全 文 :58 2014, Vol.35, No.07 食品科学 ※基础研究
苦荞麸皮黄酮抗氧化及抗肿瘤活性
李富华1,刘 冬2,明 建1,3,4,*
(1.西南大学食品科学学院,重庆 400715;2.深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院,广东 深圳 518055;
3.西南大学 国家食品科学与工程实验教学中心,重庆 400715;
4.农业部农产品贮藏保鲜质量安全与风险评估重点实验室,重庆 400715)
摘 要:以西南地区的两种苦荞麸皮为实验材料(重庆酉阳苦荞麸皮(T1);四川西昌苦荞麸皮(T2)),通
过氧化自由基吸收能力实验(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)测定苦荞麸皮黄酮的化学抗氧化能力,
采用人肝癌细胞HepG2为细胞模型,研究苦荞麸皮黄酮的细胞抗氧化活性(cellular antioxidant activity,CAA)
及对HepG2细胞抗增殖活性。结果表明:T1和T2苦荞麸皮黄酮的ORAC值分别为(57 . 0±3 . 5)、
(73.6±6.3)�mol TE/g。T1和T2苦荞麸皮黄酮的细胞抗氧化值分别为(44.4±5.2)、(52.5±2.7)�mol
QE/100 g(PBS清洗);(32.9±3.2)、(30.9±2.2)�mol QE/100 g(不经PBS清洗)。在对HepG2细胞体
外抗增殖活性研究实验中,通过与对照组细胞相比,发现当苦荞麸皮黄酮的质量浓度为21.9 mg/mL时,T1
和T2苦荞麸皮黄酮对HepG2细胞增殖的抑制率分别约为51%和82%(P<0.01),二者相应的EC50值分别为
(23.0±0.5)mg/mL和(13.7±0.1)mg/mL。因此,苦荞麸皮黄酮具有一定的体外细胞抗氧化和抗增殖的能力,
可将苦荞麸皮作为此类功能性食品开发的原料资源。
关键词:苦荞麸皮;黄酮;细胞抗氧化;抗增殖;HepG2细胞
Cellular Antioxidant and Antiproliferative Activities of Flavonoids Extracted from Tartary Buckwheat
(Fagopyrum tartaricum (L.) Gaertn) Bran
LI Fu-hua1, LIU Dong2, MING Jian1,3,4,*
(1. College of Food Science, Southwest University, Chongqing 400715, China; 2. School of Applied Chemistry and Biological
Technology, Shenzhen Polytechnic, Shenzhen 518055, China; 3. National Food Science and Engineering Experimental Teaching
Center, Southwest University, Chongqing 400715, China; 4. Key Laboratory of Agricultural Products Quality Safety and Risk
Assessment during Storage, Ministry of Agriculture, Chongqing 400715, China)
Abstract: The oxygen radical absorbance capacity (ORAC) of flavonoids extracted from the bran of tartary buckwheat
(Fagopyrum tartaricum (L.) Gaertn) from Youyang, Chongqing municipality (T1) and Xichang, Sichuan province (T2)
was evaluated as well as cellular antioxidant (CAA) and antiproliferative activities on human liver cancer HepG2 cells.
The results showed that the ORAC values of flavonoids extracted from T1 and T2 were (57.0 ± 3.5) and (73.6 ± 6.3) μmol TE/g,
respectively, and the CAA values were (44.4 ± 5.2) and (52.5 ± 2.7) μmol QE/100 g by PBS washing; (32.9 ± 3.2) and
(30.9 ± 2.2) μmol QE/100 g without PBS washing, respectively. The antiproliferative activity assay showed that at the
concentration of 21.9 mg/mL, the proliferation inhibitory rates of HepG2 cells by T1 and T2 flavonoids w ere approximately
51% and 82%, respectively, when compared to control cells (P < 0.01), and the corresponding EC50 (median effective
concentration) values were (23.0 ± 0.5) and (13.7 ± 0.1) mg/mL. Therefore, the flavonoids extracted from T1 and T2 had
significant CAA and anti-proliferative activities on human liver cancer HepG2 cells in vitro. This study shows that tartary
buckwheat bran can be considered as a resource of raw materials for functional foods.
