦丁对照品溶液5.0 mL,
置于 25 mL 量瓶中,按“2.4”项下方法进行显色和测定,重复
6 次实验,记录吸光度。吸光度的 RSD＝0.97%(n＝6),说明仪
器精密度良好。
2.5.2 重复性试验 精密称取样品 6 份,每份约 2.0 g,精密
称定,按“2.1”项下方法制备供试品溶液,每份精密吸取 1.0 mL,
分别置于 10 mL 容量瓶中,按“2.4”项下方法进行显色和测
定,记录吸光度值,计算每份样品的含量。6 份样品黄酮含量
的 RSD＝2.11%(n＝6)。
2.5.3 稳定性试验 精密称取样品 6 份,每份约 2.0 g,按
“2.1”项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液 1.0 mL,
共 6 份,分别置于 10 mL 量瓶中,按“2.4”项下方法进行显
色和测定,分别在 15、20、30、45、60、100 min 测定,RSD＝
1.38%(n＝6)。结果表明样品在 15～100 min 之间稳定。
2.5.4 加样回收率试验 精密称取芦丁对照品适量,加入已
知含量的对照品,称取样品 6 份,每份约 1.0 g,精密称定,按供
试品溶液制备方法制成溶液 6 份,各取 1.0 mL,置于 10 mL 量
瓶中,按“2.4”项下方法进行测定,结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
取样量
(g)
样品含量
(g)
对照品加入
量(g)
测得量
(g)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
0.117 0 0.012 1 0.01 0.021 5 94.78
0.102 6 0.010 6 0.01 0.020 4 97.76
0.107 9 0.011 2 0.01 0.020 8 96.52
0.105 8 0.011 0 0.01 0.020 9 99.36
98.23 2.34
0.107 4 0.011 1 0.01 0.021 2 100.56
0.101 8 0.010 6 0.01 0.020 6 100.41
2.6 样品含量测定
精密称取样品 6 份,每份约 2.0 g,按“2.1”项下方法制
备供试品溶液。每份精密吸取 1.0 mL,分别置于 10 mL 量瓶中,
按“2.4”项下方法进行显色和测定,由标准曲线计算得大乌泡
中总黄酮平均含量为 3.8%,RSD＝2.4%,说明该方法测得的含
量是可靠的。
表 2 大乌泡叶中总黄酮含量测定结果
序号 吸光度 总黄酮含量(%) 平均含量(%) RSD(%)
1 0.329 3.9
2 0.316 3.7
3 0.314 3.7
4 0.327 3.9
3.8 2.4
5 0.328 3.9
6 0.312 3.7
3 讨论
本试验用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂,主要是黄
酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基,能和铝离子产
生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中
显红色,显色反应在 100 min 内稳定[1]。
对样品的提取方法进行考察,超声、加热回流和索氏提取
3种提取方法中,采用索氏提取总黄酮,测得吸光度值最大[2]。
对显色系统和显色系统浓度分别进行考察,结果表明 5%
亚硝酸钠、10%硝酸铝、4%氢氧化钠溶液显色,吸光度值最大。
采用紫外分光光度法对大乌泡叶中总黄酮的含量进行测
定,是一种方便有效的含量测定方法。
参考文献：
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(收稿日期：2008-12-31)
(修回日期：2009-03-13,编辑：陈静)