Key words: Fagopyrum tartaricum (L.) Gaertn bran; flavonoids; cellular antioxidant activity; anti-proliferation; HepG2 cells
中图分类号:S517 文献标志码:A 文章编号:1002-6630(2014)07-0058-06
doi:10.7506/spkx1002-6630-201407012
收稿日期:2013-09-12
基金项目:中央高校基本科研业务费专项 (XDJK2012B014);国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2011AA100805-2)
作者简介:李富华(1986—),女,硕士研究生,研究方向为食品化学与营养学。E-mail:fuhualee92@163.com
*通信作者:明建(1972—),男,副教授,博士,研究方向为食品化学与营养学。E-mail:mingjian1972@163.com
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活性氧(reactive oxygen species,ROS)是机体正
常代谢的产物,一方面ROS能杀伤侵入体内的细菌,并
能消除炎症和化学物质,此外,自由基还能促进前列腺
素、凝血酶原、胶原蛋白的合成,参与肝脏解毒、调节
细胞分裂等;另一方面ROS能使构成细胞组织的各种物
质,如脂质、糖类、蛋白质、脱氧核糖核酸DNA等大
分子物质发生各种氧化反应,引起变性、交联、断裂等
氧化伤害,进而导致细胞结构和功能的破坏以及机体组
织的损伤和器官的病变,研究发现 ,自由基几乎与人类
的大部分疾病有关,如动脉粥样硬化、血栓的形成、心
肌缺血再灌注损伤、糖尿病以及致癌,促癌和癌的形成
过程中均有自由基的产生或参与[1-4]。因此,具有清除活
性氧自由基功能的天然抗氧化物质——黄酮类化合物,
已成为功能性成分研究领域的热点。黄酮类化合物主要
是指基本母核为2-苯基色原酮(2-phenyl-chromone)类
化合物,此类化合物具有多个苯环和酚羟基结构,由于
其苯环上的羟基极易失去氢电子,可作为良好的电子供
体而发挥抗氧化功能,能保护细胞膜上的不饱和脂肪酸
(unsaturated fatty acid,UFA)免于氧化[5-6]。此外,流行
病学研究表明,经常摄食富含生物黄酮类化合物的食物
能有效降低肿瘤、心脑血管疾病等慢性病的发生[7-9]。
荞麦属蓼科一年生草本植物,一般分为甜荞麦
(Fagopyrum esculentum M�ench)和苦荞麦(Fagopyrum
tartaricum (L.) Gaerth亦称鞑靼荞麦)两种,另有野生的宿
根荞麦(F. symosum)为非食用品种[4]。苦荞因富含B族维
生素、微量元素和生物类黄酮,而兼具营养和保健的双重
功效[4,10]。苦荞中黄酮类化合物含量约是甜荞黄酮含量的
30倍,并明显高于其他谷物或果蔬,且主要分布在苦荞
麸皮部位[4,11-14]。目前,对苦荞黄酮类化合物的研究多涉
及苦荞黄酮提取工艺的优化及苦荞黄酮含量及其组成成分
的鉴定等方面[10,15-17]。对苦荞黄酮类化合物抗氧化性的研
究多停留在检测其化学抗氧化活性[8,13],但化学分析法往
往忽略了抗氧化剂在机体中的摄入、生物利用率及生理代
谢等生物指标而不能准确地反映抗氧化剂的体内抗氧化能
力[18]。细胞抗氧化活性实验(cellular antioxidant activity,
CAA)则能兼顾生物相关性、抗氧化剂在细胞内的分布以
及生理代谢等因素[19]。因此通过细胞模型检测抗氧化剂清
除细胞内ROS能力来评估抗氧化剂是否具有细胞内抗氧化
活性是一种相对较为科学合理的方法。
为准确评价苦荞麸皮黄酮的功能性,本实验既采用
了相对较为准确的化学抗氧化方法——氧自由基清除能
力或抗氧化能力指数测定法(oxygen radical absorbance
capacity,ORAC),又应用人肝癌细胞HepG2模型,评
价苦荞麸皮黄酮的抗氧化活性和抗肿瘤细胞增殖能力,
为苦荞麸皮功能性食品开发及抗肿瘤药物的研发提供实
验资料和理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
产自重庆酉阳和四川西昌的两种苦荞籽粒的麸皮;
HepG2人肝癌细胞 美国菌种保藏中心。
乙醇、福林酚试剂、芦丁、没食子酸均(分析纯)
成都科龙化学试剂厂;二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,
DMSO)、2’ ,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(fluorescein
isodium salt, 2’,7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-
DA)、2,2’-偶氮二异丁基脒盐酸盐(2,’-azobis(2-
methylpropionamidine) dihydrochloride,ABAP)、荧
光素钠盐(fluorescein disodium salt,FL)、羟乙基
哌嗪乙硫磺酸(N-2-hydro xyethylpiperazine-N-ethane-
sulphonicacid,Hepes)、青霉素、链霉素混合液
(×100)、台盼蓝(0.4%) 美国Sigma公司;HepG2
细胞培养基、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、
0.05%胰酶-EDTA消化液(trypsin- ethylene diamine
tetraacetie acid,EDTA) 美国Gibco公司;细胞培养
瓶、96孔板 美国Corning公司。
1.2 仪器与设备
HERA Cell 240型CO2细胞培养箱 美国Thermo公
司;BHC-ⅡA2系列生物安全柜 苏净安泰空气技术有
限公司;DM IRB型荧光倒置显微镜 德国Leica仪器
有限公司;Spectra Max M2型连续光谱密度荧光检测仪
美国Molecular公司。
1.3 方法
1.3.1 苦荞麸皮黄酮提取
参考熊双丽等[16],并根据本实验室条件稍作修改,
即苦荞麸皮与80%的乙醇水溶液按料液比1∶35(m/V)混
合,75 ℃水浴2.5 h,将所得提取液于3 500×g条件下,
离心10 min,并将上清液于45 ℃条件下,真空旋转蒸发
至干,以超纯水定容至10 mL,得苦荞麸皮黄酮提取液,
置于-80 ℃,于3周内分析检测。
1.3.2 苦荞麸皮黄酮含量测定
芦丁标准曲线制作方法参考熊双丽等[16],苦荞麸皮
黄酮含量以每克麸皮所含的毫克芦丁当量(mg芦丁/g)
表示。所得芦丁含量与吸光度的回归方程为:
y=0.927 6x+0.014 6(R2=0.998 5),式中:y为吸光度;x
为芦丁含量/mg。
荞麦麸皮黄酮含量测定:准确吸取苦荞麸皮黄酮提
取液0.4 mL,并以30%乙醇补至1 mL,其余操作同芦丁
标准曲线制作。
1.3.3 过氧自由基吸收能力(ORAC)实验
参考Faller[20]、Wolfe等[21],在本实验室稍作修改,
即分别精确移取20 μL的磷酸缓冲液(空白)或不同质量
浓度的样液、Trolox标液于96孔板的相应位置,再将该
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96孔板置于已预热至37 ℃的酶标仪中,孵化10 min,然
后按200 μL/孔加0.96 μmol/L荧光工作液,再于酶标仪中
37 ℃孵化20 min后,按20 μL/孔加入119 mmol/L ABAP工
作液,最后于激发波长485 nm,入射波长520 nm下立即
读数,每4.5 min进行一次读数,共检测2.5 h,每个样品
质量浓度点做3个平行。黄酮的抗氧化性,结果以每克麸
皮相当于μmol Trolox的量(μmol TE/g)表示。
1.3.4 细胞培养
HepG2人肝癌细胞用含5%胎牛血清的培养液,在
37 ℃、5% CO2培养箱中传代培养,用以实验的细胞为
12~35代[20-21]。
1.3.5 细胞毒性实验[22-24]
取对数生长期的HepG2细胞接于96孔白板,使每孔
细胞数约为4×104 个,于37 ℃、5%CO2下培养4 h后,
移去残余培养基,PBS清洗1次。其中,样品孔中加入
100 μL含样品的培养基(每个质量浓度梯度做3个平
行孔),控制孔中加入100 μL的培养基,于37 ℃、5%
CO2条件下培养24 h后开始测板:移去96孔板内残余培
养基,PBS清洗1次,加50 μL/孔亚甲基蓝溶液(98%
HBSS、0.67%戊二醛、0.6%亚甲基蓝),于培养箱中放
置1 h,然后移去染色液,并用去离子水中清洗该96孔板
至清洗液无色,吸去板中多余水分并风干2~3 min,加
100 μL/孔洗脱液(49% PBS、50%乙醇、1%醋酸),然
后漩涡振荡20 min,使孔内已染色的细胞形成均匀的细
胞悬浮液,最后,于570 nm波长读取各孔中染色细胞悬
浮液的吸光度。减少的吸光度计算公式如式(1)所示。
减少的吸光度/% =(1-A样品组/A对照组)×100 (1)
1.3.6 细胞抗增殖实验
采用Wolfe等[22]的方法并进行一定的改进[23-24],即取
对数生长期的HepG2细胞接于96孔白板,使每孔细胞数
约为2.5×104 个,于37 ℃、5% CO2下培养4 h后,移去残
余培养基,PBS清洗1次。其中,样品孔中加入100 μL含
样品的培养基(每个质量浓度梯度做3个平行孔),控制
孔中加入100 μL的培养基,于37 ℃、5% CO2条件下培养
72 h后开始测板,测板操作同上述细胞毒性实验。细胞增
殖抑制率计算公式如式(2)所示。
细胞增殖抑制率/% =(1-A样品组/A对照组)×100 (2)
1.3.7 细胞抗氧化实验[21-22]
1.3.7.1 PBS清洗实验
将对数生长期的HepG2细胞接种到96孔板中(只接
种内部孔,为防止边缘效应),每孔细胞数约为6×104
个,于37 ℃、5% CO2条件下培养24 h后,移去残余培养
基,PBS清洗1次。加入新鲜培养基、苦荞麸皮黄酮(终
质量浓度梯度为0、3.6、6.7、10、13.3、16.7、20 mg/mL)、
DCFH-DA荧光探针溶液(终浓度为25 μmol/L)以及标
准品槲皮素(终浓度梯度为0、3、5、7.5、10、12.5、
15 μmol/L)。
1.3.7.2 不经PBS清洗实验
基本操作同PBS清洗实验,但苦荞麸皮黄酮终质量
浓度梯度为0、2、4、6、8、10、12 mg/mL,DCFH-DA
荧光探针溶液终浓度为25 μmol/L,标准品槲皮素终浓度
梯度为0、1、2、3、4、5、6 μmol/L。
将上述96孔板,于37 ℃、5% CO2条件下继续培养
1 h,移去残余培养液,然后加入100 μL/孔PBS,清洗一次
(PBS清洗实验)或不经PBS清洗(不经PBS清洗实验),
加入100 μL/孔ABAP溶液(终浓度为600 μmol/L),
然后,立即于发射波长538 nm,入射光波长485 nm条件下
测定荧光值,测定1 h,每5 min测定3个重复孔。对照组用
DCFH-DA和ABAP处理,不加苦荞麸皮黄酮提物;空白组
用DCFH-DA处理,不加入ABAP和苦荞麸皮提物。
1.3.8 细胞抗氧化能力的定量[22]
减去空白和初始荧光值后,每个苦荞麸皮黄酮质量
浓度对应时间-荧光值曲线下的面积即为CAA值,计算公
式如式(3)所示。
CAA值=100-(∫SA/∫CA)×100 (3)
式中:∫SA表示加入不同质量浓度苦荞麸皮黄酮提取
物后的时间-荧光值曲线下积分面积;∫CA表示空白对照
组的时间-荧光值曲线下积分面积。
苦荞麸皮黄酮提取物的半数有效质量浓度(EC50)
根据lg(fa/fu)对lg(剂量)的中效原理来计算,式中:
fa为样品作用效应(CAA值),fu为1-CAA值,EC50值以
3次平行实验计算得出,将EC50值转化为CAA值。苦荞麸
皮黄酮的CAA值以每100 g苦荞麸皮相当于微摩尔槲皮素
的量表示(μmol QE/100 g)。
1.4 数据处理
每个样品至少3次重复,实验结果表示为 ±s,
Tukey’s相关性分析采用SPSS17.0统计分析软件,图表采
用Sigmaplot19.0绘制。
2 结果与分析
2.1 苦荞麸皮黄酮含量
表 1 两种苦荞麸皮黄酮含量及其抗氧化能力(x±s, n=3)
Table 1 Flavonoids contents and antioxidant activities of tartary
buckwheat brans harvested from two different growing regions (x± s, n = 3)
苦荞名称 黄酮含量/(mg RE/g) ORAC/(μmol TE/g)
T1 6.3±1.6 57.0±3.5
T2 5.6±1.3 73.6±6.3*
注:*.与 T1相比,差异显著(P < 0.05)。
由表1可知,T1和T2苦荞麸皮黄酮含量分别为
(6.3±1.6)mg RE/g和(5.6±1.3)mg RE/g,两者黄酮
含量无显著性差异(P<0.05)。
※基础研究 食品科学 2014, Vol.35, No.07 61
2.2 苦荞麸皮黄酮的抗氧化能力
由表1可知,T1和T2的ORAC值分别为(57.0±3.5)μmol TE/g
和(73.6±6.3)μmol TE/g,T2的ORAC值明显高于T1
(P<0.05)。
2.3 苦荞麸皮黄酮的细胞抗氧化能力
细胞抗氧化实验采用两种处理方法,PBS清洗实验和
不经PBS清洗实验。PBS清洗实验主要反映在HepG2细胞
内抗氧化剂的抗氧化性;不经PBS清洗实验则主要反映包
括HepG2细胞膜表面在内的抗氧化剂的抗氧化性。HepG2
细胞中,在苦荞麸皮黄酮提取物的作用下,ABAP产生的
过氧化氢自由基氧化DCFH的动力学曲线见图1和图2,实
验中所选取的样品质量浓度范围均不显示细胞毒性。
图 1 在PBS清洗实验中,两种苦荞麸皮黄酮(a, b)和标准品槲皮素
(c)对HepG2细胞内荧光强度的影响(x±s, n=3)
Fig.1 Peroxyl radical-induced oxidation of DCFH to DCF in HepG2
cells and the inhibition of oxidation by flavonoids (a, b) extracted from
T1 and T2 tartary buckwheat brans and by quercetin standard (c) with
PBS washing (x± s, n = 3)
由图1、2可知,苦荞麸皮黄酮能有效抑制HepG2细
胞中荧光物质的生成,与对照组(0 mg/mL组)相比有显
著性差异(P<0.05),且存在一定的时效关系,即在不
产生细胞毒性的质量浓度范围内,随着T1和T2苦荞麸皮
黄酮质量浓度的升高,细胞内荧光强度降低,当T1和T2
苦荞麸皮黄酮的质量浓度达到20、12 mg/mL时,细胞内
荧光强度最低,即此时样品的细胞抗氧化能力最强。
图 2 在不经PBS清洗实验中,两种苦荞麸皮黄酮(a, b)和标准品槲
皮素(c)对HepG2细胞内荧光强度的影响(x±s, n=3)
Fig.2 Peroxyl radical-induced oxidation of DCFH to DCF in HepG2
cells and the inhibition of oxidation by flavonoids (a, b) extracted from T1
and T2 tartary buckwheat brans and by quercetin standard (c) without
PBS washing (x± s, n = 3)
表 2 两种苦荞麸皮黄酮的细胞抗氧化能力及细胞毒性质量浓度
(x±s, n=3)
Table 2 Cellular antioxidant activities and cytotoxic concentration of
flavonoids extracted from T1 and T2 tartary buckwheat brans (x± s, n = 3)
苦荞名称 CAA/(μmol QE/100 g) 毒性质量浓度/(mg/mL)PBS清洗 不经PBS清洗
T1 44.4±5.2 32.9±3.2 25
T2 52.5±2.7 30.9±2.2 25
由表2可知,在PBS清洗处理中,T1和T2苦荞麸皮黄酮
的CAA值分别为(44.4±5.2)μmol QE/100 g和(52.5±2.7)
μmol QE/100g;在不经PBS清洗处理中,T1和T2苦荞麸
皮黄酮的CAA值分别为(32.9±3.2)μmol QE/100 g和
(30.9±2.2 )μmol QE/100g在PBS清洗和不清洗处理
中,T1和T2的CAA值并无显著性差异(P<0.05)。
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2.4 苦荞麸皮黄酮的细胞抗增殖活性
用不同质量浓度的T1和T2苦荞麸皮黄酮培养人肝癌
细胞HepG2,72 h后检测其抗增殖活性。T1和T2苦荞麸
皮黄酮对HepG2细胞的生长抑制作用见图3。
a.T1;b.T2;*.与对照组相比,有显著性差异(P<0.01)。
图 3 两种苦荞麸皮黄酮对HepG2细胞抗增殖及毒性作用(x±s, n=3)
Fig.3 Antiproliferative and cytotoxic effects of flavonoids extracted
from T1 and T2 tartary buckwheat brans on HepG2 cells (x± s, n = 3)
由图3可知,黄酮在实验质量浓度范围内,能显著抑
制HepG2细胞增殖且表现出量效关系。与对照组相比,
T1苦荞麸皮黄酮的质量浓度为12.5 mg/mL时,即能显著
抑制HepG2细胞的增殖(P<0.01),但当T1苦荞麸皮黄酮
质量浓度为25 mg/mL时,其细胞抗增殖活性则是由细胞
毒性引起的,在无细胞毒性质量浓度范围内,T1苦荞麸
皮黄酮对HepG2细胞的抑制作用为73.3%~49.0%;T2苦
荞麸皮黄酮的质量浓度为9.4 mg/mL时,即能显著抑制
HepG2细胞的增殖(P<0.01),但当T2苦荞麸皮黄酮质
量浓度为25 mg/mL时,其细胞抗增殖活性则是由细胞毒
性引起的,在无细胞毒性质量浓度范围内,T2苦荞麸皮
黄酮对HepG2细胞的抑制作用为55.1%~18.3%。因此,
T1和T2苦荞麸皮黄酮在无细胞毒性作用时,能显著抑制
人肝癌细胞HepG2的细胞增殖。
T1、T2苦荞麸皮黄酮对HepG2细胞生长抑制的EC50
值见表3,此处的EC50值意为当抑制细胞增殖率为50%
时,所需样品的质量浓度值。EC50值越低,则样品的抗
增殖活性越强。
由表3知,T2苦荞麸皮黄酮的EC50值明显小于T1
(P<0.01)。即与T1相比,T2苦荞麸皮黄酮具有更强的
抗肿瘤细胞增殖的活性(P<0.01)。
表 3 两种苦荞麸皮黄酮对HepG2细胞生长抑制的EC50及毒性
(x±s, n=3)
Table 3 EC50 Values of flavonoids extracted from T1 and T2 tartary
buckwheat brans in antiproliferative activity assay and their cytotoxic
concentrations (x± s, n = 3)
种类 EC50/(mg/mL) 毒性质量浓度/(mg/mL)
T1 23.0±0.5 25
T2 13.7±0.1** 25
注:**.与 T1相比,差异极显著(P < 0.01)。
3 讨 论
对于苦荞麸皮黄酮类化合物抗氧化性的研究,目前
主要采用化学分析法研究其体外抗氧化活性[8,13,16],但通
过细胞模型来评价苦荞麸皮黄酮抗氧化性的研究则鲜有
报道。细胞抗氧化方法比化学分析法更能反映样品抗氧
化的功能特性[21-22]。
为了更全面的反映苦荞麸皮的细胞抗氧化能力,本实
验采用PBS清洗和不经PBS清洗两种操作,其中PBS清洗实
验主要反映在HepG2细胞内抗氧化剂的抗氧化性;不经PBS
清洗实验则主要反映包括HepG2细胞膜表面在内的抗氧化
剂的抗氧化性。研究发现,在PBS清洗实验中,苦荞麸皮
T1和T2黄酮的CAA值分别为(44.4±5.2)μmol QE/100 g
和(52.5±2.7)μmol QE/100 g;在不经PBS清洗处理
中,T1和T2苦荞麸皮黄酮的CAA值分别为(32.9±3.2)
μmol QE/100 g和(30.9±2.2)μmol QE/100 g。
研究发现,苦荞麸皮黄酮类化合物主要组成为芦丁、
槲皮素、异槲皮素、槲皮苷、儿茶素、表儿茶素、荭
草素、异荭草素、牡荆素和异牡荆素[14,25-27]。其中,槲皮
素、儿茶素及表儿茶素均具有很强的细胞抗氧化活性[26]。
此外,黄酮类化合物的细胞抗氧化性主要取决于黄酮化
合物的结构以及黄酮化合物糖基化或羟基化的程度[26]。
T1和T2苦荞麸皮黄酮的细胞抗氧化活性可能是由其所含
的某一种黄酮类化合物,如儿茶素、槲皮素等发挥细胞
抗氧化活性,也可能是由其黄酮类化合物的协同作用而
显示细胞抗氧化活性。
黄酮类化合物在抑制不同肿瘤细胞增殖时,表现出
不同的抑制机理。研究表明Bcl-2和Bax是重要的细胞凋
亡调控蛋白,Bcl-2大量表达时细胞凋亡减少,而Bax蛋
白大量表达时则引起细胞凋亡的加速[28]。对于人食管癌
EC9706细胞和宫颈癌HeLa细胞而言,苦荞黄酮可减少其
Bcl-2的表达量,而使Bax的表达量增多,即苦荞黄酮可
能通过诱导人食管癌EC9706和宫颈癌HeLa细胞凋亡来达
到抑制细胞增殖的作用,此外,苦荞黄酮可抑制白血病
细胞株HL-60的生长并诱导其凋亡[29]。本项研究表明,在
不产生细胞毒性的浓度范围内,T1和T2苦荞麸皮黄酮提
取物对人肝癌细胞HepG2的增殖具有一定的抑制作用,
且T2苦荞麸皮黄酮对HepG2细胞的增殖抑制作用明显强
※基础研究 食品科学 2014, Vol.35, No.07 63
于T1(P<0.01)。因此,可选择将苦荞麸皮黄酮作为抗
肿瘤药物研发以及功能性食品开发的原料资源。
4 结 论
苦荞麸皮作为苦荞面粉加工时的副产物,在荞麦类
制品加工过程中并未得到人们的重视,本实验通过细胞
模型评价了产自重庆酉阳(T1)和四川西昌(T2)的
苦荞麸皮黄酮类化合物的抗氧化性及其抑制人肝癌细胞
HepG2增殖的能力。结果表明:T1和T2苦荞麸皮黄酮具
有一定的抗氧化性,并且在实验质量浓度范围内,T1和
T2苦荞麸皮黄酮的细胞抗氧化活性表现出时效关系;在
抗增殖实验中,T1和T2苦荞麸皮黄酮在无细胞毒性的浓
度范围内,能显著抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,并表
现出量效关系。
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